Name: Düz zeminli Hava kaldırdı Platform: Yeni Bir Yöntem Awake üzerinde Mikroskopi veya Elektrofizyoloji ile davranışı birleştiren için serbestçe Kemirgenler Hareketli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-29T14:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 2 s
Description: Öğrenin, uyanık farelerde optik ve elektrofizyolojik kayıtlar için hava kaldırdı mobil ev kafesi yöntemini. İki foton mikroskobisi ve yama kelepçesi ile doğal davranış sırasında sinir aktivitesini inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar yazının onun değerli yorumlarınız için Prof Eero Castren teşekkür ederim. Iş Finlandiya Uluslararası Hareketlilik ve Nörobilim Fin Enstitüsü (Beyin ve Zihin Doktora Programı) için Finlandiya Akademisi, Merkezi&#39;ne hibe tarafından desteklenmektedir.

Burada sunulan tüm prosedürleri hayvan bakımı (Hayvan Deneyleri (62/2006) Fin Yasası) için yerel rehberlik göre yapılmıştır. Hayvan lisans (ESAVI/2857/04.10.03/2012) yerel otorite (ELÄINKOELAUTAKUNTA-Ella) elde edilmiştir. Yetişkin fareler (yaş 1-3 ay, ağırlık 20-40 g) Helsinki Üniversitesi sertifikalı hayvan barınağında grup konut kafeslerde tutulan ve gıda ve su ad temin edilmiştir. 1.. Kranial Pencere İmplantasyonu Aşağıda kısaca tarif edildiği gibi kranyal pencere, yayınlanmış protokollere küçük değişikliklerle 29-31 göre implante edilir: <ol><li> Kafatası pencere implantasyonu başlamadan önce aletleri sterilize. Postoperatif komplikasyon riskini en aza indirmek için ameliyat sırasında steril koşullarda muhafaza. </li><li> 30 dk ameliyat ve 24 saat sonrası, ameliyattan önce, bir analjezik (Ketoprofen, 2.5 mg / kg) yönetmek. Birketamin oluşan bir karışım (80 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) ile intraperitoneal olarak enjekte edilen fare esthetize. Düzenli pençe sıkıştığı tarafından anestezi derinliği izlemek. 37.0 ° C&#39;de hayvanın vücut sıcaklığını korumak için bir ısıtma pedi kullanın , Ameliyat kaynaklı inflamasyon ve beyin ödemi azaltmak subküten enjeksiyonla deksametazon (2 mg / kg) yönetmek için. </li><li> Kuru getting gözleri korumak için göz yağ sürün. Farenin kafasını tıraş ve tıraş bölgeyi temizleyin. Alnına ense gelen hattı boyunca cerrahi makas ve forseps kullanarak keseceksiniz. Kafatasına bağlı herhangi bir bağ doku çıkarın. </li><li> Yavaş ve dikkatli bir yüksek hız cerrahi matkap kullanarak sol frontal kemik küçük bir kuyu açilmasina. Delinmiş kuyuya mini cıvatasını (Malzeme) vidalayın. Vidanın fazla bir-ve-bir-buçuk tam tur yapın. NOT: Doğrudan yüzeyel kortikal damarları üzerinde bulunan bu alanlardan kaçının. Bu Ves bozulmasısels masif kanamaya yol açabilir. </li><li> Kraniotomiye gerçekleştirmek için, sağ parietal kemikte yuvarlak pencere (çapı 3-3,5 mm) matkap. 100 ug penisilin 100 birim / mL ve streptomisin ile takviye edilmiş damıtılmış H2O içinde korteks tampon bir damla (125 mM NaCl, 5 mM KCI, 10 mM glükoz, 10 mM HEPES, 2 mM CaCl2 ve 2 mM MgSO 4 uygula / ml) ve dikkatli bir şekilde dairesel pencere içinde bulunan kemik parçası kaldırmak. NOT: belirli bir hücre alt grubunda bir floresan proteini ifade edilen prosedüre bu noktada adeno-ilişkili viral (AW) vektörü ya da diğer viral vektörleri intrakranial enjeksiyon yapmak. </li><li> Kranial pencerede bir yuvarlak cam lamel (# 1.5 kalınlık kodu) yerleştirin. Poliakrilik yapıştırıcı ile kafatasına lamel takın. Lamel üstüne bir metal tutucu yerleştirin ve diş çimento ve poliakrilik tutkal karışımı ile sabitleyin. Not: Yukarıdaki prosedür kafatası pencereler için optimize edilmiştiroptik görüntüleme deneylerinde kullanılmıştır. , Elektrofizyolojik deneyler için uygun bir &quot;ters&quot; kranial penceresi hazırlamak, farklı bir yordamı kullanın. Birincisi, kafatasına metal tutucu tutkal. Video örneklendiği gibi sahibinin açıklık içinde dairesel bir pencere delin. Seçenek olarak ise, 32 beyin hareketi önlemek veya en aza indirmek için ilgili bölgenin üzerinde daha küçük bir kranyotomi (çapı en az 0.5 mm) olun. Kortikal tampon yenilemek veya kafatası pencere silikon yapıştırıcı bir damla koyun, sonra yuvarlak cam lamel ile kapatın. </li><li> Işlem tamamlandıktan sonra, kolay erişilebilir gıda ve su ile ısıtılmış bir kafeste hayvan. Bu anestezi tamamen kurtarır sonra grup konut kafesine hayvan dönün. , Hareket yemek veya içmek için isteksizlik, kilo kaybı, salya, poliereksiyon veya anormal solunum sesleri de dahil olmak üzere ağrı herhangi bir işaret, tespit üzerine analjezik yeniden yönetmek. </li></ol> 2. Animal Taşıma <ol><li> Kafesinden fareyi alın ve sadece 5-10 dakika tutun. Hayvan taşıma sırasında sakin olun, ani hareketler ve sesler yapma kaçının. </li><li> Kullandıktan sonra, kendi kafesine fareyi dönmek. </li><li> Deneye ile fare rahat ettirmek için, elleçleme bölüm arasındaki eşitsiz aralıklarla taşıma işlemi 2-3x tekrarlayın. </li><li> Küçük bir yumuşak bir bez alın ve eşit aralıklarla hayvan 2-3x sarın. </li><li> Hayvan sakin olmaya ve sarılarak alışması gerekir. Fare heyecanlı ve sinirli ise, taşıma ve paketleme işlemleri tekrarlayın. </li></ol> 3.. Hayvan Eğitimi <ol><li> Işleme ve paketleme için alışkanlık sonraki gün tamamlandıktan mobil homecage hayvanın eğitim başlatın. </li><li> Hayvanın öncesi ve eğitim boyunca günlük tartmak kaydedin. NOT: eğitim sırasında, hayvan kendi ağırlığının% 10 üzerinde kaybeder, bu t dışında tutulmalıdıro deneyler. </li><li> Eğitilmiş hayvanın büyüklüğünü maç için mobil homecage cihazın kafa sabitleme kolunun dikey konumunu ayarlayın. Standart laboratuar basınçlı hava çıkışının (tipik olarak, bir gaz deposu ya da örneğin, yaklaşık olarak 5 bar ile 300 l / dakika, yeterince yüksek bir basınç ve hava akımının hızı sağlayan bir hava pompası) için cihazın hava girişi takın. </li><li> Bir bez içinde hayvan sarın. </li><li> Kafa sabitleme koluna hayvanın başının bağlı olduğu metal tutucu, yerleştirin ve sıkıca vidaları sıkarak sabitleyin. Hava akışını açın ve hava akımı hava kaldırdı homecage ücretsiz flotasyon için uygun olduğundan emin olun. Bez kaldırarak mobil homecage içine hayvanı serbest bırakın. </li><li> Gürültü hayvan alışmakta, ortam sesleri sabit bir poz vermek (örneğin, kullanarak, radyo ya da kayıtlı müzik ve konuşma) tüm eğitim oturumları sırasında yanı sıra deneyler sırasında. </li><li> Dİlk eğitim oturumu uring, antrenman seansının sonuna kadar ışığı kapatmak, sonra ilk saat için oda ışık tutmak. </li><li> Mobil homecage eğitim 2 saat sonra, baş sabitliklerinden hayvanı serbest bırakmak ve su ve yiyecek kaynağı ile kendi kafesine geri. Durgunluk koşulları altında en az 2 saat boyunca bekletin. </li><li> % 70 etanol solüsyonu kullanarak her antrenmandan sonra mobil homecage temizleyin ve musluk suyu ile durulayın. Tek kullanımlık kağıt havlu ile su-içinize çekin ve bir sonraki kullanımdan önce mobil homecage kurulayın. </li><li> Hayvan eğitimli edilirken oda ışığı ile, 2 saat boyunca ardışık eğitim oturumları gerçekleştirin kapatılır. </li><li> Günde iki kez antrenman oturumu gerçekleştirmek. </li><li> 8-12 eğitim sonra, her seferinde en fazla 2 saat için deneysel oturumda hayvan kullanımı. </li></ol> NOT: Birden fazla 1-2 saat son uzun süreli eğitim oturumları sırasında, w fareyi sağlayan düşününya elle ya da mobil homecage çerçeveye bağlı bir pipet tutucusu kullanılarak teslim edilebilir ith içme suyu,. Seçenek olarak ise, su doğrudan mobil homecage duvarlarında hidro jel yapışkan damla yerleştirerek hayvanın ad libitum kullanım için temin edilebilir. NOT: Herhangi bir kronik stres etkilerini ekarte etmek için eğitim her gün önce hayvanları tartmak unutmayın. Herhangi bir zaman noktasında, bu tür donma, seslendirme, ya da stres kaynaklı ishal gibi stres tepkileri gösterir, eğer deneyde bir hayvan dışla. 4. Uygulamaları <ol><li> Uyanık Fare İki foton Görüntüleme Mobil homecage Çevresi Hareketli <ol><li> Mobil homecage birleştirin. Köprü ve kafa sabitleme kol konumlarını kontrol edin. </li><li> Bir bez içinde eğitimli hayvan sarın. Mobil homecage hayvan yerleştirin. Baş tespit kolunda metal tutucu kelepçe. Bez çıkarın. </li><li> Kullanarak tozdan implante kapak camını% 70 etanol çözeltisi ve kurumasını bekleyin. </li><li> Kapak sınıf daldırma sıvı bir damla yerleştirin. Su çabuk buharlaşır çünkü Tercihen, viskoz bir çözüm kullanın. </li><li> (Eğer mikroskopi kurulumunda sabit olan bir ikinci, aynı cihaz, yoksa) mikroskop altında eğitimli hayvan ile mobil homecage cihazı yerleştirin. </li><li> Bir ölçüye ya da bir femtosaniye darbeli kızılötesi lazer ile donatılmış bir piyasada mevcut lazer tarama mikroskobu görüntüleme sistemi kullanarak görüntüleme gerçekleştirin. </li><li> Floresan mikroskop geniş alan modu kullanılarak, ilgili bölgeyi bulun. Beyin damarlarını değerlendirmek ve kan damarlarının desen inceledikten sonra uygun bir hedef alanı seçmek için uzun bir pas filtreleri kullanın. </li><li> Hayvan bez immobilize, ya da retro-orbital sırasında ise görüntü kortikal damar için, ya kuyruk damarına, 70,000 MW Texas Red-konjüge dekstran (veya analog) bir% 1 çözeltisi enjekteHayvan mobil homecage içinde konumlandırılmıştır. 860 nm Ayarlama iki foton lazer ile yayılan ışığı toplamak için bant geçiş filtresi (590-650 nm) kullanılır. Thy1 promotörün kontrolü altında nöronların bir alt grubunda duyarlı floresan protein GCaMP3 - örneğin YFP veya Ca 2 + ifade eden transjenik farelerin, nöronal morfoloji veya kullanan nöronal aktivitenin ince ayrıntıları değerlendirmek için 515-560 nm emisyon filtre kullanın. </li><li> Görüntü alımı için uygun bir yazılım kullanın. </li><li> Görüntüleme sonra vidaları gevşeterek baş sabitleme kolundan hayvanı serbest bırakmak. Kendi kafesine hayvan dönün ve bir sonraki görüntüleme oturumu başlamadan önce en az 2 saat dinlendirilir. </li><li> Sonraki tekrar görüntü için ilgi (ROI) her bölgenin koordinatlarını saklayın. Görüntü aynı zamanla ROI&#39;ler ve Koordinatları görüntü örtüşme maksimize etmek için her zaman ayarlayın. </li><li> Görüntüleri analiz etmek ve uygun bir yazılımı kullanarak üç boyutlu rekonstrüksiyon yapmak(örneğin, ImageJ, vb). </li></ol></li><li> Uyanık Fare ıntrinsic Optik Görüntüleme Mobil homecage Çevresi Hareketli <ol><li> Içsel bir optik görüntüleme kurulum görüntü elde etme kamera altında cep homecage birleştirin. </li><li> Bir bez içinde eğitimli hayvan sarın. Mobil homecage hayvan yerleştirin. Kafa sabitleme koluna metal tutucu kelepçe. </li><li> % 70 etanol solüsyonu kullanarak tozdan implante kapak camını ve kurumasını bekleyin. </li><li> Implante camına gliserol bir damla koyun ve 8 mm yuvarlak kapak kayma ile örtün. </li><li> Kontralateral bıyık için hava üfleme borusu tam tersi olan bir manipülatör yerleştirin. </li><li> Yüksek hızlı kamera konumunu ayarlayın ve kortikal damarsal üzerinde odaklanır. </li><li> Gemiler haritayı elde etmek için bir kamera filtresi olmadan yeşil ışık (filtre 546BP30) kullanın. </li><li> Yaklaşık olarak 400 mikrometre kortikal yüzeyinin altında, korteks içine daha derin Odak. </li><li> Görüntü tO kan oksijenlenme seviyesi bağımlı (BOLD) optik sinyal, kamera önünde 590LP filtreyi yerleştirin ve kırmızı ışık (filtre 630BP30) ile korteks aydınlatmak. </li><li> Eşit olarak aşırı maruz kaçınarak, ilgi bölge ile dağıtılan böylece kortikal yüzeyin aydınlatma ayarlayın. Ilgi bölgesi kameranın dinamik aralık% 70-90 segmenti içinde düşer, böylece aydınlatma yoğunluğunu ayarlayın. </li><li> Kameradan görüntüleri toplamak için LongDaq görüntü alma yazılımı kullanın. </li><li> Düşük frekanslı stimülasyon (0.05 Hz) ile deneyler için (saniyede 1 ile 10 kare arasında yani) 10 Hz 1 görüntü elde etme sıklığını kullanın. </li><li> Içsel optik sinyal ile herhangi bir girişimi önlemek için oda ışığını kapatın. </li><li> Fare mobil homecage uyum için en az 30 dakika bekleyin. </li><li> Stimülasyon olmadan 6-dk atak sırasında görüntü bazal aktivite. </li><li> Uyarılmış c kaydetmek içinortical etkinlik, bir yüksek frekans (25 Hz) 6 dakika toplam süre hava ponponları tren ile 10 sn ON/10 sn OFF moduna (0,05 Hz stimülasyon) de bıyık uyarır. </li><li> Görüntü alındıktan sonra, baş sabitleme kolundan fareyi bırakın ve kendi kafesine geri. </li><li> Stimülasyon yanıtlarının genlik gürültü oranı, mükemmel sinyal sonuçlanan uyanık hayvanlarda nispeten yüksek olma eğilimindedir, çünkü frekans için ek veri filtreleme kullanmayın. </li><li> Görüntülere *. Tif yığın dosyaları elde setleri dönüştürmek ve örneğin kullanarak daha fazla analiz, açık kaynak yazılım FIJI (İmageJ). Görüntü Hesaplama aracını kullanarak bıyık uyarılması sırasında elde çerçeveleri bazal spontan aktivitesini çıkarmak. Alternatif olarak, uygun yazılım kullanarak frekans alanında filtre veri. </li></ol></li><li> Uyanık Mouse Patch-kelepçe Kayıtlar Mobil homecage Çevresi Hareketli <ol><li> Mobil homecage birleştirin.