Name: Farelerde Yerel Anafilaksi Ölçme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Öğrenin farelerde yerel anafilaksi ölçme yöntemini; Evans Blue boyası ve spektrofotometri ile damar geçirgenliği değişikliklerini nicelendirin. Bu teknik alerjik yanıtları objektif olarak değerlendirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bu lokal anafilaksi modeliyle ilgili çalışmaları için Dr. Ellen M. Fox'a teşekkür eder. Bu çalışma, Sağlık Bilimleri Üniformalı Hizmetler Üniversitesi hibe numarası R073UE tarafından desteklenmiştir.

1. duyarlı Fareler <ol><li> 20 mg / ml &#39;lik nihai bir konsantrasyona kadar 1x PBS OVA seyreltilmesi ile bir OVA stok çözelti hazırlayın. Gelecekte kullanılmak üzere -80 ° C&#39;de cryovials ve mağaza alikotları aşağı dondurun. </li><li> Oda sıcaklığında 20 mg / mL OVA stoklar bir veya daha fazla alikotları getir. Bir kapağa sahip olan bir 5 ml polistiren yuvarlak tabanlı tüpü içinde, 1 mg / ml &#39;lik bir son konsantrasyona PBS içinde 1x OVA seyreltin. Vortex kısaca karıştırın. </li><li> : 1 oranında orta hızda ayarlanan bir girdap 1 mg / ml OVA içeren polistiren tüpü tutarken, bir 1 üretmek üzere tüp vorteks devam ederken, iyice homojenleştirilmiştir Imject Alum (40 mg / ml) damla damla, bir eşit hacim kazandırmak immünojene Şap. </li><li> Girdaba boru ve boru üzerinde bant kapağını yerleştirin. Düşük ayarda vorteks açın ve OVA 30 dakika boyunca Alum&#39;un tutunmasını sağlar. <ol><li> Zaman büyük miktarda OVA / Alum hazırlanması ve fareler hassaslaştıncı arasında geçmesine izin vermeyin. Hassaslaşması OVA / Şap preparatın sonra doğrudan tamamlanmış edilemezseOda sıcaklığında iyonu deposu OVA / şap. Kullanmadan önce, 1 dakika vorteksleyin. </li></ol></li><li> OVA / Şap karışımı ile 1 ml insülin şırınga yükleyin. 27 gauge&#39;lik bir iğne kullanılarak şırınga kapağı. </li><li> OVA &#39;nın 50 ug Alum ve 2 mg fare başına bir doz için, BALB / c farelerinin periton içine OVA / Alum 100 ul enjekte edilir. </li><li> Negatif kontrol için, PBS uygulanan farelerin başka bir grup duyarlı. OVA çıkararak Yukarıda listelendiği gibi aynı şekilde Alum ve PBS&#39;nin 1: 1 karışımı hazırlayın. </li><li> 3 enjeksiyondan toplam 3 hafta boyunca haftada bir kez tüm fareleri (OVA ve PBS kontrol) duyarlı. Son enjeksiyondan sonra, yerel anafilaksi deneyini gerçekleştirmeden önce en az 2 hafta bekleyin. </li></ol> 2. Yerel Anafilaksi Deneyi <ol><li> Oda sıcaklığına OVA stok çözüm getirecek. (: 1X PBS OVA 4 seyreltme 1), 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü olarak, PBS ile 5 mg / ml &#39;lik nihai bir konsantrasyona kadar 20 mg / ml stok OVA seyreltin. Vortex kısaca karıştırın. </li><li> RC 2 &lt;kullanarak fareler anestezi/ Sup&gt; Kemirgen Anestezi Sistemi (veya benzer buharlaşmış dağıtım sistemi). Izofluran ile doldurun, ve O 2 hava akımını açın. Indüksiyon odasında Yeri farenin ve Anesthetization başlatmak için% 5 izofluran kumanda düğmesini ayarlayın. Farenin tamamen uyuşturulduktan sonra, hareketlilik eksikliği ile gösterilen, derin Anesthetization korumak için% 3 izofluran kumanda düğmesini ayarlayın. Bu prosedürde anestezi amacı, hayvan hareketsizleştirmektir. Kulak ve kuyruk ven enjeksiyonları hayvana ciddi ağrı veya sıkıntı yok. NOT: İsofluranın insan üreme