Name: Alternatifi olarak dilaltı immünoterapi Akut Solunum Enfeksiyonları Karşı Koruma tetikleyebilecek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 56 s
Description: Öğrenin, farelerde akut pnömokok pnömonisine karşı koruma sağlamak için dilaltı immünoterapi yöntemiyle akciğerlerdeki doğuştan gelen bağışıklık yanıtını nasıl artıracağınızı. Bu teknik, solunum yolu enfeksiyonlarına karşı güvenli bir alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Lille Enfeksiyon ve Bağışıklık Merkezi, Pasteur de Lille-Fransa Enstitüsü'nden Dr. Jean-Claude Sirard'a saflaştırılmış flagellini sağladığı için ve Uruguay Sağlık Bakanlığı Ulusal Referans Laboratuvarı Direktörü Dr. Teresa Camou'ya pnömokok suşunu sağladığı için teşekkür ederiz. 
Yazarlar, BichoFeo Producciones-Uruguay'dan Bay Diego Acosta ve Bay Ignacio Turel'e tüm video prodüksiyonu ve edisyonu boyunca gösterdikleri bağlılık ve sıkı çalışma için teşekkürlerini sunar.
Bu çalışma, Ulusal Araştırma ve Yenilik Ajansı, Uruguay'dan ANII, Temel Bilimleri Geliştirme Programı, Uruguay PEDECIBA ve Uruguay Sektörel Bilimsel Araştırma Komisyonu, CSIC-Universidad de la República, Uruguay'dan PR_FCE_2009_1_2783 ve BE_POS_2010_1_2544 hibelerle desteklenmiştir.