</li><li> Bir bez içinde eğitimli hayvan sarın. Bakteriyel enfeksiyonu önlemek için trimetoprim (5 mg / kg) ve sülfadoksin (25 mg / kg) uygulayın. Mobil homecage hayvan yerleştirin. Kafa sabitleme koluna metal tutucu kelepçe. </li><li> Temiz ve% 70 etanol solüsyonu veya% 0.5 klorheksidin diglukonat kullanılarak implante diş çimento &quot;kap&quot; ve cam kapak sterilize ve kurumasını bekleyin. </li><li> Yavaş ve dikkatlice metal sahibinden cam kapak çıkarın. </li><li> Penisilin, streptomisin ile desteklenmiş kortikal tampon yenilemek ve steril hemostatik tampon ile enkaz kranial pencereyi temizleyin. </li><li> Kortikal tampona toprak elektrotu yerleştirin. </li><li> Bir micromanipulator elektrofizyoloji headstage yerleştirin. </li><li> 6.5 8.5MΩ değişen uç direnci amaçlayan, borosilikat cam pipetler Üretiyor. Bir hücre içi çözelti ile yama pipet doldurun. Yama pipet çözeltisinin bileşimi(mM olarak) şu: 8 KCI, 111 K-glukonat, 0.5 CaCl2, 2 NaOH, 10 glukoz, 10 HEPES, 2 Mg-ATP ve 5 BAPTA, pH, KOH ile 7.2 &#39;e ayarlandı. Zar potansiyeli -12 mV&#39;ye 33 değerleri hesaplanmış bir sıvı bileşke potansiyeli için düzeltilmelidir. </li><li> Stereotaksik koordinatlar kullanılarak, ilgi konusu hedef bölge ve hızlı bir şekilde pipet ucu üzerinde güçlü bir pozitif basıncı muhafaza ederken, beyin içine elektrot hareket ettirin. Dura mater penetrasyonu ve pipet konumlandırma sonra, ucu direncini ölçmek ve sonraki adımların başarı oranını artırmak amacıyla fazla% 10-15 direnç bir artış göstermektedir elektrotları atın. </li><li> Çevredeki beyin dokusu şişmesini önlemek için yarı yarıya pozitif basıncı azaltır. İleri aşamalar standart &quot;kör yama&quot; protokolüne benzer. , Kayıt için bir nöron bulmak bir nöron yakın mesaf tespit edilinceye kadar kademeli bir şekilde beyin içine ucu düşürmek içinPipet ucunun y, empedans değişikliklerin bir karakteristik geçici sekansı ile gösterildiği gibi. Bir nöronun mevcudiyetinde en önemli göstergesi pipet birkaç ardışık ileri adımlar arasında elektrot direncinde tekdüze bir artış (üç 2-um adımlar arasında pipet direnç tipik olarak,% 20&#39;lik bir artış) &#39;dir. </li><li> Hedeflenen nöron ile bir gigaseal temas oluşturmak için, pipet negatif bir basınç ve hiperpolarizasyon uygulanır. </li><li> Bütün hücre konfigürasyonunu kurmak için hücreye daha büyük bir negatif basınç kısa bir darbe uygulanır. Iyi bir sızdırmazlık tutmak için, 2-3 mikron tarafından elektrot geri çekin. </li><li> Arzu edilen bir zaman süresi boyunca kayıt spontan ya da uyarılmış aktivitesi, en fazla 20-40 dakika. </li><li> Kaydettikten sonra, beyin pipet çıkarın. </li><li> Kortikal tampon yenilemek veya kafatası pencere silikon yapıştırıcı bir damla koyun, sonra metal tutucu üstüne bir yuvarlak cam lamel tutkal. </li><li> Anim bırakınvidaları gevşeterek baş sabitleme kolundan al. Sonraki kayıt önce en az bir gün için kendi kafesine hayvan dönün. </li><li> Örneğin, FitMaster yazılımı ile verileri analiz. </li></ol></li><li> Alışma-dishabituation Koku Testi Uyanık Mouse Mobil homecage Çevresi Hareketli <ol><li> Temiz bir pamuk parçasını (2 x 2 cm) takın, iki taraflı bir bantı kullanarak mobil homecage duvarının iç tarafına musluk suyu batırılmış. Pamuk parçası &quot;hedef bölge&quot; nin ortasında yer alır ve böylece duvarın dış tarafında renk işaretleri yerleştirerek dört bölgeye mobil homecage duvar bölün. &quot;Hedef&quot; bölgesi için duvar bölümü ters bakan çivili başlıkta kolunda hayvan saptamak ve 30 dakika için mobil homecage uyum sağlar. </li><li> Temiz bir pamuk başka bir parça alın ve% 1 vanilya özü birkaç damla ile ıslatın. Vanil taşıyan biri ile mobil homecage duvara temiz pamuk yerinela koku. 5 dakika için koku mevcut. Koku sunum döneminde mobil homecage hareketlerini takip edin. Hayvan cep homecage hareketinin toplam zamanına göre &quot;hedef&quot; bölge bakan harcadığı toplam süre ölçülerek koku ilgi düzeyini tahmin. </li><li> 5 dk arası oturum arayla, vanilya kokusu kullanılarak 5-dk uygulama oturumuna üç kez tekrarlayın. Her oturumda &quot;vanilya&quot; pamuk taze bir parça kullanın. </li><li> Beşinci ve son oturumu sırasında bir sosyal anlamlı kokusu ile hayvan mevcut. (Zıt bir cinsiyet, bir hayvandan elde edilen bir önceki gün) idrar birkaç damla ile pamuk temiz bir parça ıslatın ve 5 dakika için hedef bölgesinin ortasına yerleştirin. </li></ol></li><li> Mobil homecage etrafında uyanık fare hareket eden Roman koku tanıma <ol><li> Mobil homecage duvarının dış tarafında renk işaretleri yerleştirerek dört bölgeye duvarı bölün. AttACH iki temiz pamuk parçası (2 x 2 cm) (hedef bölge 1 ve hedef bölge 2 olarak adlandırılır) birbirine karşı gelen bölgeler ortasında duvarın iç tarafına musluk suyu batırılmış. Hedef bölgeleri dışındaki bir duvar parçasının bakan çivili başlıkta kolunda hayvan saptamak ve 30 dakika için mobil homecage uyum sağlar. </li><li> Hem pamuk taze olanlarla parçaları değiştirin:. Place dilimini 1. hedef% 1 vanilya özü ile ıslak bir pamuk parçası ve bölgeyi 2 hedef musluk suyu ile başka bir ıslak kokusu sırasında 10 dakika boyunca cep homecage hareketlerin video kaydedin sunum oturumu. Hayvan hedef bölgesini 1 bakan harcadığı zamanın yüzdesi olarak katılan koku hesaplamak göreceli kümülatif zaman dilimleri 1 ve 2 bakan geçirdi. </li><li> 10 dakikalık bir aradan sonra, takip eden 10 dakikalık bir süre için homecage duvara aplikatörlerin başka bir çift yerleştirin. Hedef bölge 1 ve% 1 muz e ıslak pamuk aplikatör &quot;vanilya&quot; pamuk yerleştirinHedef bölgede 2 Xtract. mobil homecage hareketlerin bir video kaydı yapın. Hayvan bölgeleri 1 ve 2 bakan kümülatif zaman yeni koku (hedef bölge 2) göreli ile duvar parçasının bakan harcadığı zamanın yüzdesi olarak yeni koku tercihini hesaplayın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Li, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-dependent+synapse+formation+underlies+the+rapid+antidepressant+effects+of+NMDA+antagonists%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">mTOR-dependent synapse formation underlies the rapid antidepressant effects of NMDA antagonists.</a> Science. 329, 959-964 (2010).</li>
<li>Sitdikova, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+suppresses+early+cortical+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Clinical+and+Translational+Neurology%22%5BJournal%5D)">Isoflurane suppresses early cortical activity.</a> Annals of Clinical and Translational Neurology. 1 (1), 15-26 (2013).</li>
<li>Helmchen, F., Fee, M. S., Tank, D. W., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+miniature+head-mounted+two-photon+microscope.+high-resolution+brain+imaging+in+freely+moving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A miniature head-mounted two-photon microscope. high-resolution brain imaging in freely moving animals.</a> Neuron. 31, 903-912 (2001).</li>
<li>Piyawattanametha, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+brain+imaging+using+a+portable+2.9+g+two-photon+microscope+based+on+a+microelectromechanical+systems+scanning+mirror%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+letters%22%5BJournal%5D)">In vivo brain imaging using a portable 2.9 g two-photon microscope based on a microelectromechanical systems scanning mirror.</a> Optics letters. 34, 2309-2311 (2009).</li>
<li>Sawinski, J., Wallace, D. J., Greenberg, D. S., Grossmann, S., Denk, W., Kerr, J. N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visually+evoked+activity+in+cortical+cells+imaged+in+freely+moving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Visually evoked activity in cortical cells imaged in freely moving animals.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 19557-19562 (2009).</li>
<li>Fee, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+stabilization+of+electrodes+for+intracellular+recording+in+awake+behaving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Active stabilization of electrodes for intracellular recording in awake behaving animals.</a> Neuron. 27, 461-468 (2000).</li>
<li>Greenberg, D., Houweling, A., Kerr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population+imaging+of+ongoing+neuronal+activity+in+the+visual+cortex+of+awake+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Population imaging of ongoing neuronal activity in the visual cortex of awake rats.</a> Nat Neurosci. 11 (7), 749-751 (2008).</li>
<li>Fujiwara-Tsukamoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reinforcing+operandum%3A+rapid+and+reliable+learning+of+skilled+forelimb+movements+by+head-fixed+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Reinforcing operandum: rapid and reliable learning of skilled forelimb movements by head-fixed rodents.</a> Journal of Neurophysiology. 108, 1781-1792 (2012).</li>
<li>Scott, B. B., Brody, C. D., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+Resolution+Functional+Imaging+in+Behaving+Rats+Using+Voluntary+Head+Restraint%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cellular Resolution Functional Imaging in Behaving Rats Using Voluntary Head Restraint.</a> Neuron. 80, 371-384 (2013).</li>
<li>Dombeck, D. A., Harvey, C. D., Tian, L., Looger, L. L., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+imaging+of+hippocampal+place+cells+at+cellular+resolution+during+virtual+navigation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional imaging of hippocampal place cells at cellular resolution during virtual navigation.</a> Nat Neurosci. 13, 1433-1440 (2010).</li>
<li>Parry, T. J., McElligott, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+restraining+awake+rats+using+head+immobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Physiolog+%26+behavior%22%5BJournal%5D)">A method for restraining awake rats using head immobilization.</a> Physiolog & behavior. 53 (5), 1011-1015 (1993).</li>
<li>Brecht, M., Schneider, M., Sakmann, B., Margrie, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whisker+movements+evoked+by+stimulation+of+single+pyramidal+cells+in+rat+motor+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Whisker movements evoked by stimulation of single pyramidal cells in rat motor cortex.</a> Nature. 427 (6976), 704-710 (2004).</li>
<li>Van Looij, M. A. J., Liem, S. -S., van der Burg, H., van der Wees, J., De Zeeuw, C. I., van Zanten, B. G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+conventional+anesthesia+on+auditory+brainstem+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+research%22%5BJournal%5D)">Impact of conventional anesthesia on auditory brainstem responses in mice.</a> Hearing research. 193, 75-82 (2004).</li>
<li>Hentschke, H., Schwarz, C., Antkowiak, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neocortex+is+the+major+target+of+sedative+concentrations+of+volatile+anaesthetics%3A+strong+depression+of+firing+rates+and+increase+of+GABAA+receptor-mediated+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neocortex is the major target of sedative concentrations of volatile anaesthetics: strong depression of firing rates and increase of GABAA receptor-mediated inhibition.</a> The European journal of neuroscience. 21, 93-102 (2005).</li>
<li>Margrie, T. W., Brecht, M., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo%2C+low-resistance%2C+whole-cell+recordings+from+neurons+in+the+anaesthetized+and+awake+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archiv%3A+European+journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">In vivo, low-resistance, whole-cell recordings from neurons in the anaesthetized and awake mammalian brain.</a> Pflugers Archiv: European journal of physiology. 444, 491-498 (2002).</li>
<li>Crochet, S., Petersen, C. C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlating+whisker+behavior+with+membrane+potential+in+barrel+cortex+of+awake+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Correlating whisker behavior with membrane potential in barrel cortex of awake mice.</a> Nat Neurosci. 9, 608-610 (2006).</li>
<li>Houweling, A. R., Brecht, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+report+of+single+neuron+stimulation+in+somatosensory+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Behavioural report of single neuron stimulation in somatosensory cortex.</a> Nature. 451, 65-68 (2008).</li>
<li>Poulet, J. F. A., Petersen, C. C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+brain+state+regulates+membrane+potential+synchrony+in+barrel+cortex+of+behaving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Internal brain state regulates membrane potential synchrony in barrel cortex of behaving mice.</a> Nature. 454, 881-885 (2008).</li>
<li>Bryant, J. L., Roy, S., Heck, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+stereotaxic+recordings+of+neuronal+activity+in+awake%2C+head-restrained+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience+methods%22%5BJournal%5D)">A technique for stereotaxic recordings of neuronal activity in awake, head-restrained mice.</a> Journal of neuroscience methods. 178, 75-79 (2009).</li>
<li>De Kock, C. P. J., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiking+in+primary+somatosensory+cortex+during+natural+whisking+in+awake+head-restrained+rats+is+cell-type+specific%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Spiking in primary somatosensory cortex during natural whisking in awake head-restrained rats is cell-type specific.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 16446-16450 (2009).</li>
<li>Dombeck, D. A., Khabbaz, A. N., Collman, F., Adelman, T. L., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+large-scale+neural+activity+with+cellular+resolution+in+awake%2C+mobile+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging large-scale neural activity with cellular resolution in awake, mobile mice.</a> Neuron. 56, 43-57 (2007).</li>
<li>Hentschke, H., Haiss, F., Schwarz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+signals+rapidly+switch+tactile+processing+in+rat+barrel+cortex+during+whisker+movements%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebral+cortex%22%5BJournal%5D)">Central signals rapidly switch tactile processing in rat barrel cortex during whisker movements.</a> Cerebral cortex. 16, 1142-1156 (2006).</li>
<li>Stüttgen, M. C., Rüter, J., Schwarz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+psychophysical+channels+of+whisker+deflection+in+rats+align+with+two+neuronal+classes+of+primary+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Two psychophysical channels of whisker deflection in rats align with two neuronal classes of primary afferents.</a> J. neuroscience. 26, 7933-7941 (2006).</li>
<li>Connor, D. H., Peron, S. P., Huber, D., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+activity+in+barrel+cortex+underlying+vibrissa-based+object+localization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Neural activity in barrel cortex underlying vibrissa-based object localization in mice.</a> Neuron. 67, 1048-1061 (2010).</li>
