Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

Bu prosedürün genel amacı, ilacın farmakokinetik profilini analiz etmek için karotis arter yoluyla ilgilenilen bir ilacı infüze etmektir. Bu, önce polietilen borudan özel bir kateter şekillendirilerek ve ardından kateterin fare karotis arteri içinde sabitlenmesiyle gerçekleştirilir. Daha sonra, fare karotis arter kateteri aracılığıyla otomatik bir infüzyon pompasına bağlanır.

Son adımda, ilaç fareye sabit bir oranda infüze edilir ve düzenli aralıklarla kan örnekleri toplanır. Sonuç olarak, sıvı kromatografisi, kütle spektrometresi, doku ve plazma örnekleri içindeki ilacın konsantrasyonunu belirlemek için kullanılır. Bu tekniğin bolus, intraperitoneal veya kuyruk ven enjeksiyonu veya juguler infüzyon gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, klinik infüzyon hızlarını temsil etmesi ve genellikle juguler yerleştirmeden daha kolay gerçekleştirilmesidir.

Bu yöntem, bir ilacın in vivo dağılımının ne olduğu gibi farmakolojideki temel soruları cevaplayabilir veya bir inhibitör veya modülatörün proteinin işlevini etkileyip etkilemediğini belirleyebiliriz. Deney için bir kateter hazırlamak için, önce bir bunsen brülöründe düşük sabit bir alev oluşturun. Ardından polietileni yumuşatmak için aleve yakın bir boru parçası tutun.

Boru erimeye başladığında, yaklaşık 0,25 milimetre çapında ince bir boru kesiti oluşturmak için iki ucu yavaşça ayırın. Daha sonra, ince kesit boyunca boruda yaklaşık 0,75 santimetre eğimli bir uç kesin ve ardından ucu alevden hızlı bir şekilde geçirerek hafifçe yuvarlaklaşmasını ve genişlemesini sağlayın. Uç hafifçe geriye doğru asılacak ve bu da artere yerleştirme sırasında borunun sabitlenmesine yardımcı olacaktır.

Boruyu bir kateter yapmak için incelmeye başladığı noktadan 6.0 santimetre kesin ve ardından körelmiş bir iğne ile donatılmış bir şırıngayı 200 mikrolitre heparin çözeltisi ile doldurun. İğneyi kateterin geniş ucuna yerleştirin ve kateteri heparin ile doldurun. Kabarcıklardan kaçınmaya özen gösterin.

Daha sonra karotis arteri izole etmek için iğneyi ve kateteri steril bir yerde saklayın. Hayvanın boynunun orta hattının hafifçe sağında bir santimetre uzunlamasına bir kesim yaparak başlayın ve ardından yağ ve kası ayırmak ve trakeayı ortaya çıkarmak için forseps kullanın. Karotis arter trakeaya paralel olarak uzanır.

Daha sonra, arterin üzerindeki fasyayı dikkatlice ayırın ve ardından VA'nın sinirini hafifçe kenara çekin. Forsepsleri karotis arter ile VA siniri arasındaki boşluğa yerleştirin ve faciada bir boşluk oluşturmak için forsepsleri yavaşça açın. Siniri dikkatlice arterden uzaklaştırın, gırtlağın yakınındaki ön uçtaki çataldan en uzak açıkta kalan arka uca kadar bir boşluk bırakın ve en az üç milimetre uzunluğunda bir arteri izole edin.

Daha sonra arterin altına ipek bir dikiş ipliği çekmek için forseps kullanın ve arteri mümkün olduğunca ön uca doğru kapatmak için güvenli bir düğüm atın. İkinci bir iplik yerleştirdikten sonra, arteri mümkün olduğunca arka uca doğru geçici olarak kapatmak için geri çekilebilir bir düğüm atın. Ardından, yerleştirmeden sonra kateteri hızlı bir şekilde sabitlemek için kullanılacak ilk iki dikiş arasına çok gevşek bir düğüm atmak için üçüncü bir iplik kullanın.

Kateteri yerleştirmek için, arteri hafifçe gergin çekmek için alt dikiş düğümünü tutun. Daha sonra arteri yukarıda ve ön dikişe çok yakın bir yere yerleştirin. Çok derin kesmemeye dikkat edin.

Açıklığın engellenmediğinden emin olmak için yarığı kontrol edin. Heparin dolu kateteri şırınga iğnesinden çıkarın ve ardından büyük hava cepleri oluşturmamaya dikkat edin. Her iki uçta da, eğimli ucu aşağı doğru ve baskın ele doğru hafifçe rahat bir açıyla konumlandırmak için kateteri manipüle edin.