<ol><li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumococcal+vaccines+WHO+position+paper--2012%5BTitle%5D)+AND+%22Weekly+Epidemiological+Record%22%5BJournal%5D)">Pneumococcal vaccines WHO position paper--2012.</a> Weekly Epidemiological Record. 14, 129-144 (2012).</li>
<li>Pneumonia - Facts Sheet N°331. , WHO. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs331/en">http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs331/en</a> (2013).</li>
<li>Appelbaum, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carriage+of+antibiotic-resistant+Streptococcus+pneumoniae+by+children+in+eastern+and+central+Europe-a+multicenter+study+with+use+of+standardized+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Carriage of antibiotic-resistant Streptococcus pneumoniae by children in eastern and central Europe-a multicenter study with use of standardized methods.</a> Clin Infect Dis. 23, 712-717 (1996).</li>
<li>Ramirez, J. A., Anzueto, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+needs+of+community-acquired+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Changing needs of community-acquired pneumonia.</a> J Antimicrob Chemother. 66, 3-9 (2011).</li>
<li>Cuburu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublingual+immunization+induces+broad-based+systemic+and+mucosal+immune+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Sublingual immunization induces broad-based systemic and mucosal immune responses in mice.</a> Vaccine. 25, 8598-8610 (2007).</li>
<li>Pedersen, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+sublingual+route+for+administration+of+influenza+H5N1+virosomes+in+combination+with+the+bacterial+second+messenger+c-di-GMP%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the sublingual route for administration of influenza H5N1 virosomes in combination with the bacterial second messenger c-di-GMP.</a> PLoS One. 25, 1-12 (2011).</li>
<li>Song, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublingual+vaccination+with+influenza+virus+protects+mice+against+lethal+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Sublingual vaccination with influenza virus protects mice against lethal viral infection.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 105, 1644-1649 (2008).</li>
<li>Cogo, R., Ramponi, A., Scivoletto, G., Rippoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prophylaxis+for+acute+exacerbations+of+chronic+bronchitis+using+an+antibacterial+sublingual+vaccine+obtained+through+mechanical+lysis%3A+a+clinical+and+pharmacoeconomic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomed%22%5BJournal%5D)">Prophylaxis for acute exacerbations of chronic bronchitis using an antibacterial sublingual vaccine obtained through mechanical lysis: a clinical and pharmacoeconomic study.</a> Acta Biomed. 74, 76-87 (2003).</li>
<li>Rosaschino, F., Cattaneo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+optimizing+compliance+of+paediatric+patients+for+seasonal+antibacterial+vaccination+with+sublingually+administered+Polyvalent+Mechanical+Bacterial+Lysates+%28PMBL%29%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomed%22%5BJournal%5D)">Strategies for optimizing compliance of paediatric patients for seasonal antibacterial vaccination with sublingually administered Polyvalent Mechanical Bacterial Lysates (PMBL).</a> Acta Biomed. 75, 171-178 (2004).</li>
<li>Senna, G., Caminati, M., Canonica, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+tolerability+of+sublingual+immunotherapy+in+clinical+trials+and+real+life%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Safety and tolerability of sublingual immunotherapy in clinical trials and real life.</a> Curr Opin Allergy Clin Immunol. 13, 656-662 (2013).</li>
<li>Mascarell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+dendritic+cells+mediate+antigen-specific+tolerance+by+stimulating+TH1+and+regulatory+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Oral dendritic cells mediate antigen-specific tolerance by stimulating TH1 and regulatory CD4+ T cells.</a> J Allergy Clin Immunol. 122, 603-609 (2008).</li>
<li>Mascarell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+the+lingual+immune+system+reveals+the+presence+of+both+regulatory+and+effector+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Allergy%22%5BJournal%5D)">Mapping of the lingual immune system reveals the presence of both regulatory and effector CD4+ T cells.</a> Clin Exp Allergy. 39, 1910-1919 (2009).</li>
<li>Mascarell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+macrophage-like+cells+play+a+key+role+in+tolerance+induction+following+sublingual+immunotherapy+of+asthmatic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Oral macrophage-like cells play a key role in tolerance induction following sublingual immunotherapy of asthmatic mice.</a> Mucosal Immunology. 4, 638-647 (2011).</li>
<li>Hervouet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-bearing+dendritic+cells+from+the+sublingual+mucosa+recirculate+to+distant+systemic+lymphoid+organs+to+prime+mucosal+CD8+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antigen-bearing dendritic cells from the sublingual mucosa recirculate to distant systemic lymphoid organs to prime mucosal CD8 T cells.</a> Mucosal Immunology. 7, 280-291 (2014).</li>
<li>Munoz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+administration+of+flagellin+protects+mice+from+Streptococcus+pneumoniae+lung+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Mucosal administration of flagellin protects mice from Streptococcus pneumoniae lung infection.</a> Infect Immun. 78, 4226-4233 (2010).</li>
<li>Hayashi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+innate+immune+response+to+bacterial+flagellin+is+mediated+by+Toll-like+receptor+5%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The innate immune response to bacterial flagellin is mediated by Toll-like receptor 5.</a> Nature. 410, 1099-1103 (2001).</li>
<li>Lightfield, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+function+for+Naip5+in+inflammasome+activation+by+a+conserved+carboxy-terminal+domain+of+flagellin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Critical function for Naip5 in inflammasome activation by a conserved carboxy-terminal domain of flagellin.</a> Nature Immunology. 9, 1171-1178 (2008).</li>
<li>Lightfield, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+requirements+for+NAIP5+in+activation+of+the+NLRC4+inflammasome%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Differential requirements for NAIP5 in activation of the NLRC4 inflammasome.</a> Infect Immun. 79, 1606-1614 (2011).</li>
<li>Honko, A. N., Mizel, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+administration+of+flagellin+induces+innate+immunity+in+the+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Mucosal administration of flagellin induces innate immunity in the mouse lung.</a> Infect Immun. 72, 6676-6679 (2004).</li>
<li>Janot, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioresistant+cells+expressing+TLR5+control+the+respiratory+epithelium%27s+innate+immune+responses+to+flagellin%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Radioresistant cells expressing TLR5 control the respiratory epithelium's innate immune responses to flagellin.</a> Eur J Immunol. 39 (6), 1587-1596 (2009).</li>
<li>Van Maele, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR5+signaling+stimulates+the+innate+production+of+IL-17+and+IL-22+by+CD3%28neg%29CD127%2B+immune+cells+in+spleen+and+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR5 signaling stimulates the innate production of IL-17 and IL-22 by CD3(neg)CD127+ immune cells in spleen and mucosa.</a> J Immunol. 185, 1177-1185 (2010).</li>
