Sinir Devresi Temelini Bellek Oluşumunda Diseksiyon için Yenidoğan Sıçanlarda bir Lateralize Koku Öğrenme Modeli

Bu protokol, akut tek nary oklüzyonları kullanan sıçanlarda lateralize erken koku tercihi öğrenimini tanıtır. Bu, önce çıkarılabilir polietilen burun tıkaçları inşa edilerek gerçekleştirilir. İkinci adım, davranışsal eğitimden önce istenen Koç'u tıkamaktır.

Daha sonra, kokulu yatak takımını hazırlayın ve ardından hayvanı bir boya fırçası ile okşayarak kokulu yatak takımında eğitin. Son adım, iki seçenekli bir test cihazı kullanarak yanal koku tercihini test etmektir. Sonuç olarak, fosforile C amp yanıt elemanı bağlayıcı protein veya P beşikinin immünohistokimyası, tek nary inzilüsyona bağlı nöronal aktivitenin tek taraflı susturulmasını ve yöntemin geri dönüşümlülüğünü göstermek için kullanılır.

Hayvan kontrol yöntemleri arasında var olan bu tekniğin en büyük avantajı, doğum sonrası katman 11'den önce intra hayvan kontrol deney tasarımımızın doğası gereği, iki koku alma hemisferinin birbirine bağlı olmadığı MA matür anterior commes projeksiyonlarının olmaması nedeniyle değişkenliği ve hayvan sayılarını azaltabilmemizdir. Bu, tek besleyici oklüzyon yoluyla bir yarım küreyi diğerinden bağımsız olarak manipüle etmemizi sağlar. Tıkalı hemisferler, hayvan içi kontrol görevi görür.

Bu teknik, yenidoğan sıçanlarda koku alma öğrenimine odaklansa da, çıkarımlar, sinaptik plastisite, metaplastik ve bunların temelini oluşturan moleküler mekanizmalar gibi öğrenme ve hafıza sırasındaki nöral süreçlerle ilgili temel soruları yanıtlamamıza izin verecektir. Bu yöntemi kullanan çalışmalardan elde edilen sonuçlar, özellikle doğum sonrası kritik dönemlerde, öğrenme ve hafızanın temel ilkelerine ve memelilere genelleştirilebilir. Bu, patofizyolojik durumlarla ilişkili hafıza kaybı için potansiyel terapötikler için umut verici bir arka plan oluşturmamıza yardımcı olacaktır.

Bu yöntem aynı zamanda koku algılama ve koku kaplama gibi koku alma ile ilgili diğer işlemler için de oldukça uygundur. Burun tıkacı polietilen 20 boru ve üç adet sıfır ipek dikiş ipliğinden yapılmıştır. İlk olarak, 22 ila yaklaşık 0,8 santimetre arasında küçük bir polietilen parçası kesin.

Daha sonra ipek sütürü, boru bölümünün her iki tarafında da iplik olacak şekilde hazırlanan borudan geçirin. Tapanın dışındaki ipliğin bir ucuna bir düğüm atın. Boru bölümünü iplikteki düğümün üzerinden aşağı doğru çekin.

Düğüm borunun içine yerleşmelidir. İpliğin her iki ucunu, borunun bir ucundan yaklaşık iki milimetre iplik çıkacak şekilde kesin. Bu işleme başlamak için, yavruyu barajdan çıkarın ve normal yataklarla kaplı güvenli bir tabağa koyun.

Pamuk uçlu bir aplikatör kullanarak, tıkanacak Koç'un üzerine lokal anestezik jöle, %2'lik Ksilokain sürün. Yavrunun tabakta yaklaşık üç dakika dinlenmesine izin verin. Yavrudaki Lucin, bu prosedürdeki en kritik adımdır.

