Name: İzolasyon, Kriyoprezervasyon ve Kültür Klinik Uygulamaları İnsan Amniyon Epitel Hücreleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: Öğrenin, hayvansal ürün içermeyen tripsin enzimi çözeltisi kullanarak insan amniyon epitel hücrelerini izole etme ve kültürleme yöntemini. Bu teknik klinik uygulamalar için cGMP standartlarına uygundur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Victoria Hükümeti'nin Operasyonel Altyapı Destek Programı'ndan sağlanan mali desteği kabul ediyorlar.

NOT: plasenta vadeli elektif sezaryen için bir tercih, tekiz gebeliklerde sağlıklı toplanan edilmelidir. Yazılı bilgilendirilmiş onam kendi plasenta toplanması için verilmelidir. Sizin ilgili insan araştırma etik kurul onayı tüm koleksiyon ve insan dokularının kullanılması gerekir. Amniyon Epitel Hücreleri 1. İzolasyon <ol style="margin-left: 40px;"><li> Bir sınıf II biyolojik güvenlik kabini içinde steril bir yüzeye yerleştirin plasentayı. </li><li> Steril Hanks ile dengelenmiş tuz çözeltisi (HBSS) kullanarak, plasenta yüzeyi ve zarlardan mümkün olduğu kadar kan yıkayın. </li><li> Göbek kordonu yukarı bakacak şekilde yerleştirilen plasenta ile, mekanik amniyon ve koryon zarlarının dış kenarını ayrı. </li><li> Ayrıldıktan sonra, elle göbek kordonu doğru, membran kenarında çalışan, plasentanın koryon zarından amniyon zarı şerit. NOT: caref Beul amniyon gelen koryon zarı kirlenmesine parçaları varsa kaldırmak için. </li><li> Steril makas kullanılarak, 250 ml HBSS içeren kabı sızdırmaz bir 500 ml&#39;lik, göbek bağı ve yer tabanından yaklaşık 2 cm amniyon membran kesti. </li><li> Amniyon zarı içeren mühürlü şişeyi sallayarak iyice yıkayın. </li><li> 15 cm Petri kabı içine toplanması steril forseps kullanarak konteyner ve yerden amniyon zarı çıkarın. </li><li> Kanlı veya yırtılmış parçaları atarak, (forseps ile dikey tutulduğunda), yaklaşık 5 cm uzunluğunda parçalar halinde amniyon zarı kesin. </li><li> 500 ml&#39;lik bir yer kabı sızdırmaz şekilde kapatıldı ve 250 ml HBSS ile yaklaşık 3-5 kez yıkama veya amniyon membranı kirlenmeye sebep olan hiçbir kan saydam hale gelinceye kadar. NOT: Herhangi bir kan mevcut çözüm sindirmek enzimatik etkinliğini azaltabilir. </li><li> Dikkat ederek, çözelti sindirmek enzimatik 50 ml ihtiva eden bir kap içine amniyon zarın tüm parçaları transferHBSS taşınmasını en aza indirir. </li><li> Kalan kanı çıkarmak için yavaşça sallanarak 15 dakika için 37 ° C&#39;de su banyosunda veya sıcak bir odada çözüm sindirmek enzimatik olarak amniyon parçaları inkübe. </li><li> Yeni bir steril kap içinde çözüm ve yer sindirmek enzimatik gelen amniyon zarı parçalarını çıkarın. </li><li> Taze enzimatik 100 mi amniyon zara çözeltisi sindirimi ve bir su banyosu ya da yumuşak çalkalama (birinci sindirim) ile sıcak bir odada 60 dakika süre ile 37 ° C&#39;de inkübe ekleyin. </li><li> Amniyon zarı parçalarını çıkarın ve enzimatik zarının her parçasından tahliye çözüm sindirmek izin vermek için yeni konteyner alarak bakım içine yerleştirin. Not: Bu, kabın iç kenarı boyunca amniyon parçaları sürükleyerek elde edilebilir. </li><li> Taze enzimatik 100 mi amniyon membran parçaları çözeltisi sindirimi ve hafif çalkalama (ikinci sindirim) ile 37 ° C&#39;de bir su banyosu ya da sıcak bir odada 60 dakika inkübe ilave edin. </li><li> Hücre asıltı geçmek10 dakika boyunca 1.000 xg&#39;de 70 mikron filtre ve santrifüj yoluyla Adım 1.14 itibaren. </li><li> Çıkarın ve supernatant ve 1 mg / ml soya fasülyesi bazlı bir enzim inhibitörü içeren 4 ml HBSS hücre pelletini. Yavaşça tek bir hücre süspansiyonu elde etmek üzere, 1 ml pipet ile tekrar tekrar pipetle. Not: ikinci sindirilmiş hücre işlem aynı seviyede olana kadar bu aşamada hücreler, buz üzerinde bırakılabilir. </li><li> Amniyon zarı parçalarını çıkarın ve enzimatik zarının her parçasından tahliye çözüm sindirmek izin vermek için yeni konteyner alarak bakım içine yerleştirin. Not: Bu, kabın iç kenarı boyunca amniyon parçaları sürükleyerek elde edilebilir. </li><li> 10 dakika boyunca 1.000 xg&#39;de 70 mikron filtre ve santrifüj yoluyla Adım 1.18 hücre süspansiyonu geçirin. </li><li> Çıkarın ve supernatant ve 1 mg / ml soya fasülyesi bazlı bir enzim inhibitörü içeren 4 ml HBSS hücre pelletini. Yavaşça 1 ml p art arda pipettek bir hücre süspansiyonu elde etmek için ipette. </li><li> İki digests veya alternatif Havuz hücreleri hücre sayımları sonrasına kadar ayrılmış hücre digests tutun. NOT: Bu yüksek canlılık hücreleri ile potansiyel olarak düşük canlılığı hücrelerinin karıştırılması önler. </li><li> 10-20 ml&#39;lik bir son hacme HBSS ekleyin ve canlılığını ölçmek için tripan mavisi kullanarak hücreleri sayısını gerçekleştirmek. </li><li> Flow sitometri ile epitel hücre fenotipi onaylayın. Anti-EpCAM-PE kullanılarak uygun antikor kokteyli Makyaj (1: 2 seyreltme), anti-CD90-PeCy5 (1: 250) ve anti-CD105 APC (1: 100), HBSS. </li><li> 25 x 10 6 hücre / ml&#39;lik bir konsantrasyonda bir hücreler ya da antikor kokteyli içinde iki digests bir alt yeniden süspanse edin. </li><li> Flow sitometri, leke izotip kontrolleri içeren antikor kokteylleri ile 1 x 10 6 hücre için (örn., IgG 1 izotop kontrol-PE + Anti-CD90-PeCy5 + Anti-CD105-APC). Set-up akış sitometresi için lekesiz ~ 1 x 10 6 hücre tutun. </li><li> Antikorda hücreleri inkübe60 dakika boyunca 4 ° C&#39;de kokteyller. </li><li> Yıkama akış sitometresi için hücreler, ml başına 5-10.000.000 hücreler HBSS ve tekrar süspansiyon 3x. </li><li> Akış sitometrik ve not sonuçlarını gerçekleştirin. Hücre izolatı (EpCAM pozitif ve CD90 / CD105 negatif hücrelerin yüzdesi) saflığı sırasıyla% 90-95 ve &lt;% 1 olacağı tahmin edilmektedir. </li><li> Nihai uygulama tarafından tespit edildiği üzere, uygun kalite kontrol ve serbest bırakma kriterleri için test edilmesi için bir kenara hücrelerin uygun bir sayısı ayarlayın. NOT: Bu hastalık / viral tarama veya diğer güvenlik veya biyolojik kriterlerini içerebilir. </li><li> Kalan hücreler için, Kriyoprezervasyonun protokolünü takip veya alternatif (kültür adım 3.6 doğrudan) kültür doğrudan yerleştirin. </li></ol> HAECs 2. Kryoprezervasyon <ol style="margin-left: 40px;"><li> Veri veya tripan mavi dışlama manuel sayım flow sitometri kullanılarak hücre sayısı ve canlılığı belirleyin. </li><li> 5 dakika boyunca 700 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Süspanse hücrehayvansal ürün içermeyen kriyoprezervasyon medya ml başına 1-10 milyon hücreleri arasındaki s. </li><li> O-halkalı dondurarak saklama şişeleri içine hücrelerin uygun bir hacim pipet ve soğutma yaklaşık olarak meydana geldiği hızı kontrollü dondurma cihazının içine koyun 1 ° C / dakika kadar -80 ° C elde edilir °. </li><li> Uzun süreli depolama için sıvı azot içine şişeleri aktarın. </li></ol> Cyropreserved hAECs 3. erimesi ve Kültür <ol style="margin-left: 40px;"><li> Sıvı