Name: Etkin Killer yapay antijen sunan hücreler (KaAPC) İn Vitro İnsan Antijen-spesifik T hücrelerinin tükenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-11T19:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Öğrenin, otoimmün hastalıklarda antijen-spesifik T hücrelerini hedefli olarak tüketmek için killer yapay antijen sunan hücreler (KaAPC) üretme yöntemini. Bu teknik, akış sitometrisi ile karakterize edilir ve klinik uygulama potansiyeli taşır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Alman Araştırma Vakfı (DFG) SCHU-2681 / 1-1 (CS) ve KFO 146 (MF) tarafından desteklenmiştir, Savunma hibe PC DOD Bölümü 040972 (MO) ve Sağlık Ulusal Enstitüsü RO1&#39;e CA108835 verir , RO1 Ai44129 (Jps)

HLA-A2-lg Tabanlı KaAPC 1. Üretimi <ol><li> Steril borat tamponu hazırlayın. Su içinde borik asit içindeki bir 0.1 M bir solüsyon yapmak ve 7.0 pH değerinin ayarlanması. Steril filtre (0.22 um) tamponu ve 4 ° C'de saklayın. </li><li> Steril boncuk yıkama tamponu hazırlayın. Magnezyum ve kalsiyum içermeyen fosfat tamponlu serum fizyolojik (PBS) kullanılır. % 3 nihai konsantrasyon, insan AB serumu ekleyin. 2 mM nihai konsantrasyon için etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ilave edin. % 0.01 nihai konsantrasyona sodyum azid (NaN3) ekleyin. Steril filtre (0.22 um) tamponu ve 4 ° C'de saklayın. </li><li> Steril içine stoktan epoksi boncuklar (yaklaşık 100 x 10 6 boncuk) 250 ul aktarın, cam tüpe vida. </li><li> Borat tampon 250 ul ilave edin. </li><li> Bir mıknatıs cam şişeyi koyun ve boncuk 2 dakika uymak edelim; aspirat tampon ve mıknatıstan cam şişeyi çıkarın. </li><li> 1 ml borat tamponu ile bir kez boncuk yıkayın. </li><li> 0.018 mcg 550 ul içine süspanse boncuklar/ Ml HLA-A2-lg ve 3.64 ug / ml anti-insan CD95 mAb (klon CH11) ve hafifçe sallanarak karıştırılır. (Ek bilgi için tartışma bölümüne bakınız.) </li><li> 24 saat boyunca 4 ° C 'de, ucuna bir döndürücü ucunda cam tüpe inkübe edin. </li><li> 2 dakika boyunca 300 xg'de boncuk aşağı doğru döndürün. </li><li> 2 dakika için bir mıknatıs üzerine cam şişe yerleştirin ve "KaAPC yükleme çözüm" aspire; , mıknatıs cam flakonun çıkarılması boncuk yıkama tamponu 1 ml ekleyin ve sallayarak dikkatle tekrar süspansiyon. </li><li> Adımı yineleyin 1.10 iki kez. </li><li> 1 mi boncuk yıkama tampon maddesi içinde, 24 saat boyunca 4 ° C 'de, bir döndürücü üzerinde cam tüpe inkübe edin. Bu noktada, tüm bağlanma yerleri artan protein boncuk yıkama tamponu içinde bulunan insan AB serumu ile bloke edilir. </li><li> 2 dakika boyunca 300 xg'de boncuk aşağı doğru döndürün. </li><li> Yer cam 2 dakika ve aspire boncuk yıkama tamponu için bir mıknatıs üzerine flakon; mıknatıstan cam tüpe çıkarın ve 1 ml PBS ile bir çözüm yerine. </li></ol> 2. Kalite Kontrol, Peptide Yükleme, Wkülleme, Depolama ve KaAPC Kararlılık <ol><li> Bir FACS tüpü içine, 1.5 x 10 5 KaAPC aktarın ve FACS yıkama tamponu 1 ml ile yıkayın. </li><li> Tampon ve tespiti için, ve anti-fare IgM FITC (klon R6-60.2 1 ul (HLA-A2-Ig Fc bölümü tespiti için), anti-fare IgG1 PE 1 ul yıkama 100 ul FACS içinde süspanse boncuk anti-insan CD95 mAb). </li><li> Tampon ve akış sitometrisi ile lekeleme yıkama oku 250 ul FACS 1 ml FACS yıkama tamponu ve tekrar süspansiyon ile yıkayınız, 4 ° C'de 15 dakika boyunca inkübe edin. </li></ol><img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51859/51859fig1highres.jpg" width="500"> Protokol bölümünde belirtildiği gibi yapılan bir KaAPC toplu Şekil 1. QC lekesi. Lekelenmesi anti-insan CD95 ise, 2. HLA-A2-lg bir anti-fare-PE IgG1 mAb protokolü kullanılarak tespit edilmiştir bölümünde tarif edildiği gibi gerçekleştirildi (anti-Fas) (se protokolüne bir anti-fare-FITC ile IgM mAb ile saptandıavranış 2.2) (mavi çizgi). Dolgulu siyah grafikler, sırasıyla anti-fare-PE IgG1 mAb ya da anti-fare FITC-lgM mAb ile lekelenmiş, boş boncuklar temsil eder. Sağ üst köşedeki sayılar ortalama floresan yoğunluğu (MFI) gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51859/51859fig1highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="4"><li> Yeni bir steril cam şişenin içine peptid yükleme devri 20 x 10 6 KaAPC için, 2 dakika boyunca bir mıknatıs üzerine yerleştirin, 5 ug peptit ile 500 ul taze PBS içine aspire PBS ve tekrar süspansiyon boncuk (Unutmayın, sadece HLA-A2 kısıtlı peptidler olacak dimer üzerine bağlanan!). </li><li> Mağaza HLA-A2-lg dimer üzerine yeterli bir peptit yüklenmesine olanak sağlamak üzere, en az 3 gün süre ile, kullanılana kadar 4 ° C 'de KaAPC yüklendi. </li><li> Kullanımdan hemen önce, 1,14 belirtildiği gibi KaAPC yüklenen peptidi yıkama; Bu adımı en az 6x tekrarlayın. NOT: Bu ücretsiz peptid t sahip olmasını sağlamak için önemli bir adımdıro yalancı pozitif öldürme sonuçları önlemek için tamamen çıkarılmalıdır; artık serbest peptid antijene özgü T hücre kültürlerinin 9 apoptosisi teşvik ettiği gösterilmiştir. Çözünebilir peptid etkisini ortadan kaldırabilmek için, yüklenen peptid süpernatant kontrol örnekleri çalıştırmak ve KaAPC (3.8 bakınız) yıkandı. </li><li> Hemasitometre kullanarak boncuk saymak ve peptit ve konsantrasyon tarih, adı ile etiketleyin. NOT: Yüklü KaAPC en az bir ay boyunca 4 ° C 'de işlevsel kalır. Bir ay sonra, aynı peptid ile yeniden yükleme KaAPC bir yıla kadar kullanılmasını sağlar. </li></ol> 3. KaAPC İn Vitro Öldürme Deneyi <ol><li> Ko-kültür ortamı hazırlayın. Ve% 3 otolog plazma verici (laboratuarda yapılan 6) 3% T hücre büyüme faktörü ile desteklenmiş tam RPMI ortamı hazırlayın. Donör otolog plazma mevcut değilse, ısı ile inaktive edilmiş insan AB serumu kullanın. </li><li> AnnexinV bağlama tamponu hazırlanmasını hazırlayın. 8.12 g sodyum klorür (NaCI) ve 0.12 g kireci çözündürün990 mi ile kombine edilmiştir 2'ye amonyum klorür (CaCl2), 10 ml 1 M HEPES tamponu O.Add. </li><li> Insan antijen-spesifik T hücrelerini oluşturur. (Ayrıntılı bir protokol için yapay antijen sunan hücreler (aAPC) kullanan bir önceki yayını 7 bakınız). Bu peptid özgünlüğü tetramer boyama ile saptandığı haliyle en azından&gt;% 75 olduğundan emin olun. </li><li> Nemlendirilmiş bir kuluçka makinesi içinde 48 saat boyunca KaAPC 1 oranında, 37 ° C de Her numune için, 2 x 10 5 antijene spesifik T hücre / göz (96 yuvarlak tabanlı plaka içindeki), 1 ortak-kültür ortamı içinde 200 ul inkübe C ve% 5 CO2. </li><li> Hasat örnekler ve bir FACS tüpü içine transferi; 1 ml bağlayıcı tampon ile AnnexinV yıkama 5 dakika boyunca 300 xg'de spin AnnexinV bağlayıcı tampon 100 ul supernatant ve tekrar süspansiyon atmak </li><li> 1 ul AnnexinV FITC ve oda sıcaklığında 10-15 dakika boyunca 5 ul 7-AAD ile Leke örnekleri, 1 mi AnnexinV bağlama tamponu ile yıkama; , 5 dakika boyunca 300 xg'de dönme üst sıvı bir atın250 ul AnnexinV bağlama tamponu içinde tekrar süspansiyon d </li><li> Akış sitometresi örnekleri hemen okuyun. </li><li> KaAPC antijen spesifik öldürmeyi belirlemek için aşağıdaki örnekleri hazırlayın: T hücrelerinin sadece; + T hücreleri, çözünür anti-CD95; T hücreleri boşaltılmış KaAPC +; T hücreleri + olmayan soydaş peptid KaAPC yüklenir; T hücreleri, ortak kökenli + peptid KaAPC yüklenir; Ortak kökenli peptitin T hücreleri + yüzer KaAPC yüklendi. </li></ol><img alt="Şekil 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51859/51859fig2highres.jpg" width="500"> ., CMVpp65 spesifik T hücreleri (~% 80) 1 oranında, hasat edilmiş ve daha sonra AnnexinV ile boyanmıştır: Şekil 2. KaAPC öldürme deneyi bir Peptid 1 de 48 saat süre ile kültüre KaAPC ya da kontrol boncuk (HLA-A2-lg sadece boncuk) yüklendi edildi ve propidyum iyodür (PI). flow sitometri (bkz protokol bölüm 3.3-3.7) tarafından "soydaş" apopitozun olmak "non-soydaş" CMVpp65 ve yüklü boncuk atıfta içinMart-1 peptid ile yüklü reklamlar. Sayılar her arsa sol alt kadranda canlı T hücrelerinin yüzdesini göstermektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51859/51859fig2highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="9"><li> , Çapraz-deneyler yaparak, iki farklı özelliklerin antijene-özgü T hücrelerinin üretilmesi için. </li><li> Bundan başka, T hücre popülasyonunun heterojen T hücrelerinin antijene özgü bir eleme analizi ile eşzamanlı KaAPC antijene spesifik tükenmesinin-yeteneklerini değerlendirmek. (Ayrıntılı bir protokol için Schütz ark bakınız. 10). </li></ol>