sistemi üzerinde olumsuz etkileri olabilir. Atık gazın etkisiz hale getirmek için iyi havalandırılan bir odada kullanmak ve indüksiyon odasına bir atma bidonu eklemek için emin olun. Izofluran kullanırken hamile iseniz, maruziyeti en aza indirmek için bir karbon filtre maske takmalıdır. </li><li> Yük bir 31 G iğne ile kapatılmış bir 3/10 cc&#39;lik bir şırıngaya insülin 5 mg / ml OVA 10 ul. 10 ul başka bir 3/10 cc şırınga insülin yük1x PBS ile yıkandı. </li><li> Diseksiyon mikroskobu kullanarak, OVA 50 ug bir meydan okuma doz için bir anestezi fare sağ kulağına OVA 10 ul enjekte. Diğer dozlar, örneğin, 20 ug olarak da kabul edilebilir. <ol><li> 15 ml konik tüp etrafında seloteyp bant (yapışkan tarafı yukarı) wrap, enjeksiyon için kulak stabilize etmek. Teybe sağ kulağının dorsal yüzü sabitleyin. Kulak, iki yaprak arasındaki iğne konik tarafı yerleştirin. Yavaşça herhangi bir kan damarlarını vurmak için özen, kulak doku merkezi haline OVA enjekte. </li></ol></li><li> Yukarıda tarif edilen aynı yöntem kullanılarak, bir negatif kontrol olarak, sol kulağa 10 ul PBS enjekte edilir. </li><li> 3 dakika bekleyin. <ol><li> Bu süre içinde, bir süzgeç içinde fare ve 1 dakika kan damarlarını genişletmek için bir ısı lambası altına veya sıcak su banyosu içinde kuyruk tutun. </li></ol></li><li> Yavaşça kuyruk v içine% 0.5 Evans mavisi 200 ul enjekte bir 27 G iğne ile kapatıldı 1 ml&#39;lik şırınga kullanarak insülinfare ein. Tüm 200 ul önce damar yapısını tahrip olabilir Rapid enjeksiyonu uygulanır. Bu durumda, kuyruk karşı tarafında ven içine boyanın geri kalan hacim enjekte çalışır. </li><li> 10 dakika bekleyin. </li><li> Fareyi Euthanize ve forseps ve cerrahi makas kullanılarak hem kulaklarını çıkarın. <ol><li> Basınç kulak merkezinde enjeksiyon sahaya uygulanır; emin, forseps ile kulak kenarları al. Yakın kesim ile mümkün olduğu kadar çok kulak doku çıkarın, ancak boydan boya olmayabilen, kulak tabanında kıkırdak mevcut olan sırt. Kürk küçük miktarlarda kesilerek çıkarılmış kulak üzerinde mevcut olabilir; Bu, deneyin etkilemez. </li></ol></li><li> Kısım bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpleri içine formamit 700 ul. Kulak başına bir tüp (fare başına iki tüp) hazırlayın. NOT: Formamide, teratojenik, mutajenik ve tahriş edicidir. Eldiven, koruyucu gözlük ve yüz koruyucu giyin. Bir tutarken Hamile kadınlar dikkatli kullanmalıdırs formamıd fetotoksik olabilir. </li><li> , Formamıd tüpler kap ve 63 ° C&#39;ye ayarlanmış kuru bir ısı banyosu gecede inkübe kulakları ekleyin. Kulaklar hala kuluçkadan sonra biraz mavi görünebilir; Ancak boyanın çoğunluğu formamid içine ekstre edilir. </li><li> 96 oyuklu bir plaka için, iki kopya halinde, her bir numune 300 ul ilave edin. Bu numune içerisinde mevcut olması halinde kürk aktarılmasını önlemek. Kuyu içinde mevcut hava kabarcığı vardır ki bunlar absorbans okumasını etkileyecek şekilde sağlanması. </li><li> 96 gözlü plaka, iki kopya halinde, formamid 300 ul ilave edin. Bu kuyular, blok olarak kullanılacaktır. </li><li> 620 nm&#39;de absorbans ölçümü için bir spektrofotometre kullanılır. Her örnek okuma Çıkar formamiddir kuyular. Not: Bütün deneyler Kuvvetler Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış protokolleri altında yapıldı. </li></ol>

