Name: Histolojik ve Fonksiyonel Özellikleri: Methylnitrosourea (MNU) Retina Dejenerasyonu ve Rejenerasyon Zebra balığı -kaynaklı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Keşfedin MNU ile yetişkin Danio rerio'da retina dejenerasyonu ve rejenerasyonunu tetikleme yöntemini. Optokinetik yanıt ölçümü ve immünohistokimyasal analizlerle görsel işlev ve morfolojik değişiklikleri nicelendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Mükemmel teknik yardımları için Monika Kilchenmann, Federica Bisignani ve Agathe Duda'ya teşekkür ederiz.

Bütün deneyler Oftalmik ve Vizyon Araştırma Derneği Vizyon Araştırma ve Oftalmoloji (ARVO) Hayvanların Kullanım Bildirimi yapıştırılır. 1. Hayvanlar <ol><li> 26.5 ° C&#39;lik bir sıcaklıkta ve 14/10 saatlik aydınlık / karanlık döngüsünde 15, su içinde standart koşullar altında, 6-12 ay arasında değişen AB (Oregon) soyunun, vahşi tip zebrafish (Br.rerio) koruyun. </li><li> Kanton Veteriner Dairesi tarafından onaylandıktan sonra hayvan deneyleri için ilgili kurumların hayvan bakım yönergeleri izleyin. </li></ol> 2. MNU Tedavi <ol><li> N-metil-N -nitrosourea (ÇUB) 150 mg / L kuru madde ihtiva eden su hazırlayın. DİKKAT! ÇUB toksiktir; Doğmamış çocuğa kanser, kalıtsal genetik hasara veya zarar görmesine neden olabilir. </li><li> , Oda sıcaklığında 60 dakika boyunca MNU ihtiva eden su içinde zebrafish inkübe edin. </li><li> Hızlı bir şekilde Zebra balığı durulayıntatlı su ve MNU olmadan yeni bir balık tankına balık koymak. Deneyler için arzu edildiği sürece, standart koşullar altında balık koruyun. </li></ol> 3. Görme Keskinliği Ölçümü <ol><li> , Optomotor sistemini başlatmak menüden &#39;test&#39; seçin ve seçenekleri ayarlayın &quot;Basit Staircase&quot;, &quot;Keskinliği (Frekans)&quot; ve &quot;Tesadüf / Ayrı&quot; 16. </li><li> Optomotor sistemi üzerinde 1 m ile yaklaşık 500 ml su ile doldurulmuş bir infüzyon şişesi takın. </li><li> Sınav odasında bir Zebra balığı yerleştirin ve infüzyon şişesi bağlayın. Optomotor sistemde muayene odasına yerleştirin. </li><li> Ölçümü başlatın ve bilgisayar ekranında gerçek zamanlı olarak göz hareketi gözlemlemek. Böylece, olumlu bir yanıt (&quot;evet&quot;) olumsuz yanıt (&quot;hayır&quot;) ise, doğru yönde ardışık sakkadlardan olarak tanımlanır istasyonu ile gözlenen benzeyen rastgele göz hareketleri temsilary ızgaralar. Zebra balığı sergi gözünde ise üç veya daha fazla sonraki optokinetik tepkiler (OKR), basın &#39;evet&#39;; değilse, basın &#39;hayır&#39;. </li><li> Menüsünden &quot;Sonuçlar&quot; başlığı altında, optokinetik uyaranın uzaysal frekansa eşik belirleyerek yazılım tarafından hesaplanmıştır görme keskinliği, ayıklayın. </li></ol> 4. Histoloji <ol><li> Etil 3-aminobenzoat metansülfonat (200-300 mg / L) bir doz aşımı zebrafish Euthanize ve gözleri enükleasyonu. </li><li> Bir kademeli alkol serisi içinde dehidre örnekleri daha sonra 12 saat boyunca 4 ° C&#39;de fosfat tamponlu tuz içerisinde% 4 paraformaldehit (PFA) (PBS) içinde bütün gözleri saptamak ve. </li><li> Parafinde örnekleri embed optik sinir başı (OSB) ile 5 mikron bölümleri kesip bir cam slaytlar monte ederek. </li><li> 4 dakika boyunca hemalum ile deparaffized parafin kesitleri Leke ve% 0.2 hidroklorik ACI, ardından damıtılmış su içinde slaytlar iki kez daldırmad ve% 0.8 amonyak. En az 10 dakika (H &amp; E) musluk suyu hemalum boyamanın geliştirilmesi sonra 3 dakika boyunca eosin ile bölümleri Leke. </li><li> Orta montaj susuz slaytlar embed ve ışık mikroskobu altında slaytlar gözlemlemek. </li></ol> 5. İmmünhistokimya <ol><li> Terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP çentik uç etiketleme (TÜNEL) <ol><li> 15 dakika boyunca, oda sıcaklığında 20 ug / ml proteinaz K ile inkübe bölümleri deparafınize edildi. Tris ile bölümlerinin üç kez yıkayın 5 dakika her biri için tuzlu su (TBS) tamponlu. </li><li> 60 dakika boyunca 37 ° C&#39;de nemlendirilmiş bir haznede 50 ul TÜNEL tepkime karışımıyla (% 10 etiketleme çözeltisi ve% 90 enzim solüsyonu) ile inkübe bölümleri. 5 dakika her biri için üç kez TBS ile yıkayın. </li><li> DAPI içeren yerleştirme ortamı ile slaytlar takın ve flöresanlı mikroskop altında slaytlar izleyin. </li></ol></li><li> Prolifere Hücre Nükleer Antijen (PCNA) boyama <ol><li> 3 dakika boyunca antijen geri alma tamponu (Tris-EDTA +% 0.05 Tween 20, pH 9.0) içinde deparafinize edilmiş kesitlerin kaynatılır ve 5 dakika her biri için üç kez TBS ile yıkayın. 