<li>Drew, P. J., Shih, A. Y., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuating+and+sensory-induced+vasodynamics+in+rodent+cortex+extend+arteriole+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Fluctuating and sensory-induced vasodynamics in rodent cortex extend arteriole capacity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (20), 8473-8478 (2011).</li>
<li>Harvey, C. D., Collman, F., Dombeck, D. A., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+dynamics+of+hippocampal+place+cells+during+virtual+navigation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Intracellular dynamics of hippocampal place cells during virtual navigation.</a> Nature. 461, 941-946 (2009).</li>
<li>Chen, G., King, J. A., Burgess, N., O’Keefe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+vision+and+movement+combine+in+the+hippocampal+place+code%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">How vision and movement combine in the hippocampal place code.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (1), 378-383 (2013).</li>
<li>Harvey, C. D., Coen, P., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choice-specific+sequences+in+parietal+cortex+during+a+virtual-navigation+decision+task%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Choice-specific sequences in parietal cortex during a virtual-navigation decision task.</a> Nature. 484 (7392), 62-68 (2012).</li>
<li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+%2C+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Long-term , high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat Protoc. 4 (8), 19-22 (2009).</li>
<li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+craniotomy+surgery+procedure+for+chronic+brain+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging.</a> J. Vis. Exp. (12), (2008).</li>
<li>Portera-Cailliau, C., Trachtenberg, J. T., de Paola, V., Svoboda, K., Wilbrecht, L., Holtmaat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Neocortical+Neurons+through+a+Chronic+Cranial+Window%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Imaging Neocortical Neurons through a Chronic Cranial Window.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2012, (2012).</li>
<li>Garaschuk, O., Milos, R. -I., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+bulk-loading+of+fluorescent+indicators+for+two-photon+brain+imaging+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo.</a> Nat Protoc. 1 (1), 380-386 (2006).</li>
<li>Barry, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JPCalc%2C+a+software+package+for+calculating+liquid+junction+potential+corrections+in+patch-clamp%2C+intracellular%2C+epithelial+and+bilayer+measurements+and+for+correcting+junction+potential+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience+methods%22%5BJournal%5D)">JPCalc, a software package for calculating liquid junction potential corrections in patch-clamp, intracellular, epithelial and bilayer measurements and for correcting junction potential measurements.</a> Journal of neuroscience methods. 51 (1), 107-116 (1994).</li>
<li>Golshani, P., Gonçalves, J. T., Khoshkhoo, S., Mostany, R., Smirnakis, S., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internally+mediated+developmental+desynchronization+of+neocortical+network+activity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Internally mediated developmental desynchronization of neocortical network activity.</a> The Journal of neuroscience. 29 (35), 10890-10899 (2009).</li>
<li>Polack, P. -O., Friedman, J., Golshani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+brain+state-dependent+gain+modulation+in+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of brain state-dependent gain modulation in visual cortex.</a> Nat Neurosci. 16 (9), 1331-1339 (2013).</li>
<li>Schwarz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+head-fixed+behaving+rat--procedures+and+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensor.%2C+%26+motor+research%22%5BJournal%5D)">The head-fixed behaving rat--procedures and pitfalls.</a> Somatosensor., & motor research. 27, 131-148 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Iyi beyin fizyolojisi ve patolojisi anlamak için, araştırma, her hazırlanması için en uygun teknikleri kullanarak, hazırlık karmaşıklık düzeylerinde çeşitli yapılmalıdır. Uyanık ve davranışlar hayvanlar üzerinde deneyler önemli bir metodolojik sorun temsil varken Şu anda, nörobilim metodolojileri geniş bir yelpazede (tam vücut fMRI alt-organel STED&#39;in mikroskopi) kolayca, anestezi hayvanlara uygulanır. Burada, yeni bir yaklaşım, bir laboratuvar hayvan, sıkıca kafa sabit olmasına rağmen, bir hava-kaldırdı mobil homecage etrafında hareket edebilir ve stressiz koşullarda maddi ortamı keşfetmek nerede açıklanmıştır. Burada sunulan kafa sabit davranıyor hayvan hazırlık çok önemli bir dizi avantaj sağlar. İlk olarak, bu yöntem ile elde edilen elektrofizyolojik veya görüntüleme verileri anestezi ne de sınırla-kaynaklı stres tarafından ne ödün vardır. Mobil ev içine fare Konumlandırmakafes hızlı ve hatta geçici olarak hayvan anestezi gerektirmez. İkincisi, hava kaldırdı homecage ince nöronal morfoloji değişiklikleri ölçmek için ve uyanık hayvanlarda tek hücreli elektrofizyolojik aktiviteyi kaydetmek için gerekli olan mekanik kararlılığı sağlar. Son olarak, mobil homecage tasarım böylece uyanık fare beyninin iki foton görüntüleme veya yama kelepçe kayıt için standart bir dik mikroskop altında cep homecage konumlandırma sağlayan, küresel koşu bandı kıyasla daha kompakt. Mobil homecage sağlam kafa sabitleme altta yatan bir beyin bölgesinde optik veya elektriksel erişim için merkezi bir yuvarlak açıklığı bulunan, özel olarak tasarlanmış dört kanatlı metal tutucu implantasyonu gerektirir. Bu metal tutucular yapıştırıcı, diş çimentosu ve kemik kafatası içine vidalanan bir cıvata küçük bir kombinasyonu vasıtası ile kafatasına bağlıdırlar. Bu cerrahi işlem, daha önce çok sayıda dayalı geliştirilmiştirprosedürleri yayınlanan ve istikrarlı ve tekrar üretilebilir kafatası pencere hazırlanması ile sonuçlandığı bulunmuştur. In vivo elektrofizyolojik deneyler, bir ay şeklinde bir pencere 34, bir küçük boyutlu kranyotomi (en az 0,5 mm) 32, ve bir delikli cam kaplı 35 hazırlanması için kullanılmıştır. Burada, &quot;ters&quot; kafatası pencere büyük bir (3.5 mm çap) ve küçük (az 0.5 mm çapında) kranyotomi ya ile implante edildi. Beyin hareketi en aza indirerek bu elektrofizyolojik deneyler için küçük boyut Kraniyotomi gerçekleştirmek için tavsiye neden olan, istikrarlı tek hücre kayıtları için önemlidir. Optik görüntüleme deneyler için kafatası pencere implantasyonundan sonra, hayvanlar pencere birinci geçici saydamlığını kaybeder ve daha sonra bağlı olarak,% 50-70 verimle (o geri kazanır ve bu süre boyunca en az 2 ya da 3 hafta boyunca geri izin verilir fare soyu genetik kökenli). Kranial pencere ve Stabil Şeffaflığıkafatasına bağlı dental çimento &quot;kapak&quot; of ity hayvan kullanımı sırasında düzenli binoküler mikroskop ve fiziksel muayene ile doğrulanabilir. 2-3 haftalık iyileşme döneminin sonunda, dental çimento kalıntı ameliyat sonrası enflamasyon ya da mekanik kusurları belirtisi sergileyen hayvanlar hariç tutulur ve deney sonlandırılır. Fareler eğitim başlangıç ​​için uygun yaş 2-4 ay (20-40 g vücut ağırlığına karşılık gelen) &#39;dir. Genç hayvanlarda, kafatasına dental çimento &quot;kapak&quot; ankraj mobil homecage baş sabit fare hareket yeteneği tarafından uygulanan mekanik strese karşı dayanıklılığını azaltabilir ki, güvenilir olabilir. Erkek ve dişi farenin mobil homecage gezinmek için aynı ölçüde istekli görünse de, (veriler gösterilmemiştir) dişi farelerde saydamlıklarını kazanmak kafatası pencerelerin yüzdesini elde etmek için daha iyi bir eğilim vardır. Bu nedenle, sipariş to yaklaşık% 30 daha fazla erkek farelerde kafa pencereleri implante, görüntüleme için seçilen hayvanların kohort cinsiyetler dengeli bir karışımını sağlamak tavsiye edilir. Sosyal etkileşimler bu nedenle yavrular işletilen ve eğitimli paralel ve grup konut kafeslerde bir arada tutulmasını tavsiye edilir, hayvanların refahını artırmak ve stresi azaltmak için bilinmektedir. Küresel yürüme bandı 13 hazırlanması için yayınlanan prosedürlere aksine, mobil homecage kullanan yöntem, baş tespitin an fare anestezi gerektirmez. Hatta kısa ve &quot;light&quot; anestezi bölüm kısa bir süre sonra elde fizyolojik ölçümler üzerinde olması muhtemel olduğunu herhangi bir kalıntı etkisi ekarte etmek için izin verir, çünkü bu fark önemlidir. Gerçekten de, olsa bile kafa sabitleme anestezi altında yapıldığını ve gerçek deneyler biri olamaz, kısa bir bekleme süresinden sonra 13 başlanmıştır çalışmalardadeneysel verilerle kısa anestezi bölüm olası uzun süreli etkileri hariç. Diğer çalışmalar tespit baş hayvanların sistematik alışkanlık için su kısıtlaması dayanıyordu ve 36 hareketsiz kalması hayvan motive aracı olarak su ödül kullandık. Ancak, ödül merkezli kafa tespit yöntemi uygulanabilir davranışsal testlerin seçim sınırlar ve daha da önemlisi, köklü uyaran-ödül derneklerin birini kaplar. Buna karşılık olarak, mobil homecage fiksasyon baş fare alışkanlık gibi bir yöntem, su ve daha sonra yoksunluk ödül gerektirmez. Bir su dağıtım sistemi ile cep homecage tamamlayan uzun süreli deneyler için tavsiye edilir. Burada sunulan hayvan eğitim oturumları ve deneyler standart 12 saat ışık takvimi (li altında tutulur bu fareler için fizyolojik pasif dönemine karşılık gelir (08:00-18:00) gündüz sırasında yapıldı) 06:00 de 06:00 de ve kapalı ghts. Su alımı doğrudan fare aktivitesi ile ilişkili olduğundan bir eğitim / görüntüleme / kayıt oturumunun süresi 2 saat aşmaması halinde, pasif dönem farelerin sırasında su dağıtımını gerekmez. Eğitim seanslarının zamanlaması ve süresi ek olarak, bir mobil homecage hayvanları habituating için seans optimum sayısının sorunu gidermek için gereklidir. I) kilo kaybı, ve ii) lokomotor aktivite seviyesi: Bu amaçla, iki kriter kafa sabitleme işlemleri neden olduğu stres değerlendirmek için kullanıldı. Şekil 6&#39;da gösterildiği gibi, kilo kaybı eğitim 2. günde% 6 arasında ortalama seviyesine ulaşır ve tamamen eğitim 4. günde (Şekil 6) tarafından tersine çevrilir. Sürekli tartmak dinamikleri ile, kafa-sabit hayvanların lokomotor aktivite düzeyi eğitimin ilk gününde bastırıldı, ancak eğitim gün 4 (Şekil 6D) ile dengeler. Bu ölçümlere dayanarak, biz önerilmezburada protokolde tarif edildiği gibi mobil homecage fare eğitim süresi en az süresi, 4 gün, t. Hava kaldırdı, düz zeminli mobil homecage kullanımı baş sabit fareler için eğitim paradigmaları karmaşık görevleri (duyumsal, algısal ve bilişsel) ekleyerek sağlar. Bu çalışmada, davranış testleri iki protokol sunulmuştur. Her iki protokol koku ipuçları kullanmak ve fare kortekste uzunlamasına görüntüleme / kayıtları ile kombine edilebilir. Mobil homecage emici olmayan malzemelerden imal edilir, ancak hala dikkate cihazı ve test koku (lar) ın bir koku arasındaki olası müdahaleler almak gerekir. Bir davranışsal deney görsel / dokunsal ipuçları engel olabilecek bir diğer faktör sorunsuz değildir ve bu nedenle, bir dönüm noktası olarak hayvan tarafından algılanabilir duvar ve ekleme arasındaki kavşak noktasıdır. Burada fark değer bu, böyle bir entegrasyon sırasında hayvanın sıkıntıyı minimuma indirmek içinmobil homecage duvara bir koku sunan pamuk yerleştirilmesi gibi rventions, Deneyciler mümkün olduğunca çabuk bu tür müdahaleleri yapmak ve karbon kafesin uzun süreli kullanımı önlemek için çalışmanız gerekir. Yeni koku / object sunum için alternatif stratejiler hidrojel bazlı solüsyon hayvanın kafası konumlandırma ile uygun yükseklikte karbon kafes duvarının iç yüzeyine bağlı küçük raflar üzerine damlalar ya da (örneğin, gıda cips gibi) nesnelerin yerleştirilmesi, örneğin, düşünülebilir. Mobil homecage kafa sabit hayvanlar yatay hareketlilik, situp, tımar çırpma, bu çalışmada gösterildiği gibi ön ayakları ile, burun-alay, vasıflı ön pençe hareketleri ve duvar dokunmadan, yalama gibi iki boyutlu hareketlerin geniş bir yelpazede gerçekleştirmek için olanak sağlar . Mobil homecage ve burada sunulan protokolleri kullanarak, araştırmacılar uyarım durumu hem de üzerinde kontrol yüksek düzeyde Sensorimotor nöronal sistemini incelemek olabilirs ve davranışsal okuma-çıkışları. Ayrıca, uyanık farelerde bilişsel yetenekleri çalışmalar klima, navigasyon ve mekansal karar verme görevleri sırasında yapılabilir. Bu yöntemin çeşitli pratik sınırlamalar vardır. İlk olarak, bir basınçlı hava önemli miktarda homecage kaldırma gücü elde etmek için ve uzun süreli deneyler gerçekleştirmek için gereklidir. İkinci olarak, bugünkü uygulamada, mobil homecage çapında sadece 18 cm olduğu ve bu nedenle karmaşık bir deney ortamında bir mekansal kısıtlama olmadan tasarlanabilir sanal gerçeklik ile karşılaştırıldığında nispeten küçük ve basit bir alan sağlar. Üçüncü olarak, bıyık uyarılması ve burada sunulan ödül-tabanlı deneyler sırasında bir aygıt olanağını fare için duvar temasını sınırlandırır kullanıldı. (Örneğin, bir göz-yönlendirilmiş ışık projektörü olarak) harici bir görsel veya duysal uyarı kanalın eklenmesi ile karşılaştırıldığında daha ergonomik ve kompakt bir cihaz tasarımı gerektirmektedirküresel koşu bandı deneylerde kullanılmış olan çoklu-ekran veya kubbe-projeksiyon çözümleri. Özet olarak, hava-kaldırılmış mobil homecage hareket baş sabit farelerin kullanımı büyük ölçüde tek bir deney içinde gözlem ve manipülasyon hücresel, moleküler ve davranışsal düzeyde birleştiren çalışmaları kolaylaştırır. Burada gösterilen spesifik uygulamaları iki-foton mikroskopik görüntüleme, içsel optik sinyal görüntüleme ve non-anestezi davranıyor farelerde yama-kelepçe kayıtları bulunmaktadır. Bu yaklaşımın uyanık davranıyor fare üzerinde deney yeni ufuklar açmak ve ilaç geliştirme ve beyin fonksiyonlarında temel araştırma için yararlı bir araç olarak hizmet edeceği beklenmektedir.

