Name: Çoklu Zebra balığı için İlaç İdaresi Bir Roman Yöntemi ( Danio rerio) Ve Çekilme Niceleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Keşfedin, Danio rerio gruplarına eşzamanlı etanol verme ve çekilme davranışlarını hareket izleme ile analiz etme yöntemini. Bu teknik, nörofarmakolojide ilaç maruziyeti değişkenliğini azaltarak güvenilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Tüm prosedürler ve davranışsal test bakımı ve deney hayvanlarının kullanımı için Hayvan Bakım kurallarına için Kanadalı Konseyi ile uyumlu olduğunu protokol numarası 06-11-12 altında MacEwan Üniversitesi Hayvan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. 1. Doz Tankları, Çözümler ve Yönetim takvimi hazırlayın <ol><li> Hayvanlar aynı ortamda ve görsel uyaranlara zaman ya da itme düzeneğinin herhangi bir boşa önlemek için günün aynı süre içinde dozlanır şekilde bir uygulama program hazırlanması. </li><li> Grup boyutları sayısı için gerektiği kadar özdeş, 1.5 L, şeffaf polipropilen yumurtlama tankları edinin. Balık 2 grup sağlar tank başına 8 balık, kullanımı grupları prosedürü daha sonra günde test edilmesi (basamak 3). Bir tutma tankı ve grup başına bir dozlama tankı (grup 2x toplam sayısı) kullanın. <ol><li> Tüm tanklarında 400 mikron yumurtlama yerlefltirmede. Fhasta yaşam su veya doğru sıcaklıkta osmoz su ters ile tankları (Zebra balığı için, 25-28 ° C) sıcaklık balık ile tutarlı normalde yer alırlar. Not: bazı ilaçların ve tamponlanmış yaşam suyun kimyasal bileşenleri arasında istenmeyen kimyasal etkileşimler olabilir. Bu durumda, ters ilaç verilmesi için en az bir ya da akvaryum tuzları ile tamponlanmış ozmoz su, yanı sıra kontrol gruplar kullanılır. </li><li> Tanklar dozlama sırasında dış görsel uyaranlara klima balık önlemek için nötr ortamda olduğunuzdan emin olun. </li></ol></li><li> İlaç çözeltisi hazırlayın. Yumurtlama tanklarda yaşam su ile ilacın uygun miktarda karıştırın. Su 1497 ml olan yüksek seviyede dereceli etanol (% 95 denatüre edilmiş etanol) 3 ml birleştirerek% 0.2 etanol çözeltisi hazırlayın. Su 1479 ml etanol ve 21 ml birleştirerek% 1.4 etanol çözeltisi hazırlayın. </li></ol> 2. netleştirilmesine Balık ve Et-metanol Yönetimi Prosedürü <ol><li> Dikkatle net habitat tanklardan balık ve yumurtlama parçayı içeren uygun tutma tankına transferi. İdeal olarak, tamamen örgü ortadan kaldırmak için yumurtlama ekine balık ev. </li><li> Kendi tutma tanklardaki tüm balık, hafifçe yumurtlama tankından dışarı yerleştirin ve uygun ilaç solüsyon tankı (Şekil 1A) içine yerleştirin kaldırın. <ol><li> Gerektiği gibi dozaj zamanını kaydedin. Burada tarif edilen prosedüre için etanol çözeltisi içinde 30 dakika kullanın. </li><li> Mümkünse, asistanlar hassas dozlama süresi sağlamak için aynı anda ilaç çözüm tüm deney gruplarının transferi ile yardım var. Alternatif olarak, bir seferde bir grup transferi ve bireysel grupların dozaj kez (Şekil 1A) izlemenize. </li></ol></li><li> Gerekli dozaj lama dönemi sonunda, dikkatli bir şekilde yumurtlama inserti kaldırarak etanol çözeltisinden balık kaldırmailaç solüsyonu ve nazikçe geri tutma tankına yerleştirerek dışarı. </li><li> Tutma tankları balık ve sonraki zamanlanmış dozlama süresi kadar geri onların yaşam alanlarına yerleştirmek, ya da yumurtlama filelere ortadan kaldırmak için geri tutma tankına eklemek