Daha sonra, dikişe tutunurken, arteri hafifçe gergin tutmak için, kateteri yavaşça yarığa yerleştirin. Daha sonra ön sütür düğümünü tutmak için forsepsleri kullanın ve arteri kateterin üzerinden yavaşça aşağı çekin. Kateteri ve ön sütürü dikkatlice serbest bırakın.

Ardından, kateterden akışı engellememeye dikkat ederken, kateteri kateterin girişine yakın bir yerde sabitlemek için orta düğümü sıkın. Orta sütür ile sıkı bir üçlü düğüm yapın ve ardından kateteri arter girişinin altındaki yerine sabitlemek için ön sütürü kullanın. Şimdi, kabarcık oluşturmamaya dikkat ederek katetere bir salin kablosu takmak için bir konektör tapası kullanın.

Daha sonra posterior sütürün uçlarını kavrayın ve düğümü serbest bırakmak için hafifçe çekin, ipliği çıkarmadan sütürü arterden aşağı ve kateterin ucunun üzerinden geçirin. Akış engellenmemiş göründüğünde kan katetere akmalıdır. Orta sütürün biraz üzerine ek bir düğüm atmak için posterior sütürden gelen ipliği kullanın.

Ardından kan kateterini yıkayın ve kateterin ucunu konektör tapasına yakın bir yere sıkıştırmak için bir kanama durdurucu kullanın. Kateterin ucunu kapatmak ve kanama durdurucuyu çıkarmak için konektörü bir port tapasıyla değiştirin. Daha sonra, ön sütürün hemen altındaki kateteri tutmak için bir çift forseps kullanın ve kateterin içine bir bükülme bastırmak için başka bir forseps kullanın, böylece ikinci bir bükülme oluşturduktan sonra kolayca yana doğru bükülür.

Aynı şekilde fareyi sol tarafına çevirin ve hayvanın kulağının altındaki ve sağ arkasındaki alanı %70 etanol ve povidon iyot ile temizleyin. Alan dezenfekte edildiğinde, ciltte dört milimetrelik küçük bir kesi yapın. Daha sonra doku flebini açık tutmak için forseps kullanın ve yanaktan boyundaki boşluğa bir kanal oluşturmak için deri altında künt içi boş bir prob çalıştırın.

Probun çıkması için dikkatlice bir alan boşaltmak için forsepsleri kullanın ve ardından port tapasını ve kateteri probdan çıkış deliğine yavaşça geçirin. Hayvanın 30 ila 60 dakika iyileşmesine izin verildikten sonra herhangi bir kan damarını veya organını ezmemeye veya daraltmamaya dikkat ederek, 40 santimetrelik bir polietilen boru parçasının bir ucuna körelmiş bir iğne ve diğer ucuna bir bağlantı portu takın. Daha sonra ilgilenilen ilacı, bilinen bir iç çapa sahip bir şırıngaya çizin.

İğneyi şırıngaya takın ve ilacı iğne ve borudan yükleyin. Şırıngayı pompaya yerleştirdikten sonra, üreticinin talimatlarına göre, pompayı, ilacın konektörden düzgün bir şekilde akması için hazırlayın. Hayvanı pompaya bağlamak için takın, fareyi sabit tutun ve kateteri port tapasına yakın bir yere sıkıştırmak için kanama durdurucuyu kullanın.

Son olarak, fişi şırıngaya ve boruya bağlı bir konektörle değiştirin. Kateterin hacmini temizlemek için hızlı bir şekilde hızlı bir pompa uygulayın ve ardından hemen istenen infüzyon hızına geçin. Bu ilk şekilde, juguler ven infüzyonu ve karotis arter infüzyonunu takiben Paklitaksel'in plazma konsantrasyonunun bir karşılaştırması gösterilmektedir.

İlaç konsantrasyonu, ilk yüksek hacimli infüzyonu takiben ilk 15 dakika içinde hızla düşer ve sonraki 150 dakika içinde dengelenir. Karşılaştırıldığında, zayıf bir infüzyondaki paklitaksel seviyeleri nispeten düşük başlar ve büyük olasılıkla infüzyonun erken dönemlerinde hattaki bir tıkanıklık nedeniyle test boyunca yukarı ve aşağı hareket eder. Burada, üç saatlik bir infüzyonun sonunda karaciğer, beyin ve kan plazmasındaki nispi paklitaksel seviyeleri gösterilmektedir Beklendiği gibi, hayvan, beyin dokusunda düşük konsantrasyonlarda ilaç ile birleştiğinde yüksek bir plazma protein bağlanması sergiler Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa 45 ila 60 dakika sürmelidir.

Videoyu izledikten sonra, bir karotis arterin nasıl izole edileceğini, bir kateterin nasıl yerleştirileceğini ve bir infüzyonun nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamalısınız.