Alt Üriner Sistem Farmakoloji değerlendirin bir Yöntem olarak mesane düz kas Şerit Kasılabilme

Bu prosedürün genel amacı, mesane düz kas dokusunun fizyolojik ve farmakolojik özelliklerini değerlendirmektir. Bu, sıçan mesanesinin diseke edilmesi, düz bir tabaka halinde açılması ve ürotelyum düz kas ve sinirlerini içeren şeritlerin kesilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, doku, kas kasılmasını ölçmek için amplifikatörlere ve stimülatörlere bağlı bir kuvvet dönüştürücüsüne bağlanır.

Bir sonraki adımda, temel ton ve doku canlılığı belirlenir ve daha sonra şeritler farmakolojik ve/veya elektriksel stimülasyona maruz bırakılır. Sonuç olarak, uyaranların mesane düz kas dokusunun kasılma üzerindeki etkileri ölçülebilir. Bu yöntem, insanlarda ve hayvanlarda patolojik ve farmakolojik bileşiklerin tüm mesane üzerindeki etkilerini ve ayrıca ürotelyumdaki düz kas sinirleri gibi spesifik mesane dokusu bileşenlerini karakterize etmek için kullanılır.

Bu teknik, iyi tanımlanmış ve kontrollü bir ortamda farmakolojik ajanlar için hızlı, kolay ve tekrarlanabilir bir tarama yöntemini temsil ettiği için çeşitli mesane disfonksiyonlarına yönelik tedavilerin geliştirilmesi sırasında yaygın olarak kullanılmaktadır. Arka uzuv kaybıyla anesteziyi onayladıktan sonra, refleksi geri çekin, hayvanın karnını tıraş edin ve ardından orta hat abdominal insizyonu ile pelvik organları açığa çıkarın. Daha sonra, mesaneyi ve üretrayı tanımlayın ve ardından proksimal üretraya yakın mesane boynunu kesin.

Mesaneyi çıkarmak için, dokuyu hemen havalandırılmış Creb çözeltisi ile doldurulmuş eşik koruyucu kaplı bir tabağa yerleştirin. Daha sonra hayvanı kurban ettikten sonra, dokuyu germeden daha fazla diseksiyon için dokuyu stabilize etmek için mesane kubbesi boynundan ve üreterlerden doku diseksiyon pimleri yerleştirin. Yabancı dokunun mesanesini kesin ve daha sonra sirozun aşağı ve lümen tarafı yukarı doğru düz bir tabaka oluşturmak için dokuyu tabandan kubbeye açın.

Dokunun her bir köşesine diseksiyon pimleri yerleştirin ve ardından mesane, boynu ve kubbe dokusunu çıkarın. Daha sonra, dokuyu tabandan kubbeye uzunlamasına yaklaşık iki ila sekiz milimetre şeritler halinde kesin ve her şeridin her iki ucuna bir doku klipsi takın. Şeritleri, her şeridin bir ucunu bir kuvvet dönüştürücüsüne ve diğer ucunu sabit bir çubuğa bağlayarak deney odalarına aktarın.

Şimdi, temel gerilim bir grama ulaşana kadar dokuları nazikçe gerin. Başlangıçta, doku gevşeme eğilimindedir ve bu da başlangıç gerginliğinde bir azalma olarak kaydedilir. Şeritleri yaklaşık her 15 dakikada bir ılık gazlı kreplerle yıkayın ve taban çizgisi gerginliğini bir grama ayarlayın.

Her yıkamadan sonra, dokuların artık gevşemeyene kadar yaklaşık bir ila iki saat dengelenmesine izin verin. Başlangıç gerilimi stabil hale geldiğinde, doku canlılığını test etmek için beş dakika boyunca veya bir plato tepkisine ulaşılana kadar doğrudan banyoya potasyum klorür ekleyin. Daha sonra, dokunun tedavi öncesi koşullarına geri dönmesini sağlamak için dokuları üç ila beş kez ılık havalandırılmış kreplerle yıkayın.

Farmakolojik düz kas stimülasyonu için, konsantre solüsyonlardan ilaçları doğrudan banyoya ekleyin. Örneğin, karbahol stimülasyonu için, her 10 mililitrelik doku banyosuna uyaran konsantrasyonlarının her birinden 10 mikrolitre ekleyin. Önceki konsantrasyondan gelen yanıt bir platoya ulaşır ulaşmaz.

Paralel şeritler halinde, düz kasın nöral stimülasyonu veya elektriksel alan stimülasyonu için eşit miktarda araç ekleyin. Tren süresini üç ila 10 saniyeye ve tren aralığını en az bir dakika aralıklarla ayarlayın. Tren uyaranlarının frekansını belirledikten sonra, uyaranın yoğunluğunu belirlemek için 0,5 ila 50 hertz arasında değişen bir frekans tepkisi eğrisi çalıştırın.