azottan dondurarak saklama şişeleri çıkarın ve buz üzerine yerleştirin. NOT: Yalnızca transferi için - bir sonraki adıma geçin hızla. </li><li> Buz kalır, sadece küçük bir parça (~ 5 mm x 5 mm) kadar 37 ° C de hızlı bir şekilde dondurarak saklama şişeleri çözülme. NOT: Bu hücre çözümü dondurulması medyada DMSO toksik etkilerini azaltmak için sıcak olmadığı önemlidir. </li><li> Soğuk (~ 4 ° C), serum içermeyen ortam ile dondurarak saklama Ortam 10 kat seyreltilir, damla damla uygun bir boyut halinde ilaved tüp veya kap. </li><li> Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 700 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Ml başına 1.000.000 hücre bir konsantrasyonda için, serum barındırmayan ortam içinde yeniden süspanse edin. Tripan mavi dışlama ile otomatik veya manuel sayım kullanarak hücre sayısı ve canlılığı belirleyin. Beklenen canlılık sonrası çözülme öncesi kriyokoruma canlılığı% 5-10 daha az olacaktır. </li><li> Plaka standart hücre kültürü-işlenmiş plastik eşya üzerine hücreler, veya alternatif kullanmak Tip I kat kültür yüzeylere kollajen. </li><li> Tip I Kollajen kaplama için aşağıdaki protokolü takip <ol><li> İnsan plasentasından (25 ml deiyonize su ve 50 ul asetik asit, 15 mg, kolajen) &#39;ye ait asit çözünebilir Tip I Kolajen hazırlayın. </li><li> Parafilm ile beher Kapak ve kolajen iplikler eriyene kadar 37 ° C&#39;de orta karıştırın. </li><li> 0.22 um filtre kullanılarak steril filtre kolajen çözeltisi. </li><li> Deiyonize su ile filtrelenmiş kollajen stok 01:10 sulandırmak. Bu seyreltilmiş hisse çalışma conce olduğunuKaplama, plastik ve zar yüzeylerin ntration çözeltisi. </li><li> Kollajen kat plastik, 37 ° C&#39;de, oda sıcaklığında 2 saat için cam ve zar yüzeylerin ya da O / N, 2-8 ° C&#39;de ilave edildi. </li><li> Kaplanmış yüzey aşırı sıvı kaldırmak, ve O / N kurumasını bekleyin. </li><li> Hücreleri ve orta tanıtan önce steril doku kültürü dereceli su veya HBSS ile durulayın. </li></ol></li><li> Levha serumsuz ortam içinde 25,000 hücre / cm2 yoğunluğunda hAECs ve ek 72-96 saat boyunca oluşmasına izin verir. </li><li> Ek sonra, dikkatli bir şekilde aspire edilmesiyle ve serumsuz ortamda uygun bir hacim, her 2-3 günde bir ile değiştirerek ortamı değiştirmek. </li><li> Aşağıdaki protokolü kullanarak Passage hücreleri <ol><li> Aspire hücre kültürü ortamı ve steril HBSS 1x hacmi ile yıkayın </li><li> Hücreler, hücre kültürü yüzeyinden ayırma gözlenen kadar enzimatik 1x hacmi ekleyin çözüm sindirmek ve 5-15 dakika inkübe, ya da. </li><li> Çözelti, hücreleri ihtiva eden sindirimi ce sağlanması enzimatik toplamakrf defalarca hücre kültürü yüzeyine karşı çözüm sindirmek enzimatik pipetleme hücre kültürü yüzeyinden ayrılır </li><li> 5 dakika boyunca 700 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> 1 mg / ml soya fasülyesi bazlı bir enzim inhibitörü ihtiva eden HBSS uygun bir hacimde hücre pelletini. Yavaşça tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için bir 1ml pipet ile art arda pipetle. </li><li> 1.000.000 hücre / ml&#39;lik bir konsantrasyonda serum içermeyen ortam ekleyin. Tripan mavi dışlama ile otomatik veya manuel sayım kullanarak hücre sayısı ve canlılığı belirleyin. </li><li> Levha serumsuz ortam içinde 25,000 hücre / cm2 yoğunluğunda hAECs, standart kültür yöntemleri ile devam eder. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Murphy, S. V., Wallace, E. M., Jenkin, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMurphy%2C+SV+%22Stem+Cells+and+Regenerative+Medicine%22">Stem Cells and Regenerative Medicine</a>. Appasani, K. 1, Springer Science and Business Media. 243-264 (2011).</li>
<li>Murphy, S. V., Atala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amniotic+fluid+and+placental+membranes%3A+unexpected+sources+of+highly+multipotent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Reprod.+Med%22%5BJournal%5D)">Amniotic fluid and placental membranes: unexpected sources of highly multipotent cells.</a> Semin. Reprod. Med. 31 (1), 62-68 (2013).</li>
<li>Parolini, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+isolation+and+characterization+of+cells+from+human+term+placenta%3A+outcome+of+the+first+international+Workshop+on+Placenta+Derived+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: isolation and characterization of cells from human term placenta: outcome of the first international Workshop on Placenta Derived Stem Cells.</a> Stem Cells. 26 (2), 300-311 (2008).</li>
<li>Lim, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preterm+human+amnion+epithelial+cells+have+limited+reparative+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Preterm human amnion epithelial cells have limited reparative potential.</a> Placenta. 34 (6), 486-492 (2013).</li>
<li>Tamagawa, T., Ishiwata, I., Saito, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+pluripotent+stem+cell+line+derived+from+human+amniotic+membranes+and+initiation+of+germ+layers+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Cell%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a pluripotent stem cell line derived from human amniotic membranes and initiation of germ layers in vitro.</a> Hum Cell. 17 (3), 125-130 (2004).</li>
<li>Miki, T., Marongiu, F., Ellis, E., Strom, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+amniotic+epithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Stem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of amniotic epithelial stem cells.</a> Curr Protoc Stem Cell Biol. 1, Unit 1E.3(2007).</li>
<li>Murphy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amnion+epithelial+cell+isolation+and+characterization+for+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Stem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Amnion epithelial cell isolation and characterization for clinical use.</a> Curr Protoc Stem Cell Biol. 1, Unit 1E.6(2010).</li>
<li>Ilancheran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+derived+from+human+fetal+membranes+display+multilineage+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Stem cells derived from human fetal membranes display multilineage differentiation potential.</a> Biol Reprod. 77 (3), 577-588 (2007).</li>
<li>Fliniaux, I., Viallet, J. P., Dhouailly, D., Jahoda, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+amnion+epithelium+into+skin+and+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Transformation of amnion epithelium into skin and hair follicles.</a> Differentiation. 72 (9-10), 558-565 (2004).</li>
<li>Miki, T., Lehmann, T., Cai, H., Stolz, D. B., Strom, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+characteristics+of+amniotic+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Stem cell characteristics of amniotic epithelial cells.</a> Stem Cells. 23 (10), 1549-1559 (2005).</li>
<li>Avila, M., Espana, M., Moreno, C., Pena, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstruction+of+ocular+surface+with+heterologous+limbal+epithelium+and+amniotic+membrane+in+a+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Reconstruction of ocular surface with heterologous limbal epithelium and amniotic membrane in a rabbit model.</a> Cornea. 20 (4), 414-420 (2001).</li>
<li>Sankar, V., Muthusamy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+human+amniotic+epithelial+cell+transplantation+in+spinal+cord+injury+repair+research%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Role of human amniotic epithelial cell transplantation in spinal cord injury repair research.</a> Neuroscience. 118 (1), 11-17 (2003).</li>
<li>Yuge, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplanted+human+amniotic+epithelial+cells+express+connexin+26+and+Na-K-adenosine+triphosphatase+in+the+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Transplanted human amniotic epithelial cells express connexin 26 and Na-K-adenosine triphosphatase in the inner ear.</a> Transplantation. 77 (9), 1452-1454 (2004).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppressive+factors+secreted+by+human+amniotic+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Immunosuppressive factors secreted by human amniotic epithelial cells.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (3), 900-907 (2005).</li>
<li>Liu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+amniotic+epithelial+cells+ameliorate+behavioral+dysfunction+and+reduce+infarct+size+in+the+rat+middle+cerebral+artery+occlusion+model%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Human amniotic epithelial cells ameliorate behavioral dysfunction and reduce infarct size in the rat middle cerebral artery occlusion model.</a> Shock. 29 (5), 603-611 (2008).</li>
<li>Venkatachalam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+neurotrophic+factor+secreted+by+amniotic+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biocell%22%5BJournal%5D)">Novel neurotrophic factor secreted by amniotic epithelial cells.</a> Biocell. 33 (2), 81-89 (2009).</li>
<li>Manuelpillai, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+amniotic+epithelial+cell+transplantation+induces+markers+of+alternative+macrophage+activation+and+reduces+established+hepatic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human amniotic epithelial cell transplantation induces markers of alternative macrophage activation and reduces established hepatic fibrosis.</a> PLoS One. 7 (6), e38631(2012).</li>
<li>Wei, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+amnion-isolated+cells+normalize+blood+glucose+in+streptozotocin-induced+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Human amnion-isolated cells normalize blood glucose in streptozotocin-induced diabetic mice.</a> Cell Transplant. 12 (5), 545-552 (2003).</li>
<li>Murphy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+amnion+epithelial+cells+prevent+bleomycin-induced+lung+injury+and+preserve+lung+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Human amnion epithelial cells prevent bleomycin-induced lung injury and preserve lung function.</a> Cell Transplant. 20 (6), 909-923 (2011).</li>
<li>Murphy, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+amnion+epithelial+cells+induced+to+express+functional+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human amnion epithelial cells induced to express functional cystic fibrosis transmembrane conductance regulator.</a> PLoS One. 7 (9), e46533(2012).</li>
<li>Murphy, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+amnion+epithelial+cells+do+not+abrogate+pulmonary+fibrosis+in+mice+with+impaired+macrophage+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Human amnion epithelial cells do not abrogate pulmonary fibrosis in mice with impaired macrophage function.</a> Cell Transplant. 21 (7), 1477-1492 (2012).</li>
<li>Hodges, R. J., Lim, R., Jenkin, G., Wallace, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amnion+epithelial+cells+as+a+candidate+therapy+for+acute+and+chronic+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cells+Int%22%5BJournal%5D)">Amnion epithelial cells as a candidate therapy for acute and chronic lung injury.</a> Stem cells Int. 2012, 709763(2012).</li>
<li>Tan, J. L., Chan, S. T., Wallace, E. M., Lim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+amnion+epithelial+cells+mediate+lung+repair+by+directly+modulating+macrophage+recruitment+and+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Human amnion epithelial cells mediate lung repair by directly modulating macrophage recruitment and polarization.</a> , (2013).</li>
<li>Litvinov, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell+adhesion+molecule+%28Ep-CAM%29+modulates+cell-cell+interactions+mediated+by+classic+cadherins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell adhesion molecule (Ep-CAM) modulates cell-cell interactions mediated by classic cadherins.</a> J Cell Biol. 139 (5), 1337-1348 (1997).</li>
<li>Winter, M. J., Nagtegaal, I. D., van Krieken, J. H., Litvinov, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epithelial+cell+adhesion+molecule+%28Ep-CAM%29+as+a+morphoregulatory+molecule+is+a+tool+in+surgical+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+pathology%22%5BJournal%5D)">The epithelial cell adhesion molecule (Ep-CAM) as a morphoregulatory molecule is a tool in surgical pathology.</a> The American journal of pathology. 163 (6), 2139-2148 (2003).</li>
<li>Musina, R. A., Bekchanova, E. S., Sukhikh, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+mesenchymal+stem+cells+obtained+from+different+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Exp+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Comparison of mesenchymal stem cells obtained from different human tissues.</a> Bull Exp Biol Med. 139 (4), 504-509 (2005).</li>
<li>Park, A., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPark%2C+A+%22Newborn+Stem+Cells%3A+Identity%2C+Function%2C+and+Clinical+Potential%22">Newborn Stem Cells: Identity, Function, and Clinical Potential</a>. , John Wiley & Sons, Inc. 119-137 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu metodolojinin başarısında önemli bir etkiye sahip birkaç kritik parametreler vardır. HAECs izolasyonundan önce 3 saat süre ile plasenta veya amniyon depolanması ancak doku mümkün olan en kısa zamanda işlem önerilmektedir, lojistik ve programlama amacıyla arzu edilebilir. Doku saklanacaksa, bu depolama amniyon membran diseksiyon ve yıkama sonrası yapılması tavsiye edilir. Amniyon sıvısı 4 ° C&#39;de steril HBSS içeren antibiyotik saklanabilir ancak hücre canlılığı, uzun depolama süresi ile azalabilir. Biz, ve diğerler...

