Name: Enterovirus Kültür ve RT-qPCR Su Norovirüs Oluşum EPA Metot 1615 Ölçüm. Virüs Örneklerinin I. Koleksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 48 s
Description: Öğrenin çevre ve içme sularından enterik virüs örnekleme yöntemini. EPA Yöntem 1615 ile elektropozitif filtre kullanarak enterovirüs ve norovirüs konsantrasyonu yapın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar olan katkıları ICR ve sırasında yapılan izleme yapılan sayısız EPA personeline teşekkür mümkün UCMR3, bildirilen diğer EPA çalışmaların aşağıdaki kurşun araştırmacılar: Daniel Dahling, Alfred Dufour, Andrey Egorov, Susan Glassmeyer, Asja Korajkic, Richard Lieberman, Robert Safferman, Tim Wade; eleştirel bu yazının gözden Shannon Griffin ve Michael Ware ve. Yazarlar örnek toplama göstermek için kendi pompa evlerden birinin kullanımı için Indian Hill Su İşleri teşekkür ederim. Bu çalışma USEPA tarafından gözden ve yayına kabul olmasına rağmen, ille resmi Ajansı politikasını yansıtmayabilir. Ticari adları veya ticari ürünlerin Mansiyon kullanımı için onay ya da tavsiye niteliğinde değildir.

1. Ön Prosedürler <ol><li> Ek malzemeler de tarif edildiği gibi bir giriş modülü, bir kartuş yuva modülü ve bir boşaltma modülden oluşan, Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, bir standart filtre düzeneği bir araya getirin. </li><li> İlk kullanımdan önce numune almak için kullanılan akış hızlarında debimetre / Toplayýcýyý kalibre. İlk kullanımdan sonra kalibrasyon kontrol ve kullanım ardından bir ay sonra. Akış hızı kalibrasyonu ya ilk kullanımdan sonra veya kullanım ilk aydan sonra değiştiyse Ek Malzemeler açıklandığı gibi, kalibrasyon kontrolleri için sıklığının belirlenmesi. <ol><li> Bir giriş modülüne bir deşarj modülü bağlayın ve daha sonra bir musluğa emme modülünü bağlayın. Akış hızı okumak için debimetre / Toplayýcýyý ayarlayın. Tamamen dokunun açın ve daha sonra bronz küresel vana kullanılarak 10 L / dk akış hızını ayarlamak. Akış hızı 10 L / dk stabil sonra, toplam hacim okumak için debimetre / Toplayýcýyý sıfırlayın. </li><li> Çıkış yerleştirin4 L içine deşarj modülü izin ya da daha büyük dereceli silindir ve aynı anda sıfıra Toplayýcýyý sıfırlayın. 4 L işaretine de toplayıcı okuma ve silindir 4 L işaretine ulaşmak için gereken süreyi ölçün. Debi ayarını tekrar debimetre / Toplayýcýyý değiştirin. NOT: akış hızı aşağıdaki 9.95 L düştü veya Adım 1.2.2 tamamladıktan sonra fazla 10.05 L yükseldi olsaydı akış hızı istikrarlı ve tekrar Adım 1.2.2 kadar bekleyin. Bir doğru kalibre metre 4.0 ± 0.04 L. bir toplayıcı okuma ile 24 ± 1 sn mezun silindir üzerinde 4 L işareti ulaşacak </li><li> Toplayıcı okuma az 3,96 veya daha fazla 4.04 L ise, gözlenen farkın ayarlamak için gerekli bir düzeltme faktörü hesaplamak. Debimetre / toplayıcı mezun silindir üzerinde 4 L işareti 3.9 L okur Örneğin, düzeltme faktörü 1.026 (4 ÷ 3.9) olacaktır. Bir alan numunenin istenen hacmi 300 L idi Dolayısıyla eğer, hacim r göre toplanandebimetre / toplayıcı üzerindeki ider olmalıdır 300 ÷ 1.026 = 292,4 L. </li></ol></li><li> Standart filtre cihazı sterilize ve numune toplama için hazırlayın. <ol><li> Ya tamamen Çözeltilerin modülleri daldırılmasıyla veya modüllerin bir pompa kullanılarak da sodyum hipoklorit dolaştırarak, her kullanım öncesi en az 30 dakika boyunca 0.525% sodyum hipoklorit ile emme ve kartuş yuvası modülleri sterilize edin. Steril dH 2 O modülleri yıkayın ve daha sonra 5 dakika süre ile, steril reaktif dereceli bir litre su için, 1 M sodyum tiyosülfat ve 50 ml ihtiva eden bir çözelti içinde Klorsuzlaşmaz. Filtre örnekleme cihazı modülü steril alüminyum folyo ile örtün biter. </li><li> Kartuş konut modülü aseptik bir elektropozitif kartuş filtre ekleyin. NOT: Bu kartuş filtre düzgün yuvaları oturduğundan emin olmak için özen gösterin. Düzgün oturmuş filtreler sızıntı olmaz ve sarsılmış zaman filtre muhafazası içinde hareket etmeyecektir. ap üzerindeki contalarroperly oturmuş filtre nerede filtre temas onları gösteren görünür girintileri olacaktır. contalar, her zaman filtre gövdesinden kaldırılır hemen sonra çentikler için kontrol edilmelidir. </li><li> Bir örnek Data Sheet benzersiz bir örnek numarasını kaydedin (bir örnek için Ek Malzemeler bakınız) ve daha sonra almak veya numune ile ilgili gerekli talimatları ile birlikte, filtre örnekleme cihazı ve saha örneği toplama olacak bireye örnek Data Sheet gemi toplama (örneğin, örnek hacmi, numune alma yeri). </li></ol></li></ol> Örnekleme Sitesinde Örnek Toplama 2. Hazırlık <ol><li> Toplama yerinde girişte ellerinizi yıkayın ve örnek kontaminasyon olasılığını en aza indirmek için ameliyat eldivenleri yok. Bağırsak veya solunum semptomları yaşıyorsanız eğer örnekleri toplamak etmeyin. Değişim eldiven sık sık, özellikle su muslukları ve diğer öğeleri dokunduktan sonra devam olabiliraminated. </li><li> Bir örnek Bilgi Formuna izleme bilgilerini Tutanak, ilgili örnek. İlgili bilgi sitesi ve örnek tanımlama, örnekleyici adını ve ekipman modelleri ve seri numaralarını içerir. </li><li> Doğrultusunda yerleşmiş kirleri temizlemek için 2-3 dakika su musluğu açın. Gerekirse, bu adımı sırasında bir drenaj ulaşmak için bir bahçe hortumu veya boru kullanın. </li><li> Örnekleme cihazı modülleri bağlıysa, bunları kesmek ve steril folyo ile kartuş konut modülünün açık uçlarını korumak. Emme modülüne deşarj modülü bağlayın ve sonra su musluğuna hem bağlayın. Deşarj modülün sonunda bir bahçe hortumu bağlayın ve 1 L polipropilen kapta serbest ucunu yerleştirin. </li><li> Musluğu açın ve su en az 75 L aparatı sayesinde numune alınacak geçmek. <ol><li> Tedbir ve polipropilen kap-klor artığı akan su yıkayın döneminde su kalite parametreleri kaydetmekual, pH, sıcaklık, ve bulanıklık. </li><li> Musluktan suyu kapattıktan sonra, emme modülden deşarj modülü çıkarın, sonra emme modülünün çıkışında ve kartuş konut modülünün çıkışına deşarj modülü kartuş konut modülünü bağlayın. Sıfıra okuma Toplayýcýyý sıfırlayın. </li></ol></li></ol> 3. Alan Numune Toplama <ol><li> Tarih ve saat ile ilk toplayıcı okuma boyunca kaydedebilir ve daha sonra yavaş yavaş su musluğunu açın. <ol><li> Kartuş yuvası dik bir pozisyonda olduğu ve tamamen su ile dolar ve emin olun. Bazı muhafazalar dolum işlemi sırasında konut havayı çıkarmak için basılabilir bir havalandırma düğmesi var. </li><li> Tamamen musluğu açın. Bronz küresel vana kullanılarak 10 L / dk akış hızını ayarlayın ve ardından başlangıç ​​akış hızını kaydedin. </li></ol></li><li> Yüzey suyu 300 L veya aparat yoluyla yeraltı 1.500 1.800 L kullanarak geçmektoplayıcı okumaları (gerekirse gibi, düzeltilmiş). Gerekli hacim önce filtre takunya ulaşıldığında ve yarısından fazlası hacmi tahsil edilmişse, bir varsa, geri kalan örnek toplamak için ikinci bir filtre konut modülünü kullanabilirsiniz. </li><li> Örnek hacmi örnekleme döneminin sonuna yaklaştıkça akış hızı dikkate alınmalıdır ve sonra örnek musluktan su akışını kapatın. Nihai akış hızı, tarih, günün saati, son toplayıcı okuma ve toplam örnek hacmi kaydedin. </li><li> Musluktan filtre örnekleme cihazı ayırın. Diğer modüllerden kartuş konut modülünü ayırın. <ol><li> Baş aşağı filtre muhafazasını (ler) çevirin ve aşırı su hem giriş ve çıkış portları akacak daha fazla su kadar dışarı akmasına izin verin. </li><li> Dik konut çevirin ve steril alüminyum folyo ile her ucunda hızlı bağlantılarını kapsamaktadır. Bir veya daha fazla kapatılabilen plastik torbalar içine konut yerleştirin. </li><li> Alımı ve d suyu boşaltındağılması modüller. Bir veya daha fazla sızdırmaz plastik torbalar içine modülleri yerleştirin. </li></ol></li></ol> Saha Örneklerinin 4. sevkiyatı <ol><li> Yalıtımlı bir depolama ve taşıma soğutucu içine filtre örnekleme cihazı modülleri yerleştirin. </li><li> Depolama donmuş buz paketleri veya çift-Torbalı buz küpleri ekleyin ve örnek sevkiyat sırasında 1-10 ° C arasında kalmasını sağlamak için soğutucu taşıma. Büyük İki veya 6-8 küçük buz paketleri yeterli olmalıdır. </li><li> Buz paketleri veya buz torbaları temas etmeden bir yerde yalıtılmış depolama ve taşıma göğüs sıcaklık kayıt cihazı yerleştirin. NOT: Analitik laboratuvar hemen girişte kartuş yuvasının ve kabın açılması sıcaklığını ölçmek için bir görsel kızılötesi termometre kullanarak edilecektir sıcaklık kayıt cihazı isteğe bağlıdır. </li><li> Ambalaj malzemesi ile herhangi bir boşluk alanı doldurun ve sonra t, bir yapışmalı plastik torba içinde korunan Örnek Data Sheet, koyunop. Suyun herhangi bir sızıntıyı önlemek için izole depolama ve taşıma göğüs ve bant kapatın. </li><li> Taşıma veya analitik laboratuvara numune gemi. Örnek bir alan örnek toplama başladıktan sonra en geç 24 saat daha analitik laboratuvar geldiğinde emin olun (yani, adım 3.1 kaydedildi zamanı). </li></ol>

