Name: Bitkiler ve Yeşil Alg Işık hasat Kompleksleri İn Vitro Sulandırma içinde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 55 s
Description: Öğrenin bitkiler ve yeşil alglerde ışık hasat pigment-protein komplekslerini in vitro yeniden yapılandırma yöntemini. Bu protokol, spektroskopik analizlerle yüksek verimli kompleks elde etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Avrupa Araştırma Konseyi tarafından RC'ye bir ERC başlangıç/konsolidatör hibesi ve Hollanda Madde Araştırma Vakfı (FOM) tarafından bir FOM programı (10TM01) aracılığıyla desteklenmiştir.

Ispanak Yapraklarından 1. Toplam Pigment Ekstraksiyon <ol><li> Öğütme soğuk tampon 100 ml ıspanak yaprağı (~ 20 g), homojen bir avuç 20 saniye boyunca bir karıştırıcı kullanılarak (Tablo 1 e bakınız). </li><li> 4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 1500 x g&#39;de 20 um ve santrifüj filtre ürünü bir gözenek çapına sahip naylon kumaş iki katmanı boyunca solüsyonu filtre. </li><li> Yumuşak bir sanatçı ile kloroplast içeren topak soğutulmuş Yıkama Tamponu, 1 ml boya fırçası süspanse (Tablo 1 e bakınız). Topak tekrar askıda bırakılmıştır sonra, 4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 10,000 x g&#39;de santrifüj Yıkama Tamponu ve 50 ml solüsyon ilave edin. </li><li> Yıkama Tamponu 50 ml pelet (tilakoidler) tekrar süspansiyon yavaşça Süpernatantı ve (Tablo 1 e bakınız). </li><li> 4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 10,000 x g&#39;de santrifüj ve çözelti tamamen supernatant çıkarın. Bu noktada, boya oksidasyonu önlemek için karanlıkta aşağıdaki adımları gerçekleştirmek. </li&gt; <li> Na 2 CO 3 ile tamponlanmış% 80 aseton, 20 ml pigmentleri elde etmek için (Tablo 1 e bakınız) ~ ekleyin. Bazen vorteks, 10 dakika boyunca buz üzerinde çözeltisi bırakın. </li><li> 4 ° C&#39;de 15 dakika boyunca 12,000 x g&#39;de santrifüj ile hücresel bileşenlerini Pelet. Not: pigmentler tamamen ekstre değil ise, topak yeşil bir renge sahip olabilir ve 1,6 tekrar edilmelidir adım olacaktır. </li><li> Bir ayırma hunisi içine supernatant toplamak. Dietiletere 0.4 birimler eklemek şiddetle sarsmak ve gazın boşaltılması vanasını açın. </li><li> 0.33 M NaCl 0.8 hacimlerini ekleyin ve kuvvetlice karıştırın. Fazların ayrılması için ~ 10 dakika bekleyin. Üst Eter fazı ekstre pigmentler içerir. Berrak bir alt faz çıkarın. Not: Ayırma açık değilse, dondurma ve faz ayrışmasını geliştirmek için bir çözüm eritin. </li><li> Uygun bir cam kap içine, ayırıcı bir huniye üstten dökülerek eter çıkarın. Gran bir kaşık ekleyerek Kurunitlerin susuz sodyum sülfat. Çözeltisi girdap ve eterden su absorbe kurutucu için ~ 5 dakika izin verir. NOT: sodyum sülfat tamamen kümeleştiler görünüyorsa bu adımı tekrarlayın; Eter yeterince kurutulur, bazı serbest yüzen kristaller olmalıdır. Bir su tabakası oluşması durumunda, ilave susuz sodyum sülfat ilave edilmeden önce bir yeniden süspanse ile çıkarın. </li><li> Arkasından, sodyum sülfat katı bırakarak yeni bir cam kaba eter süzün. </li><li> Döner bir speedvac ya da N2 akışı altında eter buharlaştırın. </li><li> % 100 aseton, 10 ml tamamen pigmentler çözülür. </li><li> % 80 aseton, 1 ml içine az miktarda (~ 3 ul) seyreltin ve soğurma spektrumunu ölçmek ve Porra ve arkadaşları tarafından tarif edilen yöntem ile Chl a / b oranı ve Chl konsantrasyonunu belirler. (1989) 15. </li><li> Aseton kadar kısım ve döner bir speedvac ya da N2 akışı altında kuru pigmentlertamamen buharlaştırıldı. -80 ° C de kurutuldu pigmentler saklayın. </li></ol> Ispanak gelen Karotenoidler 2. Ekstraksiyon <ol><li> Adımları 1,1-1,5 izleyin. Bu noktada, boya oksidasyonu önlemek için karanlıkta aşağıdaki adımları gerçekleştirmek. </li><li> Pigmentleri elde etmek için, Na 2 CO 3 (Tablo 1 e bakınız) ile tamponlanmış ~ 50 ml% 96 etanol içinde Tilakoid pelletini. 5 dakika boyunca buz üzerinde çözeltisi bırakın. </li><li> 4 ° C&#39;de 15 dakika boyunca 12,000 x g&#39;de santrifüj ile hücresel bileşenlerini Pelet. Not: pigmentler tamamen ekstre değil ise, topak yeşil bir renge sahip olabilir ve 2,2 tekrar edilmelidir adım olacaktır. </li><li> Supernatant toplamak ve (w / v) sabunlaştırılmasını başlatmak için% 80 KOH ve 0.1 hacim ekleyin. </li><li> 4 ° CO / N de çözümü bırakın, sıkıca kapatılmış ve ışıktan korunmalıdır. </li><li> Bir ayırma hunisi içine çözeltisi toplayın. Dietil eter 1 hacim ekleyin ve hafifçe karıştırın. </li><li> 0.8 vol Ekle0.33 M NaCl Umes ve hafifçe karıştırın. Fazların ayrılması için ~ 10 dakika bekleyin. Üstünde turuncu eter fazı sabunlaştırılmış karotenoidler içerir. Huninin vana içinden boşaltılmasını tarafından yeşil alt faz çıkarın. </li><li> 3 hacim su ilave edin ve potasyum hidroksit çıkarmak için yavaşça karıştırın. Katmanlar ayrılmaya bırakılır. Not: üst faz bulutlu görünürse, NaCI, az miktarda ilave (örneğin, 3 çözeltisi 200 ml NaCI g) ve yavaşça girdap eritin. </li><li> Huninin vana ile süzülmesiyle alt faz çıkarın. </li><li> Takip 1,10-1,13 adımları. </li><li> % 80 aseton, 1 ml içine az miktarda (~ 3 ul) seyreltin ve% 80 aseton içinde 440 nm&#39;deki absorpsiyon spektrumları ölçer. Konsantrasyonunu belirlemek için, karotenoidler için ortalama yok olma katsayısı kullanılan aşağıdaki formül 16 (440 ε = 255): Araba [mg / ml] = (Abs, 440 nm / 225) x 11 (optik yol) = 1 cm. </li><li> Kısım ve kuru carotenoibir speedvac veya tüm dietileter kadar N2 akışı altında buharlaştırılmıştır DS edilmiştir. -80 ° C de kurutuldu pigmentler saklayın. </li></ol> Chlamydomonas 3. Toplam Pigment ve Karotenoit Ekstraksiyon reinhardtiinin <ol><li> C büyütün yüzey üzerine sıvı kültür az miktarda yayılması ile bir petri çanağı içinde katı ortam TAP 17 reinhardtii. 20 ľmol fotoğraflar PSA m -2 sn sürekli aydınlatma akı altında büyümeye -1 hücre yeşil tabaka görünür oluncaya kadar. </li><li> Steril bir aşılama döngü kullanılarak C arasında bir miktar hasat Katı TAP ortamından reinhardtii bir 1 L şişe TAP ortamı 17 500 ml hücreleri koydu. 20 umol m-2 resimleri, PSA sn&#39;lik bir sürekli aydınlatma akışı altında 170 rpm&#39;de çalkalanarak 25 ° C&#39;de kültür büyütün -1. </li><li> 5-6 gün sonra, kültür logaritmik fazın sonuna ulaşmalıdır (6 x 10 6 hücre / mLya da 750 nm&#39;de optik yoğunluk 2-2.5). 4 ° C&#39;de 15 dakika boyunca 4000 x g&#39;de santrifüje kültürü. </li><li> Toplam pigment çıkarımı için, adımları 1,6-1,15 izleyin. </li><li> C. tam büyüme kültürü 500 ml başlayarak toplam pigment ekstresinin verim reinhardtii + b / mL, 0.5 mg a CHL bir konsantrasyon ile çözelti yaklaşık 5 ml&#39;dir. </li><li> Karotenoidler çıkarımı için, adımları 2,2-2,12 izleyin. </li></ol> İçerme Kuruluşlarının 4. saflaştırılması <ol><li> Standart moleküler biyoloji prosedürleri kullanılarak bir kaynaşmış bir C-terminal His etiketi ile sonuçlanan bir ekspresyon vektörü içine ilgi LHC&#39;in proteininin kodlama dizisi klonu. E. içine bu yapı Dönüşümü örneğin, BL21 (DE3) gibi E.coli host suşu. </li><li> Hazırlama Liziz tamponu, deterjan tamponu, Triton tamponu TE (Tablo 1), 1 M izopropil β-D-1-tiogalaktopiranosid (IPTG) ile, uygun antibiyotik ile LB ortamı 18. </li><li> Bir SINGL seçinE E. Standart prosedürler kullanılarak, uygun 6 antibiyotiklerle LB ortamının ~ 5 ml yeni boyanmış bir plakaya ekspresyon klonu içeren E. coli kolonisi. En az 16 saat boyunca 220 rpm&#39;de çalkalanarak 37 ° C&#39;de büyütülmüştür. </li><li> O 2.5 ml /, uygun antibiyotik ile takviye edilmiş LB 250 ml bir 1 L&#39;lik Erlenmeyen şişesi içine K kültürü. </li><li> 2-3 saat boyunca hücrelerin büyümesine 220 ​​rpm&#39;de 37 ° C&#39;de (ya da O.D. oluşana kadar 600 ~ 0.6). </li><li> 1 mM&#39;lik nihai bir konsantrasyona kadar IPTG ilave edin. 220 rpm&#39;de 3-4 saat 37 ° C&#39;de hücreler büyümeye devam etmektedir. </li><li> Önceden tartılmış bir santrifüj tüpüne 4 ° C&#39;de 5000 x g&#39;de 10 dakika boyunca santrifüj kültür. Iyice Süpernatantı atın ve yeniden tartma ve santrifüj tüpü ağırlığı çıkarılarak ağırlık pelet belirler. </li><li> E. süspanse 0.8 ml / güçlü döndürülerek liziz tamponu g E. coli hücre topağı. Not: Alternatif olarak, hücre topağı -80 ° C&#39;de dondurulabilirDaha sonra kullanılmak üzere ° C. Dondurulmuş bir pelet ile başlanırsa, liziz tamponu ilave edilmeden önce tam olarak çözünmesine izin. </li><li> Hücrelerin gramı başına 2 mg lisozim ekleyin ve 30 dakika boyunca arada sırada burgaç gibi ıslak buz üzerinde inkübe edilir. </li><li> 20 ug / ml DNAz, 10 mM MgCl2, 1 mM NaCI, 20 ug / ml RNAse ekleyin. Karıştırın ve 30 dakika için buz üzerine yerleştirilmiştir. </li><li> Hücre gramı başına soğuk Deterjan tampon maddesinin 2 ml ilave edilir. İyice karıştırın ve 5 dakika boyunca oda tutun. </li><li> 2 ml santrifüj tüplerine transfer (gerekirse iki tüp içine bölünmüş). 