Name: Mouse Dorsal Skinfold Odasında İskemik Doku Yaralanması: Bir Cilt Flap Model Akut Kalıcı iskemisi Araştırma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: Öğrenin, sıçan sırt deri katlama odasında iskemik kaslı deri flep modeli oluşturmayı. İntravital floresan mikroskopi ile mikrosirkülasyonu 10 gün boyunca gerçek zamanlı gözlemleyin ve doku canlılığını değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz görüntü düzenleme Katharina HABERLAND teşekkür ederiz. Finansman: kıdemli yazar, yeni bir araştırma laboratuvarı kurmak için Technische Universität München bir KKF Grant aldı.

NOT: Ön sunulan modelin uygulanması, ilgili hayvan koruma yasaları danışılması gerekir ve izin yerel yönetimler alınmalıdır. Bu çalışmada, tüm deneyler araştırma içeren hayvanlar için yol gösterici ilkeler ve hayvanların korunması konusunda Alman mevzuatına uygun olarak yapılmıştır. Deneyler yerel hayvan bakım komitesi tarafından onaylandı. 1. Hayvan Hazırlama ve Kanatçığının Cerrahi Yükseklik <ol style="margin-left: 40px;"><li> 22-24 ° C, oda sıcaklığında ve 12 saat gündüz-ve gece çevrimi ile% 60-65 bir görece nemde bir kafes hayvanları tutun. Içme suyu ve standart laboratuar yiyeceği fareler ücretsiz erişime izin ver. Her zaman hayatta kalma ameliyat sırasında steril koşulların muhafaza. </li><li> 90 mg / kg vücut ağırlığı kadar ketamin hidroklorid ve 25 mg / ihtiva eden, 10 g vücut ağırlığı başına 0.1 mi tuzlu su çözeltisinin intraperitonal ile fare anestezisi (ip) enjeksiyonukg vücut ağırlığı dihydroxylidinothiazine hidroklorür. Anestezi hayvan hazırlanması, cerrahi ve daha sonra mikroskopi için gereklidir. Bir ağrılı uyaranlara yanıt kontrol edilerek uygun Anesthetization onaylayın. Anestezi süresi boyunca, kuruluğunu önlemek için gözlerin veteriner merhem uygulayın. </li><li> Yeterli anestezi indüksiyonu sonrası, bir elektrikli tıraş makinesi ile arka tüylerini. Bundan sonra, kalan saç kaldırmak için traş bölgeye epilasyon krem ​​uygulayın. </li><li> 7-10 dk&#39;lık Depilasyon kremi kalış süresi sırasında, cilt forseps ve mikro forseps, makas ve mikro makas, dikiş materyali ve bir işaretleyici kalem gibi araçları hazırlamak. Dezenfekte ve bölmenin üssünde somun ile iki vidayı uygulayarak ve kamara sisteminin sıkılığını garanti sanığa muadili penceresinin etrafında kendinden yapışkanlı köpük (Res. 1 AC) sabitleyerek titanyum odası hazırlamak. </li><li> Yıkanarak arkasındaki tüm epilasyon kremi kaldırılık su ile kapalı. Daha sonra, kuru ve bir alkol ihtiva eden bir çözelti ile cilt dezenfekte. </li><li> Yüzükoyun fare ve arka orta hat tanımlar. Merkezi cilt kavramak ve bir kat (Şekil. 2A) oluşturmak için yukarı doğru kaldırın. Işık kaynağı her türlü kullanarak trans-aydınlatma ile, provisorily titanyum çerçeve (Şekil. 2B) yerleştirmek için nereye karar. Emin olun kraniyale yanal torasik arter (LTA) ve sanığa penceresinin merkezi aracılığıyla kaudale ders derin sirkumfleks iliak arter (DCIA) uzak dalları (Şekil. 2B-D). Odasının konumlandırılması yapıldıktan sonra, titanyum çerçeve, daha sonra tespit için kıvrımın en altındaki cildin her iki katmanın delikli. Şimdi, titanyum çerçevesini kaldırma yüzükoyun fare ve gerektiğinde arka orta hat yeniden tanımlar. </li><li> Omurga 15 x 1 bir genişlik-boy oranı ile orta hatta başlangıç ​​dik kanadı Planı1 mm&#39;lik bir yanal göre ve rastgele perfüze kanadın sonuçlanır. Daha sonra, karşı tarafa uzanan 2 mm&#39;lik bir ek deri alan belirtin (Şek. 2C, d). Bu alan, forseps ile toplandı ve daha sonra görünür kanat alanı ile müdahale etmeden titanyum çerçeveye dikilir. </li><li> Işaretleme son ardından, flep kesilirken. Bunu yaparken, LTA&#39;ya ve DCIA hem transect ve kapağını (Şekil. 2E) yükseltmek. Nakledilmiş damarların pıhtılaşması ya da bağlanması için herhangi bir gerek yoktur. </li><li> Önceden yapılmış deri deliklerinin (Res. 2F) üzerinden bölmenin vidayı yerleştirin ve sanığa çerçevesinin delik ve bir 5-0 kullanarak çerçevenin arka kısmına yükseltilmiş flep bölmenin çerçevesi içinde hem anterior ve posteriorda skinfold sabitleşmek kesintiye dikişler (Res. 2G). </li><li> (5-0 sütür ile deriye geri kanadın dikey bacaklarda sütüre <stronG&gt; Şek. 2H, J). </li><li> Kapağın damar sistemini gözlemlemek için kapağın diğer tarafında, yani 2 mm&#39;lik küçük bir deri şerit deri yanal bir yarı-dairesel bir alanı eksize edin. Bu 90 mm ​​2 arasında bir yüzeye sahiptir, bölmenin gözlem penceresi üzerinden doğrudan olarak bakma olanağı tanır. </li><li> Mikroskopi sırasında görüntü kalitesini iyileştirmek amacıyla mikrocerrahi aletleri ve optik büyütücü lens veya mikroskop kullanılarak çizgili kas jelatin benzeri gevşek areolar doku çıkarın. Kas doku katmanları içinde damarlarının zarar değil deneyin. </li><li> Son olarak, topikal bisbenzimid ve tuzlu su (Şek. 2J) ile kanat çiy taneleriyle ıslatmak, kraniyal ve arkaya doğru, önceden öne köpük kendinden yapışkan şeritleriyle endued edilmiş çerçevenin karşıt montaj