<ol><li>Kojima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+and+Bbasophils+are+selectively+activated+in+vitro+and+in+vivo+through+CD200R3+in+an+IgE-independent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mast cells and Bbasophils are selectively activated in vitro and in vivo through CD200R3 in an IgE-independent manner.</a> The Journal of Immunology. 179 (10), 7093-7100 (2007).</li>
<li>Parikh, S. A., Cho, S. H., Oh, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preformed+enzymes+in+mast+cell+granules+and+their+potential+role+in+allergic+rhinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Allergy+and+Asthma+Reports%22%5BJournal%5D)">Preformed enzymes in mast cell granules and their potential role in allergic rhinitis.</a> Current Allergy and Asthma Reports. 3 (3), 266-272 (2003).</li>
<li>Amin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mast+cells+in+allergic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">The role of mast cells in allergic inflammation.</a> Respiratory Medicine. 106 (1), 9-14 (2012).</li>
<li>Nakaya, M., Takeuchi, N., Kondo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+localization+of+histamine+receptor+subtypes+in+human+inferior+turbinates%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology+%26+Laryngology%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical localization of histamine receptor subtypes in human inferior turbinates.</a> Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 113 (7), 552-557 (2004).</li>
<li>Ramsdell, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+Trypan+Blue+to+demonstrate+the+immediate+skin+reaction+in+rabbits+and+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">The use of Trypan Blue to demonstrate the immediate skin reaction in rabbits and guinea pigs.</a> The Journal of Immunology. 15 (4), 305-311 (1928).</li>
<li>Chase, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+sensitization+of+animals+with+simple+chemical+compounds%3A+X.+Antibodies+inducing+immediate-type+skin+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Studies on the sensitization of animals with simple chemical compounds: X. Antibodies inducing immediate-type skin reactions.</a> The Journal of Experimental Medicine. 86 (6), 489-514 (1947).</li>
<li>Goose, J., Blair, A. M. J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+cutaneous+anaphylaxis+in+the+rat%2C+induced+with+two+homologous+reagin-like+antibodies+and+its+specific+inhibition+with+disodium+cromoglycate%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Passive cutaneous anaphylaxis in the rat, induced with two homologous reagin-like antibodies and its specific inhibition with disodium cromoglycate.</a> Immunology. 16, 749-760 (1969).</li>
<li>Ovary, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+cutaneous+anaphylaxis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Passive cutaneous anaphylaxis in the mouse.</a> The Journal of Immunology. 81 (4), 355-357 (1958).</li>
<li>Ovary, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immediate+reactions+in+the+skin+of+experimental+animals+provoked+by+antibody-antigen+interactoin%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Allergy%22%5BJournal%5D)">Immediate reactions in the skin of experimental animals provoked by antibody-antigen interactoin.</a> Progress in Allergy. 5, 459-508 (1958).</li>
<li>Akiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitiative+evaluation+of+passive+cutaneous+anaphylaxis+%28PCA%29+using+a+hand-held+spectrophotometer%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+%26+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Quantitiative evaluation of passive cutaneous anaphylaxis (PCA) using a hand-held spectrophotometer.</a> Biological & Pharmaceutical Bulletin. 19 (8), 1112-1114 (1996).</li>
<li>Teshima, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+spectrophotometric+analysis+of+passive+and+active+ear+cutaneous+anaphylaxis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Simple spectrophotometric analysis of passive and active ear cutaneous anaphylaxis in the mouse.</a> Toxicology Letters. 95 (2), 109-115 (1998).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Alerjik hastalıkların sayıda belirteçleri havayolu meydan ortamda bronkoalveolar sıvı dolaşması histamin Th2 sitokin üretimi ve hücre işe seviyelerindeki değişiklikler dahil olmak üzere, alerji yapıcının aşağıdaki alerjik cevaplar, gücünü değerlendirmek için kullanılır. Bu parametrelerdeki değişiklikleri izleme alerjik reaksiyonlara eğitim için önemli olmakla birlikte, biyolojik belirteçlerin her zaman klinik alerjik hastalığı ile ilişkili değildir. Bu protokol açıklanan yerel anafilaksi tahlil lokalize alerjik hastalık...