yerleştirin yavaşça net. </li><li> Hayvan barınma ekipman, ev tutma tankı olarak kullanılan aynı tankı ve yumurtlama astar içinde hayvanlar parametreleri içinde, daha önce, mümkünse de belirtildiği gibi. Bu uygulama prosedürü sırasında tamamen filelere ortadan kaldıracaktır. </li></ol> 3. Hareket Testleri <ol><li> Uzun 55 cm ve beyaz bir su geçirmez kat (Şekil 1B) ile derin 9.5 cm 9.5 cm genişliğinde bir aydınlık / karanlık arena edinin. Arenada beyaz kaplı ve yarı siyah kaplı yarısı, cırt kullanarak arena iç duvarları beyaz ve siyah su geçirmez yansıtıcı olmayan kağıt yapıştırmayın. 25-28 ° C arasındaki bir sıcaklıkta yaşam su ile 5 cm derinliğe kadar arena doldurun. BakımTest boyunca bu sıcaklık değilim. </li><li> Arena içinde yer alan için bir beyaz üç-taraflı muhafaza oluşturarak dış görsel uyaranlara minimalize. Test alanı su yüzeyinde yansımaları neden olmaz üstten ışıklandırma yaygın olan, henüz yeterince hareket izleme yazılımı, ya da yazı için parlak olduğundan emin olun video görüntüleri -hoc manuel sayısallaştırma. </li><li> Muhafazaya arena yerleştirin ve davranış izleme yazılımı kayıt ve hareket analiz parametrelerini ayarlamak. Araştırma sorusu bağlı olarak, 5-15 dakika için deneme süresini ayarlayın. NOT: Burada, biz 5 dakika kullanılır. </li><li> Balık grup yaşam tankında araştırma alanına test edilecek ulaşım ve arena muhafazanın dışında koyun. 10 dakika süre ile balık alıştırıldı. </li><li> Açık / koyu arena merkezinde uygun grup ve yerden yavaşça net bir balık, bu Avo için arena uzun eksenine paralel olduğunda balık açıklaması için emin olmakışık veya karanlık bölgeye balık kutuplama kimliği. </li><li> Hayvan yayımlandıktan hemen sonra kayıt davranışı başlar. Balık izleme veya balık atlama veya dondurulması için herhangi bir yazılım sorunları için izleyin. Konuların yarısı nedeniyle arena sonu muhafazanın açık ucuna doğru yönlendirilmiş olan kaynaklanan önyargıları herhangi boşa önlemek için test edildikten sonra, Arena 180 ° döndürün. </li><li> Deneme, hafifçe net sona erdi ve bir tanktan ya da yaşam tankına arenada balık çıkarın sonra. </li></ol> 4. Analiz <ol><li> Karanlık bölgelerde ışığa karşı harcanan zamanı inceleyin. Her yaş grubu ve her balık için, ışık ve karanlık bölgelerinde harcanan göreli bir zaman alması ve bir örnek t-testi kullanılarak analiz (veya Wilcoxon parametrik veriler için rank testi imzalı; fark, toplam deneme süresinin (yarım) 150 sn den) gruplar arasında anlamlı diğeri üzerinde bir bölgesini tercih olmadığını belirlemek için. </li><li> Bir prefe hesaplamak, tercihlerini karşılaştırmak içinkaranlık bölgede harcanan zaman ışık bölgesinde geçirdi ve gruplar arasındaki farklılıkları karşılaştırmak zaman çıkarılarak rekürensinden indeksi. t testleri iki grup karşılaştırmak için kullanılabilir. Tukey HSD post hoc testi kullanılarak varyans tek yönlü analizi ile birden fazla grubu karşılaştırmak gerektiğinde (Dunn çoklu karşılaştırma parametrik olmayan veriler için post hoc testi ile ya da Kruskal-Wallis testi). </li><li> Gruplar arasında hız, kıvrımlı bölge geçişler, sayısı ve hareketsizlik karşılaştırın. Tukey HSD post hoc testi kullanılarak varyansın tek-yönlü analizi kullanın gerektiğinde (Dunn çoklu karşılaştırma parametrik olmayan veriler için post hoc testi ile ya da Kruskal-Wallis testi). </li></ol>