Plasenta gibi perinatal kaynaklardan, plasental membranlar, göbek kordonu ve amniyotik sıvıdan elde edilen hücreler rejeneratif tıp 1,2 için hücrelerin bir potansiyel kaynağı olarak araştırmacılar ve klinisyenler dikkatini çekmiştir. Bu ilginin nedeni, bu hücre tipleri, tüm plastisite ve bağışıklık yeteneği 3, potansiyel terapötik uygulamalar için temel olan bazı özellikleri derecesine sahip olmasıdır. hAECs rejeneratif hücre malzemeden bir miktarda potansiyel kaynağı temin terimi ya da önceden dönem amniyon zar 4 elde edilebilir heterojen epitel nüfus bulunmaktadır. hücresel bir tedavi olarak çekici hAECs yapmak özellikleri kendi multipotency, düşük imünojenite ve anti-inflamatuar özelliklerini içerir. hAECs (yüksek ölçüde, in vitro ve in vivo olarak multipotent mezodermal soy içine türetme yeteneğinde olduğu kardiyomiyopati bulunmuşturyocytes, myocytes, osteositler, adiposit), Endodermal soy (pankreas hücreleri, karaciğer hücreleri, akciğer hücreleri) ve ektodermal soyları (saç, cilt, sinir hücreleri ve astrositler) 5-10. Reassuringly kendi multipotency hAECs ya bir şekilde tümörlere görünür ya da in vivo olarak tümör gelişimini teşvik etmemesine karşın. Ayrıca, hAECs de sınıf II insan lökosit antijenleri (HLA&#39;lar) 8 düşük seviyelerde ifade, ayrıcalıklı bağışıklık bulunmaktadır. Bu özellik muhtemelen bağışıklık yetkili maymunlar, tavşan, kobay, sıçan, ve domuzlar 11-13 kullanıldığı çalışmalarda gösterildiği gibi, allojenik ve ksenojenik transplantasyon sonrası immün ret kaçınmak için kendi yeteneğini temelini oluşturmaktadır. hAECs güçlü immünomodülatör ve immünosüpresif özellikler gösterir ve böylece otoimmün hastalığın tedavisinde potansiyel klinik uygulamalar için önemli bir pratik avantaj sağlar. hAECs hem doğal ve adaptif bağışıklık sistemi üzerinde bağışıklık fonksiyonlarını uygulamak inanılmaktadır. Üzerindeimmunomodülator salgılanması 14 faktörleri ile öne mekanizmaların e. Klinik öncesi hayvan hastalık modellerinde hAECs Mevcut uygulamalar felç, multipl skleroz, karaciğer hastalığı, şeker hastalığı ve kronik ve akut akciğer hastalıkların tedavisi bulunmaktadır. Araştırmacılar nedeniyle benzersiz özellikleri inme sonrası beyin iltihabı tedavi etmek hAECs kullanarak ilgi gösterdi. HAECs, onlar aşılamak olabilir kan beyin bariyerini kadar 60 gün boyunca hayatta, nöronlar içine ayırt, inflamasyonu azaltmak ve nörolojik hastalıkların 15 hayvan modellerinde hasarlı santral sinir sistemi dokusunun yenilenmesini teşvik edebilir dair kanıtlar vardır. hAECs hedef ve multipl skleroz gelişmesi ve ilerlemesine katkıda birden patolojik yollar ters yeteneği sunuyoruz. Örneğin, klinik öncesi hayvan çalışmalarında kaynaklanan hAECs kuvvetle bağışıklık olduğunu göstermektedir vepotansiyel çevresel immün tolerans neden ve devam eden inflamatuar yanıtları tersine çevirebilirsiniz. hAECs in vivo sinir hücrelerine dönüştürmek ve nörotropik geniş bir dizi 16 faktörleri salgılayarak endojen sinir sistemini geliştirmek için kapasitesine sahip olduğu gösterilmiştir. İnsan ve kemirgen amniyon epitel hücreleri, hayvan modellerinde karaciğer hastalığının tedavisi için terapötik etkinliğini göstermiştir. Düşük hepatosit apoptoz eşliğinde karaciğer hastalığı, karaciğer canlı hAECs nakledilmesiyle için haec nakli kurşun, karbon tetraklorür hasar indüksiyon modelinde ve hepatik inflamasyon ve fibrozis 17 azalmıştır. hAECs insülin ve glükoz taşıyıcıları içeren ifade pankreas faktörlere stimüle edilebilir. Çeşitli çalışmalar, diyabetik farelerde 18 kan şekeri seviyelerinin normale dönmesi için hAECs potansiyelini araştırdık. Farelerde almahAECs, her iki hayvan vücut ağırlığı ve kan glukoz seviyeleri, hücre enjeksiyonunun ardından, normal seviyelere düşmüştür. Bu çalışmalar, diyabet tedavisi için hAECs kullanımı için güçlü bir sunulmaktadır. hAECs yetişkin ve yenidoğan modelleri 19 hem de önlenmesi ve deneysel akut ve kronik akciğer hasarı tamir kanıtlanmış rolü vardır. Bu çalışmalar, hAECs Kistik fibroz membran geçirgenliğinin düzenleyicisi (CFTR), kistik fibroz 20 hastalarda mutasyona uğramış, ve iyon kanalının de dahil olmak üzere birden fazla akciğer ilişkili proteinler ifade eden fonksiyonel akciğer epitel hücrelerine in vitro olarak ayırt bulundu. HAECs yaralı yetişkin ve yeni doğan akciğer teslim edilir, ayrıca, bunların nötrofil, makrofajlar ve lenfositler 21-23 dahil olmak üzere akciğer lökosit işe, azaltılması, konak bağışıklık hücrelerinin modülasyonu yoluyla onarım etkilerini uygularlar. Onların bolluğu göz önüne alındığında,Emniyet kaydı ve birden hastalıklar için kanıtlanmış klinik uygulamalar, hAECs kullanarak klinik çalışmalarda kaçınılmazdır. Klinik denemeler içine haec tedavilerin çeviri hızlandırılması amacı ile, biz mevcut iyi üretim uygulamaları (cGMP) kurallarına uygun olarak hayvansal ürün içermeyen reaktifler kullanılarak, klinik çalışmalar için uygun bir şekilde kültür hAECs, izole cryopreserve ve yöntemler geliştirdi . Biz bu protokolünü biz hayvansal kaynaklı reaktifler 6 kullanarak hAECs izole başarıyla kullandığınız bir önceden yayınlanmış bir protokol tabanlı. Biz hayvansal ürün içermeyen reaktif ile hayvansal kaynaklı ürünler yerine orijinal protokol değişmiş ve sonraki optimizasyon hücre verimi, canlılığı ve saflık optimize etmek yapıldı. Amacımız, insan klinik denemeler için hücre üretimi için düzenleyici standartlara uygun bir protokol geliştirmekti.