Frekansı sabit tutarak, kasılmaların genliği bir platoya ulaşana kadar voltajı sistematik olarak artırın. Stimülasyon parametreleri belirlendikten sonra, elektrik alan stimülasyonu için yaklaşık 20 ila 30 dakika bekleyin, ilaç testinden önce stabilize olmak için uyarılmış kasılmalar. Daha sonra, alfa beta metilen a TP ve atropinin elektriksel alan stimülasyonu üzerindeki etkilerini test etmek için, örneğin, iki kontrol frekansı tepki eğrisi gerçekleştirin ve ardından test şeridine 10 mikrolitre alfa beta metilen a TP ve 10 mikrolitre araç ekleyin kontrol şeritlerine.

Alfa beta metilen A TP, düz kastaki purik reseptörleri doğrudan uyarır ve bu reseptörleri duyarsızlaştırır ve ilk başlangıç kasılmasına neden olur. Yanıt taban çizgisine döndükten sonra, tüm şeritlerde frekans yanıtı eğrilerini tekrarlayın. Test şeridine 10 mikrolitre atropin ve kontrol şeritlerine 10 mikrolitre araç ekleyin ve elektrik alanı stimülasyonunun sonunda frekans tepki eğrilerini tekrarlayın.

Sodyum kanal blokeri tetra ile toksine nöral iletimi bloke ederek elektrik alan stimülasyonunun seçiciliğini doğrulayın. Son olarak, şeritlerin klipsini açın. Fazla sıvıyı ortadan kaldırmak için bunları bir kağıt mendil üzerine nazikçe bloke edin ve düz kas tonusu üzerindeki etkilerini belirlemek için her şeridin ağırlığını bir terazide ölçün.

İlacın neden olduğu yanıtın zirvesinden en az 10 ila 30 saniye önce ve zirvede bir pencere seçmek için uygun veri analiz yazılımını kullanın ve deneysel tedavilerin nöral olarak uyarılmış kasılmalar üzerindeki etkilerini belirlemek için kasılmanın genliğini ölçün. İlacın neden olduğu yanıtın zirvesinden önce ve zirvesinde en az üç kasılma eğrisinin altındaki genliği, süreyi ve alanı ölçün. Son olarak, sonuçları şeritler ve farmakolojik tedaviler arasında karşılaştırmak için verileri normalleştirin.

Spontan miyojenik aktivite, doğum sonrası gelişim ve patoloji sırasında değişen düz bir kas özelliğidir. Bu temsili deneyde, yenidoğan sıçanlardan alınan şeritler büyük genlikli, düşük frekanslı ritmik kasılmalar sergilerken, yetişkin sıçanlardan alınan şeritler omurilik yaralanmasından sonra küçük genlikli yüksek frekanslı aktivite sergiler. Yenidoğan paterni otini yeniden ortaya çıkarır, A-K-C-N-Q kanal açıcı, erişkin sıçan düz kas tonusundan şeritler halinde spontan aktivitenin amplitüdünü azaltır ve ürotelyum ve mukozadan etkilenebilen kasılma özellikleri, idrar depolama ve işeme sırasında uygun mesane fonksiyonu için önemli faktörlerdir.

Örneğin, bu grafikte, düz kas tonusunda konsantrasyona bağlı olarak artar. Karik çağrı ile domuz mesane şeritlerindeki muskarinik reseptörlerin aktivasyonu gösterilmiştir. Mukoza varlığında karbahol tedavisine yanıt olarak kas kasılmasında bir azalma gözlenir.

Bu grafikte gösterildiği gibi, beş HT dört reseptörü parasempatik sinirlerde pre ally olarak eksprese edilir ve bunların aktivasyonu asetilkolin seviyelerini arttırır. Bu grafikler, beş HT dört reseptör agonisti sisapridin insan mesanesi üzerindeki uyarıcı etkisinin ileum şeritlerine karşı farklı etkinliğini ve gücünü göstermektedir. Bir dizi reseptörde var olan tür farklılıkları, bu mesane şeridi yöntemi kullanılarak değerlendirilebilir.

Örneğin, bu veriler bombesin reseptör antagonistlerinin sıçan mesanesi üzerinde uyarıcı etkilere sahip olduğunu, fare veya domuz mesane şeritleri üzerinde hiçbir etkisi olmadığını göstermektedir. Farmakolojik stimülasyon için ilaç uygulamasının konsantrasyonuna, zamanlamasına ve süresine dikkat etmek önemlidir. Diğer reseptörler üzerinde spesifik olmayan etkilerden kaçınmak veya nöral Stimülasyon için hedeflenen reseptörlerin duyarsızlaştırılmasını önlemek için, deneyin amacına göre elektriksel alan stimülasyonu için doğru parametreleri seçmek ve uyaranın düz kası doğrudan aktive etmemesini sağlamak önemlidir.