100 ul, 1 saat boyunca oda sıcaklığında çözeltisi (TBS +% 10 normal keçi serumu +% 1 sığır serum albümini, pH 7.6) ile bloke ile bloklayın. </li><li> Gece boyunca 4 ° C&#39;de nemlendirilmiş bir haznede 200 seyreltme: 1 anti-PCNA primer antikorlar ile Leke. 5 dakika her biri için TBS + Tween 20 ile üç kez yıkayın. </li><li> 1 saat boyunca oda sıcaklığında 500 seyreltme: 1 uygun sekonder antikor ile algılamayı bitirin. </li><li> DAPI içeren yerleştirme ortamı ile slaytlar takın ve flöresanlı mikroskop altında slaytlar izleyin. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Haddad, S., Chen, C. A., Santangelo, S. L., Seddon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+age-related+macular+degeneration%3A+a+review+of+progress+to+date%5BTitle%5D)+AND+%22Surv.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The genetics of age-related macular degeneration: a review of progress to date.</a> Surv. Ophthalmol. 51 (4), 316-363 (2006).</li>
<li>Bhatti, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinitis+pigmentosa%2C+pigmentary+retinopathies%2C+and+neurologic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Neurol.+Neurosci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Retinitis pigmentosa, pigmentary retinopathies, and neurologic diseases.</a> Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 6 (5), 403-413 (2006).</li>
<li>Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Retinitis pigmentosa.</a> Lancet. 368, 1795-1809 (2006).</li>
<li>Tsubura, A., Yoshizawa, K., Kuwata, M., Uehara, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+retinitis+pigmentosa+induced+by+MNU%3B+disease+progression%2C+mechanisms+and+therapeutic+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Histol.+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Animal models for retinitis pigmentosa induced by MNU; disease progression, mechanisms and therapeutic trials.</a> Histol. Histopathol. 25, 233-248 (2010).</li>
<li>Machida, K., Urano, K., Yoshimura, M., Tsutsumi, H., Nomura,, Usui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carcinogenic+comparative+study+on+rasH2+mice+produced+by+two+breeding+facilities%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Carcinogenic comparative study on rasH2 mice produced by two breeding facilities.</a> J. Toxicol. Sci. 33, 493-501 (2008).</li>
<li>Morton, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Methyl-N-Nitrosourea+%28MNU%29%3A+A+positive+control+chemical+for+p53%2B%2F-+mouse+carcinogenicity+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Pathol%22%5BJournal%5D)">N-Methyl-N-Nitrosourea (MNU): A positive control chemical for p53+/- mouse carcinogenicity studies.</a> Toxicol. Pathol. 36, 926-931 (2008).</li>
<li>Terracini, B., Testa, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carcinogenicity+of+a+single+administration+of+N-nitrosomethylurea%3A+a+comparison+between+newborn+and+5-week-old+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Carcinogenicity of a single administration of N-nitrosomethylurea: a comparison between newborn and 5-week-old mice and rats.</a> 24, 588-598 (1970).</li>
<li>Zulliger, R., Lecaudé, S., Eigeldinger-Berthou, S., Wolf-Schnurrbusch, U. E. K., Enzmann, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caspase-3-independent+photoreceptor+degeneration+by+N-methyl-N-nitrosourea+%28MNU%29+induces+morphological+and+functional+changes+in+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch.+Clin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Caspase-3-independent photoreceptor degeneration by N-methyl-N-nitrosourea (MNU) induces morphological and functional changes in the mouse retina.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 249, 859-869 (2011).</li>
<li>Tappeiner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+rod+regeneration+in+a+novel+zebrafish+retinal+degeneration+model+using+N-methyl-N-nitrosourea+%28MNU%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Characteristics of rod regeneration in a novel zebrafish retinal degeneration model using N-methyl-N-nitrosourea (MNU).</a> PLOS One. 12, (2013).</li>
<li>Bilotta, J., Saszik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+visual+system%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model visual system.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 19, 621-629 (2001).</li>
<li>Fleisch, C., Neuhauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+Behavior+in+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Visual Behavior in Zebrafish.</a> Zebrafish. 3, 191-201 (2006).</li>