<table><tbody><tr><td>Toplama Kiti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sıyırma tepsisi</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-361B</td><td></td></tr><tr><td>Liberty Pansuman Forsebi, sivri uçlu 13 cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17329&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Makas - Keskin/Küt Düz</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0562592&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Steril lateks eldivenler&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>19-014-643&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Koruyucu Giysi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Koruyucu Giysi (Önlük)</td><td>U-line</td><td>S-15374-M</td><td></td></tr><tr><td>İzolasyon önlükleri</td><td>U-line</td><td>S-15374-M</td><td></td></tr><tr><td>Steril lateks eldivenler&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>19-014-643&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Genel amaçlı yüz maskesi</td><td>Cardinal Health</td><td>AT7511</td><td></td></tr><tr><td>Boneler</td><td>Medline</td><td>CRI1001</td><td></td></tr><tr><td>Ayakkabı kılıfları</td><td>U-line</td><td>S-7873W</td><td></td></tr><tr><td>Medya ve Reaktifler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS)</td><td>Kalsiyum veya magnezyum içermeyen</td> <td>Life Technologies</td><td></td></tr><tr><td>14175095 TrypZean (hayvansal ürün&ndash; ücretsiz rekombinant tripsin)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>T3449</td><td></td></tr><tr><td>Soya Fasulyesi Tripsin İnhibitörü ve 1g / 50mL</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T6522</td><td></td></tr><tr><td>Cryostor CS5</td><td>BioLife Çözümleri</td><td>205102</td><td></td></tr><tr><td>Tripan mavisi reaktifi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Anti-EpCam-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130 - 091-253</td><td></td></tr><tr><td>PE-izotipi kontrol</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-098-845</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD90-PeCy5</td><td>BD Pharmingen</td><td>555597</td><td></td></tr><tr><td>PeCy5-izotip kontrolü</td><td>BD Pharmingen</td><td>557224</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD105-APC</td><td>BD Pharmingen</td><td>562408</td><td></td></tr><tr><td>APC-izotip kontrolü</td><td>BD Pharmingen</td><td>340754</td><td></td></tr><tr><td>Kollajen Tip VI</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C7521</td><td></td></tr><tr><td>Sarf malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 ml dereceli pipet</td><td>BD/Falcon</td><td>356550</td><td></td></tr><tr><td>10 ml dereceli pipet</td><td>BD/Falcon</td><td>356551</td><td></td></tr><tr><td>5 ml dereceli pipet</td><td>BD/Falcon</td><td>356543</td><td></td></tr><tr><td>50 ml şahin tüpleri</td><td>BD/Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>15 ml şahin tüpleri</td><td>BD/Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>15 cm Petri kapları</td><td>Corning</td><td>351058</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; m filtreler</td><td>BD / Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>0.22 & mu; m filtreler</td><td>Kırlangıç SLGV033RS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml Pipet uçları</td><td>Fisherbrand</td><td>02-707-401</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu; l Pipet uçları</td><td>Fisherbrand</td><td>02-707-409</td><td></td></tr><tr><td>20 ml Şırınga</td><td>BD / Tıbbi</td><td>309661</td><td></td></tr><tr><td>Plastik spatula</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-245-97&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Plastik tartı teknesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-202-102&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cryo şişeleri</td><td>Nunc</td><td>377267</td><td></td></tr><tr><td>Ekipmanları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bay Frosty</td><td>Fisher Scientific</td><td>A451-4&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Biyolojik Tehlike Dolabı</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