4 ° C&#39;de 12,000 x g&#39;de 10 dakika boyunca santrifüje cisimciği: pelet. </li><li> Tampon soğuk Triton 1 ml ekleyin ve tamamen sonification tarafından pelet (20 sn aralıklarla 3 bakliyat x 5 sn x% 50 güç) tekrar süspansiyon. NOT: sonification sırasında soğuk tutmak için buzlu su ile çevrili küçük bir beher tüp var. Birden fazla tüp durumunda, yeniden süspansiyon haline getirilmesi sonra bir tüp içine yeniden süspansiyon haline getirilmiş cisimciği birleştirir. </li><li> 12,000 10 dakika boyunca santrifüj4 ° C&#39;de xg cisimciği: pelet. </li><li> Adımı tekrarlayın 4.13 ve 4.14 iki kez. </li><li> Triton tampon kaldırmak için bir yıkama için sonifikasyon soğuk TE 1 ml cisimciği yeniden süspanse edin. 4 ° C&#39;de 12,000 x g&#39;de 10 dakika boyunca santrifüje cisimciği: pelet. </li><li> Sonifikasyon soğuk TE 1 ml pelletini. </li><li> Bu Bradford tahlili 19 gibi standart yöntemler ile protein konsantrasyonu değerlendirin. -20 ° C&#39;de saklayın inklüzyon cisimleri alikotları. </li></ol> 5. Sulandırma Absorbans Qy bölgesine (600-750 nm) olarak ölçülür, bu protokol, genellikle 4 OD&#39;ye ile yeniden protein 1-2 ml verir. Bakım işlemi sırasında uygun oranlarının muhafaza edilmesi için gereken miktarı, ancak, istendiği gibi ayarlanabilir. <ol><li> 2x Sulandırma Tamponu,% 20 RG, 2M KCI, TE, Tablo 1 &#39;de tarif edildiği gibi aşağıdaki çözümleri hazırlayın. Aşağıdaki s gerçekleştirinloş ışıkta Teps&#39;in. </li><li> 2 ml mikrofuge&#39;de tüp 400 ul TE toplam LHC Eklenmesi Organları 800 mikrogram süspanse. 2x Sulandırma Tampon ve vorteks kısaca 400 ul ekleyin. </li><li> 10 mM&#39;lik bir son konsantrasyon için β-merkaptoetanol (14.8 M stok), 0.6 ul ekleyin. 98 ° C&#39;de 1 dakika boyunca proteini ısıtın. 3 dakika boyunca oda sıcaklığında Vortex kısa ve yer. </li><li> 1-2 dakika boyunca kuvvetli bir şekilde bir banyo sonikatörü içinde 1 dakika ya da bir yer girdaplanarak 30 ul% 100 EtOH toplam kurutulmuş klorofil pigmentlerin 500 ug ve 80 ug karotenoid pigmentler yeniden süspanse edin. </li><li> 4 ° C&#39;de 15,800 xg ~ 30 sn pigment karışımı Spin ve hiçbir pelet olduğunu onaylayın. Pelet varsa, vorteksleme ve / veya sonifikasyon tekrarlayın. ÖNEMLİ: yeniden süspansiyon ve spin sonra, hemen proteine ​​pigment eklemek veya toparlayıp tekrar yeniden süspanse gerekecektir. </li><li> Vorteks edilirken yavaşça soğutuldu proteine ​​pigment karışımı ekleyin. Girdabına 5-10 s DevamIslak buz üzerinde ec ve yer tüpü. Protein tüpün üst taşabilir de dinç bir şekilde vorteks için dikkatli olun. </li><li> % 20 Octyl β-D-glukopiranozide (OG) (son konsantrasyon% 2), vorteks kısaca 94 ul ekleyin ve buz 10 dakika devam. </li><li> Kısaca M KCI 2 (nihai konsantrasyon 150-200 mM) girdap 90 ul ilave edin ve 20 dakika buz üzerinde tutun. NOT: kolon hazırlama (Bölüm 6) şu anda başlatılabilir. </li><li> 4 ° C&#39;de 15,800 x g&#39;de 10 dakika boyunca spin. 10 ml tüp (LDS çöktürülmüş) pelet bozmadan süpernatantı. Soğuk ve ışıktan korumalı tutun. </li></ol> 6. Nikel Kolonu Saflaştırması <ol><li> RG tamponu, RG durulama tamponu Ayrıştırma Tamponu: Tablo 1 de tarif edildiği gibi aşağıdaki çözümleri hazırlayın. </li><li> Bu aşama hava ve aşağıdaki aşamaları esnasında, kolonun iç alır sağlayan bir peristaltik pompa, bir Ni-Sefaroz sütunu (1 mi) ya da eşdeğer bağlayın. </li><li> T hızını ayarlamaO, 1 ml / dak pompa ve depolama çözeltinin çıkarılması için su ile 5-10 ml sütunu yıkayın. </li><li> OG tamponu 3-4 ml sütun dengelenmesi. </li><li> Kolona protein örnek ve yük OG tampon 3-4 ml ilave edilir. Not: protein LDS çıkarılmasından sonra daha uzun bir süre 10 dakika boyunca buz üzerinde kuluçka süresi edilmiş ise 1 dakika ilave LDS çökelmesini kaldırmak için, 4 ° C&#39;de 15,800 x g hızında tekrar dönerler. </li><li> OG tamponu, 5 ml ile sütun durulayın. </li><li> RG durulama tamponu 2 ml ile sütun durulayın. </li><li> 3 mi tampon maddesi ile bağlanmış proteininin elüt edilmesi. Yeniden oluşturulmuş protein içeren yeşil eluteye toplayın. NOT: Bu genellikle toplam olarak yaklaşık 1 ml olmuştur. </li></ol> 7. Sükroz Gradyan Santrifüjü Geri <ol><li> Sakroz çözeltisi,% 0.06 β-DM 0.01 M HEPES, pH 7.6: Tablo 1 de tarif edildiği gibi aşağıdaki çözümleri hazırlayın. </li><li> -20 ° CO / N o da sukroz çözeltisi ve dondurulması ile ultrasantrifüjdeki tüpleri doldurmakR, -80 ° C&#39;de en az 1 saat. </li><li> Dondurucudan tüp çıkarın ve 4 ° C&#39;de dokunulmadan çözülme sağlar. Not: donma / çözülme işlemi 0.1 ila 1 M sukroz ile bir gradyan oluşturur. Bir 15 ml tüp, tipik olarak yaklaşık 3 saat içinde çözülür. </li><li> Dikkatli bir şekilde üst aşama 6.8 &#39;de nikel Sefaroz sütunundan elüt yeşil fraksiyon olarak aynı hacimde çıkarın. Daha sonra gradyanı rahatsız etmemek için yavaş yavaş üstüne yeniden örnek yüklemek. </li><li> Hızlanma ve fren olmayan durdurma yavaşlaması, 18 saat boyunca, SW-41 ya da SW-60 sallanan kepçeli rotor kullanılarak bir ultrasantrifüjdeki Tüpleri dengeleyin, ve 4 ° C sıcaklıkta 200,000 x g&#39;de santrifüj. </li><li> Dikkatlice forseps ile tüp sahibinden degrade çıkar. Üst kısmını toplamak için bir kör deliğe sahiptir uzun bir iğne ile bir şırınga kullanın. Not: Alternatif olarak, bir iğne ile delme ve tüp damla toplayarak alttan fraksiyonlarım toplamak. </li></ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir

Membran proteinleri çalışmak çok kolay değil. Doğal zar proteinlerinin izolasyonu protein zarar verebilir ve temel kofaktör kaldırmak deterjanlarla lipid çift katmanından çözündürülmesi için ihtiyacı karmaşık hale gelir. Bu proteinler ayrıca biyolojik zarların düşük seviyelerde mevcut olabilir, ya da zor tek komplekslerinin saflaştırılması kılan hafif hasat kompleks durumunda olduğu gibi, yakın ilişkili proteinler ile karıştırılabilir. E. coli &#39;de heterolog protein ekspresyonu E. coli ve in vitro yeniden yapımında Bu sorunları önlemek için imkanı sunar. in vitro homojenliğe 24 saflaştırılarak edilemez kompleksleri incelemek için kullanılabilir doğal kompleksleri 20,21,23 ve dolayısıyla çok benzer özelliklere sahip kompleksleri sulandırılması ve katlanmış proteinler, sonuç saflaştırılması - 27. Bu yöntem attainab kolaylıkla, ıspanak, kullanırtoplam pigment ve karotenoid hazırlıkları için bir kaynak olarak le yıl boyunca,. Yosunlar için nativ proteinlerin bazı reconstitutions, yosunlar saflaştırılmış pigmentlerin kullanılması nedeniyle farklı pigment bileşimler tercih edilir. Chl a / b oranı ve Chl / otomobil oranı ne olursa olsun, pigment kaynağı aynı kalır. Bu sulandırma verimliliği genellikle% 35 civarındadır 28 olduğunu fark etmek önemlidir. Bu nedenle, yeniden oluşumun ardından çözeltiden Bağlı olmayan pigmentler ve katlanmamış apoprotein kaldırmak için gereklidir. Iki aşamalı bir saflaştırma protokolü (ayrıca sonuçları bakınız), bu protokolde sunulmuştur. Bununla birlikte, sukroz gradyanlı adım APO ve sanal-proteinin tam olarak ayrılmasına izin vermez unutulmamalıdır. Apoprotein fonksiyonel ölçülerde müdahale etmeyen, böylece pigmentler ihtiva etmez ve en gibi analizler için bu bir sorun değildir. Bununla birlikte, bu durumda, tamamen fr apoprotein kaldırmak için gereklidiryeniden kompleksi (örneğin protein stoikiometriye pigment hesaplamak için) ihtiva eden işlem, bir anyonik değiştirme sütunu (bakınız Passarini ve ark. detayları için 29, 2009) kullanılabilir. Kapasite in vitro izole edilmiş yeniden birleştirici pigmentler ile ışık toplayıcı proteinlerin yeniden kapatmak için, böylece elde edilen kompleksin özelliklerini değiştirmeden, çeşitli şekillerde yeniden oluşturma &quot;çevre&quot; değiştirerek kompleksleri &quot;ayarlamak&quot; için bir fırsat sağlar. Örneğin, sulandırma sırasında pigment bileşimi değişen değiştirilmiş bir pigment bileşimi ile bir kompleks neden olabilir. Bu özellik, çeşitli pigmentler kompleksinin yapısı ve kararlılığı üzerindeki etkisini incelemek için kullanılabilir. 1 ve 2.9 arasında bir Chl / araç oranı l: süresi ıspanak elde edilen pigment preparasyonu 3 bir Chl a / b oranı 1. Bu oran, tipik olarak n ile aynı özelliklere sahip olan bir sulandırma proteini üretirbirini Ative. 33 - Bununla birlikte, arıtılmış, Chl a veya b eklenmesiyle Chl a / b oranı ayarlanması bağlanma yerleri 30 seçiciliği değişken bağlı olarak farklı pigmentlerin bağlayıcı etkileyebilir. Pigment bağlama sitelerinin çoğu Chl a ya da b Chl tamamen selektif değildir, ama her ikisi için uygun olabilir, çünkü bu, mümkün olmasına rağmen, farklı afinite ile 10,30,34. 38 - Benzer şekilde, karotenoid bağlanma yerleri, ayrıca birden Ksantofil tür 8,35 karşılamak mümkün olduğu gösterilmiştir. CP26, çeşitli pigment bileşimleri kullanılarak yüksek bitkiler, diğer pigment-protein kompleksinin farklı reconstitutions Tablo 2&#39;de 39 olarak gösterilmiştir. Bu reconstitutions, özellikle pigmentler 39 için bağlanma afinitesini belirlemek için kullanıldı. Bu aynı pigment c ile bir kompleks elde etmek için dikkat çekicidir1: doğal olarak omposition pigment karışımı Chl a / b oranı 3 olmalıdır. Bu, daha yüksek bitki 20,40 her BHÇ kompleksleri için geçerli görünmektedir. Yeniden oluşturma tekniği ile, moleküler biyoloji kombinasyonu, Chl bağlayıcı kompleksinin özellikleri daha ayrıntılı olarak incelenecektir sağlar. 44 - kompleksleri, ya da protein-protein etkileşimleri katılımları kararlılığı ve katlanma farklı bir protein alanlarının önemi, apoprotein kesilmesi ya da rastgele mutagenez 8,41 yapılarak belirlenmiştir. 52 - Farklı pigmentlerin koordinasyonu için önemli bir tek amino asit kalıntıları tek tek pigmentlerin özelliklerini analiz ya da kompleks 10,28,29,45 bir fonksiyon ve stabilite etkilerinin değerlendirilmesi için, yer yönlendirmeli mutagenez ile değiştirilebilir. Şekil 6 ile Lhcb4 (CP29) yeniden53, 216 konumunda bir mutasyonu histidin. vahşi tip ve mutant komplekslerinin pigment bileşimin bir karşılaştırması mutasyon hedef sitesi WT kompleksi içinde Chl a barındırır gösteren bir molekül, bir Chl kaybını uyardığını göstermektedir. WT ve mutant absorpsiyon spektrumları arasındaki farklar, pigment içeriğine normalleşmeyi üzerine de kayıp pigmentin emme özelliklerini gösterir. Bu durumda, fark Chl His216 tarafından koordine edilen bu dalga boyunda absorbe eder (bu, mutant ile ilgili daha fazla bilgi için ve spektroskopik özellikleri Mozzo ve ark. 2008 53) gösteren, 680 nm &#39;de, ana zirve görülebilir. Mutasyon analizi, aynı zamanda pigmentlerin 54 spektroskopik özellikleri üzerindeki çevre etkisini belirlemek için de kullanılabilir. Sonuç olarak, ışık hasat proteinlerini pigment Protei sonuçlanan in vitro yeniden oluşturulabiliryerli kompleksleri çok benzer özelliklere sahip n kompleksleri. Ayrıca, ileri çalışmalar için yüksek verim ve saflıkta olan bir protein preparasyonunu elde ederlerken, bu şekilde, doğal proteinlerin izole zorlukları ortadan kaldırılır. 3 önemi: otantik bir kompleks oluşturan 1 Chl a / b oranı vurgulanmıştır ve yeniden vahşi tip ve mutant LHCs örnekleri tekniğin kullanımlarını daha fazla açıklamak için verilmiştir.

Bitki ve alglerin fotosentez cihazı integral membran (chl a) klorofil a bağlayan proteinleri b (chl b) ve karotenoidler (araba) bulunmaktadır. Bu pigment-protein kompleksleri hasat ışık enerjisi ve şarj ayırma 2 teşvik etmek için kullanılan reaksiyon merkezleri, bu uyarım enerji aktarmak aktiftir. Bunlar ayrıca, yüksek ışık hasarına 3,4 &#39;den fotosentetik düzenek korumak düzenleyici geri besleme mekanizmalarının katılmaktadırlar. Işık hasat kompleksi (LHCs) bitkiler ve yosun 5 ilişkili proteinlerin büyük bir ailenin oluşmaktadır. Ailenin her bir üyesinin öznel homojen saflaştırma komplekslerinin çok benzer kimyasal ve fiziksel özellikleri daha karmaşık hale gelmiştir. Buna ek olarak, saflaştırma işlemleri çoğu zaman, lipidler, pigment ya da başka yardımcı faktörler potansiyel kaybı ile sonuçlanabilir. In vitro yeniden oluşum Represents güçlü bir yöntem bu sorunların üstesinden gelmek için. Fotositem II&#39;nin (BHÇ-II) ile bağlantılı LHC ilk araştırmacılar bitki kloroplast ayrı delipide protein ve pigment ekstre edilmiştir. 1987 1 Plumley ve Schmidt in vitro yeniden ve daha sonra lityum mevcudiyetinde pigmentler ile ısıyla denatüre proteini birleştirildi dondurma ve eritme 1 üç döngü izledi dodesil sülfat (LDS). Bunlar, yeniden oluşturulmuş LHC komplekslerinin spektral özellikleri bitkilerden arıtıldı kompleksleri çok benzer olduğunu gösterdi. Organizmalardan saflaştırılmış komplekslerini izole edilmesindeki güçlük, birlikte, bağlı bazı içsel kendi kendine bağlanma özelliği BHÇ pigment protein kompleksleri, muhtemelen yeniden yapılandırma kolaylığı, başka araştırmacılar tarafından, yöntemin pratik kabul edilmesine yol açmıştır. Escherichia coli (E. coli) aşın fotosentetik proteinlerin yeniden oluşturma 6 Paulsen 1990 ve meslektaşları tarafından elde edilmiştir. E&#39;deE. coli, aşın zar proteinleri, genellikle, inklüzyon cisimcikleri içinde yer alır tesisleri için saflaştırma. Sulandırma, protein katlanmasını başlatır pigmentlerin ilave edildi LDS varlığında yeniden birleştirici protein içeren inklüzyon gövdelerinin yalıtılması, ısıl denatürasyonu ile elde edilir. LHCII kompleksinin katlanması, iki aşamalı bir işlemdir: ilk olarak, klorofil a 1 dakikadan daha az olarak bağlanmıştır; ikinci, klorofil b birkaç dakika 7 üzerine bağlanmış ve stabilize edilir. Katlama dinamikleri ilişkin bilgi temin edilmesine ilave olarak, yer yönelimli mutagenez ile kombine tüpte yeniden spesifik amino asitlerin stabilitesi için önemlidir (örneğin, 8,9) ya da pigment koordinasyon tanımlanmasını sağladı (örneğin, 10). Böyle pigment kompozisyon ya da deterjan gibi parametreleri ayarlayarak tekrar katlama koşulları Manipülasyon da unsurları Critica belirledikBöyle LHCII kompleksi için Ksantofiller gereği olarak doğru katlanması, l (örneğin, 1,11). Buna ek olarak, komplekslerine bağlanmış bireysel pigmentlerin özelliklerinin incelenmesi, in vivo olarak yeniden kompleksleri kullanılarak mümkün olmuştur (örneğin, 10). Burada açıklanan yöntem pigmentler izolasyonu (klorofil ve karotenoid) ıspanaktan ve yeşil deniz yosunu Chlamydomonas reinhardtii ile başlar. E. LHC proteinin ifadesi ve saflaştırılması inklüzyon cisimcikleri formunda Coli sonra Ni afinite kolonu ile LHC&#39;in yeniden oluşturulması ve daha sonra, ardından arıtma için, ayrıntılı olarak verilmiştir. Son aşamada, yeniden oluşturulmuş kompleksleri ayrıca serbest pigmentler ve katlanmamış apoprotein kaldırmak için sukroz gradyanlı santrifüjleme vasıtasıyla saflandırılır. Bu protokol üzerinde farklı laboratuvarlar tarafından tanıtıldı çeşitli değişiklikler içeren bir optimize prosedürünü temsilzaman 1,6,10,12 -14.