Nörobilim heyecan verici bir son eğilim, moleküler ve hücresel kemirgenler davranmak, uyanık ve beyindeki nöronal ağların incelenmesi için deneysel yaklaşımlar geliştirmektir. Bu tür yaklaşımlar, motor fonksiyon, sensorimotor entegrasyon, algı, öğrenme, bellek, hem de yaralanma ilerlemesini, nörodejenerasyonu ve genetik hastalıkların altında yatan nörofizyolojik süreçler üzerine yeni bir ışık tutacak söz tutun. Ayrıca, uyanık hayvanın beyninden kayıt yeni terapötik ajanlar ve tedavilerin geliştirilmesinde sözünü tutar. Yaygın nörofizyolojik deneylerde kullanılan olmuştur anestezi, potansiyel deneysel bulguların yanlış yorumlanması neden, beyin fonksiyonlarının temel mekanizmaları etkileyebilir dair artan bir farkındalık var. Böylece, yaygın olarak kullanılan anestezik ketamin hızla yeni dendritik dikenler oluşumunu artırır ve sinaptik fonksiyon 1 artırır; Başka bir yaygın olarak kullanılan anesthetcerrahi anestezi düzeyde ic izofluran tamamen yetişkin hayvanlarda 2 yeni doğmuş farelerin ve bloklar iğ patlama osilasyonlarda spontan kortikal aktiviteyi bastırır. Şu anda, yaklaşımlar sadece sınırlı sayıda iki foton mikroskobik görüntüleri veya patch-clamp kayıtları vasıtasıyla olmayan, anestezi uygulanmış farelerde deneyler sağlar. Bu yaklaşımlar serbestçe hareket eden ve yüksekliği sabit preparatlar ayrılabilir. Serbestçe hareket eden bir hayvan hazırlanması eşsiz çekiciliği navigasyon sırasında bir bütün vücut hareketleri dahil olmak üzere, doğal davranışı değerlendirme izin vermektedir. Serbestçe hareket eden bir kemirgen beyninde görüntü bir yolu minyatür kafa monte mikroskop ya Fiberscope 3-5 takmak için. Ancak, minyatür cihazlar nesnel tabanlı iki foton mikroskopi kıyasla sınırlı optik performansa sahip eğilimindedir ve kolayca tüm hücre patch-kelepçe kayıtları 6 ile kombine edilemez. Exikafa sabitleme bir uyanık kemirgen için acı çözümler fiziksel kısıtlama 7,8 veya gönüllü koltuk başlığı 9 sergilemek için hayvan eğitimi üzerinde ya öncelikle yararlanmıştır. Bir başka popüler bir yaklaşım hayvanın uzuvları, örneğin, küresel bir koşu bandı 10 onu yerleştirerek taşımak için izin vermek; Bu yaklaşım, genellikle, bilgisayar tarafından üretilen bir sanal gerçeklik ile birleştirilir. Head-sabit fareler üzerinde elektrofizyolojik çalışmalar çoğunlukla ekstraselüler kayıtları kullanmış ve kardiyovasküler fonksiyon 11 merkez düzenleme, nöronal aktivitenin 12 anestezi etkileri, beyin sapı 13 ve bilgi işleme 14 işitsel yanıtını incelemek için kullanılmıştır. Uyanık davranmak hayvanlarda öncü hücre içi / tüm hücre kayıtları 2000&#39;li yıllarda yapıldı ve algı ve hareket 15-20 ilişkin sinirsel aktivite odaklanmıştır. Aynı zaman zarfında, uyanık fareler üzerinde ilk mikroskobik görüntüleme çalışmaları pub edildiiki-foton mikroskopi fiziksel olarak zapt sıçanların 7 duyusal kortekste ve küresel bir koşu bandı 21 üzerinde çalışan fareler kullanıldı yayınlanmış. Müteakip in vivo mikroskopi ve elektrofizyoloji çalışmaları bir kafa sabitleme hazırlık başarıyla ön ayakları hareketleri, koku tanıma, çırpma ve 8,22-25 yalama dayalı davranış paradigmaları ile kombine edilebilir olduğunu göstermiştir. Küresel koşu bandı üzerinde yerleştirilen fareler bir bilgisayara 10,26 tarafından oluşturulan sanal bir görsel ortam gezinmek için eğitilmiş olabilir. Hücre içi / hücre dışı kayıtları gibi sanal bir ortam seyreden bir baş-sabit bir hayvanda, hipokampal yer hücrelerinin aktivasyonu 27, tespit edilebilir, gösterdi. Sanal bir görsel ortamda, fareler aktif hareket sırasında 27 yerel alan potansiyeli ve teta-fazlı devinim normal hareket-ilişkili teta ritmi göstermektedir. Son zamanlarda, mekansal ve zamansal faaliyetenöron popülasyonları y desenler sanal ortamda 28 hafıza karar görevleri çalışma sırasında fareler optik kaydedildi. Atılım araştırma etkin olmasına rağmen, küresel koşu bandı tasarımı çeşitli içsel sınırlamalar vardır. Birincisi, hayvan, duvarlar veya engelleri olarak hiçbir somut engel teşkil dönen bir hava topu kaldırdı, sınırsız yüzey üzerinde taşımak için gereklidir. Görsel girdi bu türlerin doğal güveniyor dokunsal duyusal girdi (örneğin, bıyık-touch veya yalamak), ile karşılaştırıldığında fareler ve sıçanlar üzerinde tartışmasız daha az etkili olduğu için bu sınırlama, bilgisayar tarafından oluşturulan &quot;sanal gerçeklik&quot; ile telafi kısmen sadece üzerinde. İkincisi, top yüzeyi önemli eğrilik kendi kafeslerine düz bir zemine yürüyüş için kullanılan laboratuvar fareleri için rahatsız olabilir. Son olarak, topun saf çapı (fare ve sıçanlar için 300 mm için en az 200 mm) küresel dikey boyutu oluştururnispeten büyük koşu bandı cihazı. Bu da ticari olarak temin edilebilir mikroskopi düzeneklerinin çoğunluğu ile küresel koşu bandı birleştirmeyi kolaylaştırır ve genellikle ısmarlama mikroskop çerçeveler vasıtasıyla bandı etrafında yeni bir kurulum yapı gerektirir. Bir kafa sabit fare, düz bir zemin ve somut duvarlar özellikleri bir hava kaldırdı mobil homecage hareket ve stressiz koşullarda fiziksel çevreyi keşfetmek nerede, burada, yeni bir yöntem tarif edilmektedir. Bu makalede fare eğitim ve baş tespitin prosedürleri gösterir ve iki-foton mikroskopi, içsel optik görüntüleme ve patch-kelepçe kayıtları uyanık davranmak farelerin beyninde gerçekleştirilen temsili örnekler sağlar.

