7 Mayıs 2015
Deneysel hayvan araştırmaları, klinik transplantasyon uygulamalarının gelişiminde çok önemli bir rol oynamaktadır. Domuz ortotopik karaciğer nakli modeli (OLTx), insan koşullarına çok benzer ve klinik odaklı araştırmalarda sıklıkla kullanılır. Aşağıdaki protokol, aktif bir porto-kaval-juguler şant kullanan güvenilir bir domuz OLTx modeli için tüm bilgileri içerir.
Bu prosedürün genel amacı, domuzlarda allojenik karaciğer naklini güvenilir bir şekilde gerçekleştirmek ve ameliyat öncesi ve sonrası stabil hayvan hemodinamiği sağlamaktır. Bu, implantasyon aşamasında bağırsak tıkanıklığını önlemek için vena CVA ve portal venin çapraz klemplenmesinden önce aktif bir portal kaval juguler şant uygulanarak gerçekleştirilir. Daha sonra, supra hepatik kablo anastomozu ile başlayarak kava replasman tekniği ile ortotopik bir karaciğer nakli gerçekleştirilir.
Daha sonra portal ven anastomoz yapılır ve karaciğer reperfüze edilir. Son olarak portal kaval juguler şant çıkarılır ve infra hepatik vena cva, hepatik arter ve koledok kanalının kalan anastomozu tamamlanır. Sonuçta, domuz anesteziden ayrıldı ve ameliyat sonrası yakından izlendi.
Bu tekniğin total vasküler oklüzyon veya pasif inance gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, bu özel teknikte anabolik faz sırasında dalak tıkanıklığının tamamen önlenmesidir. Bu şekilde, majör bağırsak iskemisi ve hemodinamik instabiliteye yol açabilecek venöz hipertansiyon ve kılcal damar hasarını önlüyoruz Bir donör domuzdan karaciğeri çıkardıktan ve alıcı domuzu metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra, bir alıcı domuzu bir ısıtma yastığının üzerine bir ameliyat masasına sırtüstü pozisyonda yerleştiriyoruz. Entübasyondan sonra, domuzun kuyruğunda veya kulağında nabız oksimetresi ile doğru şekilde yapıldığını doğrulamak için kapak geometrisini kullanın.
Kalp atış hızını ve oksijen doygunluğunu izleyin. Daha sonra aktif bir portal kablo juguler baypas için kullanılacak olan sol dış juguler ven içine bir kılıf indükleyici yerleştirmek için Seldinger tekniğini uygulayın. Steril koşullar altında sağ eksternal juguler ven içine total parenteral nütrisyon kateteri yerleştirildikten sonra, sağ karotis arteri diseke edin ve invaziv arteriyel basınç monitörizasyonu için bir polipropilen kateter yerleştirin.
Ardından, acil ligasyona izin vermek için arteri çevrelemek için iki sıfır ipek kravat kullanın. Daha sonra, bir orta hat laparotomisi yapın ve sağ üst kadrana yeterli erişim sağlamak için bir abdominal ekartör yerleştirin. Daha sonra orta adımlarda, karaciğere yakın hepato duodenum ligamentini bağlar arasında bölün.
Hepatik arter ve safra kanalının dallarını tanımlayın, bölün ve işaretleyin. Daha sonra, gastroduodenal arterin bölünmesine ulaşana kadar hepatik arteri retrograd yönde inceleyin. Daha sonra, dalağın helyumunu dalak uzunluğunun yaklaşık yarısı boyunca ortaya çıkarmak için sağ taraftaki retroperitondan elektrokoter mobilize edilmiş bir vena CVA kullanarak portal veni yapışık dokudan serbest bırakın.
Splenik arteri ve veni yapışık peritoneal tabakalardan dikkatlice temizleyin. Daha sonra hem dalak arterini hem de veni çevrelemek için 4 2 0 ipek kravat kullanın. Kateterin ucunda iki ek delik bulunan 8.5 Fransız kılıf indükleyicisini, iki sıfır bağdan biri ile portal vene distal olarak bakacak şekilde splenik venin içine yerleştirin.
Kateteri distal olarak yerleştirilmesine sabitleyin ve damarı yerleştirmeye proksimalde kapatmak için başka bir iki sıfır bağ kullanın. Daha sonra, tuzlu suyu bir santrifüj pompa kafası, bir juguler tüp ve hem bir portal dalından hem de bir kaval dalından bir girişten oluşan bir baypasa doldurun. Kaval borusunun proksimal ucuna bir boru kelepçesi yerleştirin.