odacığı mühür. Bundan sonra, bir çırpıda halkayı kullanarak cam kapak ile gözlem penceresi uygulayın. Cam altında herhangi bir hava kabarcıklarına tuzağa çalışın (Res. 2K L). Cilt yapışma güçleri tarafından cam kapak uyacaktır. </li></ol> 2. Intravital Epifloresans Mikroskopi <ol style="margin-left: 40px;"><li> İdeal optik kalite için ilk mikroskopik analiz için cerrahi hazırlık 24 saat sonra bekleyin. Bu analiz, mikroskopi taban çizgisini temsil eder ve ameliyat sonrasında günde 3, 5, 7 ve 10 tekrar edilir. Adım 1.2 açıklandığı gibi her zaman, fare uyutmak. Ismarlama bir pleksiglas bir taşıyıcı üzerinde bir yanal dekübital pozisyonda hayvan yerleştirin. Bu şekilde, cam kapak yapışan flep kas doku tabakaları yukarı-koğuşta karşı karşıya. </li><li> Bir kuyruk damarından ya da retrobulbar venöz pleksus içinde% 5 yeşil floresan dekstran (molekül ağırlığı 150,000) ve 0.05 ml% 1 yüksek seviyede florasan Rodamin ailesi boya 0.05 ml enjekte edilir. Yeşil fluoresan dekstran intravenöz uygulanması halinde, kanın hücresel olmayan bileşenler leke (IV). Dist olabilir floresan Rodamin lekeleri lökosit ve trombositdiğer hücresel ve hücresel olmayan bileşenleri inguished. Son olarak, yoğunlaşma durumuna göre daha az ya da flüoresan yayan çekirdek bileşenlerinin bisbenzimid boyar. </li><li> Daha sonra, mikroskop altında fare yerleştirin. Mikroskop bir LED sistemi içerir olun - 470 ve 425 nm, 365 ve 490 nm ve 540 ve 580 nm LED ışın kombinasyonları gibi gelen filtre setleri (62 HE BPP / GFP / HcRed, aralık 1: 350-390 nm , 460-488 nm 495 nm / 500-557 nm bölünmüş; aralığı 3: aralık 2; uyarma dalga boyu, 395 nm / 402-448 nm bölünmüş 567-602 nm, sonsuz için 610 nm / 615 nm bölmek 20 Rodamin, aralık. : 540-552 nm) emisyon 575-640 nm, 560 nm bölünmüş. </li><li> Fotoğraf ve şarj çiftli cihaz video kamera kullanarak hareket görüntü kaydedebilir ve daha fazla off-line analiz için bir bilgisayar sabit diske kaydedebilirsiniz. </li><li> Farklı hedefleri (2.5X, NA (sayısal açıklık) = odasının panorama görünümleri için 0,06 kullanın, 5X,NA = 0.16; 10X, NA 0.32 =; 20X, NA 0.50 =; Ilgi bölgelerin kayıtları için 50X, NA = 0.55). </li><li> Hemen hemen eşit yükseklikte, yani bir proksimal, merkezi ve en uzak damar girişi (Res. 3F) bir distal alanın üç bölüme bölmenin penceresinden görünür kanat yüzeyini bölün. Görüntü elde etmek için, her bir gözlem zaman noktasında şu şekilde devam edin: <ol><li> 5X objektif kullanarak uzağa yakınsaldan bölmenin penceresi içinde görüntü ile doku görüntüyü tarayın. </li><li> Flep her alanda kolayca tanımlanabilen dallanma desenleri ile ikinci veya üçüncü dereceden arteriyolleri ve beraberindeki venüllerinde seçin. 5X, 10X ya da 20X objektif kullanarak, kolayca bütün gözlem süresi boyunca paketlerini yeniden lokalize etmek için arteriolovenular demetlerinin çıktı olun. </li><li> 20X objektif ve 50X objektif, daha fazla kayıt 5-6 kılcal alanları ve &quot;apoptotik ileSırasıyla flep alanı başına &quot;alanlar. 10X ve 20X hedefleri ile kaydedilen tüm görüntüler yeşil ışık (Rodamin) filtresi, oysa, 5X ve 50X objektif kullanımı mavi ışık (floresan dekstran) ve beyaz ışık (bisbenzimid) filtresi ile kaydedilen görüntüler sırasıyla mavi ışık (floresan dekstran) ve kullanımı . </li></ol></li></ol> Kaydedilen Verilerin 3. Analiz Not: 29, aşağıdaki gibi, bir bilgisayar destekli görüntü analiz sisteminin kullanımı off-line Tüm kaydedilen parametrelerin ölçülmesi ile. <ol style="margin-left: 40px;"><li> Alanının ölçülmesi perfüze olmayan sırasıyla nekrotik doku (mm2). <ol><li> (2.6.1 itibaren) 5X amacı ile kaydedilen tam taranan odası penceresi görüntü ve non-perfüze sırasıyla nekrotik doku ölçmek için floresan dekstran kullanın. Perfüze olmayan alan Border ve m alan hesaplamak: perfüze olmayan karanlık alanı ölçmek için &quot;AreaBo&quot; işlevini kullanınYazılımın Alan ölçümü algoritmalar kullanarak m 2. </li></ol></li><li> Arterioller, kılcal damarların ve venüllerden (mikron) mikrovasküler çapı ölçümü. <ol><li> Kaydedilen AV-demetleri veya yazılım içine kılcal alanlardan yük video ve resimler. En iyi sonuçlar, en yüksek büyütme ile fotoğraf veya videoları kullanmak için geminin kesin sınırları açıkça görünür olduğu yere. </li><li> Ölçümler geminin duvarına dik gerçekleştirildiğinden emin olmak için yazılımın &quot;DiamPe&quot; işlevini kullanın. Bunu yapmak için geminin dik çapı geminin duvar ve üçüncü tıklama işareti ile iki noktalarını işaretleyin. Yazılım um ölçümü yapacak. </li><li> Aynı yerde tüm kayıtları için aynı damarlar üzerindeki ölçümleri tekrarlayın. Ortalama çapa birikmesine çok kılcal ölçün. </li></ol></li><li> Arteriyollerde kırmızı kan hücresi (RBC) hızının analizi, kılcalnd venülleri (mm / sn). <ol><li> Arteriolar kırmızı kan hücresi (RBC) hız için (mm / s) ölçümleri yazılımın &quot;VeloLSD&quot; fonksiyonunu kullanmak ve çapları ölçülmüş olan floresan dekstran penceresinde aynı damarları seçin. </li><li> Süresi (san) içinde tek bir damar