<ol><li>Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+behaviour+and+ecology+of+the+zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio.</a> Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).</li>
<li>Langheinrich, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+new+model+on+the+pharmaceutical+catwalk%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk.</a> BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).</li>
<li>Santoriello, C., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hooked%21+Modeling+human+disease+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Hooked! Modeling human disease in zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).</li>
<li>Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+nicotine+and+alcohol+on+zebrafish+%28+Danio+rerio%29+shoaling%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling.</a> Behavioural brain research. , (2012).</li>
<li>Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buspirone%2C+chlordiazepoxide+and+diazepam+effects+in+a+zebrafish+model+of+anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).</li>
<li>Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversed+Scototaxis+during+Withdrawal+after+Daily-Moderate%2C+but+Not+Weekly-Binge+Administration+of+Ethanol+in+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish.</a> PLoS ONE. 8 (5), (2013).</li>
<li>Mathur, P., Guo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+of+acute+versus+chronic+ethanol+exposure+on+anxiety-like+behavioral+responses+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish.</a> Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).</li>
<li>Dlugos, C., Rabin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+effects+on+three+strains+of+zebrafish%3A+model+system+for+genetic+investigations%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).</li>
<li>Maximino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scototaxis+as+anxiety-like+behavior+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Scototaxis as anxiety-like behavior in fish.</a> Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).</li>
<li>Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+acute+and+chronic+ethanol+exposure+on+the+behavior+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).</li>
<li>Egan, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+behavioral+and+physiological+phenotypes+of+stress+and+anxiety+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish.</a> Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).</li>
<li>Gebauer, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+anxiolytics+in+zebrafish%3A+Similarities+and+differences+between+benzodiazepines%2C+buspirone+and+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).</li>
<li>Serra, M. C., Mattioli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+preference+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29+for+a+dark+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+J+Med+Biol+Res%22%5BJournal%5D)">Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment.</a> Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).</li>
<li>Maximino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+neurochemical+changes+in+the+zebrafish+leopard+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain.</a> Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).</li>
<li>Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anxiolytic+effects+of+nicotine+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Anxiolytic effects of nicotine in zebrafish.</a> Physiology & Behavior. 90 (1), 54-58 (2007).</li>
<li>Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+alcohol+dose%3A+population+differences+in+behavior+and+neurochemistry+of+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+Brain+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish.</a> Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).</li>
<li>Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preference+for+ethanol+in+zebrafish+following+a+single+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure.</a> Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).</li>
<li>Renninger, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+genetics+of+visual+processing%2C+function+and+behaviour+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish.</a> Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).</li>
<li>Crawshaw, L. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tolerance+and+withdrawal+in+goldfish+exposed+to+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol.</a> Physiology & Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).</li>
<li>Hamilton, T. J., Holcombe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tresguerres%2C+M.CO2-induced+ocean+acidification+increases+anxiety+in+rockfish+via+alteration+of+GABAA+receptor+functioning%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+B%22%5BJournal%5D)">Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning.</a> Proceedings of the Royal Society B. , (2014).</li>
<li>Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-body+cortisol+response+of+zebrafish+to+acute+net+handling+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Aquaculture%22%5BJournal%5D)">Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress.</a> Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).</li>
<li>Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+bloom-like+concentrations+of+two+marine+Synechococcus+cyanobacteria+%28strains+CC9311+and+CC9902%29+differentially+alters+fish+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Conservation+Physiology%22%5BJournal%5D)">Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour.</a> Conservation Physiology. 2 (1), (2014).</li>
</ol>

