Kantitatif İmmünofloresan Deneyi sentrozomlar Protein Düzeyleri Varyasyon Tedbir

Bu prosedürün genel amacı, çeşitli koşullar altında Sentrozomlardaki bir proteinin seviyesindeki nispi değişiklikleri ölçmektir. Örneğin, proteazomun inhibisyonundan sonra hücre döngüsünün belirli bir noktasında, bu, ilk olarak proteazom inhibitörü MG one 15 veya kontrol çözücüsü DMSO ile örtü kaymaları üzerinde büyüyen hücrelerin muamele edilmesiyle gerçekleştirilir. Daha sonra hemen her iki hücreye de BRDU ekleyin ve bunları bir hücre kültürü inkübatöründe dört saat boyunca inkübe edin.

İkinci adım, hücreleri sabitlemek için kapak fişlerini 24 oyuklu bir plakaya aktarmaktır. Daha sonra, hücreler BRDU'ya ve ilgilenilen proteinlere karşı antikorlarla ve daha sonra karşılık gelen ikincil antikorlarla boyanır. Son adım, her numuneden alınan hücrelere aynı maruz kalma süresi ve Z ekseni uzunluğunu uygulamak için bir floresan mikroskobu ve dijital görüntüleme yazılımı kullanarak BRDU pozitif hücrelerin görüntülerini elde etmektir.