içi gri seviye Desenin kayması (mm) ölçümü temelinde olduğu satır kaydırma yöntemi kullanılarak bilgisayar destekli görüntü analiz sistemi ile analiz edin. </li></ol></li><li> Damarlarda hacim kan akışı (ul / sn) ölçümü. <ol><li> RBC hız ve damar kesit alanından arteriyoller, venüller ve kılcal hacim kan akımı (ul / sn) hesaplayın (π * r2) Gross ve Aroesty, yani S = V * π * r, 2 aşağıdaki denkleme göre , silindirik bir kap şekil 30 varsayılmıştır. </li></ol></li><li> RBC perfüze kılcal fonksiyonel kılcal yoğunluk ölçümü (besleyici perfüzyon: cm / cm <sup&gt; 2). <ol><li> Yazılımın içine 20X objektif büyütme ile kaydedilmiş floresan kılcal alanını yükleyin. RBC-perfüze mikrodamarlar fonksiyonel kılcal yoğunluğunu ölçmek için &quot;DensLA&quot; işlevini kullanın. </li><li> Imleç ile perfüze kılcal damarları Trace ve perfüze damarları işaretleyin. Işaretlemek yok kılcal damarlar, arteriyolleri veya venüllerinde perfüze olmayan. Yazılım cm / cm 2 perfüze kılcal damarların fonksiyonel kılcal yoğunluğunu ölçmek olacaktır. Diğer kaydedilen kılcal alanlar için adımları tekrarlayın. </li></ol></li><li> Mikrodamarlar (mikrovasküler remodeling) gibi tomurcuk ve filiz-oluşumu ve yeni oluşan mikrodamarlar olarak anjiyojenisinin erken belirtileri kıvrımlarında ölçümü. <ol><li> Yük yazılımı içine videoları veya floresan kılcal alanların kareleri kaydedildi. Gyrose damarlarını tanımlamak ve yazılımın &quot;TorqIx&quot; işlevini kullanın. Ders ile kesin damar akışını izlemek ve bir sağ tıklama ile biter. Yazılım olacakdoğrudan yol düz bir çizgi çizin ve takip yolu ile ilgili olarak ayarlamak. NOT: Genellikle önceden varolan kılcal dik olarak yayılan bu tür tomurcukları, filizleri ve yeni oluşan kılcal olarak anjiyogenez belirtileri, dikkat edin. Aşama 3.5 de tarif edildiği gibi bu, yeni oluşan damarların yoğunluğu ölçülür. </li></ol></li><li> Nükleer yoğunlaşma, parçalanma ve / veya marjinalleşmesi (hücre / mm 2) olarak apoptotik hücre ölümü için özellikleri, belirlenmesi. <ol><li> Yazılımın içine bisbenzimid-kaydedilmiş videoları (50X objektif) yükleyin. &quot;DenseNA&quot; işlevini kullanın. Böyle bir sol tıklama ile nükleer yoğunlaşması, parçalanma ve marjinalleşmesi olarak belirtilen özelliklerine göre apoptotik hücreleri işaretlemek. </li><li> Video boyunca tüm karakteristik hücreleri işaretleme sonra, otomatik olarak tüm işaretli hücrelerin sayısı ve alanı boyunca onu böler, hangi yazılım &quot;N / A&quot; seçeneğini tıklatın. Sonuç apoptotik olacakhücre / mm2. </li></ol></li><li> Inflamasyon temsil vasküler endotelyuma lökosit yapışması analizi. Lökositlerin Aralıklı bağlılık (lökositler haddeleme; bağlılık &lt;30 sn: silindirlerin sayısı / mm 2 endotelyal yüzey) ve lökositlerin firma bağlılık (lökositler yapışmasını; bağlılık&gt; 30 sn: çıkartmalar / mm 2 endotel yüzey sayısı). <ol><li> Rodamin sayısını sayarak enflamatuvar yanıtı analiz eder (&lt;30 saniye &quot;silindirler&quot;) ≥30 saniye arasındaki bir zaman periyodu (&quot;etiketleri&quot;), post-kılcal venüllerin endotelinde yapıştırılmış lökositler ve aralıklı olarak yapışan lökositlerin etiketli . Venüler lökosit yapışmasını mm2 endotel yüzeyi başına hücre olarak ifade edilir. </li></ol></li><li> Mikrovasküler sızıntısı (makro-moleküler fışkırma e = E1 / E2) için bir parametre olarak damar içi ve interstisyel gri seviyelerinin ölçülmesi. <ol><li> Makromoleküler l değerlendirinbir fluoresan dekstran iv enjeksiyonundan sonra, mikrovasküler geçirgenliğin bir parametre olarak eakage. Densitometrik olarak doğrudan bir kapiller damar duvarı (E1) bitişik, hem de kabın (E2) marjinal hücresiz plazma dokuda çoklu gri seviyesini belirlemektedir. Daha sonra E1 / E2 31 oranı olarak damardan makromoleküler fışkırmaya (E) hesaplar. </li></ol></li></ol> 4. Ameliyat Sonrası Bakım <ol style="margin-left: 40px;"><li> Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirket önlemek için ayrı bir kafes içinde hayvan dönün. Bu sternal yatma korumak için yeterli bilince kavuşana kadar sahipsiz bir hayvan bırakmayın. Kanama, lokal ve sistemik enfeksiyon işaretleri ve bölmenin konumu için günlük olarak hayvanlar izleyin. </li><li> Pansuman ve otomatik kurcalanmaları motor aktivite, vücut ağırlığı, ağrı belirtileri, tolerans gözlemleyerek hayvanın genel durumunu değerlendirin. </li><li> Mutu önlemek için bir kafes için fareler bir tutunodasının al manipülasyon. Ağrının herhangi bir işareti de, 8 saat aralıklarla deri altından, 0.05-0.1 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda buprenorfin geçerlidir. </li></ol> 5. Ötanazi ve Skinfold Odası Eksplantasyonu <ol style="margin-left: 40px;"><li> 10. günde, bir anestetik ilaç (150mg / kg kadar pentobarbital) bir doz aşımı ile hayvanlar kurban. </li><li> Odasını kaldırmak ve immünohistokimyasal ve moleküler protein deneyleri için flep doku örnek. Geleneksel histoloji (formalin) ve ölçülebilir protein tayini (sıvı azot veya kuru buz) için örnek dokular. </li></ol>

