Yarı Tüm vücut pletismografisi kullanılarak Farelerde Solunum Fonksiyon Ölçme

Bu prosedürün genel amacı, kontrolsüz tüm vücut pletismografisi kullanarak bilinçli bir kemirgenden alınan solunum parametrelerini ölçmektir. Bu, önce köprü amplifikatörünün kalibre edilmesiyle gerçekleştirilir. Kalibre edildikten sonra, pletismografi odasının içine bir fare yerleştirilir ve testten önce iklimlendirmeye izin verilir.

Daha sonra, oda içinde meydana gelen basınç değişiklikleri kaydedilir. Daha sonra pletismografi sistemi kullanılırken elde edilen bilgilerden çoklu solunum parametreleri hesaplanır. Sonuçlar, kısıtlanmamış tüm vücut pletismografisinin kemirgenlerde akciğer fonksiyonunun güvenilir bir değerlendirmesi olduğunu göstermektedir.

Bu tekniğin invaziv pletismografi gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajları, hayvanların uyuşturulmamasıdır, bu da artefaktları anestezi ile ilişkilendirmediğimiz anlamına gelir. Ek olarak, bu protokolün non-invaziv doğası nedeniyle, sizin, uzunlamasına önlemlere izin verir. Genel olarak, bu tekniğe yeni olan bireyler, hayvanları plazma odasına alıştırmak için gereken süreyi hafife alma eğilimindedir.

Başlamak için, veri toplama makinesi köprü amplifikatörünü ve basınç dönüştürücüsünü kurun. Hazır olduğunuzda bilgisayarın başına geçin ve analiz yazılımını açın. Kurulum araç çubuğunda bulunan kanal ayarları seçeneğini açın ve kaydedilmekte olan kanal sayısını bir olarak değiştirin.

Ardından, su sütunu aparatını gösterildiği gibi ayarlayın. İki adet beş mililitrelik serolojik pipeti plastik boru ile bağlayın. Sütunları suyla doldurun ve su seviyelerinin dengelendiğinden emin olun.

Bir cetvel ile her pipetin üstüne bir parça plastik boru bağlayın. Köprü amplifikatörünü kalibre etmek için önce su sütununun sağ tarafına 300 mikrolitre hava ile doldurulmuş bir mililitrelik bir şırınga takın. Sol taraftaki boruyu basınç dönüştürücüsü üzerindeki konektöre takın.

Ardından, aşağı kaydırma menüsünü açın ve köprü amplifikatörünü seçin. Doğru ayarları girin ve izlemeyi yaklaşık sıfır milivolta ayarlamak için sıfıra tıklayın. Hazır olduğunda, bir mililitrelik şırıngaya bastırın, ortaya çıkan basınç kolondaki suyu bir santimetre hareket ettirecek ve basınç değişikliği nedeniyle yazılım üzerinde ani bir artış gösterecektir.

Ardından, köprü amplifikatörü penceresinden giriş birimlerini seçin ve sıfır bölgesi olarak da bilinen ani artıştan önceki arka plan izini vurgulayın. Arka plan sinyalini negatif 0,002 milivolt ve pozitif 0,002 milivolt aralıklarında üretmek için 0,1'in yanındaki oka tıklayın. Arka plan sinyali penceresinin yanındaki pencereye sıfır yazın.

Şırıngaya basıldığı andan itibaren grafikte artan basınç bölgesini vurgulayın. 0,2'nin yanındaki oka tıklayın. Değer 0,9 ila 1,2 milivolt aralığında olmalıdır.

Ardından, pencereye bir tane yazın. Artan basınç penceresinin yanında, birimleri tanımlamaya gidin ve santimetre H2O'yu seçin ve tamam'a basın. Köprü amfi menüsüne dönün.

Bir milivolt seçin ve amplifikatörü sıfıra ayarlayın. Bu, kalibrasyonu tamamlayacak ve su sütunu güvenli bir şekilde çıkarılabilir. En iyi sonuçlar için, deney hayvanları deneyin başlamasından bir hafta önce pletismografi odasına sokulmalıdır.

Başlamak için, sıcaklık bağıl nemini yerleştirin, pletismografi odasının bir ucuna sondalayın ve sıcaklığı, nemi ve barometrik basıncı kaydedin. Hayvanın ağırlığını ve vücut ısısını kaydettikten sonra, pletismografi odasına yerleştirin ve odayı kapatın. Ardından, dönüştürücüyü ve şırıngayı odanın diğer tarafındaki iki deliğe yerleştirin.