<ol><li>Bizzaro, N., Tozzoli, R., Shoenfeld, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+we+at+a+stage+to+predict+autoimmune+rheumatic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+rheumatism%22%5BJournal%5D)">Are we at a stage to predict autoimmune rheumatic diseases.</a> Arthritis and rheumatism. 56 (6), 1736-1744 (2007).</li>
<li>Schütz, C., Oelke, M., Schneck, J. P., Mackensen, A., Killer Fleck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((artificial+antigen-presenting+cells%3A+the+synthetic+embodiment+of+a+%E2%80%9Cguided+missile%5BTitle%5D)+AND+%22Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">artificial antigen-presenting cells: the synthetic embodiment of a “guided missile.</a> Immunotherapy. 2 (4), 539-550 (2010).</li>
<li>Hoves, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+but+not+immature+Fas+ligand+%28CD95L%29-transduced+human+monocyte-derived+dendritic+cells+are+protected+from+Fas-mediated+apoptosis+and+can+be+used+as+killer+APC%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology+%28Baltimore%2C+Md.%3A+1950%29%22%5BJournal%5D)">Mature but not immature Fas ligand (CD95L)-transduced human monocyte-derived dendritic cells are protected from Fas-mediated apoptosis and can be used as killer APC.</a> Journal of immunology (Baltimore, Md.: 1950). 170 (11), At 
 <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12759415">http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12759415</a> 5406-5413 (2003).</li>
<li>Hoves, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elimination+of+activated+but+not+resting+primary+human+CD4%2B+and+CD8%2B+T+cells+by+Fas+ligand+%28FasL%2FCD95L%29-expressing+Killer-dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">Elimination of activated but not resting primary human CD4+ and CD8+ T cells by Fas ligand (FasL/CD95L)-expressing Killer-dendritic cells.</a> Immunobiology. 208 (5), 463-475 (2004).</li>
<li>Schütz, C., Hoves, S., Halbritter, D., Zhang, H. -G., Mountz, J. D., Fleck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alloantigen+specific+deletion+of+primary+human+T+cells+by+Fas+ligand+%28CD95L%29-transduced+monocyte-derived+killer-dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Alloantigen specific deletion of primary human T cells by Fas ligand (CD95L)-transduced monocyte-derived killer-dendritic cells.</a> Immunology. 133 (1), 115-122 (2011).</li>
<li>Oelke, M., Maus, M. V., Didiano, D., June, C. H., Mackensen, A., Schneck, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+induction+and+expansion+of+antigen-specific+cytotoxic+T+cells+by+HLA-Ig-coated+artificial+antigen-presenting+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ex vivo induction and expansion of antigen-specific cytotoxic T cells by HLA-Ig-coated artificial antigen-presenting cells.</a> Nature. 9 (5), 619-624 (2003).</li>
<li>Chiu, Y. -L., Schneck, J. P., Oelke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA-Ig+based+artificial+antigen+presenting+cells+for+efficient+ex+vivo+expansion+of+human+CTL%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">HLA-Ig based artificial antigen presenting cells for efficient ex vivo expansion of human CTL.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (50), (2011).</li>
<li>Schütz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Killer+artificial+antigen-presenting+cells%3A+a+novel+strategy+to+delete+specific+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Killer artificial antigen-presenting cells: a novel strategy to delete specific T cells.</a> Blood. 111 (7), 3546-3552 (2008).</li>
<li>Snow, A. L., Pandiyan, P., Zheng, L., Krummey, S. M., Lenardo, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+power+and+the+promise+of+restimulation-induced+cell+death+in+human+immune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+reviews%22%5BJournal%5D)">The power and the promise of restimulation-induced cell death in human immune diseases.</a> Immunological reviews. 236 (1), 68-82 (2010).</li>
<li>Schütz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+flow+cytometric+assay+for+the+simultaneous+analysis+of+antigen-specific+elimination+of+T+cells+in+heterogeneous+T+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunological%22%5BJournal%5D)">A new flow cytometric assay for the simultaneous analysis of antigen-specific elimination of T cells in heterogeneous T cell populations.</a> Journal of immunological. 344 (2), 98-108 (2009).</li>
<li>Shen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((artificial+antigen-presenting+cells+deplete+alloantigen-specific+T+cells+in+a+murine+model+of+alloskin+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+letters%22%5BJournal%5D)">artificial antigen-presenting cells deplete alloantigen-specific T cells in a murine model of alloskin transplantation.</a> Immunology letters. 138 (2), 144-155 (2011).</li>
<li>Perica, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+artificial+antigen+presenting+Cells+for+T+cell+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+nanotechnology%2C+biology%2C+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Nanoscale artificial antigen presenting Cells for T cell immunotherapy.</a> Nanomedicine nanotechnology, biology, and medicine. 10 (1), 119-129 (2013).</li>
<li>Sunshine, J. C., Perica, K., Schneck, J. P., Green, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle+shape+dependence+of+CD8%2B+T+cell+activation+by+artificial+antigen+presenting+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Particle shape dependence of CD8+ T cell activation by artificial antigen presenting cells.</a> Biomaterials. 35 (1), 269-277 (2013).</li>
</ol>