<ol><li>McFarlane, R., De Young, G., Henry, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+a+pedicle+flap+in+the+rat+to+study+necrosis+and+its+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">The design of a pedicle flap in the rat to study necrosis and its prevention.</a> Plast Reconstr Surg. 35, 177-182 (1965).</li>
<li>Finseth, F., Cutting, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+neurovascular+island+skin+flap+for+the+study+of+the+delay+phenomenon%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">An experimental neurovascular island skin flap for the study of the delay phenomenon.</a> Plast Reconstr Surg. 61, 412-420 (1978).</li>
<li>Petry, J. J., Wortham, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomy+of+the+epigastric+flap+in+the+experimental+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">The anatomy of the epigastric flap in the experimental rat.</a> Plast Reconstr Surg. 74, 410-413 (1984).</li>
<li>Achauer, B. M., Black, K. S., Litke, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcutaneous+PO2+in+flaps%3A+a+new+method+of+survival+prediction%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Transcutaneous PO2 in flaps: a new method of survival prediction.</a> Plast Reconstr Surg. 65, 45-45 (1980).</li>
<li>Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+microvascular+oxygen+supply+and+tissue+oxygenation+in+hepatic+ischemia%2Freperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Assessment of microvascular oxygen supply and tissue oxygenation in hepatic ischemia/reperfusion.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 428, 403-408 (1997).</li>
<li>Menger, M. D., Barker, J. H., Messmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+blood+perfusion+during+postischemic+reperfusion+in+striated+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Capillary blood perfusion during postischemic reperfusion in striated muscle.</a> Plast Reconstr Surg. 89, 1104-1114 (1992).</li>
<li>Uhl, E., Rösken, F., Curri, S. B., Menger, M. D., Messmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+skin+flap+necrosis+by+transdermal+application+of+buflomedil+bound+to+liposomes%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Reduction of skin flap necrosis by transdermal application of buflomedil bound to liposomes.</a> Plast Reconstr Surg. 102, 1598-1604 (1998).</li>
<li>Pang, C. Y., Neligan, P., Nakatsuka, T., Sasaki, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+fluorescein+dye+test+for+prediction+of+skin+flap+viability+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Assessment of the fluorescein dye test for prediction of skin flap viability in pigs.</a> J Surg Res. 41, 173-181 (1986).</li>
<li>Hjortdal, V. E., Hansen, E. S., Henriksen, T. B., Kjolseth, D., Soballe, K., Djurhuus, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microcirculation+of+myocutaneous+island+flaps+in+pigs+studied+with+radioactive+blood+volume+tracers+and+microspheres+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">The microcirculation of myocutaneous island flaps in pigs studied with radioactive blood volume tracers and microspheres of different sizes.</a> Plast Reconstr Surg. 89, 116-122 (1992).</li>
<li>Pang, C. Y., Neligan, P., Nakatsuka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+microsphere+technique+for+measurement+of+capillary+blood+flow+in+random+skin+flaps+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Assessment of microsphere technique for measurement of capillary blood flow in random skin flaps in pigs.</a> Plast Reconstr Surg. 74, 513-521 (1984).</li>
<li>Sandison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+the+microscopic+study+of+living+growing+tissues+by+the+introduction+of+a+transparent+chamber+in+the+rabbit%27s+ear%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">A new method for the microscopic study of living growing tissues by the introduction of a transparent chamber in the rabbit's ear.</a> The Anatomical Record. 28, 281-287 (1924).</li>
<li>Algire, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Adaptation+of+the+Transparent-Chamber+Technique+to+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">An Adaptation of the Transparent-Chamber Technique to the Mouse.</a> Journal of the National Cancer Institute. 4, 1-11 (1943).</li>
<li>Lehr, H. A., Leunig, M., Menger, M. D., Nolte, D., Messmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal+skinfold+chamber+technique+for+intravital+microscopy+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Dorsal skinfold chamber technique for intravital microscopy in nude mice.</a> Am J Pathol. 4, 1055-1062 (1993).</li>
<li>Barker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+animal+model+to+study+microcirculatory+changes+associated+with+vascular+delay%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">An animal model to study microcirculatory changes associated with vascular delay.</a> Br J Plast Surg. 52, 133-142 (1999).</li>
<li>Erni, D., Sakai, H., Banic, A., Tschopp, H. M., Intaglietta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+microhemodynamics+in+ischemic+skin+flap+tissue+by+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of microhemodynamics in ischemic skin flap tissue by intravital microscopy.</a> Ann Plast Surg. 43, 405-414 (1999).</li>
<li>Roesken, F., Schäfer, T., Spitzer, W. J., Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+analysis+of+the+microcirculation+of+osteomyocutaneous+flaps+using+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">In vivo analysis of the microcirculation of osteomyocutaneous flaps using fluorescence microscopy.</a> Br J Plast Surg. 52, 644-652 (1999).</li>
<li>Harder, Y., Amon, M., Erni, D., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+ischemic+tissue+injury+in+a+random+pattern+flap%3A+a+new+mouse+model+using+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Evolution of ischemic tissue injury in a random pattern flap: a new mouse model using intravital microscopy.</a> J Surg Res. 121, 197-205 (2004).</li>
<li>Harder, Y., Contaldo, C., Klenk, J., Banic, A., Jakob, S. M., Erni, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconditioning+with+monophosphoryl+lipid+A+improves+survival+of+critically+ischemic+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Preconditioning with monophosphoryl lipid A improves survival of critically ischemic tissue.</a> Anesth Analg. 100, 1786-1792 (2005).</li>
<li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoieton+protects+critically+perfused+flap+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Erythropoieton protects critically perfused flap tissue.</a> Ann Surg. 248, 919-929 (2008).</li>
<li>Harder, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin+reduces+necrosis+in+critically+ischemic+myocutaneous+tissue+by+protecting+nutritive+perfusion+in+a+dose-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin reduces necrosis in critically ischemic myocutaneous tissue by protecting nutritive perfusion in a dose-dependent manner.</a> Surgery. 145, 10-1016 (2009).</li>
<li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin-induced+upregulation+of+endothelial+nitric+oxide+synthase+but+not+vascular+endothelial+growth+factor+prevents+musculocutaneous+tissue+from+ischemic+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin-induced upregulation of endothelial nitric oxide synthase but not vascular endothelial growth factor prevents musculocutaneous tissue from ischemic damage.</a> Lab Invest. 90, 40-51 (2010).</li>
<li>Rezaeian, F., Ong, M. F., Harder, Y., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-acetylcysteine+attenuates+leukocytic+inflammation+and+microvascular+perfusion+failure+in+critically+ischemic+random+pattern+flaps%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">N-acetylcysteine attenuates leukocytic inflammation and microvascular perfusion failure in critically ischemic random pattern flaps.</a> Microvasc Res. 82, 28-34 (2011).</li>
<li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ghrelin+protects+musculocutaneous+tissue+from+ischemic+necrosis+by+improving+microvascular+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ghrelin protects musculocutaneous tissue from ischemic necrosis by improving microvascular perfusion.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 302, 603-610 (2012).</li>
<li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+preconditioning+with+Erythropoietin+reduces+ischemia-induced+skin+necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Long-term preconditioning with Erythropoietin reduces ischemia-induced skin necrosis.</a> Microcirculation. , (2013).</li>
<li>Harder, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+preconditioning+reduces+ischemic+tissue+necrosis+by+heat+shock+protein+%28HSP%29-32-mediated+improvement+of+the+microcirculation+rather+than+induction+of+ischemic+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Heat shock preconditioning reduces ischemic tissue necrosis by heat shock protein (HSP)-32-mediated improvement of the microcirculation rather than induction of ischemic tolerance.</a> Ann Surg. 242, 869-878 (2005).</li>
<li>Tobalem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+shockwave-induced+capillary+recruitment+improves+survival+of+musculocutaneous+flaps%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Local shockwave-induced capillary recruitment improves survival of musculocutaneous flaps.</a> J Surg Res. 184, 1196-1204 (2013).</li>
<li>Lindenblatt, N., Calcagni, M., Contaldo, C., Menger, M. D., Giovanoli, P., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+for+studying+the+revascularization+of+skin+grafts+in+vivo%3A+the+role+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">A new model for studying the revascularization of skin grafts in vivo: the role of angiogenesis.</a> Plast Reconstr Surg. 122, 169-1680 (2008).</li>
<li>Schweizer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+and+hemodynamics+during+vascular+regeneration+in+critically+ischemic+murine+skin+studied+by+intravital+microscopy+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Morphology and hemodynamics during vascular regeneration in critically ischemic murine skin studied by intravital microscopy techniques.</a> Eur Surg Res. 47, 222-230 (2011).</li>
<li>Klyscz, T., Jünger, M., Jung, F., Zeintl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cap+image%E2%80%94a+new+kind+of+computer-assisted+video+image+analysis+system+for+dynamic+capillary+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Tech%22%5BJournal%5D)">Cap image—a new kind of computer-assisted video image analysis system for dynamic capillary microscopy.</a> Biomed. Tech. 42, 168-1675 (1997).</li>
<li>Gross, J. F., Aroesty, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mathematical+models+of+capillary+flow%3A+a+critical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Biorheology%22%5BJournal%5D)">Mathematical models of capillary flow: a critical review.</a> Biorheology. 9, 225-264 (1972).</li>
<li>Menger, M. D., Pelikan, S., Steiner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+ischemiareperfusion+injury+in+striated+muscle%3A+significance+of+%E2%80%98reflow+paradox%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Microvascular ischemiareperfusion injury in striated muscle: significance of ‘reflow paradox.</a> Am J Physiol. 263 (6 part 2), 1901-1906 (1992).</li>
</ol>