İzolasyon, kriyoprezervasyon ve kültür klinik uygulamaları İnsan amniyon epitel hücreleri

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Term veya preterm amniyon membranlarından türetilen insan amnion epitel hücreleri (hAEC'ler), rejeneratif tıp için potansiyel bir hücre kaynağı olarak araştırmacıların ve klinisyenlerin dikkatini çekmiştir. Bu ilginin nedeni, bu hücrelerin yüksek multipotent farklılaşma yeteneğine, düşük immünojenisiteye ve anti-inflamatuar fonksiyonlara sahip olduğuna dair kanıtlardır. Bu özellikler, araştırmacıları, klinik öncesi hayvan çalışmalarında çeşitli hastalık ve bozuklukları tedavi etmek için hAEC'lerin potansiyelini çok başarılı bir şekilde araştırmaya sevk etmiştir.
hAEC'ler, bir dizi hastalık ve bozukluğun tedavisi için yaygın bir uygulama alanı bulmuştur. HKEC'lerin potansiyel klinik uygulamaları arasında inme, multipl skleroz, karaciğer hastalığı, diyabet ve kronik ve akut akciğer hastalıklarının tedavisi yer alır. Klinik öncesi hayvan çalışmalarından klinik çalışmalara ilerlemek, hücre tedavisi ürünleri için daha yüksek bir kalite kontrol ve güvenlik standardı gerektirir. Güvenlik ve kalite kontrol hususları için, hücre izolasyon protokollerinin hayvansal ürün içermeyen reaktifler kullanması tercih edilir. 
Araştırmacıların hayvansal ürün içermeyen reaktifler kullanarak hAEC'leri izole etmelerine, kriyoprezervasyon yapmalarına ve kültürlemelerine olanak tanıyan protokoller geliştirdik. Bu yöntemin avantajı, bu hücrelerin, uygun hücre verimlerini, canlılıklarını ve büyüme potansiyelini korurken, insanlara potansiyel olarak zararlı hayvan patojenleri verme riski olmadan izole edilebilmesi, karakterize edilebilmesi, dondurularak saklanabilmesi ve kültürlenebilmesidir. Klinik öncesi hayvan çalışmalarından klinik araştırmalara geçen araştırmacılar için bu metodolojiler, düzenleyici onayı büyük ölçüde hızlandıracak, riskleri azaltacak ve terapötik hücre popülasyonlarının kalitesini artıracaktır.

Bu prosedür doğru devam edildiğinde, 120,000,000 hAECs bir ortalama verim 80-160,000,000 hücre tipik aralık, beklenmelidir. Bu verimi kaynaktan, 83 ±% 4 arasında bir ortalama canlılığı beklenebilir. Klinik yöntemde artan ortalama verimi ve biraz daha düşük bir canlılık bağlı olarak serum proteinleri olmaması belki de, hayvan türevi ürün daha yüksek bir tripsin aktivitesi nedeniyle olabilir ve. İzole hAECs &lt;% 1, CD90, CD105, mezenkimal geni taşıyan hücreler ile% 92 EpCAM pozitif hücreleri arasında bir ortalama hücre y...