Yazarlar Şekil 1 için kullanılan onun fotoğraf ekipmanı kullanımı için Joshua Gallup kabul. Bu çalışma (TJH için) Doğal Bilimler ve Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) Kanada Discovery hibe ile desteklenmiştir.

Zebra balığı ilaç verilmesini içeren önceki çalışmalarda sadece ilaç solüsyonu 12,16 içine kendi tankından onları taşımak için balık filelere dayanmıştır. Netleştirme her zaman tutarlı değildir ve genellikle nedeniyle önemli bireysel değişkenlik zebrabalıkları, bir kaçış tepkisi beklenenden daha uzun sürer. Geleneksel transfer yöntemleri, yararlı ise de, balık, su dışında geçirmek toplam süreyi azaltarak, hem de hayvanlar arasındaki aktarım süresi değişkenlik miktarını azaltarak üzerine geliştirilebilir. Prat...

Zebra balığı (Danio rerio) davranışsal 1 ve tıbbi araştırma 2,3 için yararlı bir model organizmadır Hindistan&#39;da menşeli küçük bir teleost türdür. Balığı, sık davranışı üzerindeki etkilerini karakterize etmek amacıyla, çeşitli farmakolojik maddeler test kullanılır. Çeşitli dozlarda ve ilaç programları gibi uyarıcılar 4, anksiyolotikler 5 ve etanol 6-8 gibi bileşiklerin uygulanmasından sonra zebrafish davranışlarını araştırmak için kullanılmıştır. Bizim laboratuvar da yaygın scototaxic deneyi olarak adlandırılan iyi valide açık / koyu tahlil 9, 20, zebrafish anksiyete ve lokomosyon etanol idarenin programları farklı etkilerini araştırmıştır. Etanol uygulama yeni bir yöntem uzun bir zaman periyodu (21 gün) üzerinde 6 tekrarlayan, günlük uygulama için verimliliğini artırmak için geliştirilmiştir </s&gt; kadar. Daha önce kullanılan yöntemler ancak, biz ilişkili zaman maliyetleri ile, örgü azaltılmış bir yöntem geliştirmek için çalıştı, ve balık çok sayıda ilgi ilacın eşzamanlı, tam zamanlı yönetimini izin, pratik. Geleneksel araştırma kullanılarak, etanol içindeki, zebra balığı halinde ve etanol ve su 12/10 ve uygun bir karışım ihtiva eden başka bir tanka aktarılır. Bu yöntem yaygın olarak kabul iken, Zebra balığı örgü tanıtmak ve ilaç çözeltisinden balık kaldırmak için alınan zaman içinde değişkenlik artabilir. Bu nedenle, söz konusu bileşik için tam maruz tekrarlanan doz içeren bir deney boyunca değişebilir. Taşıma zamanlarda değişkenlik kaynaklanan hata kaynaklarını azaltan bir yöntem arzu edilir. Bizim yöntemi ile her balık özdeş dozlama süresi sonuçlanan, aynı anda tüm balık hareket edebiliyoruz. (Burada anlatıldığı gibi), etanol maruz kalmasını takiben, zebra balığı bir numbe test edilebilirkaygıyı ölçmek de dahil olmak üzere davranışsal deneyleri, r. Yeni yöntemi kullanarak balık grupları dozaj doğru çoğaltmak ve balık grupları konular arasında ve genelinde dozlama standardize etmek yeteneği ötesinde pratik kullanımları vardır. Araştırmacılar kendi deneylerde tekrarlanabilirliği ve doğruluğunu sağlamak için yöntemler kullanabilir görebilirsiniz seferde birden fazla balık takibi için izin verir, yeni yazılım gelişi. Davranışsal sinirbilim için bir model organizma olarak zebrafish yaygın kullanımı göz önüne alındığında, bu yöntem gelecekte farmakolojik çalışmalarda verimlilik ve pratiklik artacak. Mevcut paradigmada, tekrarlanan doz çizelgesi yaklaşık insan içme programları yansıttığının istihdam edildi. Kontrolü, günlük-orta, ya da haftalık-alem: Balık rastgele bir üç gruba ayrıldı. Dozlama çizelgesi önemli ölçüde önceki çalışmalarda 7 pozlama süreleri aşması nedeniyle seçilmiş, süresi 21 gün idi. Kontrol balık sıfır Alco aldıhol, günlük-orta balık günde bir kez% 0.2 alkol aldı ve haftalık-tıkınırcasına balık haftada% 1.4 alkol kez aldı. Açık / koyu bir görev geri çekilmesinden 2 gün sonra anksiyete değerlendirmek için kullanıldı. Bu bir tarafta duvar beyaz ve diğer tarafta 9 karanlık olan bir dikdörtgen arena kullanan yönetmek için basit bir testtir. Yetişkin Zebra balığı sağlam kontrol koşulları 6,9,13 altında arena karanlık tarafını tercih ederim. Artan anksiyete operasyonel karanlık bölgede harcanan önemli ölçüde daha fazla zaman olarak tanımlanan ve balık ışık bölgesi harcanan nispeten daha fazla zaman harcıyor zaman anksiyete kabul edilebilir azalmıştır. Hareket-izleme yazılımı ile, diğer bilgilendirici değişkenler de ortalama hız, hareketsizlik, kıvrımlı dahildir, miktarı ve bölge 14 geçişler olabilir. Laboratuvarda geliştirilen dozajlama metodu suda çözünür bileşikler, bir veya daha fazla zebrafi için tatbik edilen herhangi bir araştırma için geçerli olabilirsh. Bu metodoloji yararlanabilecek diğer birçok farmakolojik ajanlar da zebrabalıkları test ediliyor. Genel olarak test bileşikleri, etanol benzer bir şekilde içinde çözülür nikotin, klordiazepoksid, buspiron ve skopolamin, yer alır; su içine kimyasal uygun bir miktarda karıştırarak. Bu nedenle, bu işlemin genel kapsamı çok daha geniş ve etanol ile sınırlı değildir. Ayrıca, birden fazla gün boyunca ilaç verilmesinden sonra, açık / koyu bir görev kullanılabilirdi birçok davranış testleri sadece bir tanesidir. İlaç uygulamasından sonra veya çekilme sırasında, kullanılabilir diğer popüler deneyler yeni tankı dalış testi 15 ve 16 shoaling gibi sosyal davranış testlerini kapsamaktadır. Aşağıdaki prosedür tekrar tekrar ilgi farmakolojik bileşiği içeren çözümler balık ya da bireysel balık gruplarının nakledilmesi etkili bir yöntem açıklayacağım. Buna ek olarak, ışık / karanlık testi ile test anksiyete süreciAlkol tatbikat uzun programları maruz bırakıldıktan sonra geri çekme olan balık gruplar olarak tarif edilecektir.

