Tandem Yüksek basınçlı Donma ve Transmisyon Elektron Mikroskobu için Bitki Doku Hızlı Dondurma Değişiklik

Aşağıdaki deneyin genel amacı, transmisyon elektron mikroskobu ile müteakip görselleştirme için yüksek basınç, dondurma ve hızlı dondurma ikamesi ile bitki hücrelerinin hücresel yapılarını hareketsiz hale getirmektir. Bu, yüksek basınçlı dondurma sırasında dokunun minimum düzeyde hasar görmesini sağlamak için bir doku örneğinin bir kriyoprotektan ile kodlanarak dondurulmak üzere dikkatli bir şekilde hazırlanmasıyla elde edilir. İkinci adım olarak, numune yüksek basınç altında hızla dondurulur, bu da hücre bileşenlerini hareketsiz hale getirir ve kristal buz oluşumunu sınırlar, bu da bozulmamış morfolojiye sahip hücrelerle sonuçlanır.

Daha sonra, hücresel suyu organik çözücülerle değiştirmek ve osmiyum tetroksit gibi fiksatifleri eklemek, böylece hücresel ultra yapıları bağlamak ve stabilize etmek için hızlı serbest ikame gerçekleştirilir. Transmisyon elektron mikroskobuna dayalı olarak yüksek basınçlı dondurma ve hızlı dondurma ikamesini etkili bir şekilde koruyan sonuçlar elde edilir. Bu tekniğin geleneksel kimyasal fiksasyon gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, H-P-F-Q-F-S'nin hücresel içeriği milisaniye sürelerinde hareketsiz hale getirmesi ve artefakt oluşumunu en aza indirmesidir.