<li>Lee, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurologic+adverse+events+following+influenza+A+%28H1N1%29+vaccinations+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics+international%3A+official+journal+of+the+Japan+Pediatric+Society%22%5BJournal%5D)">Neurologic adverse events following influenza A (H1N1) vaccinations in children.</a> Pediatrics international: official journal of the Japan Pediatric Society. 54, 325-330 (2012).</li>
<li>Lewis, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+facial+nerve+paralysis+%28Bell%27s+palsy%29+following+intranasal+delivery+of+a+genetically+detoxified+mutant+of+Escherichia+coli+heat+labile+toxin%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Transient facial nerve paralysis (Bell's palsy) following intranasal delivery of a genetically detoxified mutant of Escherichia coli heat labile toxin.</a> PLoS One. 4, e6999(2009).</li>
<li>Mutsch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+inactivated+intranasal+influenza+vaccine+and+the+risk+of+Bell%27s+palsy+in+Switzerland%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Use of the inactivated intranasal influenza vaccine and the risk of Bell's palsy in Switzerland.</a> N Engl J Med. 350, 896-903 (2004).</li>
<li>Kuo, C. H., Wang, W. L., Chu, Y. T., Lee, M. S., Hung, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublingual+immunotherapy+in+children%3A+an+updated+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Neonatol%22%5BJournal%5D)">Sublingual immunotherapy in children: an updated review.</a> Pediatr Neonatol. 50, 44-49 (2009).</li>
<li>Nempont, C., Cavet, D., Rumbo, M., Bompard, C., Villeret, V., Sirard, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+flagellin%27s+hypervariable+region+abrogates+antibody-mediated+neutralization+and+systemic+activation+of+TLR5-dependent+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Deletion of flagellin's hypervariable region abrogates antibody-mediated neutralization and systemic activation of TLR5-dependent immunity.</a> J. Immunol. 181, 2036-2043 (2008).</li>
<li>
 Pathogen Regulation Directorate, Public Health Agency of Canada
 . Streptococcus pneumoniae: Pathogen Safety Data Sheet - Infectious Substances. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.phac-aspc.gc.ca/lab-bio/res/psds-ftss/streptococcus-pneumoniae-eng.php">http://www.phac-aspc.gc.ca/lab-bio/res/psds-ftss/streptococcus-pneumoniae-eng.php</a> (2011).</li>
<li>Marques, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+against+Streptococcus+pneumoniae+serotype+1+acute+infection+shows+a+signature+of+Th17-+and+IFN-gamma-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">Protection against Streptococcus pneumoniae serotype 1 acute infection shows a signature of Th17- and IFN-gamma-mediated immunity.</a> Immunobiology. 217, 420-429 (2012).</li>
<li>Stewart, C. C., Stewart, S. J., et al. Titering antibodies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStewart%2C+CC+%22Current+Protocols+in+Cytometry%22">Current Protocols in Cytometry</a>. 4, Unit 4.1(2001).</li>
<li>Kubista, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+real-time+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Aspects+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The real-time polymerase chain reaction.</a> Molecular Aspects of Medicine. 27, 95-125 (2006).</li>
<li>Pedersen, G., Cox, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mucosal+vaccine+quandary%3A+intranasal+vs.+sublingual+immunization+against+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+%26+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">The mucosal vaccine quandary: intranasal vs. sublingual immunization against influenza.</a> Human Vaccines & Immunotherapeutics. 8, 689-693 (2012).</li>
<li>Vitaliti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+immunity+and+sublingual+immunotherapy+in+respiratory+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Regulators+and+Homeostatic+Agents%22%5BJournal%5D)">Mucosal immunity and sublingual immunotherapy in respiratory disorders.</a> Journal of Biological Regulators and Homeostatic Agents. 26, S85-S93 (2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Terapötik maddelerin maddelerinin sublingual yoldan verilmesi solunum yollarında immun cevabı modüle etme yararlı bir yöntem olduğu kanıtlanmıştır. Solunum koşullarının tedavisi için SLIT&#39;in başlıca avantajı, burun içinden tatbikat 31 dayanan tedavilerle daha güvenli olan, akciğer veya burun içine bileşiklerinin doğrudan iletilmesini içerir etmemesidir. Sublingual immünoterapi ya da alerjik iltihaplanma ve astımın 32 semptomlarını iyileştirmek veya burada gösterildiği gibi akut akciğer enfeksiyonlarının tedavisi için doğal bağışıklık mekanizmalarını geçici aktivasyonunu uyarmak için düzenleme tepkilerinin uyarılması için, farklı şekillerde immun cevabı modüle etmek üzere kullanılabilir. Bu video sunulan fare modeli SLĐT&#39;in için terapötik maddeler olarak farklı bileşiklerin taranması için uygun bir yöntemdir. Bu hayvan modeli etkisini belirlemek için kullanışlı bir araç sunmaktadırAkci¤erlere immün tepkisi, hem de diğer organları (örneğin,., lenf düğümleri veya uzak mukozal the drenaj), in vitro modellerinin kullanımı ile taklit edilemeyen SLIT&#39;in. Dilaltı immünoterapi kullanılarak elde edilen sonuçları tanımlamak birçok makale olmasına rağmen, dilaltı uygulama prosedürleri için ayrıntılı yöntemleri henüz mevcut yapılmamıştır. Buna ek olarak, bu model solunum yolu sistemik hem de lokal koruma sağlamak amacıyla dil altı aşıların değerlendirilmesi için de kullanılabilir. Eşlik eden video gösterildiği gibi, bileşiklerin sublingual yolla kolaylıkla geniş eğitim gerek duyulmadan basit bir işlemdir. Tipik olarak, hayvan kullanımı konusunda uzman bir kişi bu protokolde tarif edildiği gibi, enjekte edilebilir anestetikler ile 10 fareden oluşan bir grup SLĐT&#39;i gerçekleştirmek için 1 saat gerektirir. Pnömokokal hücuma de gerçekleştirilirse, ilave 90 dakika hazırlamak için gerekli olacakBakteri süspansiyonu ve hayvanların burun içi bulaştırma gerçekleştirin. Burada sunulan FACS protokolleri Akci¤erlere hücre dinamikleri üzerinde lenf düğümleri yanı sıra etkilerini drenaj, uygulama yerel yerinde SLIT&#39;in etkisinin uygun karakterizasyonu izin verir. Bronkoalveoler içeriği ve akciğer dokusu ayrı ayrı analizi hava yolu bağışıklık yerleşik ve doku içinde kalır bu hücre tiplerini sızmakta ayırt etmek önemlidir. BAL içeriğinin analizi alveoler makrofaj ciro çalışma yanı sıra farklı tedaviler ile neden olunan alveolar boşluk, örneğin., PMN, eozinofiller, monositler içine hücrelerin işe dinamiklerini sağlar. BAL için enzim bağlantılı immünosorbent deneyi (ELISA) ya da dil altı aşılamanın ardından ortaya salgılanan IgA antikorlarının tespiti tarafından salgılanan sitokinler ve kemokinlerin varlığını saptamak için kullanılabilir. Akci¤erlere doku Çalışmasıdiğer hücre türleri, klasik dendritik hücreleri, T hücreleri ve B hücreleri karakterizasyonu sağlayacaktır. FACS analizi için BAL örnekleri ve lenf düğümleri hazırlanması basittir. Numune toplama sonra, normalde 60 dakika 10-20 örnekler için boyama protokolü tamamlamak için gereklidir. Hücre-dışı matrisin sindirim gerekli değildir ve bu Bunun aksine, akciğer veya dil altı doku hücrelerinin elde edilmesi daha fazla zaman gerekir. Dil altı yolu ile verilen terapötik maddenin emilimi vivo görüntüleme sistemleri kullanılarak, floresan veya radyoaktif işaretli moleküllerin takibi ile sağlanabilir. Sublingual immunoterapinin bağışıklık solunum yollarında tepkileri vermenin yanı sıra tedavi etmek ya da önlemek için, solunum koşulları kullanılabilir sistemik olarak uyarılması için çekici bir yöntemdir. SLIT&#39;in i sonra solunum yollarında bağışıklık tepkisinin aktivasyonunun belirlenmesi karşı tolerans mekanizmalarını aydınlatılmasıFarklı solunum koşullarına karşı mevcut tedaviler ile birlikte, tek başına veya kombinasyon halinde kullanılabilecek, yeni tedavi stratejileri rasyonel tasarım sağlamak çok önemlidir s.