<table><tbody><tr><td>Cımbız, Paslanmaz Çelik, 115 mm</td><td>XYtronic</td><td>XY-2A-SA</td><td></td></tr><tr><td>Hayvan düzeltici, tıraş makinesi</td><td>Aesculap</td><td>Isis GT420</td><td></td></tr><tr><td>Binoküler Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000</td><td></td></tr><tr><td>paslanmaz çelik ısıtma yastıklı Biyolojik Sıcaklık Kontrol Cihazı</td><td>Supertech</td><td>TMP-5b</td><td></td></tr><tr><td>Kör mikrocerrahi bıçak</td><td>BD</td><td>REF </td><td></td>374769</tr><tr><td>Filamentli borosilikat tüp</td><td>Sutter Instruments</td><td>BF120-69-10</td><td>Yama pipet üretimi için</td></tr><tr><td>Kamera&nbsp;</td><td>Foscam</td><td>FI8903W</td><td>Gece görünürlüğü</td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Pfizer</td><td>Rimadyl vet</td><td></td></tr><tr><td>Diş çimentosu</td><td>DrguDent, Dentsply</td><td>REF 640 200 271</td><td></td></tr><tr><td>Deksametazon</td><td>FaunaPharma</td><td>Rapidexon veteriner</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık matkaplar</td><td>Meisinger</td><td>HP 310104001001008</td><td></td></tr><tr><td>Dulbeco' s PBS 10x</td><td>Sigma</td><td>D1408</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forseps, 110 mm</td><td>FST</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Göz yağlayıcı</td><td>Novartis</td><td>Viscotears</td><td>Çalışma sırasında gözlerin korunması için ve daldırma için viskoz solüsyonu olarak&nbsp;</td></tr><tr><td>Foredom matkap kontrolü</td><td>Foredom&nbsp;</td><td>FM3545</td><td></td></tr><tr><td>Foredom mikro motorlu el aleti</td><td>Foredom</td><td>MH-145</td><td></td></tr><tr><td>Dört kanatlı metal tutucu</td><td>Fareler için Neurotar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kafa Tutucu</td><td>Narishige</td><td>SG-4N</td><td>Stereotaksik alet üzerine monte edilmiştir</td></tr><tr><td>Hemostaz Kollajen Sünger</td><td>Aviten, Ultrafoam BARD</td><td>Ref 1050050</td><td></td></tr><tr><td>Imaris</td><td>Bitplane</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Intervet</td><td>Ketaminol veteriner</td><td></td></tr><tr><td>Kwik-Sil&nbsp;</td><td>WPI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mai Tai DeepSee lazer</td><td>Spectra-Fizik Mikro</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pansuman forsepsleri, 105 mm</td><td>Aesculap</td><td>BD302R Mikroelektrot</td><td></td></tr><tr><td>çektirmesi</td><td>Narishige</td><td>PC-10H</td><td>Cam pipet üretimi için dikey çektirme</td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Sensapex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini cıvata</td><td>Centrostyle</td><td>Referans 00343 s/çelik M1.0x4.5</td><td></td></tr><tr><td>Mobil Ev Kafesi</td><td>Neurotar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multifoton Lazer Tarama Mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>FV1000MPE</td><td></td></tr><tr><td>Nonwoven swablar, 5 x 5</td><td>Molnlycke Health Care</td><td>Mesoft</td><td>Cerrahi tamponlar</td></tr><tr><td>Poliakrilik yapıştırıcı</td><td>Henkel</td><td>Loctite 401</td><td></td></tr><tr><td>Yuvarlak cam lamel</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td></td><td>1.5 kalınlık</td></tr><tr><td>Küçük hayvan stereotaksik alet</td><td>David Kopf Instruments</td><td>900</td><td></td></tr><tr><td>Öğrenci iris makası, düz 11,5 cm</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer Health</td><td>Care Rompun veteriner</td><td></td></tr></tbody></table>

düz zeminli hava kaldırdı platform: yeni bir yöntem awake üzerinde mikroskopi veya elektrofizyoloji ile davranışı birleştiren için serbestçe kemirgenler hareketli

Flat-floored Air-lifted Platform: A New Method for Combining Behavior with Microscopy or Electrophysiology on Awake Freely Moving Rodents

Bu yaygın genel anestezik kullanımı yaşayan bir hayvanın beyin elde edilen elektrofizyolojik veya mikroskobik verilerin alaka sarsar kabul edilmektedir. Ayrıca, anestezi uzun iyileşme uzunlamasına çalışmalarda tekrarlanan kayıt / görüntüleme bölüm frekansını sınırlar. Dolayısıyla, olmayan anestezi davranıyor farelerin istikrarlı kayıtları sağlayacak yeni yöntemler hücresel ve bilişsel nörobilimlerdeki alanları ilerlemek bekleniyor. Mevcut çözümler sadece fiziksel kısıtlama bu tür bilgisayar tarafından oluşturulan sanal gerçeklik ile kombinasyon halinde kullanılan lineer ve küresel koşu bandı gibi daha karmaşık yaklaşımlar arasında değişir. Bir baş-sabit fare bir hava kaldırdı mobil homecage hareket ve stressiz koşullarda çevresini keşfetmek nerede, burada, yeni bir yöntem tarif edilmektedir. Bu yöntem, araştırmacılar ile eş zamanlı davranış testleri (örneğin, öğrenme, alışkanlık veya roman nesne tanıma) gerçekleştirmek için olanak sağlariki foton mikroskobik görüntüleme ve / veya patch-clamp kayıtları tek bir deneyde bir araya. Bu video-makalede, uyanık hayvan kafa sabitleme aracı (mobil homecage) kullanımını tarif hayvan alışkanlık prosedürleri gösterir, ve yöntemin olası uygulamalar bir dizi örnek teşkil etmektedir.

Yöntem, burada sunulan uyanık, baş sabit ama aksi halde serbestçe hareket eden ve davranış farelerde mikroskobik görüntüleme ya da tek hücreli elektrofizyolojik kayıtları için tasarlanmıştır. Hayvanların kafatası kafa sabitleme koluna sıkıca sabitlenir iken hayvan bir gerçek (sanal aksine), maddi ve tanıdık bir ortamda, iki boyutta hareket edebilir. Hava kaldırdı mobil homecage için fareler habituating günde iki kez 2-hr eğitim seanslarının 4-6 gün (Şekil 1) oluşur. Eğitimli Hayvanlar daha sonra hemen deneylerde kullanılabilir. Tipik bir çalışma birkaç saat ile birkaç gün veya hafta arasında değişen aralıklarla aralıklı görüntüleme oturumları veya yama kelepçe kayıt oturumları bir dizi içerir. Önemli bir şekilde, hem de optik ve elektrofizyolojik kayıtları tek bir deney içinde, bilişsel ve davranışsal uyaranlara ve okumalar ile aynı anda gerçekleştirilebilir. Mekanik stabilitesini değerlendirmekDeney hayvanları mobil homecage (Şekil 2) navigasyon iken mobil homecage içinde mouse kafası tespit, floresan-konjuge dekstran ve YFP ifade kortikal dendritlerin etiketli kortikal damarların görüntü dizileri toplanmıştır. Hayvanın hareket sırasında beyin maksimum yer değiştirme genellikle 1-1.5 mikrometre geçmemiştir. Bu yer değiştirmeler, yatay yönde meydana gelen ve çok nadir olarak hareket eserler gereksiz herhangi bir düzeltme işleme, görüntü düzlemi içinde tespit edilebilir bir değişime yol açtı. Mobil homecage stabil kafa sabitleme, anestezi uygulanmış farelerde aynı güvenilirliği ile uyanık hayvanlarda tek dendritik dikenler ölçümü sağlar. Dendritik omurga yoğunluk, morfolojisi ve ciro birkaç saat ile birkaç gün veya hafta arasında değişen aralıklarla gerçekleştirilen çoklu görüntüleme oturumları ile uzunlamasına çalışmaları sırasında izlenebilir. M kullanılabilirlikThy1-GCaMP3 transgenik fareler üzerinde i) iki foton mikroskopi ve vahşi tip farelerde ii) iç optik sinyal görüntüleme: Fonksiyonel optik görüntüleme için obile homecage iki yaklaşım kullanılarak uyanık farelerin somatosensory korteksinde test edilmiştir. Ca 2 + görüntüleme hücre birçok floresan etiketli nöronların organları, yanı sıra dendrit ve aksonlar (Şekil 3) içeren bir tabaka 2/3, gerçekleştirilmiştir. İlgi (ROI) seçilmiş bölgelerinden floresan-over-zaman grafikleri mobil homecage de fare aktif navigasyon esnasında (GCaMP3 floresansta geçici artış olarak ölçülmüştür) spontan nöronal etkinlik gösteren, Şekil 3 'de gösterilmiştir. Içsel sinyallerine dayanan optik görüntüleme fonksiyonel etki uzamsal dağılımı haritalama sağlar. Şekil 4 v cevaben somatosensory korteks boyunca yayılır (bölgesel nöronal aktivasyon yansıtan) kan oksijenlenme düzeyinde dalga benzeri değişiklik göstermektedir0.05 Hz frekansta ibrissa uyarılması. Mobil homecage ile patch-kelepçe kayıtların fizibilitesini test etmek için, biz 2-3 ay eski C57Bl/6J fareler kullanıldı. Somatosensori kortekste Katman 2/3 nöronlar akım kelepçe modu kullanılarak, tam hücre konfigürasyonunda kaydedildi. Uyanık farelerin beyninde Patch-clamp kayıt kafası ile sabitlenmiş mobil homecage beyin dilimleri patch-kelepçeleme kör esas benzerdi. Girişimi yaklaşık 50% 'den fazla% 70 stabil tam hücre konfigürasyonu kayıt vermiştir ki bölgesinin başarılı gigaseal oluşumu ile sonuçlanmıştır. Nedeniyle hücrelerin mekanik değiştirmesinden gigaseal kişiyi kaybetme hiçbir olay gözlenmemiştir. 5 mouse aktif (çalışan) atakları ve pasif (dinlenme) devletler ile ilişkili bir temsilci 10 dk uzun akım kelepçe kaydın 60 saniye parçasını göstermektedir Şekil. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="6in" src='"/' files width='"600"'> Şekil 1. Mobil homecage uyanık farelerin baş fiksasyon yöntemi. A) hava kaldırdı mobil homecage tasarım ve tipik bir deneysel çizelgesi genel kavram. B) Diyagram resimlerinden bakış. Çalışma iki hafta önce kullanım ve sekiz günde iki kez eğitim oturumları takip sarma, fare habituating için kafatası pencere implantasyonu ile başlar. Tipik çalışma birkaç saat ile birkaç gün veya hafta arasında değişen aralıklarla aralıklı görüntüleme oturumları veya yama kelepçe kayıt seansları bir dizi içerir. Hem optik ve elektrofizyolojik ölçümleri tek bir deney içinde bilişsel veya davranışsal uyaranlara ve okumalar ile paralel olarak yapılabilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51869/51869fig1highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> Mobil homecage dolaşırım uyanık fareler üzerinde iki-foton mikroskopik görüntüleme Şekil 2.. Örneği. 70 kDa Texas Red-konjüge edilmiş dekstran ile etiketlenmiş A, B) Kortikal damar. Bireysel damar segmentinin çapı zaman içinde fare ve dinlenme çalışan (A) dönemlerinde damar lümeni boyunca çizilen çizgilerin profili çizilerek ölçülür. Arterler ve venler kan akışının hızı, damar duvarı (B) bölgesinin alt grubunda YFP ifade eden transjenik farelerin beyninde görüntülenmiştir nöronal morfoloji. C, D) ince ayrıntıları paralel çizilen çizgiler boyunca satır tarama ile ölçülür Thy1 promotörün kontrolü altında nöronlar. Farenizin Somatosensory korteks (C) piramidal nöronların üç boyutlu rekonstrüksiyon. Bir dendritik b görselBir uyanık davranıyor fare edinilen çiftlik bireysel dendritik omurga morfolojisi (D) fare hareketlerinin neden olduğu beyin hareket. E) Kantitasyonu ölçümü için yeterince stabil. Büyük genlik değiştirmeler fare çalışan dönemleri ile ilişkili. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51869/51869fig2highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51869/51869fig3highres.jpg" width="600"> Uyanık Thy1-GCaMP3 fare mobil homecage dolaşırım nöronal nüfus aktivitenin Şekil 3.. Örneği. Kortikal tabaka II / III nöronlar içinde A) İki foton görüntüsü. ROI, örneğin nöronal hücre gövdeleri, dendritler ve akson (zaman ler) sarı. B A'da gösterilen ROI'ler gelen GCaMP3 floresan mesafe kadar taşınmış / F izlerini gösterilirC sarı ROI'ler itibaren eries) 1.5 sn / kare hızında kaydedilir. C) Zoomed-65 msn / karede görüntülendi bölge. D) Flüoresan zamanla çizilen, eyleme karşılık GCaMP3 flüoresandaki geçici artışlar (kırmızı) gösterir Potansiyel kaynaklı Ca 2 + akını bölüm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51869/51869fig3highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51869/51869fig4highres.jpg" width="600"> Iç optik sinyalleri görüntüleme vasıtasıyla bir uyanık fare kortekste fonksiyonel tepkiler uzamsal dağılımı haritalama Şekil 4.. Örneği. Mobil ho temel faaliyet kranial pencereden yüzeysel kan damarlarının A) Parlak alan görünümü. B) Büyüklük haritası6-dk bölüm 0.05 Hz frekansta bıyık uyarılmasına tepki somatosensoriyel korteks boyunca yayılan nöronal aktivitenin. C) Büyüklük haritası sırasında mecage. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51869/51869fig4highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51869/51869fig5highres.jpg" width="600"> Mobil homecage çevresinde hareket eden bir uyanık fare kortekste tam hücre parça sıkıştırma sayımı Şekil 5. Örneği. Fare kortikal tabakanın 2/3 'te bir nöron A) Akım-kelepçe kayıt. A 0.5 sn, (iz aşağıda belirtilmiştir) 100-PA akım enjeksiyon aksiyon potansiyelleri bir patlama ile sonuçlanır. Hücre piramidal nöronlar için başak frekans adaptasyon özelliği gösterdi. B) Sürekli akım kelepçe kayıt(iz yukarıdaki pembe gösterilen) mouse 'lokomotor aktivite ile ilişkili aynı nöron. Fare bulunuyor (C) dinlenme ve (D) çalışan dönemlerinde katman 2/3 nöron Temsilcisi spontan aktivite. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51869/51869fig5highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 6," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51869/51869fig6highres.jpg" width="600"> Mobil homecage eğitim seansları sırasında Şekil 6.. Hayvan kilo kaybı ve head-fixed/non-fixed farelerin lokomotor aktivitesi. Eğitim oturumları öncesi A) Hayvan ağırlığı (+ SD, ortalama%). Kilo kaybı tam 7-8 inci antrenman mobil homecage için farenin yatay hareket göreceli. B) Yörünge tarafından tersine Not,8 inci antrenmandan 8 inci antrenmandan kafa sabit (çemberin. D) Süre) esnasında yuvarlak kafesi keşfetmek olmayan bir kafa sabit fare. C) Paletli hareketleri sırasında mobil homecage ve izlenen hareketi ekstrapolasyondan edildi Eğitimin 1-4 inci gün boyunca sabit olmayan (üçgen) fareler hareketi (+ SD,% demek). 4. günde, baş-sabit fareler ne (1. gün olarak) suyun ne de aşırı lokomotor faaliyet göstermek, unutmayın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51869/51869fig6highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a>

Bu yöntem, gezinmek ve hayvanın başının sağlam tespiti gerektiren mikroskobik görüntüleme veya tek hücreli elektrofizyolojik kayıtlar sırasında keşfetmek fare için somut, tanıdık bir ortam yaratır.

Düz zeminli Hava kaldırdı Platform: Yeni Bir Yöntem Awake üzerinde Mikroskopi veya Elektrofizyoloji ile davranışı birleştiren için serbestçe Kemirgenler Hareketli

It is widely acknowledged that the use of general anesthetics can undermine the relevance of electrophysiological or microscopical data obtained from a ...

Merhaba, ben Hel Lin, Helsinki Üniversitesi Yakın Bilim Merkezi'nde yüksek lisans öğrencisiyim. Bugün meslektaşlarım ve ben size uyanık kafa düzeltmede optik ve elektrofizyolojik kayıtların nasıl yapılacağını göstereceğiz, aksi takdirde serbest hareket eden ve hayvanlar gibi davranan hayvanlar. Yöntemimiz, farenin gezinmesi ve keşfetmesi için somut, tanıdık bir ortam yaratır.Hayvanın kafasının sıkı bir şekilde sabitlenmesini gerektiren mikroskobik görüntüleme veya tek hücreli elektrofizyolojik kayıtlar sırasında, kronik bir kafatası penceresi implante ediyoruz ve fareyi, hayvanın ayaklarının altında kayan, havayla kaldırılmış bir mobil ev kafesine alıştırıyoruz. Düz bir yüzey üzerinde hareket sırasında, mobil ev kafesi, iki foton görüntüleme için standart bir dik mikroskop altına yerleştirilebilir veya bir uyanık fare beyninde yama kelepçesi kayıtları için bir elektrofizyoloji kurulumuna yerleştirilebilir. Burada sunulan tüm deneysel prosedürler yerel etik kurul tarafından onaylanmıştır.Kraniyal pencere implantasyonu üzerine küçük değişikliklerle kranial pencereleri yayınlanmış protokollere göre implante ediyoruz. Bu iyileşme döneminde hayvanın en az iki veya üç hafta iyileşmesine izin verilir, pencere normalde şeffaflığını geri kazanır. Ameliyat sonrası herhangi bir kalıntı inflamasyon belirtisi olan hayvanlar deneylerden çıkarılır.Bir çalışma için seçilen hayvanları, kafa fiksasyonuna alıştırmak için eğitin. Mobil ev kafesinde, fareyi beş ila 10 dakika sakince tutun, ani hareketlerden ve seslerden kaçının, ardından ev kafesine geri koyun. İşlemi eşit olmayan aralıklarla iki veya üç kez tekrarlayın.Mobil ev kafesi, kafa fiksasyonundan önce hayvanı uyuşturmadan kafa fiksasyonuna izin verir. Fareyi eşit olmayan aralıklarla iki veya üç kez sarmak için bir bez kullanın. Hayvanın sarılırken sakin kaldığından emin olun.Aksi takdirde, fare tamamen alışana kadar işlemi tekrarlayın. Farelerin günde iki kez mobil ev kafesi üzerindeki eğitimine, elleçleme tamamlandıktan sonraki gün başlayın. Her antrenman seansından önce hayvanları tartın.%10'un üzerinde kilo kaybı gösteren hayvanlar çalışma dışı bırakılmalıdır. Baş sabitleme kolunun konumunu, eğitilen hayvanın boyutuna uyacak şekilde ayarlayın. Mobil ev kafesi cihazının hava girişini standart laboratuvar basınçlı hava çıkışına bağlayın.Hava basıncının, havayla kaldırılan ev kafesinin serbest yüzdürülmesi için yeterli olduğundan emin olun. Mobil ev kafesinde alışılmış hayvanların eğitimine başlayın. Fareyi paçavra sararak hareketsiz hale getirin.Hayvanın kafasına takılan metal tutucuyu kafa sabitleme koluna yerleştirin ve vidaları sıkarak sıkıca sabitleyin. Havayla kaldırılan ev kafesinin havaya kalkmasını sağlamak için hava akışını açın. Paçavrayı çıkarın ve farenin ev kafesini keşfetmesine izin verin.İlk eğitim seansı sırasında, fareler donma ve titreme davranışı ve kuyruk ereksiyonu sergileyebilir. Hayvanı gürültüye alıştırmak için, örneğin tüm eğitim oturumları sırasında ve deneyler sırasında bir radyo çevirisi veya kaydedilmiş müzik ve konuşma kullanarak ortam seslerine sürekli maruz kalmasını sağlayın. Kronik stresi önlemek için, egzersiz seansının ilk saatinde parlak ışıklı aydınlatma kullanın.İlk saatten sonra, karanlıkta eğitim yapın ve hayvanın davranışını izlemek için yakın kızılötesi bir kamera kullanın. Eğitim seansı tamamlandığında, vidaları kaybederek hayvanı baş sabitleme kolundan serbest bırakın. Bir sonraki eğitim seansından önce hayvanı en az iki saat ev kafesine geri koyun.Fareyi iki veya daha fazla fareyle birlikte bir kafeste tutmak stres seviyesini azaltacaktır. İsteğe bağlı olarak, hava asansörlü kafesi hayvanla birlikte ev kafesine yerleştirebilirsiniz. Bu, çevreyi zenginleştirecek ve hayvanın mobil ev kafesine yerleşimini güçlendirebilir.Son eğitim seansı sırasında, fareler kafa fiksasyonuna alıştırılır ve havaya kaldırılmış ev kafesinin etrafında sakince gezinirken Stressiz davranış sergilemelidir. Görünür ışığın yokluğunda, fare hareketinin yörüngesi, kafes hareketleri yakın kızılötesi kamera veya optik bilgisayar faresi ile izlenerek izlenebilir. Bir veya iki saatten fazla süren uzun süreli eğitim seansları sırasında, fareye manuel olarak veya mobil ev kafesi çerçevesine bağlı bir pipet tutucu kullanarak bir içme suyu sağlamayı düşünün.Aşağıdaki diyagram, tipik bir deneysel çalışmanın zaman çizelgesini özetlemektedir. Çalışma, fare kullanımından iki hafta önce kraniyal pencerenin implantasyonu ile başlar ve günde iki kez sekiz eğitim seansı ile devam eder. Tipik çalışma, birkaç saat ila birkaç gün veya hafta arasında aralıklarla yapılan bir dizi görüntüleme seansı veya yama kelepçesi kayıt seanslarını içerir.Hem optik hem de elektrofizyolojik deneyler, bilişsel veya davranışsal uyaranlar ve okumalarla paralel olarak yapılabilir. İki foton mikroskobu, bir kemirgen beyninin derin kortikal katmanlarındaki hücresel ve hatta hücre altı yapıların gerçek zamanlı olarak görselleştirilmesini sağlayan benzersiz bir doğrusal olmayan optik teknolojidir. İki fotonlu mikroskobik görüntüleme deneyi yapmak için, eğitimli bir hayvanı mobil ev kafesine yerleştirin, mikroskop optiklerini kazara hasardan korumak için tıpaları ayarlayın.Toz parçacıklarını temizlemek için kafatası penceresinin kapak camını temizleyin. Kapak camına bir daldırma sıvısı bırakın. Su hızla buharlaştığı için viscus solüsyonu kullanmanızı öneririz.Platform, floresan mikroskobunun geniş alan modu ve uzun geçiren bir emisyon filtresi kullanılarak tipik bir motorlu optik masanın üzerine yerleştirilebilir. Beyin damar sistemini değerlendirin ve ilgilendiğiniz bir bölge seçin. Kortikal vaskülatürü görüntülemek için, kafası sabitlenmiş ve hareketsiz hale getirilmiş bir hayvanın kuyruk damarına enjekte edilir, 70 kiloluk bir Dalton, Texas kırmızı konjuge metin Tran.Bu görüntü dizisi, davranan bir farenin mobil ev kafesinin etrafında gezinirken korteksindeki mekanların ve arterlerin hızlandırılmış kaydını gösterir. Damar lümeni boyunca çizilen çizgilerin profilini çizerek, damar çapındaki değişiklikler ve tek tek damar segmentlerinin motilitesi ölçülebilir. Atardamar ve toplardamarlardaki kan akış hızı, damar duvarına paralel olarak çizilen çizgiler boyunca çizgi taraması ile ölçülebilir. İyi.Nöron morfolojisinin ayrıntıları, Tayvan promotörü altındaki nöronların alt popülasyonunda YFP'yi eksprese eden transgenik farelerde görselleştirilebilir. Bu iki Zack, anestezi uygulanmış ve uyanık hayvanlar arasındaki görüntüleme stabilitesini karşılaştırır. Sağ yan panel, ketamin ksilazin karışımı ile uyuşturulmuş hayvandan elde edilen dendritleri gösterir.Sol yan panel, bir mobil ev kafesinin etrafında yürüyen uyanık bir hayvanda bir dendrit görüntüsü gösterirken. Uyanık hayvanlardaki bireysel omurga morfolojisi, anestezi uygulanmış farelerde olduğu gibi aynı güvenilirlik ve hassasiyetle analiz edilebilir. Hayvanlar koşarken beynin yer değiştirmesi tipik olarak bir ila bir buçuk mikrometreyi geçmez.Bu hareketler yatay yönlerde meydana gelir ve çok nadiren görüntüleme düzleminin kaymasına neden olur ve hareket artefaktlarının düzeltilmesini gereksiz kılar. Çoğu durumda, uyanık canlı beyindeki nöronal aktiviteyi kronik olarak izleme yeteneği, sinir sisteminin organizasyonunu ve işlevini anlamak için gereklidir. Bir G Kampı üç transgenik fareyi kullanarak, mobil ev kafesinde davranan uyanık farelerde spontan nöronal aktiviteyi görüntülüyoruz.Bu hızlandırılmış görüntü dizisi, nöronal hücre gövdelerinde, nitlerde ve aksonlarda kalsiyum artışlarının temsili örneklerini göstermektedir. İçsel sinyallere dayalı optik görüntüleme, içsel bir optik görüntüleme deneyi gerçekleştirmek için işlevsel alanların uzamsal dağılımının haritalanmasına izin verir. Eğitilmiş hayvanı, kamera objektifinin altına yerleştirilmiş ev kafesine yerleştirin.Kapak camını tozdan temizleyin. Bir damla gliserol koyun ve beş milimetrelik yuvarlak bir kapak kayması. Yüksek hızlı bir kameranın konumunu ayarlayın.Kontralateral vibrasyonun karşısına hava üfleme tüpü olan bir manipülatör yerleştirin. Gemi haritasını görüntülemek için yeşil ışıkları kullanın. Kortikal damarların yaklaşık 400 mikrometre altında, korteksin daha derinlerine odaklanın.Kameranın önüne bir bant geçiren filtre yerleştirin ve korteksi kırmızı ışıkla aydınlatın. Farenin en az 30 dakika platforma uyum sağlamasına izin verin. Altı dakikalık bir bölüm boyunca temel etkinliği kaydedin.Toplam altı dakikalık süre boyunca her 10 saniyede bir hava üfleme ile titreşimi uyarın. Bu görüntü, 0.05 hertz frekansında titreşim stimülasyonuna yanıt olarak somatosensoriyel korteks boyunca yayılan nöral aktiviteyi göstermektedir. Tek hücreli elektrofizyolojik kayıtlar yapmak için, ters çevrilmiş bir kafatası penceresi ile implante edilmiş eğitimli hayvanı mobil ev kafesine yerleştirin.Kapak camını yavaş ve dikkatli bir şekilde metal tutucudan çıkarın. Kortikal tamponu yenileyin ve kraniyal pencereyi hemostatik bir tamponla döküntülerden temizleyin. Toprak elektrodunu kortikal tampona yerleştirin.Yama kelepçesi pipetini hücre içi çözelti ile doldurun. Motorlu bir mikro manipülatör kullanarak kayıt pipetine pozitif bir basınç uygulayın, pipeti kortekse derinleştirin ve ilgilenilen hücre ile giga contalı bir temas elde edin. Kayıttan sonra pipeti çıkarın, kortikal tamponu yenileyin ve bir kapak camında metal tutucuya yapıştırarak kraniyal pencereyi kapatın.Hava asansörlü bir ev kafesinin kullanılması, görüntüleme ve elektrofizyolojinin öğrenme, rehabilitasyon veya kaygı ile ilgili davranış gibi klasik davranış paradigmalarıyla birleştirilmesine izin verir. Koku alma, fareler için önemli bir duyusal girdidir ve hafıza testlerinde stimülasyon ve yeniliğe tepkinin değerlendirilmesi için kullanılabilir. Koku alma testi yapmak için, eğitimli hayvanı mobil ev kafesine yerleştirin ve evlat edinmesine izin verin.30 dakika boyunca, musluk suyuna batırılmış temiz bir pamuk parçasını iki taraflı yapışkan bir bant kullanarak mobil ev kafesinin iç duvarına yapıştırın. Beş dakika sonra, ev kafesi duvarındaki temiz pamuğu, vanilya kokusu içeren bir sıvıya batırılmış yenisiyle değiştirin. Vanilya kokusuna beş dakikalık maruziyetleri, seanslar arasında beş dakikalık aralıklarla üç kez tekrarlayın.Kokuya olan ilgi düzeyini ölçmek. Hayvanın hedef bölgeye bakacak şekilde geçirdiği kümülatif süreyi ve mobil ev kafesi hareketinin toplam süresini sayın. Son beşinci seansta, sosyal olarak önemli bir koku sunun.Yeni pamuk aplikatörünü karşı cinsten farelerden birkaç damla idrarla ıslatın. Yeniliğe verilen tepkiyi değerlendirmek için, mobil ev kafesini dört bölgeye ayırın. Birbirine zıt iki pamuk parçası takın. Renk.İlk deneme sırasında bunları ev kafes duvarlarının dış tarafındaki işaretleyicilerle kodlayın. İki temiz pamuk parçası yerleştirin. Daha sonra her ikisini de %1 vanilya özütüne batırılmış pamukla değiştirin.Üçüncü deneme sırasında, vanilya pamuğunu bir numaralı bölgeye ve %1 muz özüne batırılmış pamuk parçasını bölgeye koyun. İkincisi, koku almama tercihini ölçmek için. Hayvanların koku almamak için harcadıkları zamanı, diğer bölgelere karşı karşıya kalan kümülatif sürenin yüzdesi olarak hesaplayın.Merhaba, ben Leo Kiro, Helsinki Üniversitesi Nörobilim Merkezi'nde baş araştırmacıyım. Umarım videoyu izlemekten keyif almışsınızdır ve faydalı bulmuşsunuzdur. Son beş yıldır in vivo mikroskopi üzerinde iki yönlü çalışıyoruz ve genel ve estetiğin kullanımı her zaman büyük bir endişe kaynağı olmuştur çünkü estetik beyin fonksiyonuna, kan akışına ve her şeye müdahale eder.Ve bugün, uyanık hayvanlarda çalışabildiğimiz ve stabil mikroskobik görüntüleme deneyleri yapabildiğimiz ve daha önce anestezi uygulanmış hayvanlarda elde ettiğimiz sonuçları doğrulayabileceğimiz ve doğrulayabileceğimiz için mutluyum. Mobil ev kafesinin kullanımının ve bugün sunduğumuz yöntemlerin genel olarak in vivo araştırmaların alaka düzeyini artıracağından ve yeni ve çığır açan sonuçlara yol açacağından eminim ve bunu dört gözle bekliyorum.

flat-floored-air-lifted-platform-new-method-for-combining-behavior

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Bir prosedür elektroansefalogram, elektromiyogram ve serebral laktat konsantrasyon takip edilir iken optogenetically kortikal piramidal nöronların etkinlik işlenmesi için tarif edilmektedir. Onlar kendiliğinden uyku / uyanıklık döngüsü geçmesi ise Deneysel kayıtları kablo-tethered fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir. Optogenetic cihaz laboratuar monte edilmiştir; kayıt ekipman ticari olarak temin edilebilmektedir.

Eşzamanlı Elektroensefalografi, Kemirgen Serebral Korteks Laktat Konsantrasyonu ve Nöronal Faaliyet Optogenetic Manipülasyon Gerçek zamanlı ölçüm

Bu protokol, uyanık sıçanlarda subkortikal beyin yapılarındaki nöronal aktiviteyi izlemek için bir kafa kısıtlama mekanizmasının tasarımını ve cerrahi implantasyonunu açıklar.  Juxtacellular konfigürasyondaki tek nöronları izole etmek ve anatomik konumlarını verimli bir şekilde tanımlamak için prosedürleri tanımlar.

Uyarı, Baş-ölçülü Sıçanların Alt-kortikal Beyin Yapıları içinde Juxtacellular İzleme ve Yerelleştirme Single Nöronlar

Farelere kronik transkraniyal yüksek yoğunluklu elektroensefalografik montajın düşük maliyetli yapımı ve cerrahi implantasyonu için talimatlar verilmiştir. Sinyal kaydetme, çıkarma ve işleme teknikleri de açıklanmaktadır.

Bir Kemirgen Modelinde Yüksek yoğunluklu Elektroensefalografik Toplama Düşük maliyetli ve Açık kaynak Kaynakları Kullanma

Burada, serbest hareket eden farelerde çoklu korteks tabakaları boyunca hücresel çözünürlük ile büyük ölçekli Ca 2+ görüntülemenin gerçekleştirilmesi için bir prosedür sunuyoruz. Yüzlerce aktif hücre, implante edilmiş bir prizma probu ile birleştirilmiş minyatür, başa monte mikroskop kullanarak eş zamanlı olarak gözlemlenebilir.

Çok Katlı Kortikal Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Prizmatik Problar ve Minyatür Floresan Mikroskopi ile Serbestçe Hareketli Fare Görüntüleme

Bir kablosuz fareler serbestçe davranışlar içinde stimülasyon ve çok kanallı sinirsel kayıtları için çift yönlü sistemi tanıttı. Hafif ve küçük, böylece animal´s davranış repertuar üzerinde en az etkiye sistemidir. Ayrıca, bu çift yönlü sistem beyin harekete geçirmek desen ve davranışı arasındaki nedensel ilişkileri değerlendirmek için gelişmiş bir araç sağlar.

Kablosuz, Vivo içinde kayıt ve fareler serbestçe davranışlar içinde sinirsel aktivite uyarılması için çift yönlü arayüzü

Burada sunulan protokol, eşzamanlı elektroensefalografi (EEG) ve gerçek zamanlı olarak davranışsal değerlendirme hakkında bilgi sağlar. Bu protokolde yer alan tüm adımları, özellikle öğrenme ve hafıza alanlarında, nörobilimin birçok alanındaki araştırmacılar için cazip bir çözüm olarak tartıştık.

Hipokampal nörogenezi incelemek için bir araç olarak kablosuz elektrofizyoloji ve hafıza davranış testinin eşzamanlı izlenmesi

Burada, uyanık, baş kısıtlı farelerde beyin hücrelerinin uzunlamasına görüntülenmesi için kronik bir kraniyal pencerenin implantasyonu için bir protokol sunulmaktadır.

Uyanık Farelerde Tekrarlanan In Vivo Görüntüleme için Kraniyal Pencerenin İmplantasyonu

İki tırmanma elyafına bağımlı ilişkisel öğrenme görevi sırasında hayvan davranışlarını izlemek için tek bir platform geliştirdik. Düşük maliyetli tasarım, fiber ile ilişkili serebellar aktiviteye tırmanmaya yönelik optogenetik veya görüntüleme deneyleriyle entegrasyona izin verir.

Beyinciğe Bağımlı Duyusal İlişkisel Öğrenmeyi İzlemek için Esnek Bir Platform

Uyanık, kafası sabitlenmiş sıçanların fonksiyonel görüntülemesi için ayrıntılı yeni bir prosedür tanımlanmıştır.

Uyanık, Kafaya Sabitlenmiş Sıçanların Nörogörüntülemesi için Kafa İmplantları

Protokol, serbestçe hareket eden bilinçli farelerde hücre dışı elektrofizyolojik özellikleri ortaya çıkarmak için motor kortekste (MC) hücre dışı kayıt metodolojisini ve ayrıca yerel alan potansiyellerinin (LFP'ler) ve sivri uçların veri analizini açıklar.

Serbestçe hareket eden farelerde çok kanallı hücre dışı kayıt

Burada, kemirgenlerde kronik elektrofizyoloji için kullanım kolaylığı, prob geri kazanımı, deneysel çok yönlülük ve davranışla uyumluluk için optimize edilmiş hafif, uygun maliyetli bir prob implant sistemi sunuyoruz.

DREAM implant: Başa sabitlenmiş ve serbest hareket eden farelerde kronik elektrofizyoloji için hafif, modüler ve uygun maliyetli bir implant sistemi

Öğrenin, uyanık farelerde optik ve elektrofizyolojik kayıtlar için hava kaldırdı mobil ev kafesi yöntemini. İki foton mikroskobisi ve yama kelepçesi ile doğal davranış sırasında sinir aktivitesini inceleyin.

Düz zeminli Hava kaldırdı Platform: Yeni Bir Yöntem Awake üzerinde Mikroskopi veya Elektrofizyoloji ile davranışı birleştiren için serbestçe Kemirgenler Hareketli (Video) | JoVE Journal

Düz zeminli Hava kaldırdı Platform: Yeni Bir Yöntem Awake üzerinde Mikroskopi veya Elektrofizyoloji ile davranışı birleştiren için serbestçe Kemirgenler Hareketli

Daha fazla video keşfet