DOI: 10.3791/52095-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
MicroRNA'lar (miRNA'lar), yaygın olarak korunan bir düzenleyici molekül sınıfıdır. Burada, iki güçlü ligasyon adımına ve ardından yüksek verimli dizilemeye dayanan bir miRNA klonlama yöntemini açıklıyoruz. Yöntemimiz, miRNA'ların genom çapında doğru bir şekilde kantitasyonuna izin verir.
Bu prosedürün genel amacı, yüksek verimli dizileme için mikroRNA'ları tarafsız bir şekilde hazırlamaktır. Bu, önce mikro RNA'nın üç asal ucuna bağlanma için yetkin olan DNA oligonükleotidlerinin hazırlanması veya satın alınmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, üç asal DNA oligonükleotidini mikro RNA'nın üç asal ucuna bağlamaktır.
Daha sonra, ligasyon ürünü jel saflaştırılır ve beş asal RNA oligonükleotid bağlayıcısı, mikro RNA'nın beş asal ucuna bağlanır. Son adım, hibrit molekülleri CDNA'ya dönüştürmek ve daha sonra CDNA'yı polimeraz zincir reaksiyonu ile amplifiye etmektir. Sonuç olarak, mikro RNA klonlaması ve yüksek verimli dizileme, mikroRNA'ların transkriptom geniş profilini bireysel nükleotid çözünürlüğünde kantitatif bir şekilde göstermek için kullanılır.
07:27
Related Videos
21.1K Views
10:28
Related Videos
33.9K Views
11:06
Related Videos
6.5K Views
09:29
Related Videos
7.9K Views
08:49
Related Videos
8.2K Views
08:37
Related Videos
5.9K Views
14:41
Related Videos
11.1K Views
05:12
Related Videos
1.4K Views
09:06
Related Videos
430 Views
08:55
Related Videos
18.9K Views
