4 Şubat 2015
Bu protokolün amacı bu tür farelerde prefrontal korteks-aracılı bilişsel esneklik değerlendirmek için görev (AST) vites dikkat set olarak bir davranış tahlil yapmaktır.
Bu prosedürün genel amacı, bir fare modelinde prefrontal korteksin aracılık ettiği bilişsel esnekliği ölçmektir. Bu, önce bir test faresine ikinci adımda bir yiyecek ödülü almak için küçük bir tencere kazmayı öğreterek gerçekleştirilir. Gömülü yiyecek ödülü, farenin ödülü art arda sekiz denemede hatasız bir şekilde doğru bir şekilde bulabilmesi ve alabilmesi için belirli bir bağlamsal kuyrukla ilişkilendirilir.
Ardından, ilgili boyutta bir dizi kuyruk ödülü eşleştirme değişikliği aracılığıyla. Fare, ödülü bulmak ve almak için alakasız boyutu görmezden gelirken kuyruğun ilgili boyutuna dikkat etmeyi öğrenir. Son adımda, ödül sıralaması eşleştirmesi, ödülün başarılı bir şekilde konumlandırılmasını ve alınmasını kolaylaştırmak için daha önce alakasız olan boyutun artık geçerli olması için değiştirilir.
Sonuç olarak, tersine çevirme aşamalarında deney grupları arasında kritere ulaşmak için yapılan ortalama deneme sayısındaki artış, bilişsel esneklik olarak yorumlanmaktadır. Bu yöntem, prefrontal korteksin aracılık ettiği bilişsel işlevin temel sinirbilimi hakkında fikir verebilse de, mükemmel translasyonel geçerliliğin yararıyla, transgenik veya kronik hastalık modelleri gibi diğer birçok model sisteme de uygulanabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni olan bireyler, fareler testin başlamasından önce yeterince alıştırılmamış veya eğitilmemiş olduğu için mücadele edeceklerdir.
Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan yeni bir doktora mezunu olan Jillian Heisler olacak ve her ikisi de laboratuvarda araştırma asistanı olan Lainey Ritas ve Juan Morales tarafından desteklenecek. Yiyecek kısıtlaması, test sırasında kullanımla ilişkili stresi azaltmak için her fareyi sekiz gün boyunca günde iki ila üç dakika tutar. Bir fare setinin test edilmesinde birden fazla deneyci yer alacaksa, her deneycinin işleme sürecine katıldığından emin olun.
İşlemin her günü için her bir hayvanın vücut ağırlıklarını tartın ve kaydedin. Daha sonra, iklimlendirmenin başlamasından dört gün öncesinden başlayarak, farelerin test kaplarına alışmasını sağlamak için her ev kafesinin önüne iki tepsi yerleştirin. Fareleri serbest beslenen vücut ağırlıklarının% 80 ila 85'inde tutmak için dört gün boyunca her gün iki gram yiyecek ve bir parça yiyecek ödülü ekleyin.
Daha sonra, alışma prosedüründen bir gün önce, eğitimin başlamasından iki gün önce ev kafesi yatağını değiştirin ve kırmızı ışık altındaki karanlık döngü sırasında, tanıdık bir öz koku vermek ve yeni bir ortamda olmanın stresini azaltmak için ev kafesinden az miktarda kirli yatak takımını odaya yayın. Odanın bekleme alanına su ile temiz bir tepsi yerleştirin ve her bir kapta yaklaşık 20 miligram yiyecek ödülü olacak şekilde test alanında yiyecek kısıtlaması için kullanılan iki tepsiyi yerleştirin. Ardından fareyi bekleme alanına aktarın ve başlangıç kapısını çıkarın.
Farenin odayı bir saat boyunca keşfetmesine izin verin. Fareleri test alanını ve saksıları sık sık keşfetmeye teşvik etmek için boş kalıplara sürekli olarak tahıl parçaları eklemek. Farenin alışma süresi boyunca deneyciyi de görebilmesine dikkat edin, böylece deneycinin varlığı ek bir stres faktörü olmaz.
Test sırasında. Eğitime 15. günde fareyi bekleme alanına yerleştirerek başlayın. Ardından, her biri bir yiyecek ödülü içeren boş kalıpları test alanına yerleştirin ve başlangıç kapısını kaldırın.
Bu yiyecek ödülü alımını birkaç kez tekrarladıktan sonra farenin her iki yiyecek ödülünü de alması için üç dakika bekleyin. Sonraki her denemede saksılara yavaş yavaş temiz kafes yatakları ekleyin. Denemeyi bitirmeden önce farenin her bir pottan yiyecek ödülünü alması için üç dakika beklemeye devam edin.
Fare her pottan yiyecek ödülünü aldıktan sonra, bir sonraki denemeye geçin. Fare kazma girişiminde bulunmazsa, yiyecek ödülü kısmen karşılandıktan sonra sağlanabilir. Her denemeden sonra, yiyecek ödülü tamamen karşılanana ve fare dolu bir tencereyi kazma yeteneğini güvenilir bir şekilde gösterene kadar yatak takımı eklemeye devam edin.
Test gününde işlem sırasında yiyecek ödülünü bulmak için, açlık nedeniyle test sırasında odaklanma eksikliğini önlemek için her fareye bir yiyecek ödülü verin. Sembol ayrımı aşamasında, yalnızca bir Q boyutu mevcuttur. Buradaki örnek, bir kazma substratıdır: yiyecek ödülünü tamamen ortamla kaplayın ve tüm saksıların üzerine tahıl tozu serpin.