<table><tbody><tr><td>HisTrap HP</td><td>GE Healthcare</td><td>17-5247-01</td><td></td></tr><tr><td>Naylon bez ve nbsp;</td><td></td><td></td><td>20 &mu; m gözenekler</td></tr><tr><td>Yumuşak sanatçılar boya fırçası&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NONIDET P-40</td><td>Sigma</td><td>74385</td><td></td></tr><tr><td>Beta-DM</td><td>Sigma</td><td>D4641</td><td></td></tr><tr><td>DNAase</td><td>ThermoScientific</td><td>EN0525</td><td></td></tr><tr><td>Süt Tozları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNAase</td><td>ThermoScientific</td><td>EN0531</td><td></td></tr><tr><td>Sonikatör</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oktil ve beta;- D-glukopiranozid</td><td>Sigma</td><td>O8001&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasantrifüj XL</td><td>Beckman-Coulter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TAP ortamı</td><td></td><td></td><td>referansa bakın 17</td></tr><tr><td>LB ortamı</td><td></td><td></td><td>referansa bakın 19</td></tr></tbody></table>

bitkiler ve yeşil alg işık hasat kompleksleri İn vitro sulandırma içinde

In Vitro Reconstitution of Light-harvesting Complexes of Plants and Green Algae

Bitkiler ve yeşil algler, ışık, ışık hasat kompleksleri (LHCs), klorofiller ve karotenoidler koordinat bütün zar proteinlerinin, bir ailesi tarafından yakalanır. In vivo olarak, bu proteinler Tilakoid zarının eklenir kompleksler oluşturmak üzere pigmentler içeren katlanır kloroplastın. Birlikte kolayca izolasyonu sırasında pigmentler kaybedebilir gerçeği ile ailenin üyeleri, kimyasal ve fiziksel özellikleri, yüksek benzerlik, bir doğal halde saflaştırılması zor hale getirir. LHCs arasında homojen terkiplerinin elde edilmesi için alternatif bir yaklaşım, bu natif çok benzer özelliklere sahip kompleksler sonuçlanan saflaştırılmış pigmentler ve katlanmamış, apolar başlayarak bu in vitro kompleksleri tekrar oluşturmak için mümkün olduğunu gösterdi, 1987 1 Plumley ve Schmidt geliştirilmiştir kompleksleri. Bu in vitro bakteriyel eksprese edilen rekombinant proteinlerin kullanımına yol açtı </em&gt; sulandırma. Yeniden oluşturma yöntemi, çeşitli nedenlerle güçlüdür: (1) tek tek komplekslerinin saf müstahzarları ile elde edilebilir, (2) bir pigment bileşimi yapı ve fonksiyon etkilerinin değerlendirilmesi için kontrol edilebilir, (3) bir araya getiren proteinler fonksiyonel incelemek için mutasyona uğratılabilir tek tek kalıntılarında (örneğin, pigment bağlama bölgeleri) veya protein domaini (örneğin protein-protein etkileşimi, katlama) rolü. Bu yöntem, çeşitli laboratuvarlarda optimize edilmiş ve ışık hasat kompleksi en uygulanmıştır. Burada açıklanan protokol, şu anda laboratuvarda kullanılan in vitro ışık hasat kompleksleri yeniden yapılandırma yöntemi ayrıntıları ve yöntem uygulamaları açıklayan örnekler verilmektedir.

Bu protokol, hafif hasat komplekslerinin in vitro olarak yeniden yapılandırılmasını detaylandırır. Bu entegre zar proteinleri, klorofilleri ve karotenoidleri koordine eder ve daha yüksek bitkilerde ve yeşil alglerde ışığın toplanmasından sorumludur.