Mevcut iyi üretim uygulamaları (cGMP) yönergelerine uygun olarak hayvansal ürün içermeyen reaktifler kullanarak insan amnion epitel hücrelerini (hAEC'ler) izole etmek ve kültürlemek için bir protokol açıklıyoruz.

İzolasyon, Kriyoprezervasyon ve Kültür Klinik Uygulamaları İnsan Amniyon Epitel Hücreleri

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Bu prosedürün genel amacı, epitel hücre popülasyonunu bir insan amniyon zarından izole etmektir. Bu, önce amniyon zarının koryon zarından ve ikinci aşamada plasentadan sıyrılmasıyla gerçekleştirilir. Amniyon zarı tüm kan izlerinden yıkanır ve daha sonra hayvansal ürün içermeyen bir tripsin enzim çözeltisi ile sindirilir.Son adımda, izole edilmiş epitel hücrelerini toplamak için doku bulamacı süzülür. Sonuç olarak, amniyon epitel hücre popülasyonunun saflığı akış sitometrik analizi ile değerlendirilebilir. Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, hücrelerin hayvansal hayvan ürünlerine maruz kalmasını gerektirmemesidir, bu da bu hücrelerin klinik deneyler için yararlı olduğu anlamına gelir.Amniyon epitel hücrelerini izole etmek için, plasentayı ikinci sınıf bir biyolojik güvenlik kabini içinde steril bir yüzeye yerleştirerek başlayın. Daha sonra plasenta yüzeyinden mümkün olduğunca fazla kanı yıkamak için steril HBSS kullanın. Daha sonra, plasentayı göbek kordonu ve plasenta zarları yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve amniyon zarını, zarın kenarı etrafında göbek kordonuna doğru çalışan plasentanın koryon zarından manuel olarak sıyırın.Kirletici korion zarı parçalarını amniyondan çıkarmaya özen gösterin ve ardından amniyon zarını göbek kordonunun tabanından yaklaşık iki santimetre uzakta kesmek için steril makas kullanın ve zarı 250 mililitre HBSS içeren 500 mililitrelik bir kaba yerleştirin, kabı kapatın ve dokuyu yıkamak için iyice çalkalayın, ve daha sonra zarı 15 santimetrelik bir Petri kabına aktarmak için steril forseps kullanın. Şimdi, zarı beş santimetre uzunluğunda dikey parçalar halinde kesin ve parçaları, zar kirletici kan olmadan yarı saydam hale gelene kadar gösterildiği gibi üç ila beş kez daha yıkayın. Tüm kan alındığında, doku parçalarını 50 mililitre Enzimatik Digest solüsyonuna aktarın, herhangi bir HBSS'nin taşınmasını en aza indirmek için ker alın ve amniyon dokusunu 37 santigrat derecede ılık bir odada hafif çalkalama ile inkübe edin 15 dakika sonra kalan kanı çıkarmak için, eski sindirim solüsyonunu boşaltmak için her bir parçayı kabın iç kenarı boyunca sürükleyin ve parçaları 100 mililitre taze enzimatik sindirim çözeltisi.Aynı koşullar altında bir saatlik sindirimden sonra, zarları yeni bir Enzimatik Digest çözeltisi kabına aktarın. Dokuları gösterildiği gibi boşaltmaya özen gösterin ve ikinci sindirimi takiben son 60 dakika boyunca zarları nazikçe çalkalayın. Hücre süspansiyonunu 70 mikrometrelik bir filtreden süzün ve ardından hücre bulamacını 1000 Gs ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca döndürün, tek hücreli bir süspansiyon oluşturmak için peleti dört mililitre soya fasulyesi bazlı enzim inhibitörü içinde nazikçe yeniden süspanse edin ve ardından hücrelere 10 ila 20 mililitrelik bir nihai hacme kadar HBSS ekleyin.Triam mavisi dışlaması ile canlı hücrelerin sayısını belirleyin ve ardından izole edilmiş amniyon epitel hücrelerini kriyoprezervasyon yapın. İlk olarak, 700 peynir ve oda sıcaklığında beş dakika boyunca bükün. Daha sonra peleti, hayvansal ürün içermeyen kriyo-koruma ortamında mililitre başına altı ila bir çarpı yedinci hücrelerin 10'u kadar yeniden askıya alın ve uygun bir hacimde hücreyi o halkalı kriyo koruma şişelerine pipetleyin.Son olarak, şişeleri, eksi 80 santigrat dereceye ulaşılana kadar dakikada yaklaşık bir santigrat derecede soğutmanın gerçekleştiği kontrollü bir hızlı dondurma aparatına yerleştirin ve ardından şişeleri uzun süreli depolama için sıvı nitrojene aktarın. Birçok hayvansal ürün içermeyen ortam uygun şekilde performans gösterir. Bununla birlikte, optimal DMSO konsantrasyonu yaklaşık% beş ila 10'dur. Tipik olarak, çözülme sonrası beklenen canlılık, kriyoprezervasyon öncesi canlılıktan %5 ila %10 daha azdır ve deneyimsiz kullanıcı için önemli ölçüde daha büyük olabilir.Hücre kültürü, serum serbest kültür ortamında epitel fenotiplerini korurken, hücrelerin daha sonraki aşağı akış analizi için karakterizasyonunu veya farklılaşmasını sağlamak için insan amniyon epitel hücreleri ile gerçekleştirilebilir. İmmün düzenleyici ve antienflamatuar özelliklere sahip olmasının yanı sıra, insan amniyon epitel hücrelerinin in vitro ve in vivo olarak oldukça çok güçlü olduğu ve geliştirilmesinden sonra üç ana germ katmanını temsil eden hücre soylarına farklılaştığı gösterilmiştir. Bu teknik, araştırmacıların akciğer hastalığı ve graft versus host hastalığı gibi durumlar için klinik deneyler yapmalarının yolunu açtı.

isolation-cryopreservation-culture-human-amnion-epithelial-cells-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

James Thomson ve ark, 1998 yılında kültür embriyonik kök izole etmek ve büyümek için bir teknik geliştirdi beri, daha sonra kullanmak üzere hücreleri donmuş bir stok eritme ve genişleyen donma hücreleri rutin embriyonik kök hücre kültürü yapılan önemli işlemler haline gelmiştir. Embriyonik kök hücreleri dondurma ve çözme streslere karşı çok hassas olduğundan, özel dikkat gerekir. Burada embriyonik kök hücrelerin hızla sıvı azot stokları eritme fare embriyonik besleyici hücreler kaplama ve yavaş...