<table><tbody><tr><td>Üç raflı masaüstü barındırma sistemi</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/research-systems/z-hab-system/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>400 &amp;mu;m bölmeye sahip 1.5 L yumurtlama tankı</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/consumables/tanks-lids-and-baffles/info/nursery-tank-and-baffles/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Saf Tahıl Etanolü</td><td><a href="http://www.luxco.com/brands/vodka-neutral-spirits-neutral-spirits-everclear" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Luxco, INC</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethovision XT Hareket takip yazılımı</td><td><a href="http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Noldus Information Technology</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet</td><td><a href="http://eshop.eppendorf.ca/categories/1" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Eppendorf Canada</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Işık/Karanlık Arenası</td><td>Özel yapım</td><td></td><td>Prosedür açıklamasına göre oluşturun. 9.5 cm genişlik, 9.5 cm derinlik, 55 cm uzunluk.</td></tr></tbody></table>

Çoklu zebra balığı için İlaç İdaresi bir roman yöntemi ( danio rerio) ve Çekilme niceleme

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) and the Quantification of Withdrawal

Zebra balıklarında anksiyete testi genellikle farmakolojik maddelerin uygulanmasıyla birlikte incelenir. Bu çalışmalarda, balıklar rutin olarak ağlara bağlanır ve ev akvaryumları ile dozaj tankları arasında taşınır. Bileşik uygulama kolaylığını arttırmak için, ilaç uygulaması için balıkların tanklar arasında aktarılması için yeni bir yöntem geliştirilmiştir. Yumurtlama için tasarlanmış ekler, balık gruplarını ilaç çözeltisine aktarmak için kullanıldı ve gruptaki tüm balıkların doğru bir şekilde dozlanmasına izin verdi. Bu, tekrarlanan ilaç uygulamasının uzun programlarında çok önemli hale gelen dozlamanın hassasiyetini ve verimliliğini artırır. Bu prosedürü, farklı 21 günlük programlarla etanol uyguladıktan sonra zebra balığının aydınlık / karanlık testindeki davranışını inceleyen bir çalışmada kullanılmak üzere uyguladık. Günlük-orta derecede alkole maruz kalan balıklarda, kontrol grubuna kıyasla 2 günlük çekilmeden sonra yer tercihinde önemli bir fark vardı. Bununla birlikte, haftalık tıkınırcasına uygulamaya maruz kalan bir grupta yer tercihinde anlamlı bir fark gözlenmedi. 
Bu protokol, suda çözünür olan her tür bileşikle kullanım için genelleştirilebilir ve uzun ilaç uygulama programları sırasında veya sonrasında balıkların davranışlarının incelendiği herhangi bir durumda kullanılabilir. Aydınlık/karanlık testi, kaygıda yoksunluğun neden olduğu değişiklikleri değerlendirmek için de değerli bir yöntemdir.

Yukarıda tarif edildiği gibi sürekli olarak ve doğru bir zaman etanol tatbikat süresi önemlidir zebrabalıkları farmakolojik çalışmalarda doğruluk ve kontrolü sağlamak için. Bizim prosedür dozlama prosedürünün kolaylığı ve verimi artırabilir. Haftalık-aşırı ya da günlük orta derecede ya da zamanlama etanol yönetim kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, aydınlık / karanlık testi ile ölçülen değiştirilmiş anksiyete, sonuçlandı. Iki gün son dozdan sonra test edildiğinde, (alkol aldı, ama yine de dozlama tankları taşındı) k...

Balıkları ilaçlara maruz bırakırken değişkenliği azaltmak için yeni bir yöntem açıklanmıştır. Çeşitli etanol maruziyeti modellerine maruz kalan balıkların, açık / koyu skotaktakik bir testte geri çekilme sırasında anksiyete seviyelerinin değiştiği bulundu.

Çoklu Zebra balığı için İlaç İdaresi Bir Roman Yöntemi ( Danio rerio) Ve Çekilme Niceleme

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely ...

