Name: Kerevit ve yüzgeç Sistemi: Sinir Kordon ve Motorlu Pattern Extracellular Recordings ve Diseksiyon için Pratik Kılavuzu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 45 s
Description: Öğrenin kerevit karın sinir kordonu diseksiyonu ve yüzgeç motor nöronlarından ekstraselüler kayıt tekniklerini. Bu yöntem, kurgusal lokomosyon ve motor kontrol çalışmaları için sinirbilim araştırmalarına temel oluşturur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz bazı rakamlar ile yardımcı olmak için Jos Burgert teşekkür ederiz. Biz Ingo Selbach (ve grubu &quot;Edelkrebsprojekt NRW&quot;) deney hayvanları ile laboratuvar tedarik çabalarıyla minnettarız. Biz yazının ilk sürümlerini kontrol Anna C. Schneider teşekkür ederim. Bu araştırma Emmy Noether DFG hibe SM 206 / 3-1 ve kadın öğretim üyeleri için Köln Üniversitesi başlangıç ​​hibe ile desteklenmiştir.

Bu diseksiyon prosedürü Avrupa Toplulukları Konseyi 22 Direktifi nd Eylül 2010'da (2010/63 / AB) ile uyumludur. 1. Hazırlık <ol><li> Boyutu ≥8 cm her iki cinsten kerevit, Pacifastacus leniusculus (Dana), edinin. Hayvanlar hayati ve karın ve karın uzuvlar sağlam olduğundan emin olun. </li><li> Karapaksla incelemek için özen ve bu manikür sert ve sert olduğunu. Ön ve postmolt hayvanlar yumuşak karapaksla var çünkü birçok parametre değiştirmek deri değiştirme işlemi sırasında deneyler için uygun değildir (örneğin, lokomotor aktivite azalma). </li><li> , Diseksiyon sırasında kullanılan tüm alet ve malzemeleri monte iğneleme ve sinir kordonu desheathing Şekil 2'de gösterilen ve sağlanan takviyeleri listelenen. </li></ol><img alt="Biyolojik numune analizi için cerrahi aletlerle diseksiyon mikroskobu kurulumu; Işık kaynağı içerir." src="/files/ftp_upload/52109/52109fig2highres.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 2,"> Şekil 2: (1) buz dolu kova büyük; (2) kerevit tuzlu su; (3) serum dağıtıcı; (4) diseksiyonu mikroskop; (5) diseksiyonu çanak; (6) kuvvetli makas; (7) forseps (8) yaylı makas; Açık sylgard ile kaplı (9) Petri kabı; (10) sabitleme pimleri; (11) Soğuk lamba kaynağı. 2. Brüt Diseksiyon <ol><li> 20 dakika - 15 buz üzerinde hayvan anestezisi. Bir kan kaybı aşamasını kapsamaktadır ve numune prosedürü sırasında kerevit tuzlu su ile durulanır düzenli gerekiyor çünkü lavabonun yanında bir laboratuvar tezgah brüt diseksiyon ilk bölümünü yürütmek. </li><li> Hayvan ventral yüzü yukarı tutun ve göğüs (Şekil 3-1) yakın üslerine hem pençeleri kesmek için güçlü makas kullanın. Sol ve sağ uropod (Şekil 3-2) sökün. </li><li> Siyah sylgard ile kaplı diseksiyon çanak hayvan ventral tarafı yukarı yerleştirin. Elevatelson (Şekil 4A) de karın altında buz ekleyerek ve pin tarafından te Cephalothoraksın. </li><li> 60 ml soğutulmuş kerevit tuzlu ~ ile tuzlu dağıtıcı doldurun. Kıskaç ağzının (Şekil 4B) ile, soğuk tuz ile kerevit serpmek. Aşırı tuzlu uropods de kesikler yoluyla tahliye olacak. Eksanginasyonunun sırasında buz ile kerevit Kapak </li><li> Sadece güçlü makas (Şekil 5A) kullanarak hayvanın gözlerine posterior kesilmiş bir tek enine ile hayvan başını kesmek. Şekil 5B belirtildiği gibi baz eklemlerde yakınındaki bütün yürüyen ayakları çıkarın. </li><li> Cephalothoraksın geri kalanından son göğüs kesimleri ile karın ayırın. İkinci yürüme bacak ağzına makas ucu takmadan