Klinik sonucu iskemik komplikasyonları azaltmak ve böylece iyileştirmek için, eleştirel perfüze flep dokusunda patofizyolojik süreçlerin daha detaylı bilgisi gereklidir. Akut kalıcı iskemi taklit yeni hayvan modellerinin geliştirilmesi, bu nedenle zorunludur. Buna göre, örneklenmiş kanat dokusunun immünohistokimyasal ve moleküler analiz ile ilişkili olabilir kas ve deri damarsal çeşitli parametrelerin tekrarlayan, morfolojik, dinamik ve fonksiyonel gerçek zamanlı değerlendirilmesini sağlayan bir kolay, güvenilir ve tekr...

Rekonstrüktif cerrahi maruz tendon kemik implant materyalin kapsamı kanatların kullanımına dayanır. Bir flep arteriyel giriş ve venöz çıkışı garanti kendi vasküler pedikül üzerinde aktarılan doku bloktur. Geniş uzmanlık ve transfer edilecek kapakların çeşitli varlığına rağmen, toplam doku kaybı yara arıza değişen iskemi kaynaklı komplikasyonlar hala rastlanmaktadır. Sekonder konservatif tedavi ve iyileşme minör doku nekrozu sonrasında beklenen Oysa, önemli flep nekroz genellikle cerrahi, yara klima ve ikincil yeniden yapılanma dahil cerrahi revizyon gerektirir. Bu, morbidite artar hastanede kalış süresini uzatır ve dolayısıyla artan sağlık maliyetleri yol açar. Arteriyel girişi gelen en uzak distal bölgesinde bir damar tanımlanmamış desen veya rastgele perfüze alanları ile Flaps iskemik hasara yatkındır. Acco<html> rdingly, çok sayıda deneysel ve klinik çalışmalar hem de nekroz gelişimini değerlendiren, eksenel model flepler (tanımlanmış kanlanma) ve rasgele model flepler (tanımlanmamış kan temini) 1-3. Ana bulgular yaygın nekrotik alanın büyüklüğü makroskopik değerlendirilmesi dayanmaktadır. Nedenleri ve doku nekrozu mekanizmalarını değerlendirmek üzere daha ayrıntılı olarak, çeşitli çalışmalar mikrodolaşımında analizi üzerinde duruldu. Farklı teknikler polarografik elektrotlar 4-5 ile doku oksijen geriliminin analizi, hem de lazer Doppler flowmetri 6-7, boya difüzyonu 8 ve mikrosferler 10/9 kullanarak kan akışının ölçümü de dahil olmak üzere, doku perfüzyonunu ölçmek için kullanılmıştır. Bu teknikler, ancak, sadece doku perfüzyonunun dolaylı parametreleri ölçmek için izin ve bir flep ilgi bireysel alanda microhemodynamic işlemlerin herhangi bir morfolojik analizine imkan yok. t &quot;&gt; Sandison diye tavşanlarda 11 gerçekleştirilen in vivo çalışmalarda, uzun süreli için şeffaf bir odasını kullandı kim birinci olmak bilinen 1943 yılında -. ​​Yaklaşık 20 yıl sonra - Algire uygulanabilir olması için böyle bir şeffaf odasına adapte ilk Tümör hücrelerinin 12 mikro-implantların davranışlarını incelemek amacıyla farelerde. Nedeniyle fareler gevşek cilt hayvanları sözde ve sonraki yıllarda üzerinde bazı teknik iyileştirmelerden sonra, Lehr ve co-işçi gibi adapte başardık aslında Daha küçük ve hafif bir titanyum bölmeyi üreten bir sırt deri altı bölme. Bu bölme, intravital floresan mikroskobu, morfolojik ve mikro-özelliklerden sayısı ve farklı fizyolojik ve patofizyolojik koşullar altında zaman içinde değişikliklerin doğrudan ve tekrarlayan görüntülenmesi için bir teknik, bu tür kullanılarak değerlendirilmesini mümkün kılmıştır iskemi-reperfüzyon hasarı 13 olarak. Pe soruşturmanormal ve patolojik şartlar altında cilt, kas ve kemik flep rfusion iki eğilim oluştu: Birincisi, böyle bir fare 14 pediküllü kulak kepçesi gibi dorsal Deri kıvrım odasını kullanmayın &quot;akut&quot; flep modelleri, yanal merkezli ada flep hamster 15 ve sıçanlarda 16 pedikül bileşik flep. İkinci olarak, dorsal deri kıvrım odası izinleri tekrarlayan mikrosirkülatuar ile bir flep kombinasyonu intravital floresan mikroskobu ile birkaç gün boyunca analiz &quot;kronik&quot; flap modeli. Bu fare 17&#39;nin deri altı bölmesi içinde entegre edilmiş bir rasgele perfüze muskülokutan kanat oluşur. Genişliği-uzunluk oranı, akut kalıcı iskemi durum sürekli olarak 10-14 gün kanat yüksekliği sonra,% 50 kanat doku nekrozu ~ sonuçlanan şekilde seçilmiştir. Doku nekrozu Bu tekrarlanabilir ölçüde, koruyucu (yani gelişimi les hem daha değerlendirilmesine olanaks nekrozu) ve zararlı etmenler (yani, kapak patofizyolojisi daha nekroz gelişimi). Son yıllarda, farklı peri öncesi ve doku koruyucu maddelerin 18-24 idaresi ve ısı 25 ve shockwaves 26 gibi fizyolojik stres yerel uygulama da dahil olmak üzere son şartlandırma prosedürleri, etkisini gösteren çok sayıda deneysel yayınlar, ortaya çıkmıştır. Nekroz, mikrovasküler morfolojisi ve mikrosirkülatuar parametrelerin kantitatif analizleri, immünohistokimyasal analizler ve protein deneyleri korele edilebilir. Vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), nitrik oksit sentaz (NOS) Nükleer Faktör kappa B (NF-KB) ve ısı şoku proteinlerinin (HSP-32 de dahil olmak üzere farklı proteinler ve molekül: heme oksijenaz 1 (HO-1) ve HSP- 70) doku korumada bir rol oynadığı gösterilmiştir. Bu bölme flep modeline dayanarak, iki modifikasyonlar accueillante geliştirilmiştirr eksenel desen perfüzyon ile 28 pediküllü flep deri grefti iyileşmesi 27 ve Anjiyojenik gelişmeler sırasında neovaskülarizasyonunu mikrodolaşımın analiz etmek. Biz fare Deri kıvrım odasında bir kansızlığın meydan muskülokutan kanadı içeren bir güvenilir ve tekrarlanabilir bir model sunuyoruz. Bu model Intravital epi-floresan mikroskop ile mikrodolaşımında ve hemodinami görselleştirme ve kantifizasyonunu.