CS ve MF ifşa hiçbir şey yok. NexImmune ve Johns Hopkins Üniversitesi, Dr arasında bir lisans anlaşması altında. Schneck ve Oelke bu makalede açıklanan aAPC ürünlerinin satışlarında Üniversitesi tarafından alınan lisanslı hisse hakkına sahiptir. Onlar da Üniversite politikası uyarınca belirli kısıtlamalara tabidir NexImmune stok sahibi. Dr Schneck şirket &quot;ler Yönetim Kurulu ve Bilimsel Danışma Kurulu üyesidir. Bu düzenlemenin koşulları faiz politikalarında ihtilafı uyarınca Johns Hopkins Üniversitesi tarafından yönetiliyor.

Protokolde en önemli nokta sinyali 1 (peptid-MHC) ve sinyal 2 (anti-Fas mAb) uygun oranının sağlamaktır. Biz sinyali 1 ve 2 için mükemmel oranını tanımlamak için yoğun titrasyon deneyleri var; nedeniyle HLA-A2 ile lg dimer ya da anti-Fas mAb konsantrasyonlarında çok az farklar varyasyonlar KaAPC işlevselliği de müdahale edebildiği de ortaya çıkmıştır. Böylece, hem sinyallerin yoğunluğunun her zaman kontrol edilmelidir ve her iki protein kalitesi genellikle bu ticari bir kaynaktan sipariş olsa bile test edilmelidir. Farklı tespit deneyleri, farklı konsantrasyonlarda neden olabilir Dahası, konsantrasyon her zaman aynı deneyi ile tespit edilir. HLA-A2-Ig işlevselliği, aynı zamanda, tam olmayan katlama ve / veya verimsiz peptit yüküne bozulabilir. Ayrıca dimer molekülleri proteinin işlevsel etkinliği üzerindeki etkisi olabilir, farklı derecelerde burada toplayabilir. Bu nedenle, actudimer ark miktarı değişebilir ve belirli fonksiyonel KaAPC üretilmesi için gerekli. Ayrıca, sinyal KaAPC anti Fas mAb indükleyici ölümü için ideal aralık son derece sıkı olduğu bulunmuştur. Bizim elimizde büyük miktarlarda 3.64 ug / ml 'nin altında miktarları, doza bağlı olarak, indirgenmiş öldürme aktivitesi ile sonuçlanırken mi, Fas pozitif T hücre spesifik olmayan öldürülmesine yol / 3.64 ug. Bu koşullar oldukça sıkı gibi ise de, bu ayrıntıları bir dikkat ve spesifik fonksiyonel KaAPC üretilmesiyle sonuçlanacaktır. Mevcut KaAPC fenotipi saf ya da dinlenme antijen-spesifik T hücrelerini hedefleyen antijene özel aktive edilmiş T hücreleri, ön deneylerde tükenmesi için işlevsel olduğunu da bu popülasyonlar, Fas düşürülmüş sentezlenmesine sahip antijen-özel apoptosis anlamlı endüksiyonunu gösterdi. Bu nedenle, bunları açmak yapmak Hareketsiz T hücreleri üzerinde Fas yukarı düzenlenmesini teşvik etmek için KaAPC üzerine ko-stimülatör bir sinyal ekleme olabilir tasavvurKaAPC için bir hedef haline. Bunun mümkün olduğu da her üç sinyal, dikkatli bir şekilde fonksiyonel bir KaAPC fenotip temin etmek için titre edilmesi gerekir. Bir biyo-uyumlu ya da biyo-bozunabilir matris, damak platformu ayarlanması in vivo uygulanabilirliği KaAPC arttıracaktır. Son zamanlarda, Shen ve ark. KaAPC -TRP2 11b, anti-Fas (klon Jo2) ve anti-His / H2-Kd konjüge 5 um lateks boncuklar kullanılarak in vivo kullanımı başarılı bildirmişlerdir. Bu yapay antijen sunan hücreler (aAPC) 'deki genel kavramı başarılı bir şekilde mil boyutlu parçacıklar 12 um büyüklükte transfer edilebilir ve bu işlevsellik parçacık geometrisine 13 etkisi olduğunu göstermek mümkün olmuştur. Bu yüzden, boyutu ve / veya gelecekteki KaAPC şekli değiştirilerek bir organa özgü otoimmün hastalıkların başarılı bir tedavisi için bir anahtar olabilir in vivo işlevselliği ve biyo-dağılımı üzerindeki etkisi mümkün olabilir tasarlar. <p class='"jove_content"&gt;' kaapc don durumu ve ar ba zaman maliyet etkin bir yakla kullan kolay h bazl t stratejilerinin eksikliklerin ki ya da parakrin sinyal hedefleri ctl sitolitik efekt fonksiyonlara duyarl de ilgili hastal antijenin belirlenmesini gerektirir spesifik hla tipi durulacakt tip diyabet i halen uygun hla-a2 ile k antijenler birlikte gvhh skleroz katlar>2, i daha da artırmak ve uygulanabilirliğini genişletecektir moleküllerin yanı sıra, yeni otoimmün ilgili antijenlerin tanımlanmasını eden dimer ilave HLA sınıf gelişimini tespit edilmiştir KaAPC. Ayrıca tek bir aynı anda birden fazla antijenleri hedeflemek üzere farklı epitoplarına yönelik KaAPC kullanılarak düşünülebilir. Özetle, KaAPC bir için esnek bir platformdur teknolojiyi temsilantigene-özgü T hücresi kaybı. Onların "lego benzeri" yapısı örneğin genişletmek ve in vitro ve in vivo uygulanabilirliği ve bunların daha sonradan arttırabildiğini gibi çeşitli matrisler üzerinde PD1 veya izleme aracı olarak ek yardımcı-uyarıcı ya da inhibitör sinyalleri, yeni sinyalleri dahil sağlar. Bu yazıda KaAPC farklı özellikteki T hücresi bunların karışımlarından antijen-spesifik T hücrelerinin ortadan kaldırılması için, birinci kordon dayalı yaklaşımı oluşturmak için adım adım protokol mevcut. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51859/51859fig3highres.jpg" width="500"> Şekil 3. KaAPC antijen spesifik şekilde CTL ortadan kaldırmak veya 1 Fas + efektör-hafızalı CTL aktive PKH26-etiketlenmiş ve karıştırıldı aynı donörden alınan CMVpp65 özgü CTL PKH67 etiketli:. CMVpp65 KaAPC 1 oranında, ve ko-kültive 48 saat karıştırıldı. Kontrol kültürleri yüksüz KaAPC ya da 1 ug / ml ile muamele edildisuda çözünür, anti-Fas mAb (klon CH11). Canlı hücreler minimum kaybı muamele edilmemiş karışık CTL kültürlerinde (t karışımı) olarak tespit edilmiştir. T karışımı her CTL nüfus için orijinal FACS verileri gösterilmiştir. Önce her iki T hücre popülasyonlarının 10 ayrı yolluk tarafından yayınlanan apoptoz analizi yapıldı. Sol üst kadranda tasvir Numaraları toplam hücrelerin% temsil eder. Gösteren Şekil, üç bağımsız deneyin üzerinden, temsilci bir deneyden elde edilir. Bu araştırma aslında Blood yayınlandı. . Schütz, C. ve ark katil yapay antijen sunan hücreler: yeni bir strateji spesifik T hücreleri silmek için kan.. 2008, 111, 3546-52. Telif Amerikan Hematoloji Derneği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51859/51859fig3highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Son yirmi yıl içinde çok fazla ilerleme otoimmün hastalıkların patojenik mekanizmasının anlaşılması yönünde gerçekleştirilen edilmiştir. Bununla birlikte, en yaygın tedavi yaklaşımları kortikosteroidler yanı sıra, purin analogları gibi bağışıklık bastırıcı ilaçlar, alkile edici maddeler ve kalsinörin inhibitörü 1 dayanmaktadır. Bu tür ilaçların kullanımı büyük ölçüde hastaların prognozu gelişmiş, henüz tedavi altta yatan immünolojik arıza tedavi sağlamaz. Ayrıca, hastalar enfeksiyonlara ve kanser gelişmesine karşı savunmasız hale gelir. Bu nedenle T hücresi kaynaklı otoimmün hastalıkların ve allograft reddinin tedavisi için nihai hedefi özel olarak ise, aynı zamanda, el değmemiş ve immünolojik bozuklukları mücadele için yetkili kalan bağışıklık sistemini terk ederken neden olan T hücrelerinin sadece hastalık hedef etmektir. Kullanarak antijen-sunan hücreler (APC), periferal T hücresi tepkilerini bastırmak için bir tedavi olarak birinci kadar erken olarak nitelendirildiçeşitli gruplar tarafından 1970&#39;lerde. Daha sonra pek çok hücre tabanlı yaklaşımlar geliştirilmiştir beri (Schütz&#39;ün ve ark. 2 gözden). Immunoregülatuar hücreleri otoimmünite, allogreft reddi ve kronik enfeksiyonların tedavisi için terapötik potansiyelini gösteren umut verici sonuçlar gösterdi FasL ifade katil-APC kullanarak Stratejileri. Ancak, sonuçta kendi klinik uygulanabilirliğini sınırlı FasL&#39;nin Killer-APC kullanan stratejileri ile önemli kısıtlamalar vardır; APC (i) üretimi veya izolasyonu zaman, işgücü ve maliyet yoğun olan, (ii) ikinci sitopeni bağlı bağışıklık bastırma şikayetçi olan hastalar, sınırlı miktarda ve hücrelerin kalitesi sağlar (iii) bu tür çok FasL sonuçlar olarak apoptozu teşvik edici sinyallerle yapılan kaplama ya da APC&#39;nin transdüksiyon Değişken fenotipleri ve (iv) Killer APC sonuç olarak terapötik potansiyelini azaltır T hücreleri efektör fonksiyonlarını sitotoksik duyarlıdır. Bu nedenle, belirli bir tekrarlanabilir katil APC fenoksi garanti etmek zordurin vivo T hücresi tepkilerinin, antijene özel modülasyonu için kullanılabilir türü. Katil APC 3-5 ve yapay antijen sunan hücreler (aAPC) ifade FasL ile daha önceki çalışmalara dayanarak 6,7 oto-reaktif T hücrelerinin antijen-belirgin önlenmesi ya da ortadan kaldırılması için bir tane bazlı yaklaşım (KaAPC) geliştirmiştir in vitro. KaAPC bir HLA-A2-lg dimer (sinyal 1) kovalent bir 4.5 um paramanyetik lateks boncuk bir yüzeyi üzerinde hareketsiz kılınmış bir anti-Fas mAb (apoptoz uyarıcı sinyali) oluşur. Bu antijen-spesifik şekilde birden fazla özgüllüklerinin T hücre kültürlerinden bir Fas / FasL aracılı antijen-spesifik T hücrelerinin tüketilmesi ve etkinleştirme indüklenen hücre ölümü (AICD) yolunun bağımsız olarak gerçekleştirilir. Hedeflenen T hücrelerinde doza bağlı apoptoz zaten 30 dakika 8 sonra hızla uyarılır. KaAPC kolayca kontrollü bir şekilde oluşturulabilir bir raf phenot kapalı tanımlandığı sağlanmasını gerektirmektedirype hem de hücre bazlı tükenmesi stratejilerinin eksikliklerin üstesinden en. Sonuç olarak, T hücresi KaAPC spesifik tedavi stratejilerinin alanını ilerleyen T-hücresi kaynaklı otoimmün hastalıklar ve allograft reddinin tedavisi için büyük bir potansiyel gösterir.