<li>Hodel, C., Neuhauss, S. C. F., Biehmaier, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+and+development+of+light+adaptation+processes+in+the+outer+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22InterScience%22%5BJournal%5D)">Time course and development of light adaptation processes in the outer zebrafish retina.</a> InterScience. 288, 653-662 (2006).</li>
<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends Genet. 29 (11), 611-620 (2013).</li>
<li>Brockerhoff, S. E., Fadool, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+photoreceptor+degeneration+and+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Genetics of photoreceptor degeneration and regeneration in zebrafish.</a> Cell Mol. Life Sci. 68, 651-659 (2011).</li>
<li>Brand, M., Granato, M., Nüsslein-Volhard, C. Keeping and raising zebrafish. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBrand%2C+M+%22Zebrafish%3A+A+Practical+Approach%22">Zebrafish: A Practical Approach</a>. Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. , IRL Press. 7-38 (2002).</li>
<li>Tappeiner, C., Gerber, S., Enzmann, V., Balmer, J., Jazwinska, A., Tschopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+acuity+and+contrast+sensitivity+of+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Zool%22%5BJournal%5D)">Visual acuity and contrast sensitivity of adult zebrafish.</a> Front. Zool. 9 (1), 10(2012).</li>
<li>Bailey, T. J., Fossum, S. L., Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inhibitor+of+phagocytosis%2C+O-phospho-L-serine%2C+suppresses+M%C3%BCller+glia+proliferation+and+cone+cell+regeneration+in+the+light-damaged+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">The inhibitor of phagocytosis, O-phospho-L-serine, suppresses Müller glia proliferation and cone cell regeneration in the light-damaged zebrafish retina.</a> Exp. Eye Res. 91, 601-612 (2010).</li>
<li>Nelson, C. M., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M%C3%BCller+glia+as+a+source+of+neuronal+progenitor+cells+to+regenerate+the+damaged+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Müller glia as a source of neuronal progenitor cells to regenerate the damaged zebrafish retina.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 723, 425-430 (2012).</li>
<li>Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantification+of+adult+and+developing+mouse+spatial+vision+using+a+virtual+optomotor+system%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system.</a> Invest. Ophthalmol Vis. Sci. 45 (12), 4611-4616 (2004).</li>
<li>Beck, J. C., Gilland, E., Tank, D. W., Baker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+the+ontogeny+of+optokinetic+and+vestibulo-ocular+behaviors+in+zebrafish%2C+medaka%2C+and+goldfish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Quantifying the ontogeny of optokinetic and vestibulo-ocular behaviors in zebrafish, medaka, and goldfish.</a> J. Neurophysiol. 92 (6), 3546-3561 (2004).</li>
<li>Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Burket, C. T., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+Inner+Retinal+Neurons+after+Intravitreal+Injection+of+Ouabain+in%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regeneration of Inner Retinal Neurons after Intravitreal Injection of Ouabain in.</a> Zebrafish. J. Neurosci. 27, 1712-1724 (2007).</li>
<li>Sherpa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganglion+cell+regeneration+following+whole-retina+destruction+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Ganglion cell regeneration following whole-retina destruction in zebrafish.</a> Dev. Neurobiol. 68, 166-181 (2008).</li>
<li>Yurco, P., Cameron, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+M%C3%BCller+glia+to+retinal+injury+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Responses of Müller glia to retinal injury in adult zebrafish.</a> Vision Res. 45, 991-1002 (2005).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Daha önce, bizim grup Zebrafish sistemine 9 içine kemirgenler fotoreseptör dejenerasyonu MNU modelini transfer etti. Takip eden olaylar anlatılmış ve 30 güne kadar takip edildi. Bu süre içinde tam retina morfolojik dejenerasyon ve rejenerasyon ilk tedaviden sonra meydana geldi. İlk olarak, histoloji azalmış bir çubuk hücre Buna 8. günde en az on gün 3 saymak ortaya, TUNEL boyama 3 gün MNU tedaviden sonra çubuk fotoreseptör apoptozisini tanımlar. Rejenerasyon Prolifere eden hücreler, bu çoğalması artmıştır INL...