Tip I hipersensitivite, mast hücrelerinin ve bazofillerin yüzeyi üzerindeki IgE, antijen ile indüklenen çapraz-bağlanma ile aracılık eder. Bu hücre degranülasyonunu ve histamin, triptaz ve trombosit aktive edici faktör gibi vazoaktif 2 ve proenflamatuvar medyatörlerin salınmasına yolaçar. Degranülasyonunun sırasında önceden oluşturulmuş aracıların yayımlanmasının ardından, mast hücreleri sentez ve daha fazla damar geçirgenliği 3 artış sağlayan prostaglandin ve lökotrienler bırakın. İlk klinik yanıt hızlı bir şekilde oluşur ve &quot;acil reaksiyonu&quot; olarak adlandırılır. Deride, bir pervaz ve şişlik tepki antijenin dakika içinde kolayca görülebilir olduğu anlamındadır. Meydan dozuna bağlı olarak, bir &quot;geç faz tepkisi&quot; bir kaç saat sonra görmek mümkündür. Geç faz şişlik dokulara 2 içine lokalize ödem ve lökosit işe kaynaklanmaktadır. Histamin, genellikle katılan önemli arabulucu olarak kabulani alerjik tepkiler, 1 (HR1) kaplar ve histamin reseptörü 2 (HR2) düz kasında eksprese ifade histamin reseptörü üzerine etki eder. Kombine etki, inflamasyon 4 bölgesinde kan akışını ve damar geçirgenliğini artırır. Alerji hayvan modellerinde çeşitli alerjik astım, sistemik anafilaksi ve yerel anafilaksi modelleri dahil alerjik iltihabı dahil mekanizmaları, incelemek amacıyla geliştirilmiştir. Intravenöz boya uygulama yayınlar 1920&#39;lerde 5 geri Bu teknik Bayan açıklayan, neredeyse bir yüzyıl için hayvan modellerinde lokalize alerjik tepkileri ölçmek için kullanılır olmuştur. Tavşanlar ve kobay ani hipersensitivite reaksiyonları test etmek için kullanılan ilk hayvan modelleri vardı ve en hassas yanıtlar genellikle kulakta 5,6 bulundu. Tahlil daha sonra sıçanlarda 7 ve farelerde 8 kullanılmak üzere onaylandı. Tarihsel olarak,Deney çeşitli yöntemler önceki boya enjeksiyon, boya enjeksiyondan önce antijen enjeksiyonundan antijen enjeksiyonu ve boya ve antijenin eş zamanlı olarak enjeksiyonu da dahil olmak üzere, kullanılmıştır. Alerjik yanıtların ölçülmesi için bir vasıta olarak intravenöz uygulama boya pasif ve aktif ölçmek için ikinci ve pasif reaksiyonlar 5,9 ters edilebilir çok yönlü bir deneyidir. Sayısız boyalar Tripan Blue, Pontamine Sky Blue, Evans Blue, Geigy Mavi 536 ve Hindistan Mürekkep 5,6,9 dahil alerjik yanıtları, değerlendirmek için kullanılmıştır. % 0.5 Evans mavisi çözeltisi halen deri alerjik yanıtı ölçmek için kullanılan standart bir boyadır. Meydan anafilaktik cevap kısa süreli olduğu; maksimum yoğunluğu, 10 içinde ulaşılır - boya enjeksiyonunun 15 dakika ve boya ne olursa olsun, kullanılan 9 hayvan türlerinin, cebine fazla 30 dakika tatbik edilirse, herhangi bir tepki görülebilir. Boya ekstravazasyon Kantitasyonu özgünıy mavi boya 7-9 ile gösterildiği gibi kabarıklık büyüklüğü ölçülerek elde edilmiştir. Buna ek olarak, granüle mast hücre sayımları, reaksiyon ortamının cilt dokusunun kesilmesi ve 7 mavi toluidin ile lekeleme ile tayin edilebilir. Mast hücreleri, yüksek afinite IgE reseptörü eksprese FcεRI ana yerel hücre popülasyonu olarak mast hücre degranülasyonu, genellikle, deri altı, IgE aracılı alerjik karşılıkları için bir işaretleyici olarak kullanılmaktadır. Doku içine boya ekstravazasyonunu ölçmek için spektrofotometrik teknikler 1990 yılında sıçan 10 ve fare 11 pasif deri anafilaksi (PCA) için geliştirilmiştir. Aşağıda yerel anafilaksi Deney protokolü. Kojima ve bunlar 1 ila uyarlanmış ve allerjik tepkileri ortaya çıkarmak için antijen olarak tavuk yumurtası (OVA) kullanır edildi. Bununla birlikte, istenirse OVA başka antijenler de kullanılabilir. Tahlil sonra vasküler Geçirgenlik değişiklikleri izlemek için Evans Mavi boya kullanırHücre IgE çapraz bağlanması ve histamin salgısını mast nedeniyle meydana y.

