Hızlı Floresan In Situ Hibridizasyon Protokolü

Bu prosedürün genel amacı, immünofloresan ile birlikte hızlı bir floresan in situ hibridizasyon kullanarak X kromozomu inaktivasyonu sırasında uzun kodlamayan varlık, RNA ve bununla ilişkili epigenetik modifikasyonun dinamiklerini araştırmaktır. Bu protokol, nüfuz eden ve daha sonra boyama için sabitlenen farklılaşan embriyo vücut hücreleri ile slaytların sitozin hazırlanmasını gerektirir. Daha sonra, histon H'ye karşı bir antikor tarafından lokalize edilen floresan markör, üç trimetil lizin 27, aktif olmayan X kromozomu üzerinde birikir.

Son adım, beş asal amino modifikasyonu içeren ve var olmak için bir ortalama reaktif florofor ile etiketlenmiş oligonükleotid problarını kullanır. RNA balığı. Sonuç olarak, floresan mikroskobu, E Es hücrelerinin farklılaşması sırasında mevcut RNA bulutunun lokalizasyonunu ve histon modifikasyonunu göstermek için kullanılır.