Yazılım programında başlat düğmesine basın ve 45 saniyeye kadar kayıt yapın. Hayvan hareket etmediğinde beş saniyelik veri kaydettiğinizden emin olun. 45 saniye sonra kaydı durdurun ve fareyi pletismografi odasından çıkarın.

Oda sıcaklığını ve nemini hemen kaydedin. Fareyi kafes spreyine geri koyun ve hazneyi hacim başına %80 hacimle silin. Etanol, bir sonraki fareye geçmeden önce haznenin kurumasına ve temel sıcaklık ve neme dönmesine izin verir.

Başlamak için programı tam ekran olarak açın ve verileri seçin. Mini veri pedi penceresini açın ve sol sütunda döngü ölçümlerini ve ortalama döngü yüksekliğini seçin. Birinci sütunun sağ sütununda seçeneğini belirleyin ve minimum tepe algılama ölçeğini bir olarak ayarlayın.

Bu, mini veri pedindeki tidal hacim PT ölçümünden kaynaklanan basınç düşüşünü sunacaktır. Frekans F ölçümünü sunmak için döngü ölçümlerini ve ardından olay sayısını seçin. Ardından, en yüksek inspirasyon ve sona erme süresi değerlerini oluşturmak için toplam solunum döngüsü süresi T tote saniye ölçümünü sunmak için döngü ölçümlerini ve ardından ortalama döngüsel periyodu seçin, imlecin doğrudan tepe oluğunun maksimumu üzerinde olduğundan emin olun ve dokuz ardışık tepe ve çukur hakkında bir yorum ekleyin.

Yeni bir pencere açın ve seçmeden önce sol sütundaki seçim bilgileri'ne ve sağ sütundaki süre'ye tıklayın. Tamam, kayda başlamak için programın üst kısmında bulunan makroyu seçin. Ardından, ince aracı kullanarak ilk yorum kutusunu bulun.

Dosyanın başına gidin, ardından ilk açıklamayı getirin ve veri paneline ekle komutunu seçin. Son olarak, makro komutlarından Tekrarlamaya başla'yı seçin ve tekrar sayısı penceresinin dokuz olarak ayarlandığını onaylayın. Sonrakini bul seçeneğini kullanın ve veri paneline ekle komutunu seçin.

İşiniz bittiğinde seçin ve tekrarlayın. Kaydı durdurun ve makroyu hayvan numarasına göre kaydedin. Makro artık her yorum arasındaki ilham ti ve sona erme süresini elde etmek için çalıştırılabilir.

Süre sonu ve ilhamlama art arda gerçekleştiğinden, veriler bu sırayla görünür ve manuel olarak bölünmeleri gerekir. Bu solunum izi, bir kontrol hayvanından elde edilen uygun tutarlı verileri göstermektedir. Solunum parametrelerini elde etmek için solunum salınımlarının tepe ve çukurlarına ardışık dokuz yorum eklenir.

Bu örnekler, analiz için asla kullanılmaması gereken en yaygın suboptimal izleri göstermektedir. Bu iz, hayvan koklarken ve hareket ederken kaydedildi: Zamanla kademeli olarak artan salınımlara sahip bir iz, genellikle yoğuşma ve nem birikmesinden kaynaklanır. Bu izdeki gürültü, hayvanın veya araştırmacının ekipmanla etkileşime girmesinin sonucudur.

Bu şekil, bleomisin kaynaklı pulmoner fibrozisli bir farenin akciğer fonksiyonunu göstermektedir. Solunum izindeki düzensiz desene dikkat edin. Tekniğe hakim olduktan ve ekipman kalibre edildikten sonra, veriler her hayvandan beş dakika içinde toplanabilir.

Toplanan veriler daha sonra yarasa analizine tabi tutulabilir ve bir Excel elektronik tablosuna aktarılabilir. Bu prosedürü denemek, veri toplamadan önce fareyi pletismografi odasına alıştırmak için önemli olsa da, bu fare suşları arasında değişebilir. Ortalama olarak, ergenlerin C 57 siyah altı faresini kullanıyoruz ve bu, veri toplamadan önce dört ila beş gün sürecek.