<table><tbody><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>İnsan AB serumu</td><td>Atlanta biyolojikleri</td><td>S40110</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma / Aldrich</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum azid</td><td>Sigma / Aldrich</td><td>71289</td><td></td></tr><tr><td>M-450 epoksi boncuk</td><td>Canlandırıcı / Dynal</td><td>14011</td><td></td></tr><tr><td>MPC-1 mıknatıs</td><td>Canlandırıcı / Dynal</td><td>12001D</td><td></td></tr><tr><td>Vidalı cam şişe</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-338AA</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Tüp Döndürücü</td><td>Miltenyi</td><td>130-090-753</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD95 (klon CH11)</td> <td>Milliore</td><td>05-201</td><td></td></tr><tr><td>HLA-A2-Ig dimer</td><td>BD / Pharmingen</td><td>551263</td><td></td></tr><tr><td>Kriyo-tüp 2 ml</td><td>Corning</td><td>430488</td><td></td></tr><tr><td>anti-fare IgG1 PE</td><td>BD / Pharmingen</td><td>559320</td><td></td></tr><tr><td>anti-fare IgM FITC</td><td>BD / Pharmingen</td><td>553408</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Merck</td><td>S271-3</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Sigma / Aldrich</td><td>C5080</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>cellgro / Mediatech</td><td>25-060-CI</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>gibco / yaşam teknolojileri</td><td>11875-085</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu Yuvarlak alt plaka</td><td>Falcon</td><td>353077</td><td></td></tr><tr><td>AnnexinV FITC</td><td>PromoKine</td><td>PK-CA577-1001-1000</td><td></td></tr><tr><td>7-AAD</td><td>BD / Pharmingen</td><td>51-68981E</td><td></td></tr><tr><td>FACS tüpleri</td><td>Falcon</td><td>352008</td><td></td></tr></tbody></table>

etkin killer yapay antijen sunan hücreler (kaapc) İn vitro İnsan antijen-spesifik t hücrelerinin tükenmesi