Ardından portalı ve baypasın juguler açıklığını her iki kılıf tanıtıcı katetere bağlayın ve bağlantıyı kapatmak için metal bir hortum kelepçesi halkası kullanın. Santrifüj pompa kafasını, intravenöz olarak 1000 miligram texa asidi ve 10.000 IU heparin uyguladıktan üç dakika sonra pompa konumuna yerleştirin. Her iki kılıf tanıtıcı kateterin kelepçelerini açın ve portal veni çapraz klempleyin.
Ardından, santrifüj pompayı dakikada yaklaşık 1.500 tur ile çalıştırın. Daha sonra bir deba sırt kelepçesi çapraz kelepçe kullanarak, infra hepatik vena CVA renal damarlara sadece kraniyal. Kalan kanın bir kısmını sıkmak için karaciğer dokusuna sıkı bir baskı uygulayın.
Daha sonra bir statsky kelepçe çapraz kelepçesi kullanarak, karaciğeri coddly geri çekerken bir diyafram kenarı da dahil olmak üzere sup hepatik vena kava'yı sıkıştırın. Şimdi supra hepatik vena CVA'yı doğrudan karaciğer dokusuna olan sınırından kesin ve hepatik helyumun yakınındaki portal veni, infra hepatik CVA klempine yaklaşık dört santimetre kraniyal olarak kesin. Bu deliğe vena kavanın ön duvarına bir delik açın.
Baypas kablosu açıklığının konektörünü, bir sıfır ipek bağ ile öne bakacak şekilde bir yem kilidi ile konumlandırın. Konektörü infra hepatik cva'ya sabitleyin. Ardından, baypasın kablo dalının boru kelepçesini açın.
Son olarak, mevcut portal juguler baypasa ek olarak bir kablo juguler baypasa izin vermek için infra hepatik CVA klempini açın. Pompanın hızını dakikada yaklaşık 2.500 mermiye çıkardıktan sonra, juguler taraftaki baypas çıkışının dakikada 900 ila bin mililitre arasında olduğunu onaylayın. Dört adet sıfır monofilament polipropilen sütür kullanılarak.
Alıcı taraftaki üç frenik ven oste osteosunu da sup hepatik CVA'nın açıklık dikişinde kapatın. Alıcı tarafta SUP hepatik CVA'nın her iki köşesinde içeride, dışarıda çift kollu dört adet sıfır monofilament polipropilen sütür. Donör organı karın boşluğuna yerleştirdikten sonra, donör S hepatik vena CVA'yı alıcı tarafa uyacak şekilde kesin.
Alıcı yan köşe dikişlerinin iç iğnelerini kullanarak, süper hepatik donör cva'nın her iki tarafında iç dış köşe dikişi yapın. Alıcı ve verici Avusturya yaklaştığında, sol sütürün her iki ucunu da bağlayın. Ardından, kravatın yanındaki alıcı kava arka duvarının dış iç dikişini yapın ve arka duvarın üzerinden geçin.
İdeal olarak, kalan sütür sol köşeden ön duvarın üzerinden geçecek şekilde kava duvarını önleyin. Daha sonra arka ve ön duvarlar için kullanılan her iki dikişi birbirine bağlayın. Donör portal veni uygun bir uzunlukta kestikten sonra, ön duvarı tamamlamadan kısa bir süre önce gösterildiği gibi uçtan uca bir portal Ven anastomozu gerçekleştirmek için altı adet sıfır monofilament polipropilen sütür kullanın, infra hepatik havanın lümenini entübe etmek için başka bir yıkama hattı kullanın ve bir litre oda sıcaklığında salin ile.
UW çözeltisini infra hepatik hava portal veni yoluyla yıkayın. Daha sonra, anastomozu tamamlayın ve dikişleri yaklaşık 0,5 santimetre büyüme faktörü bırakarak bağlayın. Ardından, donör infra hepatik cva'ya başka bir deba sırt kelepçesi yerleştirin.
S hepatik CVA klempini açın ve kanama olup olmadığını kontrol edin. Daha sonra karaciğeri yeniden perfüze etmek için portal kelepçeyi açın, infra hepatik vena kavanın alıcı tarafını yeniden kelepçeleyin ve baypasın kablo kısmına bir boru kelepçesi takın. Santrifüj pompayı durdurduktan sonra kablo konektörünün bağlarını kesin ve çıkarın.
