Bir Biyoassay olarak Sığır Mezenterik Arter ve Ven Bölüm yalıtma ve kullanma İnce Barsak vazoaktiviteye için Test

Bu prosedürün genel amacı, deneysel bileşiklerin vazo aktiviteleri için taranmasına izin vermek için sığır mezenterik arterlerinin ve venlerinin enine kesitlerini bir multim grafikte izole etmektir. Bu, önce hayvandan bir mezenterik doku örneği toplanarak gerçekleştirilir. İkinci adımda, numune temizlenir ve kaplar bölümlere ayrılır.

Daha sonra kesitler miyogreft üzerine monte edilir ve dengelenir. Son adımda, izole edilmiş kaplar ilgilenilen bileşiklere maruz bırakılır. Sonuç olarak, bu arter ve ven biyo-tahlili, bileşiklerin vazo aktivitesini ve sığır mezenterik kan damarları içindeki kan akışı üzerindeki etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir.

Bu tekniğin, in vivo kan akışını ölçmek gibi mevcut yöntemlere kıyasla en büyük avantajı, bu teknikle tek bir hayvandan alınan dokunun aynı anda birden fazla bileşiğe maruz bırakılabilmesidir. Bu yöntem, fescue, toksikoz veya Ergotizm gibi vazokonstriksiyona neden olabilecek çok spesifik hayvan sendromları hakkında fikir verebilse de, geliştirilmekte olan ilaçlar veya doğal ürünler gibi araştırmacıların ilgisini çekebilecek diğer senaryolara da uygulanabilir. Ek olarak, sadece sığır damar sistemine değil, aynı zamanda diğer memeli türlerinden damar sistemine de uygulanabilir.

Mezenterik dokudan kan damarlarını çıkardıktan sonra, doku örneğini bir kesme yüzeyine yerleştirmek için bir çift forseps kullanın ve kısmen buz gibi soğuk krema henzel tavukları aite tamponuna batırın. Daha sonra beş numaralı kuyumcu, forseps ve gürültü kullanarak, İris makası damarları çevreleyen yağ ve bağ dokularını dikkatlice inceler. Atardamar ve toplardamarı ayırdıktan sonra, bölümün bir ucundaki damar açıklığını belirleyin ve forseps ile damarı çevreleyen fasyayı dikkatlice kavrayın.

Ardından, makasla damara paralel bir kesim yapmak için makasın ucunu yükseltilmiş fasyanın altına kaydırın. İlk kesiden sonra, yağ ve bağ dokularını daha fazla ayırmak ve damarı temizlemek için damarın her iki tarafını da kesin. Temizlenmiş kan damarlarını yeni bir Krebs Henzel ışık tamponu tüpüne yerleştirin ve tüpü 24 saate kadar dört santigrat derecede saklayın.

Hazır olduğunda, ilgilenilen kabın istenen sayıda iki milimetrelik bölümlere tutarlı kesitlerini elde etmek için bir doku dilimleyici kullanın ve ardından her bir numunenin diseksiyon ve temizleme işlemi sırasında elde edilen herhangi bir anormallik, dal, valf veya yüzeysel hasar olmadığından emin olmak için her bölümü 12,5 x büyütmede inceleyin. Kabul edilebilir dilimlenmiş kap bölümlerini Krebs Henzel ışık tamponuna batırılmış olarak dört santigrat derecede 30 dakikaya kadar saklayın. Daha sonra destekleri her bir numunenin lümeninden nazikçe yerleştirin ve damarı miyo greft üzerine monte etmek için gerilimi kademeli olarak artırmak için miyo greft üzerindeki mikro konumlandırıcıyı kullanın.

Damarları iki ila üç gramlık bir okumanın üzerine germemeye dikkat edin. Tüm hazneler kapatıldıktan sonra, tamponu her hazneden vakumlayın ve beş mililitre taze tamponla doldurun. Tüm kap bölümleri, 500 mikrolitre 1.32 molar potasyum klorürde bir gramlık stabil bir dinlenme gerilimi elde etmek için 1.5 saat boyunca dengelendikten sonra, 5.5 mililitrelik çözeltiye 0.12 molar nihai konsantrasyona kadar kabı yıkar.

Potasyum klorüre maksimum yanıt, tedavi verilerini normalleştirmek için kullanılacağından, gerilimi manuel olarak ayarlamayın, çözeltiyi, gerilim bir gramlık temel değere dönene kadar 15 dakikalık aralıklarla taze Krebs Henzel ışık tamponu ile değiştirin. Gerilim taban çizgisine döndüğünde, deney protokolüne göre her odaya 25 mikrolitrelik alikotlar halinde standartları ekleyin. Son standart eklendiğinde, dokuz dakikalık bir zamanlayıcı başlatın.

İnkübasyonun sonunda, tedavi içeren tamponu odalardan çıkarın ve her odaya beş mililitre taze tampon ekleyin. Ardından, tamamlandıktan sonra 2,5 dakikalık bir zamanlayıcı başlatın, bu 2,5 dakikalık durulamayı tekrarlayın. İkinci durulamanın sonunda ikinci kez, odaları aspire edin.

Ardından, yeni arabelleği bir kez daha ekledikten sonra, ikinci standart sürümün başlangıcına kadar geri sayım yapmak için bir dakikalık bir zamanlayıcı başlatın. Burada gösterilen dokuz dakikalık inkübasyon dönemlerinde gözlemlendiği gibi, tedavinin artan konsantrasyonları ile birlikte, deneyin sonunda potasyum klorür ilavesinin, dokunun canlılığını doğruladığı için gerekli olduğu standartlara yanıtta artımlı artışlar vardır. Bu biyo-tahlil, deneysel bileşiklerin ince bağırsağa besin sağlayan kan damarları üzerindeki ve ayrıca emilen besinleri uzaklaştıran kan damarları üzerindeki vazo aktivitesini değerlendirmek için kullanılabilir.

Örneğin, bu deneyde, beş hidroksi triptamin tedavisinden sonra arteriyel veya venöz kasılma yanıtlarında bir fark gözlenmemiştir. Tersine, mezenterik venin artan norepinefrin konsantrasyonlarına kasılma tepkisi, mezenterik arterinkinden daha büyüktü. Bu prosedürü takiben, yöntem, araştırmacının özel olarak ilgilendiği tampondaki agonistleri veya antagonistleri içerecek şekilde daha da modifiye edilebilir.

Bu, araştırmacının çok spesifik reseptörlerin katılımını ve myo deneyi sırasında gözlemlenen vasküler tepkilerin arkasındaki mekanizmaları daha iyi anlamasını sağlayacaktır. Bu videoyu izledikten sonra, kan damarlarının nasıl toplanacağı, işleneceği ve izole edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Benim deneyimim için.