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

T hücresi kaynaklı otoimmün hastalıkların tedavisinde yeni yaklaşımlar gibi enfeksiyonlar veya maligniteler kontrol etmek için bir azaltılmış yeteneği gibi uzun vadede yan etkiler eşlik eder, bağışıklık sisteminin bastırılması ile, stratejileri çoğunlukla dayanır. Bu nedenle, yeni yaklaşımlar sadece hastalık aracılık hücreleri hedef ve sağlam kalan bağışıklık sistemini terk etmesini geliştirilmesi gerekmektedir. Geçtiğimiz on yıl içinde hücre bazlı immunoterapi çeşitli stratejiler T hücre aracılı bağışıklık tepkileri geliştirilmiştir modüle etmek. Bu yaklaşımlardan en çok tolerans uyarıcı, antijen sunan hücreler (APC) dayanmaktadır. Bununla birlikte, teknik olarak zor ve külfetli olmanın yanı sıra, bu tür yaklaşımlar, hücre bazlı bir tedavi edici kapasitesini sınırlar ve sitotoksik T hücresi tepkilerinin, son derece duyarlıdır. Burada yeniden bırakırken, patolojik T hücrelerinin tükenmesi sağlayan hücresel olmayan killer, yapay antijen sunan hücrelerin üretimi (KaAPC) için bir protokol mevcutisti bağışıklık sistemi bakir ve fonksiyonel. KaAPC bir antijen belirli bir tarz içinde istenmeyen T hücre yanıtını düzenleyerek, otoimmün hastalıkların ve allograft reddi tedavisinde bir potansiyele sahip hücresel immünoterapiye alternatif bir çözümdür.

Bu protokolün özellikleri hücre bazlı yaklaşımlar ile karşılaştırıldığında kaplama değişmez, aynı zamanda HLA-A2-Ig (1 sinyal) ve anti-Fas mAb (apoptoz sinyali) görüntüleyen bir KaAPC fenotip tanımlanmış kuşağı ya da transdüksiyon etkinliklerinin ve kolay bir üretim (Şekil 1) modüle edilebilir. Ayrıca, KaAPC, T hücrelerinin sitotoksik efektör fonksiyonlara duyarlı değildir ve bunların işlevselliği nitro manipülasyon öncesi ve sonrası otolog antijen sunan hücreler kalitesine bağlı değildir. KaAPC olmayan ortak kökenli KaAPC T hücrelerini (Şekil 2) tüketmek olmaz yüklü iken, ortak kökenli peptid ile yüklü olduğunda in vitro ortamda antijen-spesifik T hücrelerini tüketme yeteneğine sahiptir. Bu nedenle, KaAPC antijene özel bir şekilde T hücresi apoptosis. Daha sonra, farklı T hücresi SPE karışımından antijen-spesifik T hücrelerinin seçici tükenmesi için ikinci KaAPCsadece asgari sitotoksisite komşu T hücreleri sızması olduğunu gösteren cificities, (Şekil 3). Böylece, KaAPC otoimmün hastalıklar ve allograft tedavisi için potansiyel klinik uygulanabilirliği olan insan aktive antijen-spesifik T hücrelerinin in vitro antijen ile spesifik azaltımı için mükemmel bir araç temsil eder.

Topluluk oluşturan hücreler katil yapay antijen üretimi için sunulmuştur, KaAPC insan antijen-spesifik T hücrelerinin in vitro tüketimi ve bir antijene T hücre aracılı bağışıklık hastalıklarının tedavisi için selüler immünoterapi için alternatif bir çözüm için etkin bir araç Kalan bağışıklık sistemini ödün vermeden özel biçim.

Etkin Killer yapay antijen sunan hücreler (KaAPC) İn Vitro İnsan Antijen-spesifik T hücrelerinin tükenmesi