<ol><li>Katayama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-year+monthly+quantitative+survey+of+noroviruses%2C+enteroviruses%2C+and+adenoviruses+in+wastewater+collected+from+six+plants+in+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">One-year monthly quantitative survey of noroviruses, enteroviruses, and adenoviruses in wastewater collected from six plants in Japan.</a> Water Res. 42 (6-7), 1441-1448 (2008).</li>
<li>La Rosa, G., Pourshaban, M., Iaconelli, M., Muscillo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+real-time+PCR+of+enteric+viruses+in+influent+and+effluent+samples+from+wastewater+treatment+plants+in+Italy%5BTitle%5D)+AND+%22Annali+Dell+Istituto+Superiore+Di+Sanita%22%5BJournal%5D)">Quantitative real-time PCR of enteric viruses in influent and effluent samples from wastewater treatment plants in Italy.</a> Annali Dell Istituto Superiore Di Sanita. 46 (3), 266-273 (2010).</li>
<li>Sedmak, G., Bina, D., MacDonald, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+an+enterovirus+sewage+surveillance+system+by+comparison+of+clinical+isolates+with+sewage+isolates+from+milwaukee%2C+wisconsin%2C+collected+august+1994+to+december+2002%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Assessment of an enterovirus sewage surveillance system by comparison of clinical isolates with sewage isolates from milwaukee, wisconsin, collected august 1994 to december 2002.</a> Appl. Environ. Microbiol. 69 (12), 7181-7187 (1994).</li>
<li>Berg, H., Lodder, W., van der Poel, W., Vennema, H., de Roda Husman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+diversity+of+noroviruses+in+raw+and+treated+sewage+water%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Genetic diversity of noroviruses in raw and treated sewage water.</a> Res Microbiol. 156 (4), 532-540 (2005).</li>
<li>Haramoto, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+profiles+of+human+noroviruses+and+indicator+bacteria+in+a+wastewater+treatment+plant+in+Tokyo%2C+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Seasonal profiles of human noroviruses and indicator bacteria in a wastewater treatment plant in Tokyo, Japan.</a> Water Sci Technol. 54 (11-12), 301-308 (2006).</li>
<li>Denis-Mize, K., Fout, G. S., Dahling, D. R., Francy, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+human+enteric+viruses+in+stream+water+with+RT-PCR+and+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Water+Health%22%5BJournal%5D)">Detection of human enteric viruses in stream water with RT-PCR and cell culture.</a> J Water Health. 2 (1), 37-47 (2004).</li>
<li>Hamza, I. A., Jurzik, L., Stang, A., Sure, K., Uberla, K., Wilhelm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+human+viruses+in+rivers+of+a+densly-populated+area+in+Germany+using+a+virus+adsorption+elution+method+optimized+for+PCR+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Detection of human viruses in rivers of a densly-populated area in Germany using a virus adsorption elution method optimized for PCR analyses.</a> Water Res. 43 (10), 2657-2668 (2009).</li>
<li>Lieberman, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLieberman%2C+RJ+%22Microbial+monitoring+of+vulnerable+public+groundwater+supplies%22">Microbial monitoring of vulnerable public groundwater supplies</a>. , American Water Works Association. Denver, CO. (2002).</li>
<li>Parshionikar, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Waterborne+outbreak+of+gastroenteritis+associated+with+a+norovirus%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Waterborne outbreak of gastroenteritis associated with a norovirus.</a> Appl. Environ. Microbiol. 69 (9), 5263-5268 (2003).</li>
<li>Hewitt, J., Bell, D., Simmons, G. C., Rivera-Aban, M., Wolf, S., Greening, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastroenteritis+outbreak+caused+by+waterborne+norovirus+at+a+New+Zealand+ski+resort%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Gastroenteritis outbreak caused by waterborne norovirus at a New Zealand ski resort.</a> Appl. Environ. Microbiol. 73 (24), 7853-7857 (2007).</li>
<li>Shaw, S., Regli, S., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus+occurrence+and+health+risks+in+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22Information+Collection+Rule+Data+Analysis%22%5BJournal%5D)">Virus occurrence and health risks in drinking water.</a> Information Collection Rule Data Analysis. Maguire, M. J., McLain, J. L., Odolensky, A. , AWWA Research Foundation and American Water Works Association. 437-462 (2002).</li>
<li>Sobsey, M. D., Wallis, C., Henderson, M., Melnick, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentration+of+Enteroviruses+from+Large+Volumes+of+Water%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Concentration of Enteroviruses from Large Volumes of Water.</a> Appl Microbiol. 26 (4), 529-534 (1973).</li>
<li>Hill, W. F., Akin, E. W., Benton, W. H., Metcalf, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus+in+water.+II.+Evaluation+of+membrane+cartridge+filters+for+recovering+low+multiplicities+of+poliovirus+from+water%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Virus in water. II. Evaluation of membrane cartridge filters for recovering low multiplicities of poliovirus from water.</a> Appl Microbiol. 23 (5), 880-888 (1972).</li>
<li>USEPA. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((40+CFR+Part+141+National+Primary+Drinking+Water+Regulations%3A+Monitoring+Requirements+for+Public+Drinking+Water+Supplies%3B+Final+Rule%5BTitle%5D)+AND+%22Federal+Register%22%5BJournal%5D)">40 CFR Part 141 National Primary Drinking Water Regulations: Monitoring Requirements for Public Drinking Water Supplies; Final Rule.</a> Federal Register. 61 (94), 141(1996).</li>
<li>Pang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+removal+rates+in+subsurface+media+estimated+from+published+studies+of+field+experiments+and+large+intact+soil+cores%5BTitle%5D)+AND+%22J+Environ+Qual%22%5BJournal%5D)">Microbial removal rates in subsurface media estimated from published studies of field experiments and large intact soil cores.</a> J Environ Qual. 38 (4), 1531-1559 (2009).</li>
<li>Johnson, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viruses+and+Bacteria+in+Karst+and+Fractured+Rock+Aquifers+in+East%5BTitle%5D)+AND+%22Ground+Water%22%5BJournal%5D)">Viruses and Bacteria in Karst and Fractured Rock Aquifers in East.</a> Ground Water. 49 (1), Tennessee, USA. 98-110 (2011).</li>
<li>Fout, G. S., Schaefer, F. W. 3rd, Messer, J. W., Dahling, D. R., Stetler, R. E. ICR Microbial Laboratory Manual. , Environmental Protection Agency. (1996).</li>
<li>Fout, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFout%2C+GS+%22Method+1615%3A+Measurement+of+enterovirus+and+norovirus+occurrence+in+water+by+culture+and+RT-qPCR%22">Method 1615: Measurement of enterovirus and norovirus occurrence in water by culture and RT-qPCR</a>. , U.S. Environmental Protection Agency. 1-91 (2012).</li>
<li>Borchardt, M. A., Spencer, S. K., Kieke, B. A., Lambertini, E., Loge, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viruses+in+nondisinfected+drinking+water+from+municipal+wells+and+community+incidence+of+acute+gastrointestinal+illness%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Viruses in nondisinfected drinking water from municipal wells and community incidence of acute gastrointestinal illness.</a> Environ Health Perspect. 120 (9), 1272-1279 (2012).</li>
<li>Francy, D. S., Bushon, R. N., Stopar, J., Luzano, E. J., Fout, G. S. Scientific Investigations Report 2004-5219, U.S. Geological Survey. Environmental factors and chemical and microbiological water-quality constituents related to the presence of enteric viruses in ground water from small public water supplies in southeastern Michigan. , 1-54 (2004).</li>
<li>Regli, S., Rose, J. B., Haas, C. N., Gerba, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+Risk+from+Giardia+and+Viruses+in+Drinking-Water%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+American+Water+Works+Association%22%5BJournal%5D)">Modeling the Risk from Giardia and Viruses in Drinking-Water.</a> Journal American Water Works Association. 83 (11), 76-84 (1991).</li>
<li>USEPA. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parts+141+and+142+Revisions+to+the+Unregulated+Contaminant+Monitoring+Regulation+%28UCMR3%29+for+Public+Water+Systems%3B+Final+Rule%5BTitle%5D)+AND+%22Federal+Register%22%5BJournal%5D)">Parts 141 and 142 Revisions to the Unregulated Contaminant Monitoring Regulation (UCMR3) for Public Water Systems; Final Rule.</a> Federal Register. 77 (85), 26072-26101 (2012).</li>
<li>Lambertini, E., Spencer, S. K., Bertz, P. D., Loge, F. J., Kieke, B. A., Borchardt, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentration+of+enteroviruses%2C+adenoviruses%2C+and+noroviruses+from+drinking+water+by+use+of+glass+wool+filters%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Concentration of enteroviruses, adenoviruses, and noroviruses from drinking water by use of glass wool filters.</a> Appl. Environ. Microbiol. 74 (10), 2990-2996 (2008).</li>
<li>Butot, S., Le Guyader, F. S., Krol, J., Putallaz, T., Amoroso, R., Sanchez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+various+real-time+RT-PCR+assays+for+the+detection+and+quantitation+of+human+norovirus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Evaluation of various real-time RT-PCR assays for the detection and quantitation of human norovirus.</a> J Virol Methods. 167 (1), 90-94 (2010).</li>
<li>Cashdollar, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+Evaluation+of+EPA+Method+1615+for+Detection+of+Enterovirus+and+Norovirus+in+Water%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development and Evaluation of EPA Method 1615 for Detection of Enterovirus and Norovirus in Water.</a> Appl. Environ. Microbiol. 79 (1), 215-223 (2013).</li>
<li>Cashdollar, J. L., Wymer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+primary+concentration+of+viruses+from+water+samples%3A+a+review+and+meta-analysis+of+recent+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Methods for primary concentration of viruses from water samples: a review and meta-analysis of recent studies.</a> J Appl Microbiol. 115 (1), 1-11 (2013).</li>
<li>Rhodes, E. R., Hamilton, D. W., See, M. J., Wymer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+hollow-fiber+ultrafiltration+primary+concentration+of+pathogens+and+secondary+concentration+of+viruses+from+water%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Evaluation of hollow-fiber ultrafiltration primary concentration of pathogens and secondary concentration of viruses from water.</a> J Virol Methods. 176 (1-2), 38-45 (2011).</li>
<li>Katayama, H., Shimasaki, A., Ohgaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+virus+concentration+method+and+its+application+to+detection+of+enterovirus+and+norwalk+virus+from+coastal+seawater%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development of a virus concentration method and its application to detection of enterovirus and norwalk virus from coastal seawater.</a> Appl. Environ. Microbiol. 68 (3), 1033-1039 (2002).</li>
<li>Haramoto, E., Katayama, H., Utagawa, E., Ohgaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+human+norovirus+from+water+by+virus+concentration+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Recovery of human norovirus from water by virus concentration methods.</a> J Virol Methods. 160 (1-2), 206-209 (2009).</li>
<li>Sobsey, M. D., Jones, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentration+of+poliovirus+from+tap+water+using+positively+charged+microporous+filters%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Concentration of poliovirus from tap water using positively charged microporous filters.</a> Appl. Environ. Microbiol. 37 (3), 588-595 (1979).</li>
<li>Karim, M. R., Rhodes, E. R., Brinkman, N., Wymer, L., Fout, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+electropositive+filter+for+concentrating+enteroviruses+and+noroviruses+from+large+volumes+of+water%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">New electropositive filter for concentrating enteroviruses and noroviruses from large volumes of water.</a> Appl. Environ. Microbiol. 75 (8), 2393-2399 (2009).</li>
<li>Ko, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+electropositive+filtration+for+recovering+norovirus+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22J+Water+Health%22%5BJournal%5D)">Evaluation of electropositive filtration for recovering norovirus in water.</a> J Water Health. 9 (1), 27-36 (2011).</li>
<li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Evidence+of+Norwalk+Virus+Contamination+Levels+on+the+Hands+of+Infected+Individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Laboratory Evidence of Norwalk Virus Contamination Levels on the Hands of Infected Individuals.</a> Appl. Environ. Microbiol. 79 (24), 7875-7881 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Çevre sularından virüsleri konsantre edilmesi için farklı filtre tipleri yıllar üzerinde 26 kullanılmıştır. Güncel yöntemler süzgeçleri 27, elektronegatif filtreler 13,28,29, cam yünü filtreleri 23 ve elektropozitif filtreler 30 istihdam. Elektronegatif filtreler yaygın olarak uzun yıllar kullanıldı, ancak tuz ilavesi ve önce veya örnekleme sırasında alanda su pH ayarlanması için bir gereklilik kendi yararını 13 sınırlar. alan örneklemesi için en pratik filtre seçimi elektropozitif filtreler olduğunu. Bu filtreler, yüksek akış hızlarında ve su herhangi bir klima olmaksızın suyun büyük hacimli örnekleme sağlar. Cam yünü filtreler en ucuz seçenek olmakla birlikte, elektropozitif filtrelerin daha yavaş akış oranları ve ticari olarak mevcut değildir. Ultrasüzgeçler su kalitesinin geniş bir ürün yelpazesi üzerinde en yüksek virüs kurtarma sağlar, ancak ekipman sampli için gerekling kolayca alan taşınabilir değildir ve örnekleri toplamak için gerekli süre 27 daha uzundur. Yöntem son zamanlarda kullanım alanına ayarlama ihtiyacını önlemek için elektronegatif filtreleri şartlandırılarak geliştirilmiştir, ancak bu büyük örnek hacimleri 28,29 toplamak için geçerli olmayabilir. EPA Method 1615 alüminyum oksit nanolifler veya dörtlü aminler ya kendi pozitif yük almak elektropozitif kartuş filtreler kullanır. ikincisi üzerine eski avantajları, daha az pahalı olduğu ve etkili bir şekilde 30,31 değerleri doğal pH&#39;ı geniş bir aralık üzerinde sularından virüsü toplar; Ancak, her kartuş, yanı sıra Borchardt ve arkadaşları tarafından kullanılan cam yünü filtreleri su 23,31,32 (Cashdollar, yayınlanmamış veriler) den Enterovirüs ve norovirusa benzer kurtarma verir. Kartuş filtreler örneklerin toplanması kolaylaştırmak için tasarlanmış basit bir örnekleme cihazı içine yerleştirilirve örnekleme sırasında kirlenmeyi azaltmak. Büyük çalışmalar birden analitik laboratuvarları kullanarak yapılan zaman standart yöntemler paha biçilmezdir. EPA Method 1615 standart prosedürler ve bu toplanan verileri etkileyebilir iki büyük örnek toplama sorunları en aza indirmek için rehberlik sağlar çalışmalar-yanlış kirlenme örnek toplama sırasında veya yetersiz dezenfekte cihaz bileşenleri ve bileşenleri tarafından filtre gözeneklerin tıkanması kaynaklanan olumlu sonuçlar Su örneklenmiş olan. Enterik virüsler nedeniyle yetersiz hijyen kişiden kişiye yayılabilir gibi, virüsler kontamine eldiven 33 ile kötü yıkanmış elleri veya elinden örneklerin içine sokulabilir. Bu numune potansiyel kirlenme yolları anlamak ve örnekleme sırasında aseptik tekniği kullanmak esastır. Nümune eldivenler öncelikle p maruz örnekleyicinin korumak için kullanılan ve olmadığını anlamak gerekirkirden cihazı rotect. Örnekleme ve bakım başlangıç ​​kirlenmesini eldivenin el önlemek için eldiven giyilmesini sırasında alınmalıdır önce eller yıkanmalıdır. Onlar yüksek seviyelerde enterovirüsleri veya Noroviruses dökülme olabilir gibi gastroenterit veya solunum semptomları olan numune, numune toplamak olmamalıdır. İkincisi, bakım, önceki örnekleme olaylardan virüsün taşınmasını önlemek için alınmalıdır. Kontaminasyon bu potansiyel kaynağını en aza indirmek için, yöntem 1615 yılında örnekleme cihazı giriş ve kartuş yuvası modülü arasında bir basınç regülatörü ve basınç ölçer içermemesiyle ICR, de modifiye edilmiştir. Örnekleme olaylar sırasında gözlenen basınçlar maksimum konut değerlendirmesi altında her zaman çünkü bu bileşenler çıkarıldı (örneğin, 125 5-inç kartuş muhafazaları için psi) ve dezenfekte etmek zor çünkü. İkinci sorun st ekipmanları boş kontrollerin kullanımı ile gösterildiUST 6,20 sonra udies. derecesi hangi ICR veri bilinmeyen etkilenen, ama büyük olasılıkla küçük oldu; Sadece iki yanlış pozitif negatif performans değerlendirme örnekleri çalışma sırasında vardı (veriler gösterilmemiştir). Ayrıca taşınmasını bulaşma olasılığını azaltmak için, aynı zamanda giriş modülü boru, her örnekleme olaydan sonra değiştirilmesi önerilir. Bu cihaz virüsü ile tohumlandı, kalite ya da performans kontrol için kullanılmıştır, eğer yeterli bir dezenfeksiyon sağlamak için özellikle önemlidir. Dezenfeksiyon uygulamadan önce, serbest klor konsantrasyonu depolama esnasında herhangi bir kayıp ölçülmelidir. Yukarıda tarif edilen düzeneğin konfigürasyonda ilgili değişimlere ek olarak, düzenli olarak ekipman boşlukları dezenfeksiyonun etkili olduğunu göstermek için çalıştırılabilir esastır. Yöntem 1615 ekipman boşlukları virüs tohumlu kontroller için kullanıldıktan sonra dezenfekte edilmiştir cihazları kullanılarak gerçekleştirilebilir görev, bu şekilde basitleştirilmesiihtiyacını ortadan kaldırarak prosedür dezenfeksiyon önce aygıt içinden bir virüs aşılanmış solüsyonun geçmek için. bu konsantrasyon, ekipman, herhangi uygun bir virüs deaktive etmek ve nükleik asitleri indirgeme her ikisi de gerekli olduğu gibi dezenfektan konsantrasyonu, Yöntem 1615 için 0.525% hipoklorit yükseltildi. Bu nedenle, ekipman boşlukları hücre kültürü ve qPCR deneyleri hem kullanılarak analiz edilmelidir. Elektropozitif filtrelerin Her iki tür Tablo 1&#39;de rapor çalışmaları sırasında tıkanma tabi tutulmuştur. Azaltılmış hacimli numune bilinmeyen sayısı, toplayıcı bir yanlış okuma veya başka karşılamak için örnekleme kasıtlı erken durağı olarak, bağlı örnekleme hataları olabilir Özellikle 20 NTU daha az bulanıklık okumaları ile sular için son tarih. tıkanma derecesi filtre tipi ve su kalite parametreleri üzerine hem bağlıdır. Önfiltreler bazı gelişmeler ölçüsünü sağlar, fakat kullanıldığında, işlenmiş ve analiz edilmelidirayrı elektropozitif filtreden. UCMR3 için geçerli tavsiye örnek en az yarım hacmi ilk filtre kullanılarak toplanan olabilir eğer iki alüminyum oksit nano-tabanlı filtreler kullanarak ön filtre olmadan tahsil edilmesi olduğunu.