Vizyon insan için en önemli duyu ve değer düşüklüğü, yüksek sosyo-ekonomik etkisi vardır. Gelişmiş dünyada, retina dejeneratif hastalıklar yaşlı yetişkinler 1 arasında görme kaybı ve körlük önde gelen nedenidir. En dejeneratif retina hastalıklarının nedeni kısmen anlaşılır ve tedavi çözümleri kayıp vizyon kazanmak için çok sınırlı. Retinitis pigmentosa N -nitrosourea (ÇUB), retinal dejenerasyon meydana metiltio, primer fotoreseptör kaybı 2-3. N retinal dejeneratif bir hastalığın tipik bir örneğidir ve bu nedenle yaygın primer fotoreseptör hücre ölümü ile 4 hastalıkların modellemek için kemirgenlerde kullanılır. Bu bir alkilleyici madde ve genellikle 5-7 maruz bir kaç ay sonra görünür huylu ve kötü huylu tümörler, yol açar. Buna ek olarak, kısa süreli bir gözlem süresi içinde özel bir fotoreseptör hücre ölümüne neden olur. Böylece, retina tabaka Yapıdaki kaybıre ve anlamlı bir retina incelmesi konsantrasyona bağlı bir şekilde tespit edilmiştir. Retina glia hücreleri aktive edildi, ancak retina pigment epiteli (RPE) hiçbir değişiklik bulundu. Endoplazmik retikulum (ER), stres ile ilgili apoptoz retinada 8 ÇUB etkisinin en temel bir yol olarak görünmektedir. Biz son zamanlarda Zebrafish 9 fotoreseptör dejenerasyonu ikna etmek için bir kimyasal model olarak MNU girmiştik. Diğer nedenler arasında, Zebra balığı (Br.rerio) çünkü diğer omurgalıların 10 o kendi görsel sistemin benzerlikler görsel araştırma önemli hale gelmiştir. Dış retina ultraviyole, kısa, orta tepe hassasiyetleri ve görünür spektrumu uzun dalga boyu ve bir çubuk fotoreseptör türüyle dört farklı koni gruba ayrılabilir olabilir fotoreseptörleri içerir. Iç nükleer tabaka (INL) olarak, bipolar, yatay ve amacrine internöron hücre gövdeleri, wel olarak bulunurlarMuller, glia hücreleri, hücre soma olarak L.. Dış pleksiform katman (OPL) içinde fotoreseptör ve iç retina arasındaki sinaptik iletişim lensin en yakın hücre tabakası ise optik sinir ve optik sistemini içeren uzun aksonlar oluşturan bileşenler ve ganglion hücre tabakası (GC) olan oluşturulmaktadır . Salgı bezleri ve iç nükleer tabakadaki hücrelerin arasında olduğu, sinaptik temasların olarak iç pleksiform tabakasındaki (IPL) 11 oluşur. RPE nörosensöriyel retina dışında yer alır ve uzun apikal mikrovilluslu 12 ile fotoreseptör dış segmentleri çevreler. Ayrıca, Zebrafish yüksek rejeneratif ve lezyonlu beyin, retina, omurilik, kalp ve diğer dokuları 13 yetiştirmeleri için yapabiliyor. Retinal hasar oluştuğunda, Muller hücreleri olduğu düşünülmektedir INL hücreleri, aktive edilmiş ve çeşitli retinal hücre tipleri içine ayırt etmek için bir potansiyele sahiptir. Buna ek olarak, aynı zamanda ONL bulunan çubuk progenitörlerle üretir. Başka bir nedenleYeni hücreler ile yetişkin zebrafish retina malzemeleri urce siliyer marjinal bölgesidir. Bu kaynak, sürekli olarak büyüyen Zebrafish göz 14 çubuk fotoreseptör sabit bir yoğunluğu elde etmek için gereklidir. ÇUB modeli retina dokusu için basit ve tekrarlanabilir bir dejenerasyon / yenilenmesi yaklaşımı olarak da kullanılabilir. Nedeniyle Zebra