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Bu deneyin genel amacı, otoreaktif veya istenmeyen T hücresi popülasyonlarının tükenmesi için hücresel olmayan HLA IG tabanlı öldürücü yapay antijen sunan hücre veya KAAAPC oluşturmaktır. Bu, fonksiyonel K-A-A-P-C'nin üretilmesi için ilk olarak HLA IG moleküllerinin ve Antifa monoklonal antikorlarının hücre boyutunda demir dekstran parçacıklarına kovalent olarak bağlanmasıyla elde edilir İkinci adımda, K-A-A-P-C, uygun işlevselliklerini sağlamak için akış sitometrisi ile karakterize edilir. Daha sonra, K-A-A-P-C, istenmeyen antijene özgü T hücresi popülasyonunu hedeflemek için farklı peptitlerle yüklenir.Sonuç olarak, yüklenen akraba tarafından T hücrelerinin antijene özgü anti-yağ aracılı öldürülmesini ölçmek için akış sitrik analizi yapılabilir. K-A-A-P-C. Bu yöntem için fikir ilk olarak, hücre bazlı bir öldürücü antijen sunan hücrenin geliştirilmesi üzerinde çalışırken sorunlarla karşılaştığımızda ve aynı zamanda beat tabanlı bir platformun geliştirilmesi üzerinde çalıştığımızda aklımıza geldi. Bağışıklık hücresi modülasyonu teknolojisi Önce K-A-A-P-C oluşturmak için, bir stoktan 250 mikrolitre epoksi boncuk ve 250 mikrolitre taze hazırlanmış borat tamponunu steril bir vidalı cam şişeye ekleyin.Boncukların iki dakika sonra yapışmasını sağlamak için şişeyi bir mıknatısın üzerine yerleştirin, tamponu aspire edin ve şişeyi mıknatıstan çıkarın. Boncukları bir kez başka bir mililitre delikli sekiz tamponla yıkayın ve daha sonra 550 mikrolitre HLA A iki IG ve anti-insan CD 95 MAB içinde yeniden süspanse edin. Boncukları antikorlarla karıştırmak için şişeyi hafifçe çalkalayın ve ardından boncukları 24 saat boyunca dört santigrat derecede bir döndürücü ucunda inkübe edin.Ertesi gün, boncukları 300 Gs ve oda sıcaklığında iki dakika döndürün ve şişeyi tekrar mıknatısın üzerine yerleştirin. İki dakika sonra yükleme tamponunu aspire edin. Şişeyi mıknatıstan çıkarın ve boncukları dikkatli bir şekilde çalkalayarak bir mililitre yıkama tamponunda yıkayın.Üçüncü yıkamadan sonra, kalıntı protein bağlanma bölgelerini bloke etmek için şişeyi bir mililitre taze boncuk yıkama tamponunda döndürün. Ertesi gün, boncukları tekrar döndürün ve şişeyi tekrar mıknatısın üzerine yerleştirin. İki dakika sonra yıkama tamponunu aspire edin.Şişeyi mıknatıstan çıkarın ve KAPC'ye bir mililitre PBS ekleyin. Boncukların kalitesini kontrol etmek için, K-A-A-P-C'nin 1,5 katı 10 ila beşte birini bir faks tüpüne aktarın ve bir mililitre faks yıkama tamponu Resus. Boncuk peletini 100 mikrolitre yıkama tamponunda askıya alın ve HLA'yı tespit etmek için bir mikrolitre anti fare IgG, bir PE ekleyin; anti-insan CD'sini tespit etmek için iki IG ve bir mikrolitre anti fare IG, MFI TC, 95 MAB.Daha sonra, dört santigrat derecede 15 dakikalık bir inkübasyondan sonra, boncukları bir mililitre faks yıkama tamponu Resus'ta yıkayın. Bunları 250 mikrolitre yıkama tamponunda askıya alın ve peptit yüklemesi için numuneleri bir akış sitometresinde okuyun. K-A-A-P-C'nin yedide birine 10 kez iki kez aktarın ve yeni bir steril cam şişeye aktarın.Daha sonra boncukları iki dakika boyunca mıknatısın üzerine yerleştirdikten sonra, PBS'yi aspire edin ve boncukları beş mikrogram peptit içeren 500 mikrolitre taze PBS'de yeniden süspanse edin. Şişeyi, yüklenen peptidin tarihi ve adı olan K-A-A-P-C ile etiketleyin. Daha sonra, A-K-A-A-P-C in vitro öldürme testi gerçekleştirmek için HLA A iki IG dimerine yeterli peptit yüklemesine izin vermek için yüklenen KAA-APC'yi en az üç gün boyunca dört santigrat derecede saklayın.Tüm serbest peptidi çıkarmak için peptit yüklü K-A-A-P-C'yi gösterildiği gibi en az altı kez yıkayın. Daha sonra K-A-A-P-C ve iki kez 10 ila beşinci antijene özgü T hücrelerini, 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte nemlendirilmiş bir inkübatörde 48 saatlik kültürden sonra bire bir oranında 200 mikrolitre ko-kültür ortamında 96 kuyulu yuvarlak alt plakanın numunesi başına bir oyuğa aktarın. Numuneleri uygun karşılık gelen faks tüplerine aktarın ve bir mililitre nexin five bağlayıcı tamponda yıkayın.Daha sonra, peletleri 100 mikrolitrelik bir nexin five bağlayıcı tampon içinde yeniden süspanse edin ve daha sonra numuneleri oda sıcaklığında bir mikrolitre nexin five FITC ve beş mikrolitre yedi a d içinde inkübe edin. 10 ila 15 dakika sonra, numuneleri bir mililitre nexin five bağlayıcı tampon ile yıkayın ve peletleri 250 mikrolitre bir nin beş bağlayıcı tampon içinde yeniden süspanse edin. Ardından numuneleri hemen bir akış sitometresinde okuyun.K-A-A-P-C, HLA A iki IG ve Antifa MAB'ı aynı anda görüntüler, bu da hücre tabanlı yaklaşımlarla karşılaştırıldığında, kodlama veya transdüksiyon verimlilikleri tarafından değiştirilmez ve üretim sırasında kolayca modüle edilebilir. K-A-A-P-C, aynı kökenli peptit ile yüklendiğinde in vitro olarak antijene özgü T hücrelerini tüketebilirken, aynı kökenli olmayan bir bez yüklüdür. K-A-A-P-C, T hücresini tüketmez, bu nedenle K-A-A-P-C, antijene özgü bir şekilde T hücresi apoptozunu indükler.Daha sonra, K-A-A-P-C, sadece farklı T hücresi özgüllüklerinin bir karışımından antijene özgü T hücrelerinin seçici olarak tükenmesi için kullanıldığında, komşu T hücrelerine minimal sitotoksisite sızar. Bu nedenle, K-A-A-P-C, geliştirildikten sonra otoimmün hastalıkların ve allogreft reddinin tedavisi için potansiyel bir klinik uygulanabilirliğe sahip, insan aktif antijene özgü T hücrelerinin in vitro antijen, antijene özgü tükenmesi için mükemmel bir araçtır. Bu teknik, hücresel immünoloji alanındaki araştırmacıların, T hücresi aracılı otoimmün hastalıkların ve nakil reddinin tedavisi için yeni yaklaşımları keşfetmelerinin yolunu açtı.

killer-artificial-antigen-presenting-cells-kaapc-for-efficient-vitro

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu yazıda, insan periferik kan mononükleer hücrelerinde alloantigen özel anerji ikna etmek için basit bir teknik anlatılmaktadır. Tekniği olmayan alloreactive donör hücreleri oluşturmak için klinik olarak uygulanabilir. İnfüzyon bu hücrelerin bağışıklık sulandırıldıktan geliştirmek ve allojeneik hematopoietik kök hücre transplantasyonu sonrası toksisite azaltabilir.