İnsan enterik virüsler gastrointestinal içinde çoğaltmak ve fekal-oral yoldan yayılır. Bu virüsler genellikle yüksek konsantrasyonlarda 1-3 kanalizasyon bulunurlar. Onlar kanalizasyon atıkları 4,5 inat, ve yüzey 6,7, zemin 8-10 ve 11 içme sularında tedavi edilebilir. Mevcut olduğunda, ABD&#39;deki çevre sularından virüsün konsantrasyonu tipik olarak doğrudan ölçüm 12,13 için çok düşüktür. Bu, virüs büyük hacimlerde su gelen konsantre edildi gerektirir. Bilgi Toplama Kuralı (ICR), ABD Çevre Koruma Ajansı (USEPA) 14 tarafından yürütülen izleme sırasında, bulaşıcı birimlerinin 19.7 en muhtemel sayı ülke çapında 0.009 arasında değişmektedir büyük yarar kaynak suyu pozitif örneklerin virüs konsantrasyonları (EMS) / L. Pozitif örneklerin Medyan ve ortalama konsantrasyonları 0.03 ve akan kaynak suları için 0.17 EMS / L, 0.01 idigöl ve rezervuarlarda gelenler için 0.07 EMS / L, ve yeraltı sularını 11 (2000/04/25 tarihli ICR Aux1 18 ay erişim veritabanından veri) kullananlar için 0,04-0,74 EMS / L. Ulusal yeraltı Bir USEPA çalışmanın olumlu örneklerin Virüs konsantrasyonları 0.009 2.12 bulaşıcı birimler / ortanca ve 0.13 ve 0.29 bulaşıcı birimler / L 8 ortalama konsantrasyonları ile L arasında değişmektedir. Pozitif yeraltı örneklerinde virüs konsantrasyonu akan akarsularda daha yüksek oldu. Bu çalışmalarda yeraltı kullanarak tesislerin çoğu karstik bölgelerde bulunan akiferlerinden su aldı. Bunlar, kireçtaşı ve kristalin bulunan olanlarla birlikte (kırık kaya) ayarlarınız diğer ayarlardan 8,15,16 daha yüksek virüs konsantrasyonlarını olması muhtemeldir. USEPA virüs yöntemleri yüzey suyunun 200 L 300 L (ICR) (1615 Yöntemi) ve yeraltı 17,18 1,000 L 1.500 L (ICR) (1615 Yöntem) örnekleme hacimleri belirtin. Ancak, daha kullanımı ilebüyük örnek hacimleri, çoğu yüzey ve yeraltı suyu numuneleri virüs 8,11,19,20 için negatiftir. Yüzey sularında bulunan Virüsler içme suyu tüketicilere potansiyel sağlık riski oluşturmaktadır. Yüzey Suyu Arıtma Kural en az 4-log virüs konsantrasyonlarını azaltmak için yüzey suyu kullanan tüm arıtma tesisleri gerektirir. Hatta bir 4 log azalma, 0.0044 EMS / L kadar az kaynağı, su içinde enfekte edici virüs konsantrasyonunun, ortalama kalma ve tedavi koşullarına ve rotavirüs 11,21 için doz tepki parametrelerinin varsayarak günde bir enfeksiyona neden olabilir. Tedavi edilmeyen Sularda bulunan virüs riski nedeniyle tedavi ve viral oluşum eksikliği daha büyük olabilir. Borchardt ve arkadaşları erişkinlerde akut gastroenterit% 22 ve% 63 kadar çocuklarda daha az beş yıl işlenmemiş yeraltı sularını kullanarak 19 topluluklarda içme suyu virüs nedeniyle olabileceğini tahmin ediyoruz. USEPA Mbu yöntemde, 1615 Borchardt bulgularına ve meslektaşları 19,23 takibi ulusal olarak düzensiz Kirletici İzleme Yönetmelik üçüncü izleme döngüsü (UCMR3) 22 sırasında enterovirüs ve Norovirus algılamak için geliştirilmiştir. USEPA yöntem öncelikle işlenmemiş yeraltı sularını kullanarak sistemlerde virüs ölçmek için tasarlanmış, ancak diğer su matris türlerini içerecek şekilde daha genel yazılmıştır. Yeni yöntem ICR 17 sırasında kullanılan önceki virüs yöntemiyle birçok bileşenleri koruyarak bir melez, moleküler prosedürlerin eklenmesi norovirusa 24 Borchardt ve ark. 19,23 ve ek primer setleri yöntemine dayalı. Bu yazının amacı örnekleme prosedürü ve toplama ve sevkiyat sırasında numunenin bütünlüğünü korumak için gerekli adımları tanımlamaktır. Genel yöntemin bir değerlendirme Cashdollar ve ark. 25 tarif edilmiştir. Bu protokol, basit alan collectio kapaklarıBir pompa ve ön filtre gerekli değildir ve ayarlamalar pH veya suyun içinde bir dezenfektan varlığı için gerekli değildir nerede yüzey ve yeraltı sularının n numune alınacak. daha karmaşık bir numune alma Fout ve ark. 17,18 tarif edilmiştir.