Kalan kanı baypastan juguler kateter yoluyla domuza geri verin. Şimdi kelepçeyi, juguler kateteri kapatın ve baypası ayırın. Daha sonra, bir heparini antagonize etmek için 100 miligram protamin sülfat uyguladıktan sonra, infra hepatik cva'nın uçtan uca anastomozunu gerçekleştirmek için beş sıfır monofilament sütür kullanın.
Yine, her iki klempi serbest bırakarak intra hepatik alt CVA'yı reperfüze etti. Donörün çölyak gövdesinin etrafındaki bir aort yamasını kestikten sonra, gastroduodenal arterin birleştiği yere proksimal olarak ortak hepatik artere bir bulldog kelepçesi koyun. Hepatik arter heparin ile yıkandıktan sonra, anesti os için altı adet sıfır monofilament polipropilen sütür kullanın.
Arteriyel osteo uçtan uca koşan bir paraşüt tekniği ile reperfüze edilir, daha sonra önce distal ve ardından proksimal bulldog klempleri 2 6 0 monofilament sütürlerle açılarak reperfüze edilir. Safra kanalını uçtan uca yerleştirmek için koşu tekniğini kullanın. Hemostazı kontrol ettikten sonra, kılıf tanıtıcı kateteri dalak damarından çıkarın.
Proksimal ve distal uçları tek numara monofilament emilebilir sütür ile kapatmak için kalan iki bağı kullanın. Karın duvarını kapatın. Son olarak, cildi kapatmak için bir cilt zımbası veya iki sıfır dikiş çalıştırın.
Ameliyat sonrası bakım için metin protokolüne bakın. İlk transplantasyon çalışmamızda, kalp atan bir donörden veya HBD'den karaciğer alan alıcı domuzların %100'ü, transplantasyondan beş gün sonra takibin sonuna kadar hayatta kaldı. Bununla birlikte, dolaşım ölümü veya DCD'den sonra donörlerden karaciğer alan domuzların sadece% 50'si, hepatosellüler hasardan kan örneklerinin beş günlük takip analizine ulaşmıştır.
Safra ve karaciğer fonksiyonu, her iki grupta da ST seviyelerinin 24 saat sonra zirveye ulaştığını gösterdi. Bu, DCD grubunda HCD grubuna kıyasla çok daha yüksekti ve beş gün sonra neredeyse normal değerlere geri döndü. Benzer şekilde, bu grafikte gösterildiği gibi, alkalin fosfataz değerleri, burada gösterildiği gibi HBD grubuna kıyasla DCD grubunda 36 saat sonra belirgin şekilde artmıştır.
Total bilirubin HPD grubunda stabil iken, DCD grubunda beşinci güne kadar kademeli olarak artmıştır ve deney grubunun sadece bir kısmında safra hasarını düşündüren yüksek bir standart sapma göstermektedir. Bu şekilde, karaciğer fonksiyonunun bir belirteci olarak INR, 24 saatte zirve yapan ve neredeyse normal değerlere geri yüklenen A ST değerlerine benzer bir eğilim gösterdi. Beş gün sonra Bu videoyu izledikten sonra, ortotopik domuz karaciğeri nakli sırasında aktif venöz venöz baypasın nasıl kullanılacağını iyi anlamış olmalısınız.
Bu şekilde, tüm prosedür boyunca stabil ve hareketli koşullar sağlıyoruz.
Bu makale, porcine ortotopik karaciğer transplantasyonu modeli kullanılarak domuzlarda allojenik karaciğer transplantasyonu gerçekleştirilmesi için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır. Yöntem, aktif bir porto-kaval-juguler şant aracılığıyla işlem sırasında ve sonrasında stabil hemodinamik durumun korunmasına vurgu yapmaktadır.
Güvenilir büyük hayvan modellerinin oluşturulması, hepatik terapötiklerin ve cerrahi yeniliklerin klinik uygulamaya geçişinden önce risklerinin azaltılması açısından kritik öneme sahiptir. Aktif porto-kaval-jugular şantlı porcine ortotopik karaciğer transplantasyonu modeli; greft fonksiyonunu, hemodinamik stabiliteyi ve biliyer iyileşmeyi kontrollü koşullar altında değerlendirmek için fizyolojik olarak uygun bir sistem sağlar. Bu yaklaşım, karaciğer hastalıklarını hedefleyen erken aşama biyofarma Ar-Ge çalışmalarında mekanistik doğrulamayı ve öngörüsel güvenilirliği destekler.
Bu yöntem, özellikle vasküler ve biliyer anastomoz gerektiren hepatik yönelimli tedaviler için, hedef doğrulamadan preklinik etkinlik testlerine kadar uzanan keşif sürecine entegre olmaktadır.