Kanama ve doku hasarını önlemek için burun tıkacı takılması sırasında kür alınmalıdır. Daha sonra, yavruyu alın ve baskın el ile baskın olmayan elde nazikçe ama güvenli bir şekilde tutun, bir burun alın, aynı lokal anestezik jöleyi ipliğin çıkıntı yapmadığı ucun etrafına tıkayın ve sürün. Bu, hem tıkaç takılmasıyla ilişkili herhangi bir küçük ağrı için anestezik hem de nes'in içinde bir kayganlaştırıcı görevi görecektir.

Yavruyu sıkıca tutarak ve tıkaç tamamen takılana ve Koç'tan sadece iki milimetrelik iplik çıkıntı yapana kadar çok hafif itmelerle tapayı yavaşça döndürerek burun tıkacını nazikçe takın. Bu süreçte her iki koç burcundan da kanama olmaması gerekir. Burun tıkacı takılması sırasında kanaması olan yavrular deney için kullanılamaz.

Fişe alışması için hayvanın tabakta beş dakika dinlenmesine izin verin Koku kontaminasyonunu önlemek için eğitime başlamadan önce, kokulu yatak takımlarını bir davlumbazda hazırlayın ve yeni eldivenler giyerken 500 mililitre talaş yatak takımını plastik bir torbaya koyun. 0,3 mililitre nane özü almak için bir şırınga kullanın ve bunu plastik torbadaki yatakların üzerine püskürtün. Torbayı bağlayın, torbayı kuvvetlice sallayın ve yatak takımlarının torbada beş dakika dinlenmesine izin verin, kokulu yatak takımını kullanmadan önce beş dakika boyunca çeker ocakta açıkta bulunan 20 x 20 x beş santimetre akrilik eğitim kutusuna yerleştirin.

Yatak takımları hazırlandıktan sonra kullanılmış eldivenleri atın. Eldivenlerin hayvanlarla temas etmesine izin vermeyin. 500 mililitre kokusuz yatak takımını başka bir temiz akrilik eğitim kutusuna koyun ve kokulu yatak takımı veya kullanılmış eldiven ile temas etmediğinden emin olun.

Deneysel koku için alışılmış yavruyu kokulu yatakların üzerine yerleştirerek koku koşullandırma paradigmasına başlayın. Ayrıca inme OS pozitif yavrular. Yavruyu 30 saniye boyunca okşayın.

Küçük bir boya fırçası kullanarak, öncelikle yavrunun arka bölgesi çevresinde hızlı dairesel hareketler kullanın. Okşama, koku soğancığı ve koku alma korteksine norepinefrin salınımına neden olur. Bu, koşulsuz bir uyaran görevi görür.

Yavrunun 30 saniye dinlenmesine izin verin. 30 saniye okşayarak tekrarlayın, ardından toplam 10 dakika boyunca 30 saniye dinlenin. 10 okşama artı koku eşleştirmesi tamamlandığında, yavruyu bakım kutusundan çıkarın.

Burun tıkacını çıkarın ve yavruyu kontrol için baraja geri koyun. Koku sadece işletim sistemi negatif yavrular. Alışılmış yavruyu herhangi bir okşama olmadan 10 dakika boyunca kokulu yatağın üzerine yerleştirin.

10 dakika sonra yavruyu bakım kutusundan çıkarın. Burun tıkacını çıkarın ve yavruyu baraja geri koyun. Yanal koku tercihi testi, son eğitim seansını takiben çeşitli zaman noktalarında gerçekleştirilir.

Test, iki santimetre nötr bölge ile ayrılmış iki akrilik eğitim kutusunun üzerine yerleştirilen 30 x 20 x 18 santimetre paslanmaz çelik test odasında gerçekleştirilir. Bir eğitim kutusunda kokulu yatak takımları, diğer kutuda ise temiz kokusuz yatak takımları bulunur. Daha önce gösterildiği gibi bir nane kokulu yatak takımı ve bir kokusuz yatak takımı hazırlayın ve her kutuyu test odasının karşı taraflarının altına yerleştirin.