<table><tbody><tr><td>1-L polipropilen şişe</td><td>Nalgene</td><td>2104-0032</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum folyo kareler</td><td>Cole-Parmer</td><td>06275-40</td><td></td></tr><tr><td>Otoklav</td><td>Steris</td><td>Amsco Lab Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Balonlu naylon</td><td>ABD Plastikleri</td><td>50776</td><td></td></tr><tr><td>Kapatılabilir çanta</td><td>Uline</td><td>S-12283</td><td></td></tr><tr><td>Kapatılabilir çanta</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>S31798C</tr><tr><td>Ticari buz paketleri</td><td>Cole-Parmer</td><td>06345-20</td><td></td></tr><tr><td>Soğuk kasa</td><td>Çeşitlendirilmiş Biyoteknoloji</td><td>CSF-BOX</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı bez sünger</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-415-469</td><td></td></tr><tr><td>Dereceli silindir</td><td>Cole-Parmer</td><td>06135-90</td><td>4-L veya daha büyük</td></tr><tr><td>Hype Wipe</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-412-56</td><td></td></tr><tr><td>iButtons sıcaklık veri kaydedici</td><td>Maxim</td><td>DS1921G</td><td></td></tr><tr><td>Yalıtımlı saklama ve taşıma sandığı</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-676-12</td><td></td></tr><tr><td>Koli bandı</td><td>U.S. Plastics</td><td>50083</td><td></td></tr><tr><td>Taşınabilir klor kolorimetre II test kiti</td><td>Hach</td><td>5870062</td><td></td></tr><tr><td>Taşınabilir pH ve sıcaklık probu</td><td>Omega</td><td>PHH-830</td><td></td></tr><tr><td>Taşınabilir bulanıklık ölçer</td><td>Omega</td><td>TRB-2020-E</td><td></td></tr><tr><td>PTFE diş bandı</td><td>Cole-Parmer</td><td>08270-34</td><td>Tüm dişli bağlantılarda kullanım</td></tr><tr><td>Pompa, Santrifüj Manyetik Tahrik</td><td>Cole-Parmer</td><td>72010-20</td><td></td></tr><tr><td>Redüksiyon nipeli</td><td>Cole-Parmer</td><td>06349-87</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hipoklorit (NaClO)</td><td></td><td></td> <td>Yerel olarak temin edilebilen ev tipi çamaşır suyu kullanın</td></tr><tr><td>Sodyum tiyosülfat (Na2S2O3)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>217247</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi eldivenler</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-058-800</td><td></td></tr><tr><td>Su geçirmez işaretleyici</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-290546</td><td></td></tr><tr><td>Medya</td><td>Bileşimi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%0.525 sodyum hipoklorit (NaClO)</td><td>Ev tipi çamaşır suyunu 1:10 oranında dH2O.&nbsp; içinde seyrelterek% 0.525'lik bir NaClO çözeltisi hazırlayın; % 0.525 NaClO çözeltilerini oda sıcaklığında 1 haftaya kadar saklayın.</td><td></td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">[başlık]</td></tr><tr><td>1 M sodyum tiyosülfat (Na2S2O3) pentahidrat</td><td>248.2 g Na2S2O3 1 L dH2O.&nbsp; Sodyum tiyosülfatı oda sıcaklığında 6 aya kadar saklayın.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