Bu çalışmanın genel amacı, akut solunum yolu enfeksiyonlarının (ARI) tedavisinde dil altı immünoterapinin faydalarını göstermek ve bu uygulama yolunun diğer uygulama yollarına, yani intranazal ile karşılaştırıldığında avantajlarını sunmaktır.
ARI her yıl, özellikle beş yaşın altındaki çocuklarda milyonlarca ölüme neden oluyor. Streptococcus pneumoniae, bebeklerde ve yaşlılarda bakteriyel pnömoninin en önemli etiyolojik ajanlarından biri olmaya devam etmektedir1,2. Mevcut ana tedavi antibiyotik kullanımına dayanır, ancak dirençli suşlar sürekli olarak ortaya çıkmaktadır3,4.
SLIT, özellikle solunum yollarındasistemik ve mukozal düzeyde geniş yanıtlara neden olur 5. İnfluenza enfeksiyonuna karşı etkinliği kanıtlanmıştır, humoral ve hücresel yanıtların üretimi ile uzun süreli korumayı teşvik eder6,7. Ayrıca, dil altı yolla verilen bakteri lizatları ile profilaktik tedavinin yaşlılarda kronik obstrüktif bronşit alevlenmelerini azalttığı8 ve çocuklarda tekrarlayan solunum yolu enfeksiyonlarınıönlediği 9 gösterilmiştir. SLIT, alerji ve astım tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Klinik çalışmalar, sadece solunum yollarındaki bağışıklık tepkisini modüle etme etkinliğini değil, aynı zamanda güvenliğini de göstermiştir10. İlaç şirketlerinin ve araştırmacıların SLIT'e artan ilgisine rağmen, bileşiklerin dil altı verilmesinden sonra mukozal immün yanıtların indüklenmesinde rol oynayan mekanizmalar belirsizliğini korumaktadır. Son zamanlarda, alerjen duyarsızlaştırma ile ilişkili toleransı teşvik eden mekanizmalara dikkat çekilmiştir. Dendritik hücreler ve makrofajlar gibi dil altı mukozasında yerleşik ve işe alınmış hücrelerin, SLIT11-13'ten sonra toleransı artırabileceği öne sürülmüştür. Oral mukozanın dendritik hücreleri, IFN-gama ve IL-10 üreten T yardımcı hücrelerini11 teşvik edebilir, ayrıca distal genital mukozaya yeniden dolaşım yapabilir ve CD8 + T hücrelerini14 teşvik edebilir. Bununla birlikte, SLIT'in doğuştan gelen hücreler üzerindeki etkisi veya akut solunum yolu enfeksiyonları sırasında patojen klirensini iyileştirme kapasitesi hakkında çok az şey bilinmektedir.
Akciğerlerdeki pnömokok enfeksiyonunun doğal kontrolü, büyük ölçüde yerel doğuştan gelen savunmaların etkin ve hızlı aktivasyonuna bağlıdır. Daha önce, bir TLR5 ve NLRC4 agonisti olan tek bir intranazal flagellin (FliC) dozu ile akciğerlerin doğuştan gelen bağışıklığının arttırılmasının, Streptococcus pneumoniae serotip 1'in ölümcül bir dozunda klinik izolat ile mücadele edilen farelerin% 75-100'ünü koruduğunu gösterdik. Bu korumanın GR1 + hücrelerinin (muhtemelen polimorfonükleer nötrofiller, PMN'ler) lokal alımına bağlı olduğu ve antikorlara, B veya T hücrelerine(15) bağlı olmadığı gösterilmiştir. 
Flagellin, bakteri kamçısının yapısal bileşenidir. Monomerik formunda, hücre dışı FliC16'yı algılayan TLR5 ve hücre içi flagellin17,18'i tespit eden NLRC4 / NAIP5 inflamatuarını algılayan TLR5 olmak üzere iki Patojen Tanıma Reseptörü (PRR) tarafından tanınır. FliC, PRR'ler tarafından algılandığında, önemli bir inflamatuar yanıt tetiklenir. Biz ve diğerleri, saflaştırılmış FliC'nin Salmonella enterica serovar Typhimurium'dan akciğerlere damlatılmasının, özellikle akciğerlerin epiteli tarafından tanındığında, kemokin ve sitokinlerin hızlı bir şekilde üretilmesini sağladığını ve bunun da bağışıklık hücrelerinin hava yollarına, özellikle de PMN'lere alımını düzenlediğini gösterdik15,19-21. Geçici olmasına rağmen, FliC'nin nazal olarak verilmesinden sonra hava yollarına meydana gelen önemli nötrofil infiltrasyonu, insan kullanımı için klinik tedavilere doğru hareket ediyorsa bir endişe kaynağı olabilir. Aşırı iltihaplanma, akciğerlerin işlevi için zararlı olabilir. Ayrıca, immünostimülatör moleküllerin intranazal olarak verilmesinin fasiyal paralizi ve/veya beyin toksisitesine neden olabileceği gösterilmiştir22-24. 
Dil altı immünoterapisi, solunum yollarındaki immün yanıtı modüle etmek için intranazal yola göre daha güvenli bir alternatif sunar. Non-invaziv, ağrısız, basit ve hasta uyumu iyidir25. Ayrıca, daha önce de belirtildiği gibi, formülasyonların doğrudan intranazal veya intrapulmoner verilmesiyle ilişkili riskler olmaksızın solunum mukozasında koruyucu yanıtları indükleyebilir. Dil altı yol, alternatif olarak, akciğerin bağışıklık sistemi üzerinde büyük etkileri olan, ancak toksik olduğu kanıtlanmış molekülleri iletmek veya intranazal olarak uygulandığında büyük iltihaplanma ortaya çıkarmak için kullanılabilir. Bu avantajların yanı sıra, dilaltı immünoterapi formülasyonları, steril olmayan ürünler bu yolla teslim edilebildiğinden ve endotoksik şok SLIT için bir endişe kaynağı olmadığından daha düşük üretim maliyetine sahiptir. Öte yandan, akciğerlerde bir bağışıklık tepkisi oluşturmak için intranazal veya parenteral yollarla kullanılanlara kıyasla daha yüksek dozlarda immünostimülatör bileşiklerin gerekli olduğunu fark etmek önemlidir; ayrıca SLIT'in fare modelini kullanırken yüksek konsantrasyonlu çözeltilere ihtiyaç vardır, çünkü formülasyonların biriktirildiği anatomik bölge küçüktür. 
Daha önce yayınlanmış verilerimize dayanarak, model immünostimülan olarak flagellin ile dil altı immünoterapi kullanarak bir koruma modeli geliştirdik. Kontrol grubundaki tüm fareler 5 gün içinde enfeksiyondan ölürken, tek bir flagellin dozunun serotip 1 suşunun neden olduğu invaziv pnömokok pnömonisine karşı %60 sağkalımı indüklediğini gösterdik. Akış sitometrisi analizi, flagellin ile dil altı tedaviden sonra korunan hayvanların hava yollarına daha fazla sayıda PMN alındığını gösterdi, bu da bu hücrelerin dil altı immünoterapisinin neden olduğu koruma mekanizmasına dahil olabileceğini düşündürdü. 
Bu video, dil altı immünoterapisinin nasıl uygulanacağını ve ayrıca dil altı mukozasından ilgili dokunun nasıl kurtarılacağını, daha fazla analiz yapmak için lenf düğümlerinin yanı sıra akciğerleri ve hava yollarını nasıl boşaltacağını ayrıntılı olarak göstermektedir. Ek olarak, FACS analizi için genel hücre hazırlama tekniğini gösterir ve akut enfeksiyon modelini oluşturmak için Streptococcus pneumoniae süspansiyonlarının nasıl hazırlanacağını ve farede intranazal enfeksiyonların nasıl gerçekleştirileceğini kısaca gösterir.