Koku ilgili Q boyutu olduğunda, talaş yataklarının her iki tencerede de kazma alt tabakası olduğunu unutmayın. Ardından, başlangıç kapısı kapalı ve tencereler test odasının her iki yanında olacak şekilde bekleme alanına bir fare yerleştirin. Şimdi kapıyı çıkarın ve teste başlamak için zamanlayıcıyı başlatın.
Fareye bir seçim yapması için deneme başına üç dakika izin vermek, doğru veya yanlış bir kazma girişimi veya seçim yapılıp yapılmadığını ve farenin her deneme için seçim yapmasına kadar geçen süreyi kaydedin. Bir fare üç dakika içinde bir seçim yapmadıysa, bu seçimi de yanlış olarak kaydedin. Her iki kap için de bir seçim yapıldıktan sonra, seçilmeyen kabı test odasından çıkarın.
Doğru bir seçim yapılırsa hissedilir, bu örnekte farenin yiyecek ödülünü bitirmesine izin verin. Yanlış bir seçim yapılırsa, bu örnekte, farenin bu seçim için yiyecek ödülü olmadığını göstermek için tencereyi keşfetmesine izin verin. Seçim ne olursa olsun.
Her denemenin sonunda, fareyi bekleme alanına geri yerleştirin ve başlangıç kapısını değiştirin. Daha sonraki denemelerde, tabloda gösterildiği gibi eşleştirilmiş medya ve duyu kullanarak, az önce gösterildiği gibi aynı prosedürü izleyerek doğru bir seçimi gösteren tencereye bir parça yiyecek ödülü koymak için forseps kullanın. Bir not olarak, testten önce güçlü ilk kokunun dağılmasına izin vermek için POTS'u önceden gönderdiğinizden emin olun. Test etme.
Bu grafikte, tedavi edilmemiş C 57 siyah altı J farede her aşamada kriteri karşılamak için yapılan ortalama deneme sayısı. Dikkat seti kullanılarak kaydırma görevi veya bir ST gösterilir. Basit ayrım aşamasındaki farklılıklar, kokunun ilgili bir sıra olduğu durumlarda kriteri karşılamak için artan sayıda deneme olarak yansıtılır.
Burada gösterildiği gibi, performans verilerinin normalleştirilmesi, başlangıçta ilgili kuyruğun öğrenilmesiyle ilişkili değişkenliği azaltır ve sonraki boyutlar arası kayma aşamalarında iyileştirilmiş performansın görselleştirilmesini geliştirir. Önceki boyutlar arası kaymaya göre ekstra boyutsal kayma sırasında kriteri karşılamak için gereken denemelerde önemli bir artış, test geçerliliğinin önemli bir kontrol ölçüsüdür. Ekstra boyutsal kayma aşamasından önce, fareler ödülü bulmak için tek bir ilgili Q boyutuna dikkat etmeyi öğrendiler.
İlginç bir şekilde, ham verilerdeki boyut içi ve dışı kaymaların analizi, ikinci boyut içi ve boyut dışı kaymalar arasındaki kritere ulaşmak için gereken deneme sayısında önemli bir artış olduğunu ortaya koymaktadır. Ayrıca, hem ikinci hem de üçüncü boyutlar arası kaymalar arasında, veriler basit ayrım aşamasındaki performansa normalize edildiğinde ekstra boyutsal kaymaya kıyasla önemli bir ekstra boyut içi kayma belirgindi. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, uygun şekilde gerçekleştirilirse her araştırmacının aynı anda iki fareyi test etmesiyle test faresi başına üç haftadan daha kısa bir sürede tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, eğitim ve test aşamalarında yaya trafiği, test alanının iç kısmı, güçlü parfüm veya kafes değişiklikleri gibi dikkat dağıtıcı kokular gibi çevresel dikkat dağıtıcı unsurları en aza indirmeyi unutmamak önemlidir.
Bu videoyu izledikten sonra, kolayca elde edilebilen malzemeler ve ortak laboratuvar malzemeleri kullanılarak farelerde dikkat kümesi kaydırma görevinin nasıl yürütüleceğini iyi anlamalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu protokol, farelerde prefrontal korteks tarafından yönetilen bilişsel esnekliği değerlendirmek için kullanılan bir davranışsal testi, özellikle de dikkat kümesi kaydırma görevini (AST) özetlemektedir. Prosedür, farelerin bir gıda ödülünü belirli bağlamsal ipuçlarıyla ilişkilendirmek üzere eğitilmesini ve ardından uyum yeteneklerini değerlendirmek için bu ipuçlarının değiştirilmesini içerir.
Dikkat seti değiştirme görevi (AST), farelerde prefrontal korteks aracılı bilişsel esnekliğin translasyonel olarak geçerli bir davranışsal okumasını sağlayarak nöropsikiyatrik ilaç adaylarının mekanistik risklerinin azaltılmasına olanak tanır. Tersine çevirme aşamaları sırasında kritere ulaşmak için gereken deneme sayısındaki artış aracılığıyla bilişsel esnekliğin azalmasını nicelleştiren bu analiz, hedef doğrulamayı ve erken keşif aşamasındaki öngörü güvenini destekler. Türler arasındaki korunmuşluğu, kemirgen modellerden insan patofizyolojisine geçişteki translasyonel sürekliliği artırır.
AST, erken keşif aşamasındaki hipotez testlerinden, öncü bileşik belirleme ve preklinik etkinlik testlerine kadar uzanan keşif sürekliliğine uyum sağlar; özellikle nöropsikiyatrik endikasyonlardaki bilişsel son noktalar için uygundur.