balığı biyolojik süreçler bazı benzerlikleri ve insanlarda bu ilgili hücre ölümü yolları belirlemek için kapıları açmak ve potansiyel nöroprotektif ilaç ekrana. Bizim gruptan bir önceki çalışmaya göre, biz şimdi retina de- ve laboratuvar videoları 9 uygun fonksiyonel değişiklikler dahil olmak üzere izleyen rejenerasyon bu MNU kaynaklı zebrabalıkları modelinin yöntemlerini göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>Asetik asit</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Amonyak</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>294993</td><td>%0.80</td></tr> <tr><td>Sığır serum albümini (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>05470</td><td></td></tr><tr><td>Dako Pen</td><td>Dako, Glostrup, Danimarka</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>DAPI montaj ortamı</td><td>Vector Labs, Burlingame, CA, ABD</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>45260</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>2860</td><td>%100, %96, %70</td></tr> <tr><td>Etilendiamintetraasetik asit (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>ED</td><td></td></tr><tr><td>Etil 3-aminobenzoat metansülfonat tuzu</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>E10521</td><td>Trikain</td></tr><tr><td>Eukitt</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>3989</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-tavşan Alexa 594</td><td>Life Technologies, Zug, İsviçre&nbsp;</td><td>A11012</td><td></td></tr><tr><td>Keçi normal serumu</td><td>Dako, Glostrup, Danimarka</td><td>X0907</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>320331</td><td>%0.20</td></tr> <tr><td>Yerinde Hücre Ölümü Tespit Kiti</td><td>Roche Uygulamalı Bilimler, Rotkreuz, İsviçre</td><td>11684795910</td><td>TUNEL Kiti</td></tr><tr><td>Mayer'in hemalum solüsyonu</td><td>Merck, Darmstadt, Almanya</td><td>109249</td><td></td></tr><tr><td>Metilnitrosourea (MNU)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>N4766</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>OptoMotry</td><td>SerebralMekanik, Lethbridge, AB, Kanada</td><td>n.a.Paraformaldehit</td><td></td></tr> <tr><td>(PFA)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>P5368</td><td></td></tr><tr><td>Proteinaz K</td><td>Dako, Glostrup, Danimarka</td><td>S3004</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan anti-PCNA&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji, Santa Cruz, ABD</td><td>SC-33756</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus cam kaydıraklar</td><td>Gehard Menzel GmbH, Braunschweig, Almanya</td><td>10149870</td><td></td></tr><tr><td>Tris tamponlu salin (TBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>P5912</td><td></td></tr><tr><td>Trizma tabanı</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Ksilen</td><td>Sigma-Aldrich, Buchs, İsviçre</td><td>534056</td><td></td></tr><tr><td>Zebra balığı (Danio rerio) AB (Oregon) türü</td><td>Fribourg Üniversitesi, Biyoloji Bölümü</td><td>n.a.Kendi</td> <td>balık tesisi</td></tr></tbody></table>