<table><tbody><tr><td>Ketamin çözeltisi (50 mg/ml)</td><td>Pharma Service, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xilacine çözeltisi (%2)</td><td>Portinco S.A., Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril 1 ml şırınga</td><td>Modern, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril 27 G iğne</td><td>Modern, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>General Electric Health Care</td><td>E15885</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>ATCC</td><td>302020</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin Çözeltisi</td><td>SIGMA</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Ca 2 + / Mg 2 + </td><td>PAA</td><td>H21002</td><td></td></tr><tr><td>Tip-I Kollajenaz</td><td>Yaşam Teknolojileri / Gibco</td><td>17100017</td><td></td></tr><tr><td>Deoksiribonükleaz I (DNAse-I)</td> <td>SIGMA</td><td>D4513</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Life Technologies / Gibco</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>PerCP-Cy5.5 konjuge sıçan anti fare IgG2b anti CD11b</td><td>BD</td><td>550993</td><td>Klon M1/70</td></tr><tr><td>APC konjuge hamster anti fare IgG1 anti CD11c</td><td>BD</td><td>550261</td><td>Klon HL3&nbsp;</td></tr><tr><td>APC-Cy7 konjuge sıçan anti fare IgG2a anti Ly6G</td><td>BD</td><td>560600</td><td>Klon 1A8</td></tr><tr><td>Steril Salin Solüsyonu</td><td>Laboratorio Farmaco Uruguayo, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triptik Soya Agar</td><td>BD Difco, Fransa</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>Defibrine Koyun Kanı Biokey</td><td>, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril Petri Kapları</td><td>Greiner</td><td>633180</td><td></td></tr><tr><td>p10 Pipet</td><td>Gilson</td><td>F144802</td><td></td></tr><tr><td>p20 Pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3120000097</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipet</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipet</td><td>Capp</td><td>C200</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3120000054</td><td></td></tr><tr><td>p1000 Pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3120000062</td><td></td></tr><tr><td>Steril Filtre Uçları p10</td><td>Greiner</td><td>771288</td><td></td></tr><tr><td>Steril Filtre Uçları p200</td><td>Greiner</td><td>739288</td><td></td></tr><tr><td>Steril Filtre Uçları p1000</td><td>Greiner</td><td>750288</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>BIOSAN</td><td>V1-plus</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik ince uçlu forseps&nbsp;</td><td>SIGMA</td><td>Z168785/Z168777</td><td>Kavisli ve düz</td></tr><tr><td>Pansuman dokusu forseps</td><td>SIGMA</td><td>F4392</td><td>Uzunluk 8 inç</td></tr><tr><td>Mikro diseksiyon forseps</td><td>SIGMA</td><td>F4017</td><td>Düz ve nbsp;</td></tr><tr><td>Mikro diseksiyon forseps</td><td>SIGMA</td><td>F4142&nbsp;</td><td>kıvrımlı</td></tr><tr><td>Mayo Makas</td><td>SIGMA</td><td>Z265993&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Neşter</td><td>SAKIRA MEDİKAL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril Biyopsi Punch & Oslash; 3mm</td><td>Stiefel Laboratories Ltd.</td><td>2079D</td><td>5 mm çap da kullanılabilir</td></tr><tr><td>Steril 1.5 ml Tüpler</td><td>Deltalab</td><td>200400P</td><td></td></tr><tr><td>Steril 15 ml Tüpler</td><td>Greiner</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>Steril 50 ml Tüpler</td><td>Greiner</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Steril serolojik pipetler 5 ml</td><td>Greiner</td><td>606160</td><td></td></tr><tr><td>Steril serolojik pipetler 10 ml</td><td>Greiner</td><td>607160</td><td></td></tr><tr><td>Steril serolojik pipetler 25 ml</td><td>Greiner</td><td>760180</td><td></td></tr><tr><td>Biyolojik güvenlik kabini, sınıf II</td><td>Thermo Scientific</td><td>1300 serisi, tip A2</td><td></td></tr><tr><td>Mikro İzolatör; Raf</td><td>RAIR&nbsp; IsoSystem&nbsp;</td><td>76144W</td><td>Süper&nbsp; Fare&nbsp; 1800 AllerZone&nbsp;</td></tr><tr><td>Soğutmalı Mikrosantrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>Legend Micro 21R</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj</td><td>Heraeus</td><td>Biofuge-pico</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Thermo Scientific</td><td>Sorval ST40R</td><td></td></tr><tr><td>CO2 İnkübatör&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>Model&nbsp; 3111</td><td></td></tr><tr><td>Steril İnce uçlu pastör pipetleri</td><td>Deltalab</td><td>D210022</td><td></td></tr><tr><td>Steril pastör pipetleri</td><td>Deltalab</td><td>200007</td><td></td></tr><tr><td>Steril 24 oyuklu plaka</td><td>Greiner</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavisi Solüsyonu&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik Hücre Sayacı - Kontes</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>C10227&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kontes Hücre Sayma Odası Slaytları</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>C10312</td><td></td></tr><tr><td>Akış Sitometri Tüpleri</td><td>BD</td><td>343675</td><td></td></tr><tr><td>Akış Sitometresi - FACS Canto-II</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gerçek Zamanlı PCR Cihazı - Rotor Geni Q veya ABI 7900</td><td>Qiagen / Uygulamalı Biyosistemler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trizol Reaktif</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15596-026</td><td>Moleküler Biyoloji Sınıfı</td></tr><tr><td>DNAse-I</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>18068-015</td><td>Moleküler Biyoloji Sınıfı</td></tr><tr><td>DNAse-I Tamponu 10X</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>18068015</td><td>Moleküler Biyoloji Sınıfı</td></tr><tr><td>EDTA 25 mM</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>18068015</td><td>Moleküler Biyoloji Sınıfı</td></tr><tr><td>Ultra Saf Su</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10977</td><td>Moleküler Biyoloji Sınıfı</td></tr><tr><td>RNAse Çıkışı</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>100000840</td><td>Moleküler Biyoloji Sınıf</td></tr><tr><td>Rastgele Heksamer Primerleri</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>N8080127</td><td>Moleküler Biyoloji Sınıf</td></tr><tr><td>M-MLV-RT tamponu</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>18057-018</td><td>Moleküler Biyoloji Sınıf</td></tr><tr><td>M-MLV-RT enzimi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>28025-021</td><td>Moleküler Biyoloji Sınıfı</td></tr><tr><td>QuantiTect Syber Green PCR Kiti</td><td>Qiagen</td><td>204143</td><td>Moleküler Biyoloji</td></tr><tr><td>Sınıfına Özel Primerler&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td></td><td>Moleküler Biyoloji Sınıfı</td></tr></tbody></table>

alternatifi olarak dilaltı immünoterapi akut solunum enfeksiyonları karşı koruma tetikleyebilecek