<table><tbody><tr><td>BALB/c</td><td>Fareler Jackson Laboratuvarı</td><td>651</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.4</td><td>Kalite Biyolojik</td><td>114-058-101</td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumin</td><td>Sigma</td><td>A5503-10G</td><td></td></tr><tr><td>Imject Alum</td><td>Thermo Scientific</td><td>77161</td><td>Kullanmadan önce iyice karıştırın</td></tr><tr><td>Evans Blue Dye</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Formamid</td><td>Sigma</td><td>295876</td><td>%99+ Spektrofotometrik sınıf</td></tr><tr><td>İzofluran, USP</td><td>Phoenix</td><td>NDC 57319-474-06</td><td></td></tr><tr><td>1cc İnsülin şırıngaları</td><td>BD</td><td>329654</td><td></td></tr><tr><td>3/10 cc 31 G iğneli insülin şırıngası</td><td>Terumo</td><td>NDC 100861</td><td></td></tr><tr><td>27 G İğneler</td><td>BD</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>FST</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi makas</td> FST.14070-12 <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 ml Polistiren yuvarlak tabanlı tüpler</td><td>BD Falcon</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Tıbbi Malzeme Ortakları</td><td>15-1151</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Konik tüpler</td><td>BD Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>Düz tabanlı 96 kuyulu plaka</td><td>Costar</td><td>3590</td><td></td></tr><tr><td>Bant</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RC 2 Kemirgen Anestezi Sistemi</td><td>VetEquip</td><td>922100</td><td></td></tr><tr><td>Vortex Genie 2</td><td>Bilimsel Endüstriler</td><td>SI-0236</td><td>Model G560, 3 inç platformlu</td></tr></tbody></table>

farelerde yerel anafilaksi Ölçme

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Alerjik tepkiler, mast hücreleri ve bazofiller ve vazoaktif ve proenflamatuvar medyatörlerin, bunu takiben de aktivasyonu sonucudur. Bir hassaslaşmış bireyde bir alerjene maruz kalma küçük eritemden hayatı tehdit eden anafilaksi farklılık klinik semptomlara neden olabilirler. Laboratuvarda, çeşitli hayvan modelleri alerjik yanıtları sürüş mekanizmalarını anlamak için geliştirilmiştir. Bu yazıda, lokalize alerjik yanıtları ölçmek için damar geçirgenliği değişiklikleri ölçmek için ayrıntılı bir yöntem açıklanmaktadır. Yerel anafilaksi tahlil, ilk 1920&#39;lerde bildirildi ve Kojima ve arkadaşları tarafından yayınlanan tekniği adapte edilmiştir. 2007 yılında 1. Bu testte, OVA duyarlı farenin araç ile sol kulak ve OVA ile sağ kulakta zorlanmaktadır. Bu Evans Mavisi damardan enjeksiyonu ile takip edilir. On dakika sonra enjekte Evans mavisi, hayvanda damar dışına olan boya ötenazi yapılmış ve birkulaklara formamidde gecede ekstre edilir. Ekstre boyanın absorbans daha sonra bir spektrofotometre ile ölçülür. Bu yöntem güvenilir bir lokal allerjik yanıtın görsel ve ölçülebilir tezahürü sonuçlanır.