enterovirus kültür ve rt-qpcr su norovirüs oluşum epa metot 1615 Ölçüm. virüs Örneklerinin i. koleksiyonu

EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. I. Collection of Virus Samples

EPA Yöntem 1615, çevre ve içme sularındaki enterovirüsleri ve norovirüsleri ölçmek için standart bir yöntem sağlamak amacıyla geliştirilmiştir. Yöntemin standartlaştırılmış örnekleme bileşeni, belirtilen minimum hacimde suyun bir elektropozitif kartuş filtreden geçirilmesiyle suda bulunabilecek virüsleri konsantre eder. Yüzey ve bitmiş/yeraltı suyu için belirtilen minimum hacimler sırasıyla 300 L ve 1.500 L'dir. Önemli bir yöntem sınırlaması, filtrelerin numune hacmi gereksinimini karşılamadan önce tıkanma eğilimidir. İki farklı, ancak eşdeğer kartuş filtre seçeneği kullanılarak yapılan çalışmalar, filtre tiplerinden birine sahip numunelerin %10'unda, diğer filtre tipinde ise %6'sında filtre tıkanmasının bir sorun olduğunu göstermiştir. Tıkanma bulanıklıkla birlikte artma eğilimindedir, ancak yalnızca bulanıklık ölçümlerine dayalı olarak tahmin edilemez. Maliyet açısından bakıldığında, filtre seçeneklerinden biri diğerine göre tercih edilir, ancak filtre seçimleri yapılırken su kalitesi ve numune alınacak su sistemi ile ilgili deneyim dikkate alınmalıdır.