<table><tbody><tr><td>C57Bl/6 fareler, 6-8 w, 20-22 g</td><td>Charles River Epilasyon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>kremi</td><td>Balea Herhangi bir</td><td></td><td>epilasyon kremi</td></tr><tr><td>Titanyum haznesi</td><td>Irola</td><td>160001</td><td>Halteblech M</td></tr><tr><td>Özel yapım Pleksiglas montaj çerçevesi</td><td></td><td></td><td>Hayvanın solunumu nedeniyle hazne hareketini önlemek için hazneyi sabitlemek için çerçeve.</td></tr><tr><td>Oluklu peynir başlı vida</td><td>Vidalar ve Daha Fazlası</td><td>842210</td><td>DIN84 M2x10</td></tr><tr><td>Altıgen tam somun</td><td>Vidalar ve Daha Fazlası</td><td>93422</td><td>DIN934 M2</td></tr><tr><td>Geçmeli halka</td><td>Schaefer-Peters</td><td>472212</td><td>DIN472 J12x1,0</td></tr><tr><td>Kapak camı</td><td>Volab</td><td></td><td>Özel yapım kapak camı, 11,8 mm çapında.</td></tr><tr><td>Sabitleme köpüğü</td><td>tesamoll</td><td>05559-100</td><td>tesamoll Standart I-Profil</td></tr><tr><td>Ketamin hidroklorür</td><td>Parke Davis</td><td></td><td>Ketavet&reg;</td></tr><tr><td>Dihidroksilidinotiyazin hidroklorür</td><td>Bayer</td><td></td><td>Rompun&reg;</td></tr><tr><td>Buprenorfin</td><td>Essex İlaç</td><td></td><td>Temgesic&reg;</td></tr><tr><td>Tuzlu su%</td><td></td><td></td><td></td> 0.9</tr> <tr><td>Dezenfeksiyon alkolü</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 5-0</td><td>Ethicon</td><td>V 490 H</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 5-0</td><td>Ethicon</td><td>EH 7823 H</td><td></td></tr><tr><td>1 ml şırınga</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Esnek cetvel ile cerrahi cilt işaretleyici</td><td>Mor cerrahi</td><td>PS3151</td><td>Herhangi bir cerrahi cilt markörü ve esnek cetvel</td></tr><tr><td>Sivri uçlu makas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikro Makas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal makas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 kelepçe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnce anatomik forseps</td><td></td><td></td><td></td>Mikro</tr><tr><td>forseps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Altıgen somun sürücü</td><td>wiha</td><td>1018</td><td></td></tr><tr><td>Tornavida</td><td>wiha</td><td>685</td><td></td></tr><tr><td>Çıtçıtlı pense</td><td>Knipex</td><td>4411J1</td><td>12-25 mm</td></tr><tr><td>Tel kesici</td><td>Knipex</td><td>70 02 160</td><td>Tel kesici, vidaları kısa kesmek için kullanılır; 160 mm</td></tr><tr><td>Trans-aydınlatma ışığı</td><td>IKEA</td><td>501.632.02</td><td>LED ışık Jansj&ouml;; herhangi bir ışık&nbsp;</td></tr><tr><td>Büyütme gözlükleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İntravital mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>490035-0001-000</td><td>Scope.A1.Axiotech</td></tr><tr><td>LED sistemi</td><td>Zeiss</td><td>423052-9501-000</td><td>Colibri.2</td></tr><tr><td>LED modülü 365nm</td><td>Zeiss</td><td>423052-9011-000</td><td></td></tr><tr><td>LED modülü 470nm</td><td>Zeiss</td><td>423052-9052-000</td><td></td></tr><tr><td>LED modülü 540-580nm</td><td>Zeiss</td><td>423052-9121-000</td><td></td></tr><tr><td>Filtre seti 62 62 HE BFP + GFP + HcRed</td><td>Zeiss</td><td>489062-9901-000</td><td>Aralık 1: 350-390 nm uyarma dalga boyu, bölünmüş 395 nm / 402-448 nm; Aralık 2: 460-488 nm, bölünmüş 495 nm / 500-557 nm; Aralık 3: 567-602 nm, 610 nm / 615 nm'den sonsuza bölünmüş.</td></tr><tr><td>Filtre seti 20 Rhodamine</td><td>Zeiss</td><td>485020-0000-000</td><td>540-552 nm, bölünmüş 560 nm, emisyon 575-640 nm</td></tr><tr><td>2.5X objektif NA=0.06</td><td>Zeiss</td><td>421020-9900-000</td><td>A-Plan 2.5X/0.06</td></tr><tr><td>5X objektif NA=0.16</td><td>Zeiss</td><td>420330-9901-000</td><td>EC Plan-Neofluar 5X/0.16 M27</td></tr><tr><td>10X objetifif NA=0.30</td><td>Zeiss</td><td>420340-9901-000</td><td>EC Plan-Neofluar 10X/0.30 M27</td></tr><tr><td>20X objektif NA=0.50</td><td>Zeiss</td><td>420350-9900-000</td><td>EC Plan-Neofluar 20X/0.50 M27</td></tr><tr><td>50X objektif NA=0.55</td><td>Zeiss</td><td>422472-9960-000</td><td>LD Epiplan-Neofluar 50X/0.55 DIC 27</td></tr><tr><td>ZEN görüntüleme yazılımı</td><td>Zeiss</td><td></td><td>ZenPro 2012</td></tr><tr><td>CapImage</td><td>Dr. Zeintl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Floresein izotiyosiyanat-dekstran</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>45946</td><td></td></tr><tr><td>bisBenzimide H 33342 trihidroklorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2261</td><td>Yutulması halinde zararlıdır; ciddi cilt yanıklarına ve göz hasarına neden olur, solunum yolu tahrişine neden olabilir.</td></tr><tr><td>Rhodamine 6G chloride</td><td>Invitrogen</td><td>R634</td><td>Yutulması halinde zararlıdır; genetik kusurlara neden olabilir; kansere neden olabilir; doğurganlığa veya doğmamış çocuğa zarar verebilir.</td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>Merial</td><td></td><td>Narcoren&reg;</td></tr></tbody></table>