Başarıyla tahlil geçirmiş hayvanların deri ve mavi görünür gözleri vardır. PBS duyarlı hayvanlar bu nedenle hem kulaklar beyaz (Şekil 1A) kalmalıdır, PBS veya OVA da tepki olmamalıdır. OVA hassas hayvanlarda PBS meydan alan kulak (sol) tamamen beyaz veya enjeksiyon bölgesinde lokal bir şekilde hafifçe mavi olarak olmalıdır. OVA alan kulak (sağ) bir boya uygulama için (Şekil 1B) sonra 10 dakika boyunca aşamalı olarak koyu mavi olmalıdır. PBS duyarlı hale geti...

Mast hücreleri ve bazofillerin aktivasyonuyla karakterize alerjik tepkiler, IgE çapraz bağlanması ve proenflamatuar aracıların salınması ile tahrik edilmektedir. Alerjik tepkilerin bir kantitatif olarak değerlendirilmesi allerjen vasküler geçirgenlikte değişiklikleri izlemek için Evans mavisinin kullanılması sureti ile elde edilebilir.

Farelerde Yerel Anafilaksi Ölçme

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Bu prosedürün genel amacı, vasküler geçirgenlikteki değişiklikleri ölçmek, lokalize alerjik tepkileri ölçmektir. Bu, önce hayvanları O albümin gibi bir alerjene karşı duyarlı hale getirerek gerçekleştirilir. İkinci adım, alerjenin intradermal enjeksiyonu ile kulaklara meydan okumaktır.Daha sonra Evan'ın mavi boyası kuyruk damarına enjekte edilir. Son adım, boyayı meydan okunan kulaklardan gece boyunca inkübe ederek çıkarmaktır. Formda, kulağa giren boya miktarını ölçmek için nihai olarak bir spektro fotometri olan amid kullanılır.Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, boya ekstravazasyonunun spektrometri ile ölçülmesidir. Bu, tahlilin kolayca gözlemci yanlılığına maruz kalmadığı anlamına gelir. Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler, intradermal ve kuyruk damar enjeksiyonları teknik olarak zorlayıcı olduğundan ve yeterlilik elde etmek için çok fazla pratik gerektirdiğinden mücadele edeceklerdir.Kullanım için oda sıcaklığına bir dizi yumurta suyu çözeltisi getirerek başlayın. Oda sıcaklığındayken, ova stoğunu bir XPBS'de mililitre başına bir miligram konsantrasyona seyreltin. Beş mililitrelik polistiren yuvarlak tabanlı bir tüp kullanın.Tüpü orta hızda girdaplayın

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kemirgen solunum fizyolojisi ve solunum yolu inflamatuar hücrelerin örnekleme tekrarlanan ölçümler arzu edilir, ancak genellikle mümkün değildir. Burada sözlü havayolu inflamatuar hücrelerin havayolu hiperreaktivite ve örnekleme tekrarlanan ölçümler izin verir fareler Entübasyon için tekrarlanabilir bir yöntem açıklanmaktadır.

Havayolu Direnci Ölçümleri ve Fare Bronkoalveolar Lavaj Sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, Non-invaziv Yöntemi

Alerjik astım Deneysel fare modelleri hastalığı patogenezinde okuyan ve yeni ilaçlar geliştirmek için yeni olanaklar sunar. Bu modeller de alerjik immün yanıt, hava yolu inflamasyonu ve pulmoner patofizyolojisi yöneten ölçüm faktörleri için uygundur.

Alerjen Bağlı Astım murin Modeli

Bu video, bir fare modelinde cilt iltihabını indükleyerek bir test antijenini değerlendirmek için in vivo bir tekniği göstermektedir. Test antijeni - bir yağ / aseton çözeltisi içinde bir hapten - fare kulağının derisine topikal olarak uygulanır ve cildin iltihabı yeterli bir süre sonra değerlendirilir.