İki santimetre aralıkla. Plastik ağı test odasının metal ızgara zeminine yerleştirin. P'yi barajdan çıkarın ve tıkanmış olan Koç'un üzerine sert bir şekilde kokusuz silikon yağı sürün.

Eğitim sırasında, gres ilk test prosedürü boyunca gerektiği gibi yeniden uygulanabilir. Yavruyu test odasının nötr bölgesine yerleştirin. Yavrunun bir dakika boyunca odayı keşfetmesine izin verin, yavrunun odanın iki tarafında, yani nane veya nötr kokulu yatak takımları üzerinde ne kadar zaman geçirdiğini kaydedin.

Yavruyu kapalı bir plastik tutma haznesine aktarın ve bir dakika dinlenmeye bırakın. Yön tercihlerini kontrol etmek için yavrunun odadaki ilk yönünü değiştirerek test denemelerini toplam 10 dakika tekrarlayın. Testten hemen sonra, Koç'taki yağı silin.

Daha önce gösterilen aynı RY tecrit prosedürünü izleyerek karşı Aries'e bir polietilen burun tıkacı yerleştirin ve hayvanın 10 dakika dinlenmesine izin verin. Daha sonra yavru üzerinde yanal koku tercih testi yapılır. Yine. Test bittiğinde, fişi çıkarın ve yavruyu baraja geri koyun.

Koku ve okşama eğitimi sırasında tek dar inziva, korunan NRI'lerle sınırlı yanal bir koku hafızasına yol açar. Yavrular, eğitim sırasında olduğu gibi aynı yerde tenha bir koku tercihi için test edildiğinde, şartlandırılmış koku için bir tercih gösterirler. Bu, karşı nary tenha ile test yapıldığında gözlenmedi.

Buna karşılık, sadece koku kontrol grupları, hangi hastalığın tıkandığına bakılmaksızın koku tercihi göstermez. Test sırasında, lateralize koku eğitimi, koku maruziyeti sırasında koku alma sisteminin lateralize aktivasyonu ile sonuçlanır, koku soğancığının veya OB'nin immünohistokimyası ve anterior piriform korteks veya bir PC, koku maruziyetini takiben tıkalı hemisferde kontralateral korunmuş hemisfere kıyasla önemli ölçüde daha az fosforile Creb gösterdi. Nissel boyama, OB'nin mitral hücre tabakasında ve her iki hemisferin PC'sinin piramidal hücre tabakasında karşılaştırılabilir hücre gövdelerini gösterir.

Burun tıkacının çıkarılmasını takiben bezelye yengeç ekspresyonu OB'nin mitral hücrelerinde koku maruziyetini takiben ve PC'deki piramidal hücreler, tıkalı ve korunmuş hemisferler arasında karşılaştırılabilir. Bu, tek bir deneme nary inzivasının etkisinin geçici ve geri dönüşümlü olduğunu ve test sırasında koku algısını ve kokulara nöronal aktivasyonu etkileyebilecek görünür uzun vadeli nöronal hasara yol açmadığını gösterir. Bir kez ustalaştıktan sonra, uygun şekilde yapılırsa NA oklüzyonu beş dakikadan daha kısa sürede yapılabilir.

Bu prosedürü denerken, burun deliğini tıkarken son derece dikkatli olmak önemlidir. Herhangi bir aşırı kuvvet veya yanlış teknik, kanamaya ve dolayısıyla burun deliğine zarar verebilir Bu prosedürü takiben. Sinaptik plastisite ile ilgili ek soruları yanıtlamak için ex vivo elektrofizyoloji ve moleküler teknikler gibi diğer yöntemler kullanılabilir.

Bu videoyu izledikten sonra, koku öğrenmeyi lateralize etmek ve hafıza oluşumunu destekleyen nöral devreyi incelemek için geçici tek taraflı dar oklüzyonların nasıl kullanılacağını iyi anlamış olmalısınız.