mouse dorsal skinfold odası&#39;nda İskemik doku yaralanması: bir cilt flap model akut kalıcı iskemisi araştırma

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Derin uzmanlık ve ileri cerrahi tekniklere rağmen, geniş doku nekrozuna yara arıza değişen iskemi kaynaklı komplikasyonlar hala özellikle rekonstrüktif flep cerrahisi, yaşanıyor. Çoklu deneysel flep modelleri altında yatan nedenleri ve mekanizmalarını analiz etmek ve iskemik komplikasyonları önlemek için tedavi stratejileri araştırmak için geliştirilmiştir. En modelleri sınırlayıcı faktör, doğrudan ve tekrar tekrar mikrovasküler mimarisi ve hemodinamikleri görselleştirmek için eksik olasılığıdır. Protokolün amacı bu daha önce belirtilen eksik unsurları affiliating köklü bir fare modeli sunmaktır. Harder ve ark. Tedavi edilmeyen muhafaza edilmesi durumunda 10 gün sonra% 50 nekroz ~ akut kalıcı iskemi ve sonuçları uğrar rastgele bir perfüzyon desenli bir kas deri flebi modeli geliştirmiştir. Intravital epi-floresan mikroskop yardımı ile, bu odacık model tekrarlayan görselleştirme sağlarmorfolojisi ve zamanla farklı ilgi bölgelerinde hemodinamik. Böyle apoptoz, inflamasyon, mikrovasküler sızıntı ve anjiyogenez gibi ilişkili süreçler incelenmiş ve immünhistokimyasal ve moleküler protein deneyleri korele edilebilir. Bugüne kadar, model, kansızlığın meydan doku pre, peri etkisi ve postconditioning araştıran yayımlanmış birkaç deneysel çalışmalarda yapılabilirliğini ve tekrarlanabilirlik kanıtlamıştır.

Nekroz Bu model, temel nokta - doku nekrozu, aşağıdaki kanat yüksekliği (örneğin akut iskemi, kalıcı indüksiyonu) - tekrar tekrar ölçülür ve 10 günlük bir süre boyunca, Şekil 3 'de gösterildiği gibi makroskopik olarak gösterilen. Flep nekroz nihai sınır çizimi genellikle ameliyattan 5 gün sonra ve 7 arasında meydana ve Şek. 3D-F (proksimal hayati ve flep distal nekrotik bölge arasında gelişen vazodilatasyon ve mikrovasküler biçimlen...

Sunulan murin dorsal Deri kıvrım odasının penceresi kas deri flebi akut kalıcı iskemi bir bölge görüntüler. Mikrovasküler ve hemodinaminin miktarının doğrudan ve tekrarlayan değerlendirmesi için Intravital epi-floresan mikroskopi izin verir. Morfolojik ve hemodinamik sonuçlar daha histolojik ve moleküler analizler ile ilişkili olabilir.