Filtre tıkanma Tıkanma filtre içinden suyun akış hızını, Yöntem 1615 ile karşılaşılabilir büyük potansiyel bir problemdir. Bazı durumlarda bu, daha büyük bir akış sağlamak için küresel vana açılarak aşılabilir. Gerekli olan hacim içinden geçmeden önce, diğer durumlarda, filtre tamamen tıkalı hale gelecektir. Tablo 1 filtre tipi, su tipi ve bulanıklığın bir fonksiyonu olarak düşük hacimleri ile örneklerin yüzdesini göstermektedir. Tıkanma ters yüzey suyu numuneleri için durum iken, alüminyum oksit nano-tabanlı filtre yeraltı örnekleri için dörtlü amin bazlı filtre daha iyi performans ile, yeraltı ve yerüstü su hem de örnekleri ile oluştu. Alüminyum oksit nano-tabanlı filtreler ile toplanan örneklerin% 10 tıkanma nedeniyle gerekli minimum belirtilen hacmini karşılamak için başarısız olurken Genel, dörtlü amin bazlı filtre kullanılarak toplanan örneklerin% 6 hacmindeki eksikliği vardı. Cinsel, bulanıklık artmıştır tıkanmaya, ancak farklı bileşenlerin bir dizi bulanıklık katkı ve bunlardan bazıları, tıkanmasına neden yoktur. Örneğin, ICR çalışma sırasında meydana gelen tüm tıkanma olayları% 43 (verileri gösterilmemiş olan) iki nehir sistemleri sınırlı idi. ICR sırasında yüzey suyu için minimum hedef hacim çalışma sırasında toplanan ortalama hacmi 208 L medyan hacmi 217 ± 32 L idi 200 L. oldu (ICR Aux1 18 ay erişim veritabanından veri 2000/04/25 tarihli) . Böylece, tam ses bile yüksek Türbiditlerin birçok sularından alınabilir. Bulanıklıkları 75 NTU üzerinde iken UST bir ön filtre kullanmak için numune gerekli, hatta bir ön filtre ile, 75 üzerinde Türbiditlerin ile sularda toplanan örneklerin% 34 NTU tıkanmış. Yöntem 1615 50 NTU üzerinde suları ile bir ön filtre kullanılmasını önerir; Ancak, Yöntem 1615 yayımlanmasından bu yana, yöntemde listelenen Buna ek olarak birkaç farklı ön filtre seçenekleri olmuşturtest edilmiştir. Örnek hacmi içinde belirgin bir gelişme ile sonuçlandı, bu açıklamalarla (veriler gösterilmemiştir). <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52067/52067fig1.jpg"> Şekil 1. Standart Filtre Aparatı. Standart filtre cihazı alımı, filtre konut ve deşarj modülleri (her modül bir açıklaması için Ek Malzemeler bakınız) oluşur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52067/52067fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Toplam Örnekler </td><td> Yetersiz Örnekler b sayısı </td><td> Yüzde Eksik Örnekleri </td><td> Bulanıklık (NTU) </td></tr><tr><td colspan="4" fo:padding-left="200px" style="text-align:center"> NanoCeram kullanarak Yeraltısuyu Filtreler c </td></tr><tr><td> 113 </td><td> 1 </td><td> 1 </td><td> &lt;20 </td></tr><tr><td colspan="4" fo:padding-left="200px" style="text-align:center"> Yüzey Suyu NanoCeram Filtreler c kullanarak </td></tr><tr><td> 83 </td><td> 12 </td><td> 14 </td><td> &lt;20 d </td></tr><tr><td> 8 </td><td> 4 </td><td> 50 </td><td> 20 - &lt;50 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 5 </td><td> 83 </td><td> ≥ 50 d </td></tr><tr><td colspan="4" fo:padding-left="230px" style="text-align:center"> Toplam NanoCeram c </td></tr><tr><td> 210 </td><td> 22 </td><td> 10 </td><td> ≥ 0 </td></tr><tr><td colspan="4" fo:padding-left="200px" style="text-align:center"> 1MDS Filtreler c kullanarak Yeraltı </td></tr><tr><td> 374 </td><td> 75 </td><td> 20 </td><td> &lt;20 </td></tr><tr>1MDS Filtreler c kullanarak merkezi "&gt; Yüzey Suyu: ext-align </tr><tr><td> 2693 </td><td> 27 </td><td> 1 e </td><td> &lt;20 E </td></tr><tr><td> 505 </td><td> 36 </td><td> 7 f </td><td> 20 - &lt;50 f </td></tr><tr><td> 122 </td><td> 19 </td><td> 16 E </td><td> 50 - &lt;75 g </td></tr><tr><td> 175 </td><td> 60 </td><td> 34 e, f </td><td> ≥ 75 e, f, g </td></tr><tr><td colspan="4" fo:padding-left="240px" style="text-align:center"> Toplam 1MDS c </td></tr><tr><td> 3869 </td><td> 217 </td><td> 6 </td><td> ≥ 0 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Filtre Kapasitesi numuneler aşağıdaki hacmi ve bulanıklık verilerin mevcut olduğu gelen çalışmalardan şunlardır:. 4/2 sayılı ICR Aux1 18 ay erişim veritabanından 1) USEPA ICR çalışması (veri5/2000), 2) USEPA yeraltı çalışması 8, 3) USEPA Lawrence ve Lowell, MA çalışması (yayınlanmamış veriler), 4) USEPA Mississippi Nehri çalışma (yayınlanmamış veri), 5) USEPA içme suyu arıtma tesisi çalışması (yayınlanmamış veriler), 6) USEPA Yöntem 1615 değerlendirme çalışması 25 ve 7) Her çalışma için belirlenen asgari su hacmi önce tıkanmış filtre toplandı UCMR3 izleme ilk üç ay (yayınlanmamış veri). b Örnekleri. Bu yüzey suları için 200 L ve yeraltı için 1.500 L olmuştur, ama USEPA yeraltı çalışması için USEPA ICR altında yeraltı ve 1.893 L idi kaynak suları için 200 L idi. Hacmi belirlenen tam minimum toplamak için yeteneği c anlamlı farklı Numuneler, hem genel (p &lt;0.001) NanoCeram ve yüzey suları ile yeraltı arasında 1MDS filtreleri (p = 0.002) ile ve her filtre türü için (p ​​&lt;0.001) Mann-Whitney Rank Sum testi kullanılarak d. &amp; # toplamış8211, aynı üst simge değeri ile g Gruplar (p &lt;0.05) Ranks test Varyans Kruskal-Wallis One Way Analiz ve Dunn İkili Çoklu Karşılaştırma Prosedür göre önemli ölçüde farklıdır. Tüm istatistiksel testler için bağımlı değişken, ancak 1.0 bir maksimum değere sahip, belirtilen en düşük hacimde bir fraksiyonu olarak filtreden geçirilir birimdir.

EPA Metod 1615, çevre ve içme sularındaki enterovirüsleri ve norovirüsleri konsantre etmek için elektropozitif bir filtre kullanır. Bu el yazması, Yöntem 1615 analizleri için numune toplama prosedürünü açıklamaktadır.

Enterovirus Kültür ve RT-qPCR Su Norovirüs Oluşum EPA Metot 1615 Ölçüm. Virüs Örneklerinin I. Koleksiyonu

EPA Method 1615 was developed with a goal of providing a standard method for measuring enteroviruses and noroviruses in environmental and drinking waters. ...