Bu prosedürün genel amacı, tekrarlanan dozlamanın geri çekilme davranışı üzerindeki etkilerini değerlendirmek için balık gruplarını etanol ile doğru ve verimli bir şekilde dozlamaktır. Bu, ilk olarak zebra balığının dozlanmasıyla, tüm balık gruplarının belirli süreler boyunca aynı anda ilaca maruz kalmasına izin vermek için geliştirilmiş yeni bir yöntem kullanılarak gerçekleştirilir. İkinci adım, etanol çekilmesinin belirli etkilerinin test edilmesine izin veren bir programda balığın dozlanmasına devam etmektir.Daha sonra, geri çekilme sırasında balıklar, hareketi kaydetmek için hareket izleme yazılımı kullanılarak açık karanlık bir görevde ayrı ayrı test edilir. Son adım, etanol çekilmesinin zebra balığı davranışı üzerindeki etkilerini araştırmak için verileri analiz etmektir. Sonuç olarak, tarif edilen prosedür kullanılarak tekrarlanan etanol dozu, iki günlük geri çekilmeyi takiben zebra balığının davranışı üzerinde geçici ancak belirgin bir etkiye neden olur.Bu tekniğin temel avantajı, büyük balık gruplarına aynı anda ilaç uygulanmasına izin vermesi ve uzun süreler boyunca tekrarlanan ilaç, ilaç veya toksin maruziyetini içeren çalışmalar için ideal olmasıdır. Bu yöntem, yoksunlukla ilgili davranışların nicelleştirilmesi gibi nörofarmakoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu yöntem için ilk olarak, aynı anda birden fazla balığa etanol vermeye çalıştığımızda ve ağ oluşturmanın ilaç uygulamak için hem yanlış hem de kesin olmayan bir yöntem olduğunu gördüğümüzde aklımıza geldi.Başlamak. Herhangi bir zaman karışıklığından veya görsel uyaranlara önyargıdan kaçınmak için hayvanların aynı ortamda ve günün aynı saatinde dozlanacağı şekilde bir uygulama programı hazırlayın. Daha sonra, günde iki balık grubunun test edilmesine izin vermek için grup boyutlarının sayısı için gerektiği kadar aynı 1,5 litrelik şeffaf polipropilen yumurtlama tankı elde edin.Tank başına sekiz balıklık gruplar kullanın, grup başına bir tutma tankı ve bir dozaj tankı gereklidir. Bu nedenle, tank sayısı grup sayısının iki katıdır. Daha sonra tüm tutma tanklarına 400 mikronluk yumurtlama ekleri yerleştirin.Tankları burada uygun sıcaklıkta habitat, su veya ters ozmoz suyu ile doldurun. Zebra balıkları için 25 ila 28 santigrat derece kullanılır. Dozajlama sırasında şartlandırmayı, balıkları dış görsel uyaranlara maruz bırakmamak için tankların nötr bir ortamda olduğundan emin olun.Daha sonra dozaj tanklarında ilacın uygun miktarı habitat suyu ile karıştırılarak ilaç solüsyonu hazırlanır, burada %0.2'lik etanol solüsyonu ve %1.4'lük etanol solüsyonu tanktaki su ile birleştirilerek hazırlanır. Balıkları habitat tanklarından dikkatlice ağlayın ve yumurtlama ekini içeren uygun tutma tankına aktarın. İdeal olarak, tüm balıklarla birlikte kendi tutma tanklarındaki ağları tamamen ortadan kaldırmak için balıkları yumurtlama ekinde barındırın.Yumurtlama ekini tutma tankından yavaşça kaldırın ve uygun ilaç çözeltisi tankına yerleştirin. Mümkünse, hassas dozlama süresini sağlamak için tüm grupların aynı anda ilaç çözeltisine aktarılması konusunda yardım alın. Dozlama süresini gerektiği gibi kaydedin.Etanol çözeltisinde 30 dakika, gerekli dozlama süresinin sonunda burada açıklanan prosedür için kullanılır. Yumurtlama ekini ilaç çözeltisinden dikkatlice kaldırarak ve yavaşça tutma tankına geri yerleştirerek balığı etanol çözeltisinden çıkarın. Beyaz su geçirmez bir zemine sahip, dokuz buçuk santimetre genişliğinde, 55 santimetre uzunluğunda ve dokuz buçuk santimetre derinliğinde açık karanlık bir arena elde edin.Arenanın yarısı beyaz, yarısı siyahla kaplı, Velcro kullanarak arenanın iç duvarlarına beyaz ve siyah su geçirmez yansıtıcı olmayan bir kağıt sabitleyin, arenayı 25 ila 28 santigrat derece sıcaklıkta habitat suyu ile beş santimetre derinliğe kadar doldurun. Test boyunca bu sıcaklığı koruyun, arenanın yerleştirilmesi için beyaz üç taraflı bir muhafaza oluşturarak dış görsel uyaranları en aza indirin. Test alanının dağınık ek yüke sahip olduğundan emin olun.Su yüzeyinde yansımalara neden olmayan aydınlatma, hareket izleme yazılımı veya video görüntülerinden post hoc manuel