Bitkiler ve Yeşil Alg Işık hasat Kompleksleri İn Vitro Sulandırma içinde

In plants and green algae, light is captured by the light-harvesting complexes (LHCs), a family of integral membrane proteins that coordinate chlorophylls ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, bitkilerin veya alglerin in vitro hafif hasat pigment protein komplekslerini yeniden oluşturmaktır. Bu, pigmentlerin ıspanak yapraklarından veya alg kültürlerinden ekstrakte edilmesi ve APA protesinin e coli'de aşırı eksprese edilmesiyle elde edilir. İkinci adım olarak, APA protesi, yeniden yapılandırılmış bir kompleks elde etmek için pigmentlerle karıştırılır.Daha sonra, sulandırılmış pigment protein kompleksi fazla pigmentlerden saflaştırılır ve sulandırılmış pigment protein kompleksi ile absorpsiyon spektrumları, floresan spektrumları ve dairesel deizm'e dayalı olarak doğal olanın benzer spektroskopik özelliklerini gösteren katlanmamış protein sonuçları elde edilir. Bu prosedürün temel avantajı, nispeten yüksek miktarda pigment protein kompleksi elde etmemize ve ayrıca mutasyona uğramış tip protein ve farklı bileşimlere sahip pigment karışımlarında kullanarak kompleksleri manipüle etmemize izin vermesidir. Prosedürü gösteren Alberto na, laboratuvarda yüksek lisans öğrencisi Ispanak yapraklarından toplam pigmenti çıkarma prosedürüne başlamak için. Bir avuç ıspanağı homojenize etmek için bir blender kullanın, 100 mililitre soğuk öğütme tamponunda 20 saniye boyunca yaklaşık 20 gram bırakır.Çözeltiyi, 20 mikrometre zayıf bir çapa sahip iki kat naylon kumaştan süzün ve süzüntüyü 10 dakika boyunca 1.500 Gs'de santrifüjleyin. Dört santigrat derecede. Süpernatanı çıkarın ve bir mililitre soğuk yıkama tamponu ekleyin.Kloroplast içeren peleti yumuşak bir sanatçının boya fırçasıyla yeniden süspanse edin. Pelet yeniden süspanse edildikten sonra, 10 dakika boyunca 10.000 Gs'de bir çözelti olan 50 mililitre yıkama, tampon ve santrifüj ekleyin. Dört santigrat derecede, süpernatanı çıkarın ve peleti 50 mililitre yıkama tamponu santrifüjünde, dört santigrat derecede 10 dakika boyunca 10.000 G'de bir çözelti içinde nazikçe yeniden süspanse edin, süpernatanı bu noktadan itibaren tamamen çıkarın.Bu prosedür karanlıkta yapılmalıdır. Pigment oksidasyonunu önlemek için, pigmentleri çıkarmak için sodyum karbonat ile tamponlanmış yaklaşık 20 mililitre% 80 aseton ekleyin, çözeltiyi 10 dakika buz üzerinde bırakın. Girdap bazen hücresel bileşenleri, dört santigrat derecede 15 dakika boyunca 12.000 G'de santrifüjleme ile paletler.Toplam pigment ekstraksiyonu beyaz bir topak ile sonuçlanmalıdır. Snat bir ayırma hunisine toplayın. 0.4 hacim datil eter ekleyin.Kuvvetlice çalkalayın ve gazı boşaltmak için vanaları açtığınızdan emin olun. 0.8 hacim nokta 33 molar sodyum klorür ekleyin ve kuvvetlice karıştırın. Katmanların ayrılması için yaklaşık 10 dakika bekleyin.Üstteki eter fazı, ekstrakte edilen pigmentleri içerir. Şeffaf alt fazı çıkarın ve atın. Eteri, ayırıcı huninin üstünden uygun bir cam kaba dökerek çıkarın.Bir kaşık dolusu granül susuz sodyum sülfat ekleyerek eteri kurutun. Çözeltiyi döndürün ve kurutucunun eterden suyu emmesi için yaklaşık beş dakika bekleyin. Eter yeterince kuruduğunda.Bazı serbest yüzen kristaller olmalı ve sodyum sülfatta topaklanma olmamalıdır. Eteri yeni bir cam kaba boşaltın, sodyum sülfat katısını pigmentlerin arkasında bırakın ve aseton tamamen buharlaşana kadar döner hızlı bir vakumda kurutun. Kurumuş pigmentleri eksi 80 santigrat derecede saklayın.Ispanaktan keratinoid ekstraksiyonu bu videoda gösterilmemiştir, ancak kurutulmuş pigmentler de eksi 80 santigrat derecede saklanır. Sulandırma için hafif hasat kompleksi veya LHC, inklüzyon cisimleri şeklinde e coli'den eksprese edildi ve saflaştırıldı. Sulandırılmanın başarısı için pigment proteinleri arasındaki oran ile tampon kullanım miktarı çok önemlidir.Bu işlem loş ışıkta yapılmalıdır. 800 mikrogram LHC inklüzyon cisimini toplam 400 mikrolitre te içinde yeniden süspanse edin. İki mililitrelik bir füge tüpünde, 400 mikrolitre iki x sulandırma, tampon ve girdap ekleyin.Kısaca 14,8 molar beta mar CAPTA etanol stoğundan 0,6 mikrolitre ekleyin. 10 milimolar'lık bir nihai konsantrasyon elde etmek için, proteini bir dakika boyunca 98 santigrat derecede ısıtın. Kısa bir süre girdap yapın ve üç dakika oda sıcaklığında bekletin.500 mikrogram toplam kurutulmuş klorofil pigmentini ve ayrıca 80 mikrogram keratinoid pigmenti 30 mikrolitre% 100 etanol içinde kuvvetli bir şekilde girdaplama ile yeniden süspanse edin. Bir dakika boyunca. Pigment karışımını yaklaşık 30 saniye boyunca dört santigrat derecede 15.800 G'de döndürün ve sıkmadan hemen sonra pelet olmadığını onaylayın, girdap yaparken pigment karışımını soğutulmuş proteine yavaşça ekleyin.Protein tüpün üst kısmından taşabileceğinden çok kuvvetli bir şekilde girdap yapmamaya dikkat edin. Beş ila 10 saniye boyunca girdap yapmaya devam edin ve ardından tüpü ıslak buzun üzerine yerleştirin. Kısa bir süreliğine %2'lik bir son konsantrasyon elde etmek için 94 mikrolitre% 20 oktal, beta D glikozit veya og ekleyin ve 10 dakika buz üzerinde tutun, 150 ila 200 mikro azı dişi nihai konsantrasyon elde etmek için 90 mikrolitre iki molar potasyum klorür ekleyin.Kısa bir süre girdap yapın ve 20 dakika boyunca buz üzerinde tutun. 10 dakika boyunca dört santigrat derecede 15.800 GS'de döndürün. SUP natanı, peleti bozmadan 10 mililitrelik bir tüpe aktarın.Natini soğuk tutun ve ışıktan koruyun. Bu prosedüre, protokol metninde açıklandığı gibi bir mililitrelik nikel SRO sütunu hazırlayarak başlayın. Protein örneğine üç ila dört mililitre OG tamponu ekleyin ve örneği kolona yükleyin.Kolonu beş mililitre OG tamponu ve ardından iki mililitre OG durulama tamponu ile durulayın. Bağlı proteini üç mililitre elu tamponu ile elute edin. Sulandırılmış proteini içeren yeşil ellu'yu toplayın.Sükroz gradyanı, protokol metninde açıklandığı gibi, degradenin üstünden dikkatlice çıkarılarak, nikel SRO'lar sütunundan ima edilen yeşil fraksiyonunkiyle aynı hacimde hazırlanır. Degradeyi bozmamaya dikkat ederek sulandırılmış numuneyi yavaşça üstüne yükleyin. Tüpü ve teraziyi bir S SW 41 veya SW 60 sallanan kova rotoruna yerleştirin ve 18 saat boyunca dört santigrat derecede 200.000 G'de bir ultrasantrifüjde yavaş hızlanma ve ara vermeden durma ile döndürün.Ultrasantrifüj tamamlandığında, gradyanı tüp tutucusundan dikkatlice çıkarmak için forseps kullanın. Yeşil bant, toplanacak bir kısımdır. CP 24'ün absorpsiyon spektrumu.İn vitro olarak yeniden oluşturulan bir klorofil AB bağlayıcı protein, doğal kompleksin spektrumu ile karşılaştırılır. Aynı spektrumlar, hemen hemen aynı bir pigment bileşimini ve organizasyonunu gösterir. Sulandırılmış kompleksin kalitesi floresan spektroskopisi ile de değerlendirilebilir.Pigmentler farklı dalga boylarında uyarıldığında floresan yaydığından, 440 nanometrede klorofil A, 475 nanometrede klorofil B ve 500 nanometrede zils. Sulandırılmış bir CP 24 vahşi tip kompleksinin floresan emisyon spektrumları ve maksimuma normalize edilmiş, klorofil B ve XANTHE dolgularından klorofil A'ya verimli enerji transferi gösterir. Bunun yerine serbest klorofil A'nın varlığı, 675 nanometre civarında ek emisyona yol açar.Hem yeniden yapılandırılmış hem de doğal CP 24 komplekslerinin 475 nanometre alıntısındaki floresan emisyon spektrumları, yeniden yapılandırılmış kompleksin doğru şekilde katlandığını gösteren 681 nanometrede tek bir tepe noktası gösterir. Yeniden yapılandırılmış CP 24 ve yerel kompleks de çok benzer dairesel karizma spektrumları göstermektedir. Farklı pigmentlerin koordinasyonu için önemli olan tek amino asit kalıntıları, tek tek pigmentlerin özelliklerini analiz etmek veya kompleksin işlevine ve stabilitesine katkılarını değerlendirmek için değiştirilebilir.Burada vahşi tip ve mutasyona uğramış CP 29'un absorpsiyon spektrumları gösterilmektedir. Yeşil çizgi, iki çizim arasındaki farkları gösterir Tate olduğunda, SUSE gradyanı da dahil olmak üzere bu teknik, uygun şekilde yapılırsa ultrasantrifüjleme 24 saat içinde yapılabilir.