İnsan Embriyonik Kök Hücreler Donma ve Çözülme

Bu iletişim kuralı birincil amniyotik sıvı ve membran Mezenkimal kök hücrelerin içine İndüklenmiş pluripotent kök hücreler tamamen kimyasal olarak tanımlanan koşullarda bir sigara entegre episomal yaklaşım kullanarak yeniden programlama açıklar. Yordamlar, ayıklama, kültür, yeniden programlama ve elde edilen İndüklenmiş pluripotent kök hücreler sıkı yöntemlerle karakterizasyonu ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Birincil amniyotik sıvı ve membran hücreler Pluripotent Xeno-Alerjik koşullarında için yeniden programlama

Bu çalışmada yalıtım ve kültür vitro decidualization tahlil yapmak için insan endometrium stromal hücre için doğrulanmış ve en iyi duruma getirilmiş bir yordam sunar. Ayrıca, bu çalışmada çift insan endometrium stromal hücreler kullanarak belirli bir gen için verimli bir şekilde devirme detaylı bir yöntem sağlar.

Vitro Decidualization için insan endometrium Stromal hücre izolasyon

Bu protokol, klinik ve fizyopatolojik modellerde olası uygulama için heterojenliklerini ve fonksiyonel özelliklerini belirlemek için insan amniyotik zarının farklı anatomik bölgelerinden epitel hücrelerinin izolasyonu açıklanmaktadır.

İnsan Amniyotik Membranının Farklı Anatomik Bölgelerinden Epitel Hücrelerin In Vitro Kültürü

Burada, vitrifiye insan blastosistlerinin ısınması, in vitro implantasyon dönemi boyunca ekinde, tek hücrelere sindirilmesi ve daha fazla araştırma için erken trofenlast hücrelerinin toplanması için bir yöntem tanımlıyoruz.

Peri-implantasyon Aşamasında Trophoblast Hücrelerinin Tek Hücre Li Hücre Koleksiyonu İnsan Embriyoları

Bu çalışma, embriyo biyopsisini önleyen ve NGS kullanılarak kromozom ploidi tanımlamasını sağlayan, harcanan kültür ortamını kullanan insan embriyolarının kromozom taraması için bir protokol bildirmektedir. Bu makale, kültür ortamının hazırlanması, tüm genom amplifikasyonu (WGA), yeni nesil dizileme (NGS) kütüphanesinin hazırlanması ve veri analizi dahil olmak üzere ayrıntılı prosedürü sunmaktadır.

İnsan Preimplantasyon Embriyolarının Harcanan Kültür Ortamı Kullanılarak Kromozom Taraması: Örnek Toplama ve Kromozomal Ploidi Analizi

Burada, hava-sıvı arayüzünde primer insan nazal epitel (HNE) hücrelerinin izolasyonu, amplifikasyonu ve farklılaşması ve güçlendirilmiş HNE'nin başarılı bir şekilde dondurulmasına ve daha sonra çözülmesine izin veren bir biyobankacılık protokolü açıklanmaktadır. Protokol, farklılaşmış HNE hücrelerinin elektrofizyolojik özelliklerini ve farklı modülatör tedavileri üzerine CFTR ile ilişkili klorür sekresyon düzeltmesini analiz eder.

Primer İnsan Burun Epitel Hücreleri: Hassas Tıp Bağlamında Biyobankacılık

Bu çalışma, insan kök hücresinden türetilmiş retina pigment epitel hücrelerinin etkili bir şekilde dondurularak saklanması için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır.

İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Retina Pigment Epitel Hücrelerinin Optimal Aşamada Dondurularak Saklanması

Bu çalışma, primer insan meme epitel hücrelerini (HMEC'ler) küçük miktarlarda meme dokusundan verimli bir şekilde izole etmek ve büyütmek için daha kolay, zaman kazandıran ve ekonomik bir protokol bildirmektedir. Bu protokol, hem laboratuvar hem de klinik uygulamalar için birincil HMEC'lerin hızlı bir şekilde üretilmesi için uygundur.

Primer İnsan Meme Epitel Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü

Bu protokol, fare yumurtalığından preantral folikülleri kapsüllemek ve kültürlemek için tiramin bağlantılı bir hyaluronan hidrojel kullanan yeni bir üç boyutlu (3 D) kültür modelini açıklar. Ayrıca vitrifikasyon yoluyla yumurtalık folikülü kriyoprezervasyonuna yönelik iki yaklaşımı da detaylandırıyoruz.

Üç Boyutlu Folikül Kültürü için Yeni Bir Hyaluronan Hidrojelin Uygulanması ve Fare Yumurtalık Folikülü Kriyoprezervasyonu için Metodoloji

Öğrenin, hayvansal ürün içermeyen tripsin enzimi çözeltisi kullanarak insan amniyon epitel hücrelerini izole etme ve kültürleme yöntemini. Bu teknik klinik uygulamalar için cGMP standartlarına uygundur.

İzolasyon, Kriyoprezervasyon ve Kültür Klinik Uygulamaları İnsan Amniyon Epitel Hücreleri

Daha fazla video keşfet