niceleme için yeterince parlaktır. Ardından, davranış izleme yazılımının kayıt ve hareket analizi parametrelerini, araştırma sorusuna bağlı olarak beş ila 15 dakikalık bir deneme süresi ile ayarlayın, test edilecek balık grubunu habitat tankındaki araştırma alanına taşıyın ve arenanın dışına yerleştirin. Muhafaza. Balığın 10 dakika alışmasına izin verin.Uygun gruptan bir balığı nazikçe ağa bağlayın ve açık karanlık arenanın ortasına yerleştirin, her balığı arenanın uzun eksenine paralel olarak konumlandırıldığında serbest bırakın. Balığın aydınlık veya karanlık bölgeye sapmasını önlemek için, hayvan serbest bırakıldıktan hemen sonra davranışı kaydetmeye başlayın. Deneme sona erdikten sonra, balığın izlenmesi veya balıkların zıplaması veya donması ile ilgili herhangi bir yazılım sorunu olup olmadığına dikkat edin, balığı arenadan bir bekletme tankına veya habitat tankına nazikçe ağ ile bağlayın ve çıkarın.Deneklerin yarısı test edildikten sonra arenayı 180 derece döndürün, arenanın hangi ucunun muhafazanın açık ucuna doğru yönlendirildiğinden kaynaklanan önyargılardan kaynaklanan karışıklıkları önlemek için. Her grup ve her balık için aydınlık ve karanlık bölgelerde geçirilen süreyi inceleyerek analize başlayın, aydınlık ve karanlık bölgelerde geçirilen göreceli süreyi elde edin ve grupların bir alanı diğerine göre önemli ölçüde tercih edip etmediğini belirlemek için tek örnekli bir T-testi kullanarak analiz edin. Tercihleri karşılaştırmak için, aydınlık bölgede geçirilen süreyi karanlık bölgede geçirilen süreden çıkararak bir tercih dizini hesaplayın ve gruplar arasındaki farkları karşılaştırın.T-testini kullanarak, parametrik olmayan veri setleri için gerektiğinde, iki anahtar, dürüst anlamlı fark post hoc testi kullanarak tek yönlü bir varyans analizi ile birden fazla grubu karşılaştırın. Resco Wallace testini Dunn'ın çoklu karşılaştırma post hoc testi ile kullanın, ardından gruplar arasında hızı, bölge geçişlerinin sayısını, dolambaçlı ve hareketsizliği karşılaştırın. Tek yönlü varyans analizini kullanarak, yine iki anahtar, gerektiğinde dürüst anlamlı fark post hoc testi kullanın.Etanolün haftalık veya günlük ılımlı bir programda uygulanması, kontrollerle karşılaştırıldığında açık karanlık bir testle ölçüldüğü gibi anksiyete seviyelerinin değişmesine neden oldu. Burada, her koşul için beş dakikalık açık karanlık deneme boyunca tek bir kontrol zebra balığı hareket yolunun temsili parkur çizimleri gösterilmektedir. Aynı zebra balığı parkur grafiği, deneme boyunca zebra balığı hareketinin renkli bir temsili olan bir ısı haritası olarak temsil edilir.Balığın her bir pikselin temsil ettiği konumda geçirdiği süreye bağlı olarak. Son dozlamadan iki gün sonra test edildiğinde, kontrol grubundaki zebra balığı, arenanın karanlık tarafında önemli ölçüde daha fazla zaman geçiren kontrol balığı ile beklenen davranış modelini gösterdi. Diğer çalışmalardaki saf zebra balıklarına benzer şekilde, haftalık tıkınırcasına yemek yiyen gruptaki balıklar, son etanol uygulamalarından iki gün sonra test edildiğinde, görevdeki aydınlık veya karanlık bölgeleri tercih etmedi.İlginç bir şekilde, günlük ılımlı gruptaki balıklar, arenanın aydınlık bölgesini önemli ölçüde tercih etti. Kontrol grubunun aksine, tercih indeksi kontrol ve günlük ılımlı gruplar arasında anlamlı bir fark olduğunu gösterdi. Gruplar arasında yüzme hızı veya hareketsizlik açısından önemli bir fark yoktu ve bu nedenle bu etki balıklardaki motor eksiklikten kaynaklanmıyordu.Bu prosedürü denerken, ilgilenilen farmakolojik bileşiği balığı beslemeden önce veya sonra günün aynı saatinde uygulamayı unutmamak önemlidir. Bu nedenle, etanol veya diğer farmakolojik bileşiklerle yapılan bu prosedürün ardından, bağımlılık ve yoksunluk gibi şeyleri değerlendirmek için diğer zebra balığı davranış testleri yapılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, davranışsal testler için zebra balığı gruplarını verimli ve doğru bir şekilde nasıl dozlayacağınızı iyi anlamış olmalısınız.Bu prosedürü takiben, özellikle yumurtlama eklerini kullanmak, balıkları dozlarken hassasiyeti sağlamanın harika bir yoludur.