in-vitro-reconstitution-light-harvesting-complexes-plants-green

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Tarif edilen karşılaştırmalı nicel proteomik yaklaşım, farklı koşullar altında multiprotein komplekslerinin bileşimi içine bir bakış açısı elde etmeyi amaçlamaktadır ve genetik olarak farklı suşların karşılaştırılması ile gösterilmiştir. Kantitatif analiz için bir sükroz yoğunluk gradyanı farklı fraksiyonların eşit hacimleri kütle spektrometresi ile analiz edilir ve karıştırılır.

Multiprotein kompleksleri Karşılaştırmalı Analizi için Yeni Bir Yaklaşım dayanarak<sup&gt; 15</sup&gt; N Metabolik Etiketleme ve Kantitatif Kütle Spektrometre

Bu yazıda, su içinde yağ emülsiyonları göre hidrofobik pigmentler ile suda çözünür proteinler monte edilmesi için, basit ve yüksek verimli bir yöntem tarif eder. Biz Brassica bitkileri E. ifade rekombinant suda çözünür-klorofil dört varyant bağlayıcı proteinler (WSCPs) ile yerli klorofil montajında ​​yöntemin etkinliğini gösteren E. coli.

Petrol Emülsiyonlar Su: Hidrofobik Pigmentler ile Suda çözünür Klorofil bağlayıcı Proteinler Montaj için Yeni Bir Sistem

Burada donarak kırılmış bitki dokularını incelemek için bir prosedürü açıklıyoruz. Yüksek basınçlı donmuş yaprak numuneleri, dondurularak kırılır ve çift katmanlı kaplanır, bu da minimum ışın hasarı ile yüksek büyütmelerde kriyo-taramalı elektron mikroskobu kullanılarak görüntülenen iyi korunmuş donmuş hidratlı numuneler verir.

Cryo-tarama elektron mikroskobu tarafından Freeze-kırık Yaprak Dokular içinde Fotosentez Membranlarının Supramoleküler organizasyonu incelenmesi

Burada, bir protokol fucoxanthin klorofil a/c proteinler (FCP) Diyatomlarla dan ayırmak ve onları uyarma enerji transferi iyon kompozisyon değişiklikleri üzerine çalışmaya doğal lipit kompozisyonları ile lipozomlar içine dahil mevcut.

İzole ve ışık-hasat antenler Diatom Cyclotella Meneghiniana lipozomlar Thylakoid lipidler ile gelen ekleme

Bir iletişim kuralı bitki aydınlatma için thylakoid protein kompleksi organizasyon ve mavi yerel polyacrylamide ile kompozisyon jel elektroforez (BN-sayfa) ve 2D-SDS-sayfa açıklanmıştır. Protokol Arabidopsis thalianaiçin optimize edilmiş ama küçük değişiklikler ile diğer bitki türleri için kullanılabilir.

Thylakoid membran Protein kompleksleri tarafından mavi yerli jel elektroforez Analizi

Biz burada fizyolojik aktif thylakoids yüksek verimli izolasyon için protokoller ve protein taşıma deneyleri kloroplast ikiz arginin translocation (cpTat), salgı (cpSec1) ve sinyal tanıma parçacık (cpSRP) yolu için mevcut.

Yalıtım fizyolojik aktif Thylakoids ve onların kullanımı enerji bağımlı Protein taşıma deneyleri

Burada çözündürüldükten thylakoid kompleksleri tarafından yerel Yeşil Jel Elektroforez ayırmak için bir iletişim kuralı mevcut. Yeşil Jel bantları daha sonra zaman korelasyon tek foton sayma (TCSPC tarafından) karakterizedir ve veri analizi için temel adımlar sağlanır.

Ispanak Thylakoid Protein kompleksleri yerli yeşil Jel Elektroforez ve grup Time-Correlated tek foton sayma kullanarak karakterizasyonu tarafından ayrılması

Bu protokol, spektral analize dayalı olarak kırmızı alglerdeki fikobiliprotein değişikliklerinin adım adım otofloresan görüntülemesini ve değerlendirilmesini açıklamaktadır. Bu, yalnızca kıt materyalin mevcut olduğu ve hücrelerin laboratuvar koşullarında yavaş büyüdüğü veya hiç büyümediği aşırı habitatlara hücresel adaptasyonu değerlendirmek için etiketsiz ve tahribatsız bir yöntemdir.

Kırmızı Alg Fizyolojisini Değerlendirmek için Otofloresan Görüntüleme

Bu protokol, ilgilenilen gen(ler)i yeşil mikroalgler Chlorella vulgaris'in nükleer genomuna entegre etmek için Agrobacterium tumefaciens aracılı dönüşümün (AMT) kullanımını ana hatlarıyla belirtir ve kararlı dönüştürücülerin üretimine yol açar.

Yeşil Mikroalglerin Agrobacterium tumefaciens Aracılı Genetik Mühendisliği ( Chlorella vulgaris)

Tek molekül mikroskopi, nükleer taşıma yeni bakış açıları sağlanan Yaklaşım.

Tek Molekül Görüntüleme Nükleer Ulaştırma

Öğrenin bitkiler ve yeşil alglerde ışık hasat pigment-protein komplekslerini in vitro yeniden yapılandırma yöntemini. Bu protokol, spektroskopik analizlerle yüksek verimli kompleks elde etmeyi sağlar.

Bitkiler ve Yeşil Alg Işık hasat Kompleksleri İn Vitro Sulandırma içinde

Daha fazla video keşfet