Sublingual Immunotherapy as an Alternative to Induce Protection Against Acute Respiratory Infections

Dil altı yolu, küçük molekülleri kan dolaşımına iletmek ve farklı bölgelerdeki bağışıklık tepkisini modüle etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Sistemik ve mukozal bölgelerde, yani akciğerlerde ve ürogenital sistemde humoral ve hücresel yanıtları etkili bir şekilde indüklediği gösterilmiştir. Dil altı aşılaması, alt ve üst solunum yollarındaki enfeksiyonlara karşı korumayı teşvik edebilir; Ayrıca alerjenlere karşı toleransı artırabilir ve astım semptomlarını iyileştirebilir. Dil altı immünoterapi (SLIT) ile akciğerin immün yanıtının modülasyonu, potansiyel olarak zararlı moleküllerin doğrudan hava yollarına verilmesini gerektirmediği için formülasyonların intranazal yolla doğrudan uygulanmasından daha güvenlidir. İntranazal doğumun aksine, beyin toksisitesi veya yüz felci gibi yan etkiler SLIT tarafından desteklenmez. SLIT'in altında yatan bağışıklık mekanizmaları hala belirsizliğini korumaktadır ve akut akciğer enfeksiyonlarının tedavisinde kullanımı henüz araştırılmamıştır. Bu nedenle, potansiyel avantajlarını daha fazla araştırmak için SLIT'in uygun hayvan modellerinin geliştirilmesine ihtiyaç vardır. 
Bu çalışma, akut pnömokok pnömonisine karşı koruma yeteneklerini değerlendirmek için farelerde terapötik ajanların dil altı uygulamasının nasıl gerçekleştirileceğini göstermektedir. Dil altı aşılama sırasında fare kullanımının teknik yönleri, dil altı mukozasının hassas bir şekilde tanımlanması, lenf düğümlerinin boşaltılması ve dokuların, bronkoalveoler lavajın ve akciğerlerin izolasyonu gösterilmektedir. FACS analizi için tek hücreli süspansiyon hazırlığı için protokoller ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. İmmün yanıtın analizi için diğer aşağı akış uygulamaları tartışılmaktadır. Streptococcus pneumoniae inoculum'un hazırlanmasının teknik yönleri ve farelerin intranazal zorluğu da açıklanmaktadır.
SLIT, akciğerlerin bağışıklık tepkisini modüle etmek için aday moleküllerin taranmasına izin veren basit bir tekniktir. SLIT'in başarısını etkileyen parametreler, yüksek konsantrasyonlu formülasyonların moleküler boyutu, bozunmaya yatkınlığı ve stabilitesi ile ilgilidir.

Sublingual immünoterapi ile başarılı Akci¤erlere bağışıklık tepkisini modüle etmek üzere kullanılabilir. Biz, flagellin, TLR5 ve NLRC4 agonisti tek bir dozu, kemokinler CXCL1, CCL20 ve tuzlu suyla tedavi edilen kontrol grubu ile karşılaştırıldığında sitokin, IL-6 kodlayan mRNA'nın önemli ölçüde artmasına neden olduğunu göstermiştir. MRNA seviyelerinin indüksiyon SLIT'in sonra 8 saatte doruğa katlayın ve 20 saat (Şekil 1) sonra bazal düzeylere geri dönmektedir. SLIT'in S'dir. Pneumoniae ile 2 saat önce uygulandı burun içi enfeksiyona, ancak, CXCL1 ve IL 6 mRNA düzeyleri tedavi edilmemiş hayvanlarda (Şekil 2) ile karşılaştırıldığında SLIT'in sonra, hatta 24 saat regüle kaldı. FACS ile BAL hücre popülasyonlarının ve akciğer dokusunun analizi dil altı yolu ile FLIC ile muamele edilmiş hayvanlar için akciğerin doku (Şekil 3), hava yollarında nötrofil sayısı artmıştır, ancak ortaya çıkardı. Şekil 4'te gösterildiği gibi, flagellin ile SLĐT koruma teşvik edilmesi ve akut pnömokok kökenli pnömoniye karşı yaşamalarım arttırmıştır. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="6.7in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig1highresV2.jpg" width="680"> Flagellin ile sublingual immünoterapi Şekil sonra akciğerlerin transkripsiyonel profili 1. kinetiği. Sekiz ila 10 haftalık BALB / c fareleri (n = 4) olarak uygulandı dil altı yolu ile, flagellin ya da tuzlu su, 10 ug ile muamele edilmiştir. Akciğerler farklı zaman noktalarında toplandı ve nükleik asit koruyucu yerleştirildi. Tüm RNA çıkarılması uygulandı ve cDNA sentezlenmiştir. mRNA seviyeleri Tabl listelenen spesifik primerler kullanılarak, gerçek zamanlı PCR ile değerlendirildiE 1. miktar ölçümü normalizasyonu için ACTB mRNA seviyelerini kullanarak ACt yöntemi göre gerçekleştirilmiştir. Sonuçlar ± SEM ortalaması olarak salin ile tedavi edilmiş gruba kıyasla kat bir artış olarak gösterilmiştir. Yıldız Mann-Whitney testi kullanılarak hesaplanmıştır istatistiksel olarak anlamlı fark (p &lt;0.05) göstermektedir. Sonuçlar Şekil 2, bağımsız deneyi temsil etmektedir. <img alt="Şekil 2" fo:content-width="6.2in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig2highresV2.jpg" width="660"> Ile, flagellin. Sekiz ila 10 haftalık BALB / c fareleri (n = 4, kontrol grubu için n = 7 tedavi gören grup için) sublingual immünoterapi sonra pnömokok kökenli pnömoni sırasında Şekil 2. akciğerleri transkripsiyonel profili, flagellin ya da tuz, 10 ug ile muamele edilmiştir anestezi altında dilaltı rota. 2 saat sonra 10 farenin neden olan en az ölümcül bir doz (MSD) ile intranazal yoldan tehdit edildiS. klinik izolatı% 0 mortalite 4x10 5 CFU / 50 ul karşılık gelen pneumoniae serotip 1 E1585. Akciğerler mücadeleden 24 saat sonra toplandı ve RNA ekstraksiyonu ve cDNA sentezi gerçekleştirilmiştir kadar nükleik asit koruyucu depolanmıştır. Gerçek zamanlı PCR ile gerçekleştirilmiştir (Tablo 1 'de astar listesine bakınız) ve nispi ölçümü normalizasyonu için ACTB mRNA seviyelerini kullanarak ACt yöntemi göre gerçekleştirilmiştir. Sonuçlar ± SEM ortalaması olarak salin ile tedavi edilmiş gruba kıyasla kat bir artış olarak gösterilmiştir. Yıldız Mann-Whitney testi kullanılarak hesaplanmıştır istatistiksel olarak anlamlı fark (p &lt;0.05) göstermektedir. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig3highresV2.jpg" width="680"> Polimorfonükleer nötrofil Şekil 3. Analiz (PMN) SLIT'in sonra akciğerlerin dokusunda ve hava yollarında işe. Eight'e10 haftalık BALB / c fareleri (n = 4) olarak uygulandı dil altı yolu ile, flagellin ya da tuzlu su, 10 ug ile muamele edilmiştir. 2 saat sonra farelerin S. MLD ile intranazal yoldan tehdit edildi pneumoniae serotip 1 E1585. Hücumdan 24 saat sonra, BAL yapıldı ve akciğerler FACS analizi için işlenmiştir. PMN Ly6G yüksek / CD11b yüksek / CD11c'nin negatif hücreler olarak tanımlanan ve FCS-SSC profiline göre yapılmıştır. Sonuçlar akciğerde ya da BAL'da toplam hücre sayıları açısından PMN yüzdesi olarak ifade edilmiştir. Barlar ± SEM medyan temsil eder. Yıldız tek yönlü Mann-Whitney testi kullanılarak hesaplanmıştır istatistiksel olarak anlamlı fark (p &lt;0.05) göstermektedir. <img alt="Şekil 4" fo:content-width="5.3in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig4highresV2.jpg" width="530"> Flagelllin'ine ile Şekil 4. SLIT'in akut pnömokokal pnömoniye karşı fareleri korur. S. MLD ile intranazal yoldan tehdit edildi pneumoniae serotip 1 E1585. Hayatta kalma günlük olarak değerlendirildi. Kaplan-Meier eğrileri Log-rank (Mantel-Cox) testi açısından karşılaştırıldı. Yıldız istatistiksel olarak anlamlı fark (p &lt;0.05) .Results 2 bağımsız deneyler temsilcisi olduklarını gösterir. <table align="center" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody align="center"><tr><td> İsim </td><td> Dizi 5'-3 ' </td><td> PCR Ürün uzunluğu (bp) </td></tr><tr><td> mB,-actin_F </td><td> GCTTCTTTGCAGCTCCTTCGT </td><td rowspan="2"> 68 </td></tr><tr><td> mB,-actin_R </td><td> CGTCATCCATGGCGAACTG </td></tr><tr><td>mCCL20_F </td><td> TTTTGGGATGGAATTGGACAC </td><td rowspan="2"> 69 </td></tr><tr><td> mCCL20_R </td><td> TGCAGGTGAAGCCTTCAACC </td></tr><tr><td> mCXCL1_F </td><td> CTTGGTTCAGAAAATTGTCCAAAA </td><td rowspan="2"> 84 </td></tr><tr><td> mCXCL1_R </td><td> ACGGTGCCATCAGAGCAGTCT </td></tr><tr><td> mlL-6_F </td><td> GTTCTCTGGGAAATCGTGGAAA </td><td rowspan="2"> 78 </td></tr><tr><td> mlL-6_R </td><td> AAGTGCATCATCGTTGTTCATACA </td></tr><tr><td> mTNFalpha_F </td><td> CATCTTCTCAAAATTCGAGTGACAA </td><td rowspan="2"> 63 </td></tr><tr><td> mTNFalpha_R </td><td> CCTCCACTTGGTGGTTTGCT </td></tr><tr><td> mCxcl2_F </td><td> CCCTCAACGGAAGAACCAAA </td><td rowspan="2"> 72 </td></tr><tr><td> mCxcl2_R </td><td> CACATCAGGTACGATCCAGGC </td></tr></tbody></table> Gerçek zamanlı PCR analizi için kullanılan astar listesi Tablo 1.. QPCR analizi için kullanılan özel astar dizilerini sıralamaktadır. İleri ve fare ACTB için primerler, ters Cccl20, CXCL1 Il6, TNFa ve CXCL1 5'-3 'sekansları gibi sunulmuştur ve beklenen ürün uzunluğu hem baz çiftlerinde (bp) olarak gösterilir.