a-novel-method-drug-administration-to-multiple-zebrafish-danio-rerio

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Video, etanole maruz kaldıktan sonra zebra balıklarında anksiyete ile ilgili davranışı incelemek için aydınlık-koyu tercih testini açıklamaktadır.

Aydınlık-Koyu Tercih Testi: Zebra Balıklarında Kaygı ile İlgili Davranışları İncelemek İçin Bir Yöntem

Zebra balığı, enerji homeostazı çalışmaları için önemli bir model organizmadır.  NADH2'ye duyarlı bir redoks indikatörü olan alamar Blue'yu kullanarak, zebra balığı larvalarının metabolik hızını 96 oyuklu plaka formatında ölçen ve ilaç veya gen keşfine uygulanabilen bir test geliştirdik.

Yüksek Verimli<em&gt; Danio rerio</em&gt; Enerji Harcaması Deneyi

Bu iletişim kuralı fluorescently etiketli gıda yüksek üretilen iş moda larva zebra balığı bağırsak yoluyla transit süresini ölçmek için hedeftir.

Yüksek işlem hacmi ölçüm larva zebra balığı kullanarak Gut Transit süre

Bu yazıda yetişkin zebrafish stres davranışsal ölçmek için basit bir yöntem açıklanmaktadır. Yaklaşım, stresli bir durumda, zebra balığı bir tankın alt yarısını tercih ettiği doğuştan gelen eğilimin avantajlarından yararlanır. Biz de Farmakoloji ile tahlil bağlantı için yöntemleri tarif.

Zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar

Zebra balığı embriyoları kimyasal bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için kullanılır. Onlar harici geliştirmek ve kimyasallara duyarlı, ince phenotik değişikliklerin tespitine izin. Deney sadece doğrudan embriyo içeren plaka eklenir bileşik küçük bir miktar gerektirir, test sistemi verimli ve maliyet-etkin hale.

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

Zebrabalığı ksenogreft modelleri, in vivo mikroortamda yüksek üretimli ilaç taraması ve insan kanser hücrelerinin floresan görüntülemesini sağlar. Zebra balığında hasta kaynaklı lösemi örnekleri üzerinde otomatik floresan mikroskop donanımlı görüntüleme ünitesi kullanılarak büyük ölçekli, otomatik ilaç taraması için bir iş akışı geliştirdik.

Zebrabalığında Primer Hasta Kaynaklı Tümör Xenograftların İlaç Taraması

Burada, kimyasalların (örneğin, metamfetamin ve glifosat) yetişkin zebra balığı üzerindeki potansiyel nörotoksik etkilerini tek bir tank kullanarak etkili bir şekilde belirlemek için yeni tank, Shoaling ve sosyal tercih testleri dahil olmak üzere kapsamlı bir davranışsal test bataryası sunuyoruz. Bu yöntem nörotoksisite ve çevresel araştırmalarla ilgilidir.

Tek Bir Tankta Davranış Testleri Bataryası Kullanılarak Yetişkin Danio rerio'da Nörotoksisite Değerlendirmesi

Yetişkin zebra balıklarında yeni bir intraperitoneal (IP) enjeksiyon yöntemi tanımlanmıştır. Doksorubisin gibi toksik bileşiklerle çalışırken, bu prosedür daha önce bildirilen iki IP yönteminden daha etkilidir. Teknik, zebra balığı modelinde sınırlı deneyime sahip araştırmacılar tarafından kolayca benimsenecek şekilde tasarlanmıştır.

Yetişkin Zebra Balıklarında Vücut Hasarını ve İlişkili Mortaliteyi En Aza İndiren Bir İntraperitoneal Enjeksiyon Tekniği

Bu protokol, zebra balığı larvalarında döllenmeden 3-7 gün sonra bir ilaç tarama prosedürünü ve ardından morfolojik değerlendirmeyi tanımlar.

Erken Evre Zebra Balığı Larvalarında Küçük Molekül Taraması ve Toksisite Testi

Bu çalışma, yetişkin zebrabalıklarda kesin, invaziv olmayan, vücut kütlesine dayalı oral ilaç dağıtımını mümkün kılan jelatin bazlı bir beslenme yöntemini sunmaktadır. Protokol, güvenilir besleme kabulünü ve prensip kanıtı olarak MK-801'in başarılı bir şekilde teslim edilmesini gösteriyor; bu da beklenen davranışsal etkileri ortaya çıkardı.

Balıklarda Oral İlaç Dağıtımına Basit ve Kesin Bir Yem Tabanlı Yaklaşım

Keşfedin, Danio rerio gruplarına eşzamanlı etanol verme ve çekilme davranışlarını hareket izleme ile analiz etme yöntemini. Bu teknik, nörofarmakolojide ilaç maruziyeti değişkenliğini azaltarak güvenilir sonuçlar sağlar.

Çoklu Zebra balığı için İlaç İdaresi Bir Roman Yöntemi ( Danio rerio) Ve Çekilme Niceleme

Daha fazla video keşfet