Cilt İltihabını İndükleyerek Bir Antijene Karşı Bağışıklık Tepkisini Değerlendirme Tekniği

Doğrulma refleksinin kaybı uzun laboratuvar hayvanlarında, aynı zamanda hipnoz denilen, bilinç kaybı için standart bir davranış vekil olarak görev yapmıştır. Farmakolojik müdahaleler kaynaklanan uçucu anestetik duyarlılıkla değişiklikler herhangi bir solunan terapötik teslim için adapte edilebilir, dikkatli bir şekilde kontrol edilen yüksek verimli değerlendirme sistemi ile tespit edilebilir.

Yerel ya da Sistemik Farmakolojik Müdahale sonrası Farelerin Uçucu Genel Anestezik Hassasiyet Değişiklikleri değerlendirilmesi

Elektronik von Frey ölçümleri, enflamatuar bir olaydan önce ve sonra sürekli olarak uygulanan basınç uyaranlarına kemirgen mekanik çekilme eşiklerindeki değişikliklerin hızlı ve hassas bir şekilde ölçülmesine izin verdiği için klasik von Frey filamentlerine etkili ve geliştirilmiş bir alternatiftir.

Elektronik von Frey aparatı kullanarak farelerin arka pençesindeki dokunsal hassasiyetteki değişikliklerin ölçülmesi

Açıklanan antijenik liposomal nano tanecikleri ve kullanımları uyarıcı B-hücre harekete geçirmek vitro ve in vivohazırlıktır. Tutarlı ve güçlü antikor yanıt-e doğru yeni bir fıstık alerjisi model gelişmesine yol açtı. Antijenik lipozomlar oluşturmak için protokol farklı antijenleri ve bağışıklama modeller için genişletilebilir.

Antijenik lipozomlar hastalığa özgü antikorların üretimi için

Burada doğru bir şekilde pasif sistemik anafilaksi (PSA) ve bir kızılötesi termometre kullanarak gıda Anti fare modelleri vücut sıcaklık farklılıkları ölçmek için yeni bir yöntem mevcut. Bu yordamı doğru önceki PSA sonuçlarında yinelenen.

Kızılötesi termometre pasif sistemik anafilaksi ve gıda Anti değerlendirme sırasında kullanarak fare vücut sıcaklık ölçümü

Burada nötrofil göçünü ve infiltrasyonu hem in vivo hem de in vitro olarak değerlendirmek için üç yöntem sayılmaktadır. Bu yöntemler nötrofil göç hedefleyen umut verici terapötik keşfetmek için kullanılabilir.

Farelerde Nötrofillerin Göçü ve İnfiltrasyonunun Saptanması

Kontakt aşırı duyarlılık (CHS), alerjik kontakt dermatitin (AKB) murin deneysel bir modelidir. CHS, göğüs ve karın bölgesinin traş edilmiş cildini boyayarak reaktif hapten ile hassaslaşmaya dayanır, daha sonra seyreltilmiş bir hapten ile kulak derisi meydan okuması ile çeşitli şekillerde değerlendirilen bir şişlik reaksiyonuna neden olur.

Alerjik Kontakt Dermatitin Murin Modeli Olarak Kontakt Aşırı Duyarlılık

Burada, fare kulaklarında alerjik kontakt dermatiti 1-floro-2,4-dinitrobenzen (DNFB) ile indükleme yöntemlerini ve alerjik kontakt dermatitin ciddiyetinin nasıl değerlendirileceğini açıklıyoruz.

Alerjik Kontakt Dermatit Değerlendirmesi için Fare Kulak Modeli

Öğrenin farelerde yerel anafilaksi ölçme yöntemini; Evans Blue boyası ve spektrofotometri ile damar geçirgenliği değişikliklerini nicelendirin. Bu teknik alerjik yanıtları objektif olarak değerlendirmeyi sağlar.

Farelerde Yerel Anafilaksi Ölçme

Daha fazla video keşfet