Mouse Dorsal Skinfold Odası&#39;nda İskemik Doku Yaralanması: Bir Cilt Flap Model Akut Kalıcı iskemisi Araştırma

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Bu prosedürün genel amacı, fare deri kıvrım odasında iskemik etkilenmiş bir muskülokütanöz flebin tekrarlanabilir ve güvenilir bir modelini oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle deri kıvrım odasının ve farenin sırtının hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, nekroz gelişmesi amacıyla bir flep kaldırılır ve rastgele perfüze edilir.Ardından flep, titanyum deri kıvrımı kamerasına yerleştirilir. Son olarak, kameranın sızdırmazlığını sağlamak için pencere kamerası bir örtü camı ile mühürlenir. Nihayetinde, mikrocircülasyon, 10 gün veya daha uzun bir süre boyunca intravital floresan mikroskobu ile kamera penceresi üzerinden görselleştirilir.Bu fare modelinin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, intravital floresan mikroskopi kullanarak yaklaşık iki haftalık bir süre boyunca muskülokütanöz dokunun mikrovaskülatüründeki mikrosirkülasyonel ve morfolojik değişikliklerin gerçek zamanlı olarak gözlemlenmesine olanak tanımasıdır. Diğer hususların yanı sıra model, doku sağkalımını nihayetinde artırmak için koşullandırma prosedürlerinin incelenmesine imkan verir. Metin protokolüne uygun olarak fareyi anestezi altına aldıktan sonra, sırttaki kılları temizlemek için elektrikli tıraş makinesi kul

ischemic-tissue-injury-dorsal-skinfold-chamber-mouse-skin-flap-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Cerrahi travma inflamatuvar yanıt indükler. Sitokinler ve endojen ligand iskemi ve reperfüzyon sonrası miyokard infarkt modüle bilinmektedir. Biz torakotomi etkilerini en aza indirmek için asılı ağırlıklar kullanılarak murin iskemi ve reperfüzyon değiştirilmiş bir kapalı göğüs modeli sunuyoruz.

Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Ücretsiz doku transferi yaygın olarak onkolojik rezeksiyon ve travma sonrası form ve fonksiyon geri rekonstrüktif cerrahide kullanılmaktadır. Ameliyat öncesi bu doku ön hazırlık sonucu iyileştirebilir. Bu makalede, bir...

Miyokutanöz İskemi Reperfüzyon Hasarı Rat Modeli: in situ Enine Rektus abdominis kas deri Flap

Biz fareler tabi olan orta ve ağır iskemi-reperfüzyon bağlı böbrek hasarı modelleri tanımlamak tek taraflı renal pedikül sırasıyla, eş zamanlı veya gecikmeli taraf nefrektomi takip sıkma. Bu modeller sürekli böbrek fonksiyon bozukluğu ve post-yaralanma fibrozis yol, ancak yaralanma şiddeti ve yaşam fare arka plan, yaş ve cerrahi ekipman bağlıdır.

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

sıçan nedeniyle onun büyüklüğü, kullanılabilirlik ve oldukça uysal davranış, yıllardır bir araştırma modeli olarak kullanılmıştır. Bu protokolün amacı, kronik yaraların patofizyolojisi değerli bilgiler sağlamak için bir iskemik deri yara iyileşmesi modeli olarak sıçan kullanmaktır.

Sıçan İskemik Cilt Yara Modeli Gösteri

Farede arka bacak iskemisinin cerrahi indüksiyonu, anjiyogenezi incelemek için yararlıdır, ancak bu, belirgin iskemiye bağlı doku nekrozu gösteren bazı akraba fare suşlarında tehlikeye girer. Kademeli arteriyel oklüzyonun indüksiyonu yoluyla bu sorunu aşmak için ameroid büzücüler kullanarak subakut ekstremite iskemisini indüklemek için yöntemler açıklanmaktadır.

Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

Bu protokol mıknatıs sıkma kullanarak fare kulak cilt üzerinde bir iskemi-reperfüzyon (İR) modeli indüksiyon açıklar. Özel bir dahili Intravital görüntüleme modeli kullanarak, in vivo inflamatuvar yanıt sonrası reperfüzyon eğitim. Bu tekniğin gelişiminin arkasındaki mantık lökosit cilt IR hasarı nasıl cevap anlayışı yaygınlaştırmaktır.

Bağışıklık Yanıtları intravital multiphoton Görüntüleme Fare Kulak Skin uyaran İskemi-reperfüzyon yaralanması

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Burada, primer fibroblastlar kullanarak in vitro çizik testve farelerde in vivo deri yara iyileşmesi test için bir protokol salıyoruz. Her iki tahliller in vitro ve in vivo yara iyileşmesini değerlendirmek için basit yöntemlerdir.

In Vitro ve In Vivo In Vivo Analizi Yara İyileşmesi için Scratch Migration Tahlil ve Dorsal Skinfold Odası

Burada rekonstrüktif mikrocerrahide iskemi-reperfüzyon hasarının patofizyolojisini incelemek için klinik öncesi bir hayvan modelini açıklıyoruz. Sıçanyüzeysel kaudal epigastrik damarlar dayalı Bu ücretsiz deri flep modeli de iskemi-reperfüzyon yaralanma ile ilgili hasarı dengelemek için farklı tedaviler ve bileşiklerin değerlendirilmesi için izin verebilir.

Rekonstrüktif Mikrocerrahide İskemi-Reperfüzyon Hasarı Nın İnceleştirilmesinde Klinik Öncesi Sıçan Modeli

Bu makale, küçük bir kesi ile farelerde akut iskemi kurmak için etkili bir cerrahi yaklaşım göstermektedir. Bu yaklaşım, laboratuvar yükseltmesi yapılmadan çoğu araştırma grubu tarafından uygulanabilir.

ApoE'de Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler

Bu protokol, sıçanlarda, femur damarlarının sıkıştırılması ve bağlanması yoluyla yüzeysel inferior epigastrik damarlardan kan akışının iyi bir şekilde görselleştirilmesine ve manipüle edilmesine izin veren fasyokutanöz fleplerin toplanmasını, dikilmesini ve izlenmesini açıklar. Bu, iskemik ön koşullandırmayı içeren çalışmalar için kritik öneme sahiptir.

Bir sıçan modelinde iskemik ön koşullandırma etkilerini incelemek için yüzeysel inferior epigastrik arter aksiyel flep

Öğrenin, sıçan sırt deri katlama odasında iskemik kaslı deri flep modeli oluşturmayı. İntravital floresan mikroskopi ile mikrosirkülasyonu 10 gün boyunca gerçek zamanlı gözlemleyin ve doku canlılığını değerlendirin.

Mouse Dorsal Skinfold Odası'nda İskemik Doku Yaralanması: Bir Cilt Flap Model Akut Kalıcı iskemisi Araştırma

Daha fazla video keşfet