Bu çalışma, farelerde akut pnömokok pnömonisine karşı koruma sağlamak için akciğerlerde doğuştan gelen bağışıklık tepkisini artırmak için dil altı immünoterapisinin kullanılmasının rahatlığını göstermektedir.

Alternatifi olarak dilaltı immünoterapi Akut Solunum Enfeksiyonları Karşı Koruma tetikleyebilecek

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been ...

Bu prosedürün genel amacı, akciğerlerde doğuştan gelen bağışıklık tepkisini artırmak ve ölümcül pnömokok pnömonisine karşı konfor koruması sağlamak için dil altı immünoterapisini kullanmaktır. Farede ilk adım, anestezi uygulanmış farenin dil altı mukozasına immünostimülatör ajan bayrağı ile bir çözeltinin uygulanmasından oluşur. Daha sonra, daha önce kontrol olarak düz çizgi veya salin ile tedavi edilen anestezi uygulanmış farelere intranazal kök tarafından ölümcül bir dozda streptococcus pnömonisi içeren bir süspansiyon aşılanır.Bronş biler laj, hava yollarına sızan alt popülasyonu analiz etmek için yapılır ve akciğer dokusu, hücre popülasyonunun fenotipik karakterizasyonu için tek hücre süspansiyonu elde etmek üzere işlenir. Multiparametrik akış sitometrisi mandibular ile, bir aksesuar mandibular lenf nodları ve dil altı dokusu da akış sitometrisi veya diğer aşağı akış analizlerini gerçekleştirmek için işlenebilir. Hava yollarına sızan hücre popülasyonları.Akciğerler veya dil altı mukozası, immün fenotipleme ve multiparametrik akış sitometrisi ile tanımlanabilir Dil altı immünoterapisinden sonra farklı dokulardaki immün aktivasyon, gerçek zamanlı PCR ile transkripsiyon profili incelenerek de analiz edilebilir. Biyoteknoloji Bölümü Aşı Araştırma Laboratuvarı'na hoş geldiniz, U Üniversitesi Tıp Fakültesi'ni tahsis ediyoruz. İnternazal yol, akciğer enfeksiyonunu veya farklı bir teolojiyi tedavi etmek veya önlemek için immünostimülatör ajanların verilmesi için başarıyla kullanılmıştır.Bakteriyel jelin bir bileşeni olan intranazal doğum hattının, STO farelerinin neden olduğu devam eden akciğer enfeksiyonunu kırmak için etkili bir şekilde kullanılabileceğini gösterdik. Burun içi kök normalde düşük dozda terapötik ajan gerektirmesine ve solunum yollarında güçlü bir yanıt oluşturmasına rağmen, merkezi sinir sistemi toksisitesi ve hitabet sinirleri boyunca immünostimülatör bileşiklerin emilimi ile ilişkili fasyum paralizisi olasılığı gibi bazı dezavantajları vardır. Bu nedenle, pnömokok pnömonisine karşı koruyucu bağışıklığı indüklemek için bir alternatif olarak bir UAL immünoterapi modeli oluşturduk.Dil altı immünoterapisi, intranazal kuruluma kıyasla daha güvenli bir alternatif sunar. Non-invaziv, ağrısız ve basittir. Terapötik bir ajanın daha yüksek dozlarını gerektirebilmesine rağmen, uzunluktaki bağışıklık tepkisini nihai olarak modüle etmek için NA veya farmasötik ürünler vermek için kullanılabilir.Şimdi size, terapötik bir ajan olarak pohpohlama kullanarak farelerde dil altı uygulamasının nasıl yapıldığını göstereceğiz. Gurur verici subin immünoterapisi, sonunda fareleri akciğere doğuştan gelen bir bağışıklık tepkisini tetikleyerek streptokok pnömonisi ile ölümcül bir burun içi zorluktan koruyabilir. Ayrıca, akışlı geometri ve gerçek zamanlı PCR kullanarak uzunluk, enfeksiyon sırasında ve dil altı immünoterapi sonrası doğumsal yanıtın karakterizasyonunu da ele alacağız.Son olarak, daha fazla Analiz için yerel tanecikli lenf düğümlerini ve dil altı dokusunu nasıl toplayacağınızı göstereceğiz. Test edilecek stimülatör ajanın çözeltisini hazırladıktan sonra, immüno-uyarıcı içeren çözeltiyi maksimum 10 mikrolitre hacimde Interperitoneal Injection Pet ile 200 mikrolitre Ketamin OSI solüsyonu uygulayarak hayvanları uyuşturun. Ardından fareyi sol elinizle alın ve serbest elinizle baş parmağınızı ve işaret parmağınızı kullanarak tutun.Kapalı forsepsleri nazikçe dilin altına yerleştirin ve yerinde tutun. Orta ve yüzük parmağınızı kullanarak pipeti alın ve solüsyonu ağzın tabanına ve dilin sırt tarafına uygulayın. Forsepsleri çıkarın ve kafese geri koymadan önce ağzın üç ila beş dakika dinlenmesine izin verin.Bu tekniğin temel özellikleri, hayvanları tedavi etmek için kullanılan toplam hacim ve anestezidir. Ağız boşluğu farelerinin küçük boyutu, dil altı oranına uygulanabilecek maksimum hacmi 10 mikrolitre ile sınırlar. Doza karar verdikten sonra, numunenin konsantrasyonunu bu maksimum hacme ayarlamanız gerekir.Daha büyük hacimler, çözeltinin istenmeyen şekilde yutulmasına veya aspirasyonuna neden olabilir. Yutmayı önlemek ve maddelerin epitel yoluyla nüfuz etmesini sağlamak için anestezi çok önemlidir. Fareler çok erken uyanacağı için anesteziye nefes almamanızı tavsiye ederiz.Bazı enjekte edilebilir anesteziklerin farelerde tükürük salgısına neden olabileceğini unutmayın. Böyle bir durumda, çözeltiyi terapötik ajanla uygulamadan önce aşırı tükürük salgısını ortadan kaldırmak için küçük bir parça veya kağıt kullanın, terapötik ajanın dozu, etkisini en üst düzeye çıkarmak için ayarlanmalıdır ve birkaç dozun test edilmesi şiddetle tavsiye edilir. Bileşiğinizi daha önce intranazal kök ile kullandıysanız, beş ila 10 kat daha yüksek bir doz test etmek için iyi bir başlangıç noktası olacaktır.Terapötik ajanınızı dil altı kökü ile test edin. Epitel yoluyla emilimin şu şekilde sınırlı olacağını unutmayın: Molekülün boyutu çözülme Bilinen bakteriyel CFU numarası santrifüjünün önceden hazırlanmış streptokok pnömonisi stoğunun bir alikotu 2, 500 Gs'de beş dakika boyunca ve süpernat Askıya Alma Bir mililitre ster salin ve santrifüjde atın. Yine, süpernatanı atın ve sonra dinlenin.50 mikrolitrede dört kez 10 ila beş CFU'luk bir süspansiyon elde etmek için peleti uygun steril salin hacminde askıya alın, bu da ampulde %100 mortaliteye neden olan partikül serotipin minimum bakteri dozuna karşılık gelir C.Fareler 50 mikrolitre bakteri süspansiyonu alır ve toplam hacmi daha önce anestezi uygulanmış bir farenin burun deliklerine dikkatlice aşılar. Fareyi iki dakika dik tutun ve iki dakika daha sırt pozisyonunda dinlendirin. Meydan okumadan sonra, süspansiyonun seri on kat seyreltmesini gerçekleştirerek bakteriyel süspansiyondaki CFU numaralarını doğruladı ve bunları kan üzerine plakaladı.Agar plakası %5 CO2 mukozası ile gece boyunca 37 derecede inkübe edin. Etno kolonileri, alfa hemolitik bakterilerin yeşil alo özelliği ile ayırt edilebilir. Koloni oluşturan birimleri sayın ve meydan okuma dozu kullanımını kaydedin.Hayvana ötenazi yaptıktan sonra, göğüs boşluğunu boynuna kadar açın. Trakea ve dil altı bölgesini ortaya çıkarmak için ön bacaklar boyunca bir kesi yapın. Mandibular lenf düğümlerini tanımlayın.Bunlar genellikle tükürük bezlerinin üzerine oturan beyazımsı oval şekilli yapılar olarak görünür. İnce uçlu eğri forsepsleri kullanarak, dil altı dokusunu nazikçe yukarı çekin ve ağız tabanının sırt tarafını ortaya çıkarın. Mandibular lenf düğümlerini dokudan çıkarmak için çekirdek ince uçlu forseps ile hafifçe yukarı çekerek alın.Bunları, aşağı akış prosedürüne göre C-R-P-M-I veya nükleik asit koruyucu solüsyon içeren bir tüpe yerleştirin. Bu daha sonra gerçekleştirilecekti. Şimdi boğazın her iki tarafında daha derinde bulunan daha küçük lenf düğümlerini tanımlayın ve çıkarın.Bunlar aksesuar mandibular lenf düğümleridir. Akciğeri açığa çıkarmak için göğüs boşluğunu açın ve timusu çıkarın. İnferior binna CVA'yı kesin ve bronş lavajını gerçekleştirmek için fazla kanı emici bir doku ile alın.İlk olarak, trakeayı açığa çıkarın. Sonra bir neşter ile küçük bir kesi yapın ve ince bir uç yerleştirin. Daha önce kalsiyum magnezyum içermeyen bir mililitre PBS ve bir milimolar EDA ile doldurulmuş peppe'yi aktarın Toplam hacmi en az üç kez dikkatlice aşılayın ve aspire edin.Daha sonra hücre süspansiyonunu aspire edin ve steril 1.5 mililitrelik bir tüpe aktarın. Akciğerlerin kan damarlarında bulunan tüm kırmızı kan hücrelerini ve bağışıklık hücrelerini ortadan kaldırmak için kalbin sağ ventrikülüne kalsiyum, magnezyum içermeyen beş mililitre PBS ve bir milimolar EDTA enjekte ederek akciğerleri perfüze edin. Perfüzyon doğru yapılırsa, akciğerlerin rengi pembeden beyaza dönecektir.Kalbi çıkarın, perfüz akciğerlerini alın ve yapılacak aşağı akış analizine bağlı olarak bunları tam orta veya nükleik asit koruyucu solüsyona yerleştirin. Dil altı mukozasındaki hücre popülasyonunu analiz etmek isterseniz, hayvanın başını izole edin ve tükürük bezlerini çıkarın ve yumuşak doku takın. Mandibula eklemine ulaşana kadar ağzın her iki tarafında bir kesi yapın ve alt çeneyi dil ve ağız tabanı ile birlikte ayırın.Bir çift künt sıçan dişi forseps kullanarak, dili yukarı çekin ve dilin tabanının ağız tabanıyla birleştiği yerde bir kesi yapın. Bu alan dil altı mukozasını oluşturur. Biyopsi zımbası, forseps ve makas kullanarak dili kesin ve çıkarın.Dil altı mukozal dokusunu kesin ve temiz bir tüpe yerleştirin. Akciğerleri 24 oyuklu bir plakaya aktarın ve temiz bir makasla ifade edin. Bir mililitre sindirim ortamı ekleyin, birkaç kez yukarı ve aşağı pipetleyin ve inkübasyondan sonra 40 dakika boyunca 37 derecede ve% 5 CO2'de inkübe edin.Hücrelerin çoğunun dokudan salındığından emin olmak için tekrar yukarı ve aşağı pipetleyin. Hücre süspansiyonunu 40 mikro gözenekli bir hücre süzgecine aktarın ve beş mililitre PBA ile yıkayın. 2, 500 GS'de beş milimolar EDTA santrifüjü beş dakika.Reus, kalsiyum, magnezyum, bir milimolar EDTA ve% 1 fetal boing serumu içermeyen PBS ile yapılan bir mililitre faks EDTA'da hücreleri askıya alır. Bir QU alın ve hücrelerin trip ve blue ile iki kat seyreltilmesini yapın ve Reus süspansiyon hücrelerini mililitre başına 10 ila yedi hücre arasında iki kez konsantrasyonlara kadar sayın ve tüp başına 50 mikrolitre ekleyin. İmmünotipik analiz için her tüpe 50 mikrolitre iki kez antikor karışımı ekleyin.Gerçeklerle üç kez yıkadıktan sonra karanlıkta buz üzerinde 30 dakika inkübe edin. EDTA: 200 mikrolitre olguda hücreleri yeniden süspanse edin EDTA ve bir sitometrede analiz edin: Aynı prosedür, bu alanı içeren sindirim ortamını kullanarak dil altı dokusundaki hücre popülasyonunu analiz etmek için kullanılabilir. Kollajenaz ve DS, TLR beş ve LC dört'ün bir agonisti olan saflaştırılmış düz çizgi kullanılarak yapılan bir dil altı immünoterapisi, akciğerlerde nötrofil alımında rol oynayan kemokin ve sitokinlerin mRNA seviyelerinde önemli ölçüde yukarı regülasyona neden oldu.Bu aynı zamanda enfeksiyon sırasında da gözlendi. Akciğerlere PMN alımı akım sitometrisi ile doğrulandı. TLR beş agonisti ile dil altı tedavi, hayvanların sağkalımının artması ve pnömokok pnömonisine karşı koruma ile ilişkilidir.Dil altı immünoterapisinin, invaziv PNE pnömokok pnömonisine karşı hatlarda koruma sağlamak için etkili bir araç olduğunu gösterdik. Bu, histo pnömoni tarafından üretilmeyen bir terzi beş agonisti olan lain'in dil altı kurulumu ile başarıldı. Lain'in dil altı montajı, hatlarda kemokin C Xcl L olanın yukarı regülasyonunu ve ayrıca nötrofillerin infiltrasyonunu indükledi.TLR agonistleri ile pnömokok dil altı immünoterapisini ortadan kaldırmak için çok önemli olan bir hücre türü, enfeksiyonları tek başına veya bakteri yayılımını ve ciddi enfeksiyon formlarının gelişmesini önlemek için antibiyotik tedavisi gibi mevcut tedavilerle kombinasyon halinde tedavi etmek için kullanılabilir. Dil altı kökü de aşı vermek için kullanılabilir ve mukozal ve sistemik koruyucu bağışıklığı indüklemek için etkili olduğu gösterilmiştir. Bu strateji, solunum yolu enfeksiyonları ve özellikle kardeş pnömonileri için özellikle ilgi çekicidir, çünkü sadece temel hastalığı önlemekle kalmaz, aynı zamanda giriş sporunda bakterileri bloke eden asal kolonizasyonu da önleyebilir.Genel olarak, dil altı yolunun solunum yolu enfeksiyonlarını tedavi etmek veya önlemek için yeni stratejiler geliştirmek için çekici bir alternatif olduğuna inanıyoruz. Bu tekniği denemenizi öneririz.