histolojik ve fonksiyonel Özellikleri: methylnitrosourea (mnu) retina dejenerasyonu ve rejenerasyon zebra balığı -kaynaklı

Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics

Endüstriyel dünyada görme kaybının çoğunluğu için fotoreseptör hasar hesabı ile sonuçlanan retina dejeneratif hastalıklar, örneğin retinitis pigmentosa,. Hayvan modelleri, bu tür hastalıkları incelemek için temel bir öneme sahiptir. Bu bağlamda, N-metil-N -nitrosourea (ÇUB) yaygın olarak kemirgenlerde kullanılmıştır fotoreseptör spesifik toksin farmasötik olarak retina dejenerasyonuna tetiklemek için karıştırılabilir. Daha önce, Zebra balığı bir MNU kaynaklı retina dejenerasyonu modeli, görsel araştırmalar başka popüler model sistem kurduk. Memelilere büyüleyici bir fark yetişkin zebrabalıkları retina ve hasar sonra rejenerasyon kalıcı nöron olduğunu. Biz yetişkin zebrabalıkları görme keskinliği ölçümleri istihdam var bu gözlemi ölçmek için. Böylece, optokinetik refleks olmayan anestezi balık fonksiyonel değişiklikleri izlemek için kullanılmıştır. Bu immünhistokimyasal staini yanı sıra histoloji ile takviye edildiapoptosis için ng (TÜNEL) ve çoğalması (PCNA) gelişmekte morfolojik değişiklikler ilişkilendirmek için. Özet olarak, fotoreseptör apoptoz üç gün dış çekirdek katmanında (ONL) hücrelerin belirgin bir azalma izler ÇUB tedaviden sonra ortaya çıkar. Bundan sonra, iç nükleer tabaka (INL) ve onl hücre çoğalması gözlenmiştir. Burada, bir tam histolojik kalmaz, aynı zamanda etkin bir yenilenmesi, 30 günlük bir süre boyunca oluşturduğunu ortaya koymuştur. Şimdi ölçmek ve video formatında MNU kullanarak Zebra balığı retina DE- ve yenilenmesini takip yöntemleri açıklamaktadır.

Görme keskinliği: Deneysel set-up [mekansal frekans: 0.042 daireler / derecesi (c / d); kontrast: 100%; sürüklenme hızı: 20 derece / saniye (d / src); arka ışık parlaklık: 152 cd / m 2] Bu çalışmada, yetişkin zebrabalıkları OKR değerlendirmesini sağladı. Iyi prosedürü tolere her zebrabalıkları, 10 dakika - VA ölçüm süresi ortalama yaklaşık 5 oldu. MNU maruz önce görme keskinliği 0.577 ± 0.014 devir / derece (c / d) idi. 1 150 mg / L MNU'nun uygulamasından sonra gö...

Bu yazıda retina de- ve rejenerasyon ve yetişkin zebrabalıkları N-metil-N -nitrosourea kullanarak görme fonksiyonu üzerindeki etkisinin ölçümü göstermektedir. Görme keskinliği kaybı ve azalmış fotoreseptör numaraları iç nükleer tabakada çoğalması ile takip edildi. Komple morfolojik ve fonksiyonel rejenerasyon 30 gün ilk tedaviden sonra meydana geldi.

Histolojik ve Fonksiyonel Özellikleri: Methylnitrosourea (MNU) Retina Dejenerasyonu ve Rejenerasyon Zebra balığı -kaynaklı

Retinal degenerative diseases, e.g. retinitis pigmentosa, with resulting photoreceptor damage account for the majority of vision loss in the industrial ...

Bu prosedürün genel amacı, n metil ve nitro ueaa kullanarak yetişkin zebra balığında retina dejenerasyonunu ve ardından gelen rejenerasyonu indüklemektir. Bu, ilk olarak yabani tip zebra balığının N metil, N azot üre veya MNU içeren suda kuluçkaya yatırılmasıyla gerçekleştirilir. Bir sonraki görme fonksiyonu, optokinetik yanıtın veya OKR'nin ölçülmesi ve farklı zaman noktalarında görme keskinliğinin hesaplanmasıyla ölçülür.Tedavi sonrası, zebra balığı ötenazi yapılır ve retina dokusundaki morfolojik değişiklikleri gözlemlemek için h ve e boyama kullanılarak histolojik incelemeler için gözler çekirdeklenir. Son olarak, hücre ölümü ve proliferasyonu için spesifik boyama ile retinada hücresel değişiklikler görselleştirilir. Sonuç olarak, görme keskinliğinin ölçülmesi ve morfolojik ve hücresel değişikliklerin ölçülmesi, retina D ve rejenerasyonu görselleştirmek için kullanılır.Bu farmakolojik modelin temel avantajı, kullanımının basit ve hızlı olması ve yetişkin zebra balıklarında güvenilir bölgesel dejenerasyon ve rejenerasyona neden olmasıdır: NM, metil, n, nitroso, üre veya MNU muamelesini gerçekleştirmek için, litre başına 150 miligram kuru MNU içeren su hazırlayarak başlayın. Nm m

methylnitrosourea-mnu-induced-retinal-degeneration-regeneration

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Çoklu ışık zarar protokolleri zarar fotoreseptör tarif ve dolayısıyla yetişkin zebrafish bir retina rejenerasyon tepki neden olmuştur. Bu protokol, pigmentli hayvanlarda kullanılabilen geliştirilmiş bir yöntem açıklanır ve bu çubuk ve tüm retinada arasında koni fotoreseptörlerin büyük çoğunluğu zarar verir.

Yetişkin Zebra balığı Retina Rejenerasyon Çalışmaları Kullanım için Yeni Bir Işık Hasar Paradigma

Nörolojik ve non-nörolojik hastalıkların çok zebra balığı model yetişkin balık ziyade embriyo / larva incelenir için, erişkin zebrabalıkları hastalık modellerinde uygulanabilen bir nicel yan hat rejeneratif deneyi geliştirilmiştir. Deney 1) neuromast ve 2) tek tek saç hücre düzeyde çözünürlüğü dahil.

Yetişkin Zebra balığı Lateral Hat Rejenerasyon için bir Deneyi

Zebra balığı yetişkin böbrek böbrek yenilenmesi ve hastalık çalışmalar için mükemmel bir sistemdir. Böyle bir araştırmanın önemli bir yönü nefron yapısı ve fonksiyonu değerlendirmesidir. Bu protokol nefron borucuk kompozisyonunun ve böbrek geri emiliminin değerlendirilmesi için uygulanabilecek çeşitli yöntemler anlatılmaktadır.

Yetişkin Zebra balığı Böbrek Nefron Kompozisyon ve Fonksiyon Analizi

Zebra balığı safra güdümlü karaciğer rejenerasyonunun altında yatan moleküler mekanizmaları değerlendirmeye yardımcı olmak için, nitroredüktaz eksprese eden hepatositlerin metronidazol tedavisi üzerine genetik olarak ablasyon edildiği bir karaciğer hasarı modeli oluşturduk.  Bu protokolde, hepatosit ablasyonunun ve biliyer güdümlü karaciğer rejenerasyonunun nasıl ustaca manipüle edileceğini, izleneceğini ve analiz edileceğini açıklıyoruz.

Biliyer odaklı Karaciğer Rejenerasyon Eğitim Zebra balığı hepatosite özgü Ablasyon

teratojen Pozlama doğum kusurlarına neden olabilir. Balığı kimyasal teratojenik potansiyeli belirlemek için faydalıdır. Biz maruz kalma farklı zamanlarda da nitrit değişik düzeylerde embriyoların açığa tarafından zebrabalıkları yararını göstermektedir. Biz nitrit toksik ve ağır gelişimsel bozukluklara neden olduğunu göstermektedir.

Bir Model Olarak Zebra balığı Nitrit teratojenik potansiyelini değerlendirmek için

Zebra balığı retina dejenerasyonu/rejenerasyon omurgalılarda mekanizmaları incelemek için popüler bir hayvan modelidir. Bu iletişim kuralı yerelleştirilmiş yaralanma dış retina iç retina en az hasar ile kesintiye neden yöntemi açıklanır. Daha sonra in vivo retina morfoloji ve Müller glia yanıt retina yeniden oluşturma işlemi boyunca izliyoruz.

Bir lazer kaynaklı retina dejenerasyonu, Zebra balığı rejenerasyon modelini Müller Glia hücre aktivasyonu

Bu protokol, transgenik zebra balığı modeli kullanarak retinal pigment epitelini (RPE) genetik olarak ablate etme metodolojisini açıklamaktadır. Farmakolojik bileşikler kullanarak sinyal yolu modülasyonunu içerecek şekilde protokolün uyarlanması kapsamlı bir şekilde detaylandırılmıştır. Pigmentasyona dayalı RPE rejenerasyonunu ölçmek için bir MATLAB platformu geliştirildi ve sunuldu ve tartışıldı.

Zebra Balığı Retinal Pigment Epitelinin Rejenerasyonunu İncelemek için Nitroredüktaz / Metronidazol Aracılı Ablasyon ve Bir MATLAB Platformu (RpEGEN)

Insanlarda akut böbrek hasarı (AKI), böbrek nefron oluşturan epitel hücrelerin zarar görmesine neden olduğu yaygın bir klinik sorundur ve AKI, yüksek ölüm oranları% 50-70 ile...

Zebra balığı Pronephros Lazer Ablasyon Böbrek Epitel Rejenerasyon Eğitim

, Canlı hayvan içinde kök hücre farklılaşması çalışmak için cazip bir model planarian flatworm. Yenileme, temel laboratuvar kolayca yapılır basit amputasyon deneyleri ile çalışılmış ve farmakolojik ve genetik...

Farmakolojik ve Fonksiyonel Genetik Tahliller Planarian Rejenerasyon işleyin<emJaponica> Dugesia</em

Intravitreal antisens morpholinos enjekte ve retina içine electroporating koşullu yetişkin zebrafish retinanın bir hedef protein ifade demonte bir yöntem açıklanmıştır. Ortaya çıkan protein yenileyici veya sağlam retina proteinin rolünü test edilmesine imkan sağlayan birkaç gün, nakavt edilir.

Morpholinos in vivo Elektroporasyon Yetişkin Zebra balığı Retina

Keşfedin MNU ile yetişkin Danio rerio'da retina dejenerasyonu ve rejenerasyonunu tetikleme yöntemini. Optokinetik yanıt ölçümü ve immünohistokimyasal analizlerle görsel işlev ve morfolojik değişiklikleri nicelendirin.

Histolojik ve Fonksiyonel Özellikleri: Methylnitrosourea (MNU) Retina Dejenerasyonu ve Rejenerasyon Zebra balığı -kaynaklı

Daha fazla video keşfet