Bu prosedürün genel amacı, EPA yöntemi 1615'e dayalı olarak enterik virüslerin oluşumu için çevresel ve içme sularından numune almak için standartlaştırılmış bir yaklaşım sağlamaktır. Bu, önce bir numune alma aparatının monte edilmesi, aparatın giriş ve kartuş muhafaza modüllerinin sterilize edilmesi ve ardından aseptik olarak steril bir elektropozitif kartuş filtresinin eklenmesiyle gerçekleştirilir. Daha sonra, numune alma aparatında bulunan bir elektropozitif filtreden tanımlanmış bir hacimde su geçirilir.Daha sonra aparattan ve kartuş filtre muhafazasından fazla su boşaltılır ve örneklenen hacim bir numune veri sayfasına kaydedilir. Son olarak, numune alma aparatı bileşenleri, bir ila 10 santigrat derece arasında tutulan daha soğuk bir nakliye konteynerinde paketlenir ve bir analitik laboratuvara teslim edilir. Sonuç olarak, çevresel ve içme sularındaki enterovirüsler ve norovirüsler, genel bir yöntemin parçası olarak bu örnekleme prosedürü kullanılarak ölçülür.Bu prosedür, virüsleri, bazı çevresel içme sularını konsantre etmek için Elektropozitif filtre kullanır. Bu yordamı gerçekleştirmek için kullanılabilecek başka filtre türleri de vardır. Biri ultra filtre, diğeri ise negatif yüklü bir filtredir.Elektro Posy filtrenin ultra filtreye göre avantajı, örneklemenin yaklaşık iki buçuk kat daha hızlı olmasıdır. Negatif yüklü filtreler kullanılarak virüs toplama, tuzların eklenmesinde pH ayarlaması gerektirir. Filtreleri pozitif olarak yüklemenin avantajı, numune almadan önce herhangi bir ayarlamaya gerek olmamasıdır.Genel olarak, bu prosedüre yeni başlayan kişiler, steriliteyi korumakla ve numune toplama için uygun bir musluğun olmaması gibi beklenmedik koşullarla mücadele edeceklerdir. Bugün prosedürü gösteren ben, sha out, Jennifer Cash dolar ve Eunice VER kazları olacak. Hepimiz EPA'nın Cincinnati, Ohio'daki Ulusal Maruziyet Araştırma Laboratuvarı'nın profesyonel personeliyiz.Numune toplamaya hazırlanmak için, burada gösterildiği gibi, metin protokolünün ek materyallerinde açıklandığı gibi bir emme modülü, bir kartuş muhafaza modülü ve bir boşaltma modülünden oluşan standart bir filtre aparatı monte edin. Örnekleme için akış hızlarının kullanılması. Bir boşaltma modülünü bir giriş modülüne bağlayarak ve ardından giriş modülünü bir musluğa bağlayarak ilk kullanımdan önce akış ölçer toplayıcısını kalibre edin.Musluğu tamamen açın ve ardından akış hızını dakikada 10 litreye ayarlamak için bronz küresel vanayı kullanın. Akış hızı dakikada 10 litrede sabit kaldığında, toplam hacmi okumak için akış ölçer toplayıcısını sıfırlayın. Ardından, boşaltma modülünün çıkışını dört litrelik veya daha büyük dereceli bir silindire yerleştirin ve aynı anda toplayıcıyı sıfıra sıfırlayın.Dört litre işaretindeki toplayıcı okumasını ve silindir üzerindeki dört litre işaretine ulaşmak için gereken zamanlayıcıyı ölçün. Toplayıcı okuması 3,96'dan az veya 4,04 litreden fazlaysa, gözlemlenen farkı ayarlamak için gereken bir düzeltme faktörünü hesaplayın. Örneğin, akış ölçer toplayıcısı, dereceli silindirdeki dört litre işaretinde 3,9 litre okursa, düzeltme faktörü 1,026 veya dört bölü 3,9 olacaktır. Standart filtre aparatını sterilize etmek ve numune toplamaya hazırlamak için, giriş ve kartuş muhafaza modüllerini tamamen daldırmak için% 0.525 sodyum hipoklorit kullanın ve en az 30 dakika bekletin.Alternatif olarak, çözümü modüller arasında dolaştırmak için bir pompa kullanın. Modülleri durulamak için steril DH iki O kullanın ve ardından beş dakika boyunca klorlamayı gidermek için litre steril reaktif dereceli su başına 50 mililitre bir molar sodyum tiyosülfat çözeltisi kullanın. Daha sonra filtre numune alma aparatını kapatmak için steril alüminyum folyo kullanın.Modül aseptik olarak sona erer. Kartuş muhafazası modülüne bir elektropozitif kartuş filtresi ekleyin ve doğru şekilde oturduğundan emin olun. Muhafazalarda, bir numune veri sayfasına benzersiz bir numune numarası kaydedin ve ardından filtre numune alma aparatını, numune veri sayfasını ve numune alma ile ilgili gerekli talimatları saha numunesini toplayacak kişiye alın veya gönderin Toplama yerine varışta ve ellerinizi yıkadıktan sonra, numune kontaminasyonunu en aza indirmek için şafak cerrahi eldivenleri.Özellikle su musluklarına ve kontamine olabilecek diğer eşyalara dokunduktan sonra eldivenleri sık sık değiştirin. Musluğu numune alma aparatına ve bir bahçe hortumundaki iç dişlere sterilize etmek için sodyum hipoklorit içeren bir ped kullanın. Saha ve numune tanımlaması, numune alıcı adı, ekipman modelleri ve seri numaraları dahil olmak üzere ilgili numune izleme bilgilerini bir numune veri sayfasına kaydedin.Bahçe hortumunu musluğa takın. Hortumun çıkışını suyun güvenli bir şekilde tahliye edilebileceği bir yere yerleştirin ve ardından suyu açın. Çizgiye yerleşmiş kalıntıları temizlemek için iki ila üç dakika dokunun.Boşaltma modülünü giriş modülüne bağlayın ve ardından her ikisini de su musluğuna bağlayın. Boşaltma modülünün ucuna bir bahçe hortumu bağlayın ve serbest ucu bir litrelik propilen kabın içine yerleştirin. Daha sonra musluğu açın ve numune alınacak en az 75 litre suyu cihazdan geçirin.Propilen kabına akan su, klor kalıntı pH'ı, sıcaklık ve bulanıklık üzerindeki yıkama süresi boyunca aşağıdaki su kalitesi parametrelerini ölçün ve kaydedin. Musluktaki suyu kapattıktan sonra, boşaltma modülünü giriş modülünden ayırın ve ardından kartuş yuvası modülünü emme modülünün çıkışına ve boşaltma modülünü kartuş yuvası modülünün çıkışına bağlayın. Ardından toplayıcı okumasını sıfırlayın.Alan örneği toplamaya başlamak için. İlk toplayıcı okumasını tarih ve saatle birlikte kaydedin ve ardından su musluğunu yavaşça açın. Kartuş muhafazasının dik konumda olduğundan ve tamamen suyla dolduğundan emin olun.Şimdi musluğu tamamen açın ve ilk akış hızını kaydetmeden önce akış hızını dakikada 10 litreye ayarlamak için bronz küresel vanayı kullanın. Toplayıcı okumalarını kullanarak, aparattan 300 litre yüzey suyu veya 1500 ila 1800 litre yeraltı suyu geçirin. Numune hacmi numune alma süresinin sonuna yaklaşırken akış hızını gözlemleyin ve ardından numune musluğundaki su akışını kapatın, son akış hızını, tarihi, günün saatini, son toplayıcı okumasını ve toplam numune hacmini kaydedin.Filtre örnekleme aparatını musluktan ayırın. Kartuş muhafazası modülünü diğer modüllerden ayırın. Filtre muhafazalarını ters çevirin ve hem giriş hem de çıkış portlarından daha fazla su akmayana kadar fazla suyun dışarı akmasına izin verin.Muhafazayı dik çevirin ve her iki uçtaki hızlı bağlantıları kapatmak için steril folyo kullanın. Muhafazayı bir veya daha fazla sızdırmaz plastik torbaya yerleştirin. Suyu giriş ve boşaltma modüllerinden boşaltın.Numuneleri nakliyeye hazırlamak için modülleri bir veya daha fazla sızdırmaz plastik torbaya yerleştirin. Filtre örnekleme aparatı modüllerini yalıtımlı bir depolama ve taşıma soğutucusuna yerleştirin. Numunenin bir ila 10 santigrat derece arasında kalmasını sağlamak için depoya donmuş buz paketleri veya çift torbalı buz küpleri ekleyin ve soğutucuyu taşıyın.Sevkiyat sırasında. Herhangi bir boşluğu ambalaj malzemesiyle doldurun ve ardından numune veri sayfasını sızdırmaz bir plastik torbaya koyun ve ambalaj malzemesinin üzerine yerleştirin. Yalıtılmış saklama ve taşıma sandığı taşıma aracını kapatın veya numuneyi analitik laboratuvara gönderin.Göğüs sevk edilecekse, sızıntıyı önlemek için bantla kapatın. Numunenin, saha alımının başlamasından en geç 24 saat sonra analitik laboratuvara ulaştığından emin olun. Filtre tıkanması, suyun akış hızını azalttığı için Yöntem 1615 ile karşılaşılabilecek önemli bir potansiyel sorundur.Bu tablo, filtre tipinin, su tipinin ve bulanıklığın bir fonksiyonu olarak azaltılmış hacimlere sahip numunelerin yüzdesini gösterir. Yeraltı suyu örneklerini filtrelerken, nano Illumina lifleri içeren filtre, kuaterner amin bazlı bir filtreden daha iyi performans gösterdi. Ariamin bazlı filtre, yüzey suyu örneklerini filtrelemek için daha iyiydi.Genel olarak, dördüncül ortalamaya dayalı filtre kullanılarak toplanan örneklerin %6'sı hacim olarak yetersizdi. Toplanan numunelerin %10'u alüminyum oksit ile alınırken, nanolif esaslı filtreler tıkanma nedeniyle gerekli minimum belirtilen hacmi karşılayamamıştır. Bu prosedürü denerken, steril koşulları korumayı unutmamak önemlidir.Bu, genel bir yöntemin sadece ilk prosedürüdür. Bu prosedürü takiben filtre elüsyonu, ikincil konsantrasyon ve toplam kültürel virüs, test ve moleküler testler gibi testler yapılacaktır. Bu daha sonraki tahliller, virüs oluşumunu ve konsantrasyonunu gerçekten ölçmek için gereklidir.Bu videoyu izledikten sonra, çevre ve içme sularından virüs örneklerinin nasıl toplanacağını iyi anlamış olmalısınız. Viral patojenlerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini unutmayın ve bu işlemi gerçekleştirirken her zaman eldiven kullanımı gibi önlemler almalısınız.