sublingual-immunotherapy-as-an-alternative-to-induce-protection

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Profilaktik ve terapötik aşılama çoğu zaman düğümleri ve bağışıklık hücrelerinin dolayısıyla kötü katılımını lenf nedeniyle aşının hafta drenaj güçlü bağışıklık tepkilerini uyarmak için başarısız olur. Lenf düğümlerine aşı doğrudan enjeksiyon ile, sözde lenf sistemi içi enjeksiyon, aşı etkinliği güçlü geliştirilebilir ve aşı doz azaltılabilir.

Fare intralenfatik immünoterapi ve Aşılama

Reaktiflerin Entübasyon aracılı intratrakeal (IMIT) instilasyon solunum yolu hastalıkları, hem de akciğer içine doğrudan tedavi reaktifler aşılamak için bir yöntem incelenmesi için mükemmel, invazif olmayan bir yöntemdir. Bu klinik öncesi test için uygun bir hızlı ve yüksek oranda çoğaltılabilir bir yöntemdir.

Entübasyon-aracılı intratrakeal (IMIT) damlatma: A Noninvaziv, Lung-özel Dağıtım Sistemi

Aşıların nasıl çalıştığı hakkında genel bir bilgi eksikliği var. Burada, dendritik hücrelere ve T hücresi bağışıklığına özel olarak odaklanarak, aşılara karşı erken konak bağışıklık tepkileri hakkında fikir edinmek için ters genetik ve kemik iliği kimerik farelerin birlikte kullanılmasını öneriyoruz.

Kimerik fare modellerinde Rekombinant Grip aşıların burun içinde yoluyla mukozal bağışıklık Okumak

Haemophilus influenzae'nin farelerin alt solunum yollarına intra-trakeal inokülasyon prosedürünü gösteriyoruz. Bu, fare modellerinde hava yolu iltihabını düzenleyen sinyal yollarını incelemek için çok kullanışlı bir araçtır.

intra-trakeal İdaresi<em&gt; Haemophilus influenza</em&gt; Fare Modelleri Havayolu inflamasyonu Eğitim için

Burada, fare modelinde BCG ile intranazal ve subkutan bağışıklamanın neden olduğu koruyucu etkinliği ve akciğer immün yanıtını karşılaştırmak için izlenen metodolojiyi detaylandırıyoruz. Sonuçlarımız, pulmoner aşılamanın faydalarını göstermekte ve aşı kaynaklı korumada IL17 aracılı yanıtın rolünü önermektedir.

Koruyucu etkinliği ve Pulmoner Bağışıklık Tepkisi Fare Subkutan ve Burun BCG İdaresi ardından

Açıklanan antijenik liposomal nano tanecikleri ve kullanımları uyarıcı B-hücre harekete geçirmek vitro ve in vivohazırlıktır. Tutarlı ve güçlü antikor yanıt-e doğru yeni bir fıstık alerjisi model gelişmesine yol açtı. Antijenik lipozomlar oluşturmak için protokol farklı antijenleri ve bağışıklama modeller için genişletilebilir.

Antijenik lipozomlar hastalığa özgü antikorların üretimi için

Burada etkinliği ve ana bilgisayar bağışıklık yanıtı aşı vivo içinde değerlendirilmesi için zarif bir iletişim kuralı mevcut. Bu iletişim kuralı eğitim viral, bakteriyel aşı modelleri veya paraziter patojenler için adapte edilebilir.

Ana bilgisayar-patojen yanıt ve aşı etkinliği farelerde değerlendirilmesi

Burada sunulan bir adım-adım prosedür doğrudan intratrakeal lipopolisakkarid instilasyon tarafından fareler akut akciğer hasarı neden ve kan örnekleri, Bronkoalveoler Lavaj sıvısı ve akciğer dokusu FACS analizi gerçekleştirmek için. Minimal invasiveness, basit kullanım, iyi reproducibility, ve hastalık şiddeti titrasyon bu yaklaşımın avantajlarıdır.

Doğrudan Intratracheal Lipopolysaccharide Instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme

Bu makale, intranazal aşıların ve emziren tavşanlardan(Oryctolagus cuniculus)süt toplanmasının, dil bağışıklığını çeviriye uygun bir anne bağışıklama modelinde değerlendirmenin bir yolu olarak tanımlanmaktadır ve göstermektedir.

Yeni Zelanda Beyaz Tavşanlarında Anne Bağışıklama Çalışmalarında İntranazal Bağışıklama ve Süt Toplama (Oryctolagus cuniculus)

Bu çalışmada, invaziv olmayan endotrakeal instillasyon tekniğinin, akciğerlere hassas LPS iletimi sağlamak için temel bir laringoskop kullanılarak sıçanlarda ALI geliştirdiği gösterilmiştir. LPS, laringoskop kullanılarak endotrakeal tüp aracılığıyla yerleştirilir. Akciğer yaralanmasının büyüklüğü birden fazla zaman noktasında değerlendirilir.

Kemirgenlerde akut akciğer hasarını indüklemek için lipopolisakkaridin invaziv olmayan endotrakeal uygulaması

Öğrenin, farelerde akut pnömokok pnömonisine karşı koruma sağlamak için dilaltı immünoterapi yöntemiyle akciğerlerdeki doğuştan gelen bağışıklık yanıtını nasıl artıracağınızı. Bu teknik, solunum yolu enfeksiyonlarına karşı güvenli bir alternatif sunar.

Alternatifi olarak dilaltı immünoterapi Akut Solunum Enfeksiyonları Karşı Koruma tetikleyebilecek

Daha fazla video keşfet