Co-uyarıcı Sinyal Abluka Alloantigen Uyarım İnsan periferik kan mononükleer hücreleri içinde Alloantigen özel anerji indüksiyonu

Antijen-spesifik T hücrelerinin indüksiyon ve genişleme için yeni bir DC bağımsız bir yöntem açıklanmıştır. HLA-A2-Ig tabanlı yapay Antijen sunan hücreler (aAPC), HLA-A2 verimli farklı antijen özgüllüğü CTL genişletmek için kısıtlı peptitler ile yüklenir. Bu teknoloji tabanlı CTL evlatlık immünoterapi için büyük bir potansiyele sahiptir.

Verimli HLA-Ig Tabanlı Yapay antijen sunan hücrelerin Ex vivo</emİnsan CTL> Genleşme

Burada yapay antijen sunan hücreler (AAPC) kullanarak toplu T hücre popülasyonlarının insan NKT hücreleri aktive ve genişletilmesi için bir yöntem açıklanmaktadır. CD1d bazlı AAPC kullanılması, fonksiyonel NKT hücrelerinin yüksek sayılar için bir standart bir yöntem sağlar.

Yapay Antijen Hücre (AAPC) Aracılı Aktivasyon ve Doğal Öldürücü T hücreleri genişletilmesi Presenting

Bu videoda, antijenik peptit yüklü MHC-Ig'ler ve anti-CD28 antikorları ile işlevselleştirilmiş manyetik nanopartikül bazlı yapay antijen sunan hücreler (aAPC'ler) kullanılarak nadir antijene özgü CD8+ T hücrelerinin izole edilmesi için bir protokol açıklanmaktadır. aAPC'lerin, antijenik peptit hedefli T hücresi reseptörlerini spesifik olarak eksprese eden CD8 + T hücreleri ile etkileşimi ve ardından in vitro genişlemeleri, bu CD8 + T hücresi popülasyonunun zenginleşmesi ve genişlemesi ile...

Antijene Özgü CD8+ T Hücrelerinin Nanopartikül Bazlı Zenginleştirilmesi ve Genişletilmesi

Bu videoda, tümör antijenine özgü kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin ex vivo üretimi için bir teknik gösterilmektedir. Transgenik RNA taşıyan retroviral vektörler, T hücresi sağkalımını ve proliferasyonunu teşvik etmek için interlökin-2 ile takviye edilmiş bir ortamda dalak hücreleri ile karıştırılır. Karışım daha sonra rekombinant insan fibronektin fragmanları ile kaplanmış bir plakaya aktarılır ve virüsün hücre ile füzyonunu kolaylaştırmak için santrifüjlenir, bu da RNA'nın...

Tümöre özgü kimerik antijen reseptör T hücreleri oluşturmak için bir ex vivo teknik

Bir CD19 özgü kimerik antijen reseptör (SYR) eksprese eden T hücrelerinin ilk-in-insan gen tedavi denemelerinde B-hücreli kanserlerin araştırılan tedavi olarak infüze edilir. Bu kullanılarak T hücre genetik modifikasyonu...

Klinik Uygulama<em&gt; Sleeping Beauty</emGenetiği Periferik ve Göbek Kordon Kanı alınan T hücreleri Değiştir Sunan Hücreler&gt; ve Yapay Antijen

Burada, hızlı ve tekrarlanarak ayarlanabilir boyutu, şekli ve yüzey proteini tanıtımı için T hücre genişletme ex vivo veya içinde vivo hücre (aAPC) sunan biyolojik ilham, biyolojik olarak parçalanabilen articifical antijen üretmek için bir iletişim kuralı mevcut .

Yönbağımlı polimer yapay antijen hücreleri CD8 + T Hücre aktivasyonu için sunma imalatı

Antijen spesifik T hücreleri ayırdetmek veya tedaviler nedeniyle onların son derece düşük frekanslı kullanmak zordur. Burada, bu hücreler zenginleştirmek için antijen spesifik T hücrelere bağlayabilirsiniz bir manyetik parçacık geliştirmek için bir protokol sağlar ve daha sonra bunları birkaç genişletmek için hundred-fold karakterizasyonu ve tedavisi için.

Zenginleştirmek ve nadir antijen spesifik T hücreleri Manyetik Nano tanecikleri ile genişletin

Bu makalede, üç boyutlu (3D) timik kültür sistemi tarafından tümör antijene özgü indüklenen pluripotent kök hücre kaynaklı timik göçmenler (iTE) oluşturmak için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. iTE, proliferasyon, hafıza oluşumu ve tümör baskılanması kapasitesine sahip naif T hücreleri ile yakından ilişkili T hücrelerinin homojen bir alt kümesidir.

Üç boyutlu Timik Kültür Sistemi Murine indüklenen Pluripotent Kök Hücre kaynaklı Tümör Antijen-spesifik Timik Emigrants oluşturmak için

Bu makalede, in vitro ve in vivo kullanılmak üzere fonksiyonel T hücrelerinin yüksek sayıda verim amacı ile, antijene özgü CD8 T hücrelerinin üretimi ve bunların in vitro genişlemesi için bir protokol açıklanmaktadır.

Otoimmün Diyabet Modelinde Fonksiyonel Testler için Antijene Özgü Primer Fare Sitotoksik T Hücrelerinin Yüksek Verimli Üretimi

Bu makalede, OP9/DLL1 co-kültür sistemini kullanarak fonksiyonel tümör antijene özgü indüklenen pluripotent kök hücre türetilmiş CD8αβ+ tek pozitif T hücreleri oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır.

Tümör Antijene Özgü T Hücrelerinin Üretimi için İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Kullanılması

Öğrenin, otoimmün hastalıklarda antijen-spesifik T hücrelerini hedefli olarak tüketmek için killer yapay antijen sunan hücreler (KaAPC) üretme yöntemini. Bu teknik, akış sitometrisi ile karakterize edilir ve klinik uygulama potansiyeli taşır.

Etkin Killer yapay antijen sunan hücreler (KaAPC) İn Vitro İnsan Antijen-spesifik T hücrelerinin tükenmesi

Daha fazla video keşfet