epa-method-1615-measurement-enterovirus-norovirus-occurrence-water

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Source: Fout, G. S., Cashdollar, J. L. EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. II. Total Culturable Virus Assay. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the use of a total culturable virus assay to quantify infectious viruses in water samples. It outlines host cell inoculation, observation of cytopathic effect, and statistical quantification of infectious virus concentration.

Quantifying Infectious Viruses in Water Samples Using an In Vitro Total Culturable Virus Assay

Burada, Buffalo Green Monkey böbrek hücresi hattını kullanarak toplam kültürlenebilir virüsleri ölçmek için bir prosedür sunuyoruz. Prosedür, çevresel ve içme sularında bulaşıcı virüslerin oluşumunu ölçmek için standartlaştırılmış bir araç sağlar.

Enterovirus Kültür ve RT-qPCR Su Norovirus Oluşum EPA Metot 1615 ölçülmesi. II. Toplam kültürlenebilir virüs Deneyi

Burada, ters transkripsiyon-kantitatif PCR kullanarak çevresel ve içme sularında enterovirüs ve norovirüsü ölçmek için bir prosedür sunuyoruz. EPA Metodu 1615'ten alınan bu standardize prosedürle yeraltı sularından ortalama virüs geri kazanımı, poliovirüs için %20 ve murin norovirüsü için %30 idi.

Enterovirüs Kültür ve RT-qPCR Su Norovirus Oluşum EPA Method 1615 Ölçümü. Bölüm III. RT-qPCR Virüs Algılama

Çevresel sert yüzeylerde norovirüsün tespiti ve miktarının belirlenmesi için makro köpük tabanlı bir örnekleme metodolojisi geliştirilmiş ve değerlendirilmiştir.

Yüzeyler İnsan Norovirus Tespiti sürüntü Örnekleme Yöntemi

İnsan adenovirüsünün sivri uçları kullanılarak küçük hacimli su örnekleri için optimal viral konsantrasyon koşullarını belirlemek için bir yaklaşım geliştirilmiştir. Burada açıklanan teknikler, diğer viral hedefler için konsantrasyon parametrelerini tanımlamak için kullanılır ve büyük ölçekli viral konsantrasyon deneylerine uygulanır.

Sudan Viral Konsantrasyon için Küçük Bir Ses Prosedürü

Bu el yazması, yeni nesil dizileme için DNA parçalarını saflaştırmak için otomatik bir jel boyutu seçim yaklaşımını açıklamaktadır. Ranger Teknolojisi, agaroz jel yükleme, elektroforetik analiz ve hedeflenen DNA parçalarının geri kazanılması sürecinin tamamının tam otomasyonunu sağlayarak yüksek verimli ve yüksek kaliteli yeni nesil dizileme kitaplıklarına olanak tanır.

Otomatik Jel Boyut Seçimi Çevre Su Örneklerinden hazırlanmıştır nesil Sıralama Kütüphaneler Kalitesi Geliştirmek için

Otomatik ve minyatür bir sistem kullanılarak su örneklerinden östradiolün ekstraksiyonu ve ön konsantrasyonu için bir protokol sunulmuştur.

Küçük Kirleticilerin İmmünolojik Analizi Su Örneklerinin Otomatik Katı Faz Ekstraksiyon Basit Bir Yöntem

Suyun temiz ve doğru noktadan örneklenmesi için basit, müdahaleci olmayan ve güvenilir bir yöntem olan VacuSIP'i tanıtıyoruz. Sistem, partikül ve çözünmüş bileşiklerin uzaklaştırılmasını ve atılımını temiz bir şekilde ölçmek için bentik süspansiyon besleyiciler tarafından solunan ve solunan suyun yerinde eşzamanlı olarak toplanması için geliştirilmiş ve değerlendirilmiştir.

VacuSIP, bir Geliştirilmiş INEX Yöntemi için<em&gt; In Situ</em&gt; Partikül Ölçümü ve Çözünmüş bileşikler Aktif Süspansiyon besleme üniteleri İşlenmiş

Su örneklerinin bir filtre kartuşu ile filtrelenmesi ve filtreyi çıkarmak için muhafazayı kesmek zorunda kalmadan çevresel DNA'nın (eDNA) çıkarılması için bir protokol açıklıyoruz. Bu protokol, balıklardan alınan eDNA'yı metabarkodlama için geliştirilmiştir, ancak diğer organizmalardan alınan eDNA'ya da uygulanabilir.

Filtrasyon Su Örnekleri ve Çevre DNA Ekstraksiyon için bir Filtre Kartuşu Kullanımı

Makale, birçok numuneyle yapılan çalışmalarda toprak mikrobik topluluk yapısını belirlemek için hem toplam lipidlerin hem de gösterge lipidlerinin göreceli olarak bolluğunun karakterize edilmesinde kullanılmak üzere, mikroorganizmaların hücre membranlarından lipidlerin ekstraksiyonu için çaba ve doğruluğu denkleştirirken, verimliliği arttıran bir yöntemi açıklıyor.

Çok Örnekli Deneylerde Toprak Mikroplarını Karakterize Etmek İçin Bir Lipid Ekstraksiyon ve Analiz Metodu

Öğrenin çevre ve içme sularından enterik virüs örnekleme yöntemini. EPA Yöntem 1615 ile elektropozitif filtre kullanarak enterovirüs ve norovirüs konsantrasyonu yapın.

Enterovirus Kültür ve RT-qPCR Su Norovirüs Oluşum EPA Metot 1615 Ölçüm. Virüs Örneklerinin I. Koleksiyonu

Daha fazla video keşfet