Mika hazırlanması Yüksek Çözünürlüklü Optik Mikroskopi Görüntüleme için lipit tabakalarının Desteklenen

Burada sunulan prosedür, tek molekül izleme çalışmaları gibi yüksek çözünürlüklü görüntülemeye uygun katmanlar tarafından MICA® destekli lipid hazırlamanın kolay bir yöntemini göstermektedir. MICA® yüzeyi, düz ve son derece ince taze bir mika yüzeyini açığa çıkaran optik yapıştırıcı kullanılarak cam mikroskop lamı ile kapak lamı arasına yapıştırılmış tek bir MICA® tabakasından oluşan bir sandviçin ayrılmasıyla hazırlanır. Bir buçuk mililitrelik bir flakon kabından yapılmış küçük bir plastik hazne monte edilerek, iki tabaka oluşumu için gereken lipit veziküllerinin hacmi 30 mikrolitre kadar düşük olabilir.

İlk adım olarak, tedarikçiden gelen çok katmanlı MICA® tabakasını alın ve makasla daha küçük parçalar halinde kesin. Yeni bir bıçak bıçağı kullanarak broşürü iki veya üç ince broşür haline getirin. Şimdi temizleyin, kapak iyice uyur.

Bu, 0.17 milimetre kapak yerleştirmeyi içerir. Her kapağı bir cam eğitim kavanozuna sığar. Ayrı bir yuvada uyuyun ve 60 santigrat derecede 30 dakika boyunca deterjan içinde sonikasyon yapın.

Kapağı yıkayın. Mini anahtar suyu ile 10 ila 20 kez uyur ve hava akımı veya nitrojen ile fön çeker. Bir mikroskop cam lam alın ve yerinde temizleyin.

Daha önce mikroskop patlaması ve küre üzerinde yaklaşık 15 mikrolitre düşük viskoziteli optik ahe küçük bir damla. Bir UV ışık kutusu üzerinde birkaç dakika boyunca broşür hasif'i kesin. Birkaç kat mika soymak için viski bandı kullanın.

İlk birkaç katman parçalanacaktır, bu yüzden viskiye bağlı katmanları görene kadar yapın. Bant düzgün ve tamdır. Bandı kapatın.

Micah Yüzeyine bir damla yüksek viskoziteli optik yapıştırıcı yerleştirin. Orada hava kabarcığı olmadığından emin olun. Saldırgan damlacığın üzerine nazikçe temiz kapak uykusu yerleştirin.

Ahe'yi yaymak için camı hafifçe vurmak için cımbız kullanın. Yine, yapıştırıcıyı UV ışığı ile birkaç dakika kürleyin. Camdan oluşan sandviçi bölmek için bıçak kullanın.

MICA'yı kaydırın ve uyku durumunu örtün. Çoğu durumda, yalnızca çok ince bir MICA tabakası örtü uykusuna yapışmış kalacaktır. Bir iğne veya cımbız ucuyla küçük çizikler yaparak MICA® yüzeyinizi incelemek için diseksiyon mikroskobu kullanın.

Yüzeyin gerçekten mika olup olmadığını, yüzeyin düzgün bir şekilde çizildiği yerde, burada olduğu gibi veya optik yapıştırıcı üzerinde, yüzeyin parlak olduğu yerde olduğu gibi kolayca söyleyebilirsiniz. Bir buçuk mililitrelik cam şişeden bir bardak alın, gaz kabını çıkarın ve kapağı oje kullanarak MICA® yüzeyine yapıştırın. Birkaç dakika kurumasını bekleyin.

Şimdi burada standart bir protokol kullanarak bir lipit çift katmanlı onarım lipidi katman katman hazırlayabilirsiniz. 30 mikrolitrelik bir damla lipit vezikül, flakon kapağı haznesine yerleştirilir ve tamponunuzu yıkamadan önce 60 dakika inkübe edilir. Yıkandıktan sonra numune görüntüleme için hazırdır.

Bu durumda, özel yapım numune tutucuya monte edilir. Bu tür hazırlanmış MICA® yüzeyinde tek moleküller kolayca gözlemlenebilir. Burada A-D-O-P-C'yi cam ve mika üzerinde desteklenen katmana göre karşılaştırıyoruz.

Hareket türünün bu iki yüzey arasında önemli ölçüde farklılık gösterdiğine dikkat edin. Sağ panellerde renklerle izlenen tek moleküllerin yolu, MICA® üzerindeki difüzyon davranışının cam üzerindekinden farklı olduğunu açıkça göstermektedir. Bununla birlikte, görüntüleme kalitesinde önemli bir fark yoktur.

20 nokta için yarı maksimum yoğunlukta düz fonksiyonun ortalama örgüsü, her iki alt tabaka için hemen hemen aynıdır, bu da MICA® yüzeyinin gözle görülür optik sapmalar oluşturmadan ışıkla tamamen nüfuz edebileceğini gösterir. Genel olarak, MSDS difüzyon davranışında bariz bir fark gösterir. Bununla birlikte, her durum için, farklı oranlarda yayılan iki parçacık popülasyonu gözlemlenebilir.

Hızlı ve yavaş olmak üzere iki farklı difüzyon katsayısı, çift üstel beslemeden kare yer değiştirmenin kümülatif olasılığına çıkarıldı. Bu DOPC çift tabakası için, her iki difüzyon bileşeni de MICA yüzeyinde daha hızlıdır, MICA® üzerindeki yavaş hareket eden parçacıklar hızlı olandan yaklaşık 10 ila 20 kat daha yavaştır. Bununla birlikte, cam üzerindeki yavaş nüfus, burada hareketsiz olmaya yakındır.

Yüzey tipinin lipid çift tabakalarının difüzyon davranışında bir fark yaratabileceğini gösterdik. Bu nedenle, MICA® gibi farklı substratlar üzerinde desteklenen çift tabakalar üzerindeki çalışmalar arasındaki sonuçları karşılaştırırken dikkatli olmak gerekir ve MICA'daki cam çift tabakaları görüntülemek, gösterdiğimiz karmaşık hazırlık nedeniyle genellikle oldukça zordur, ancak bu kadar yüksek kaliteli yüzeyleri hazırlamanın basit ama etkili bir yoludur.