ve karşı tarafa keserek ikinci yürüyüş bacaklar düzeyinde (göğüs segmenti 3) bir ilk kesim olun. (Şekil 6A-1). </li><li> T ile her iki taraf için bu ilk kesim uzatınO (Şekil 6A-2) cephalothoraks. </li><li> Iç organların bazı görünür hale getirmek için açık hayvan çevirin. Numunenin ön kısmına belirgin sindirim bezi (Şekil 6B-3) itin ve karın boşluğundan üreme organları kaldırmak için forseps kullanabilir. </li><li> Cephalothoraksın (Şekil 6C) ön kısmını çıkarın. Kalan toraks (Şekil 6D-4) her iki tarafta, solungaçları kapağı karapaksla yan kısımlarını kaldırmak için yan keser kullanın. Solungaçları çıkarın ve soğuk tuzlu su ile durulayın örnek. </li><li> Şekil 6E-5'te gösterildiği gibi, sternum levhanın tüm uzunluğu boyunca bir kesim ile diseksiyon devam edin. Pleuron ve swimmerets (Şekil 6E kırmızı işaretler) arasındaki maksimal yanal konumlarda bu kesim olun. Aynı kesim ile diğer tarafta devam edin. Soğuk tuzlu su ile örnek durulayın. </li><li> Bir dissectio altında kalan diseksiyonu yürütmekn mikroskop. Siyah sylgard ile kaplı ve numune kapsar şekilde kerevit tuzlu su ile dolu diseksiyon çanak kerevit karın ventral tarafı yukarı yerleştirin. Not: Aşağıdaki adımlar (2,12-4,8) sağ elini deneyci için geçerli yönlü talimatları içerir. Aşağıdaki adımları (2,12-6,8) o, soğuk tuzlu su ile, düzenli aralıklarla her 20-30 dakikada bir kerevit tuzlu yerine sağlıklı sinir sistemi tutulması önemlidir. </li><li> Posterior telson de ve öne karapaksla kalıntıları böcek pimleri ile örnek Fix. Sola telzon noktaları ve tablo kenarına paralel olacak şekilde örneği yerleştirin. </li><li> Bir yürüyüş bacak açıklığı (Şekil 7A) ile yakala ve numune açık (Şekil 7B beyaz ok) çekmek için sol elinde kaba forseps kullanın. Onların ventral büyük iki dorsal fleksör kas ipliklerini (Şekil 7B-1 ve C-1) belirlenmesi ve kesimŞekil 7B'de gösterildiği gibi, baz. </li><li> Dorsal (kalp) iner sternum arter (Şekil 7C-2), tanımlama ventral, 4. torakal segmentte. Ventral arter oluşturan, sinir kordonu altında projeler önce bu arter, sağ sinir kablosu (Şekil 7C-3) Yukarıdaki yatıyor. </li><li> Sternum arter transect. Şekil 7C'de gösterildiği gibi, makas bir bıçak kullanarak, ilk arteri kaldırın ve ventral bulunan sinir kablosu görünür olduğunda sadece kesti. </li><li> (Sağ tarafına) öne dorsal fleksör kasları Fix. Onlar vizyon bloke olmayacak şekilde bu pimleri ile maksimum gergin pozisyonda yapılmalı ve numune gergin kalır. Dorsal kas teller (Şekil 8-1), ilgili sinirler ilk karın gangliyonları, A1 ve A2, sabit zaman N1, N2, N3 ve görünür (Şekil 8) vardır. </li><li> Spec kapmak için sol elinde forseps kullanınYürüme ayaklarından biri açılışında imen. Aşağıdaki diseksiyon boyunca adımlar açık örneği tutmak için yavaşça çekin. </li><li> Sinir kablosu en uzak konumda sinirleri N3 transect. (Şekil 8-3). </li><li> Şekil 8-4 gösterildiği gibi ventral apodeme yakın fleksör kasları kesin. Sinir kablosu veya sinirler N2 zarar vermemeye özen gösterin. </li><li> Adımları 2.18 ve sinirler N3 için 2,19 ve A5 kalan karın ganglion A2 fleksör kasları tekrarlayın. </li><li> Son karın ganglion anda, A6, ventral apodeme dorsal fleksör kasları kesmek ve örnek olarak Şekil 9'da gösterildiği bakmak gerekir. </li><li> A6 (Şekil 9-1) sinirlere sternal plaka posterior kesin ve ventral bölümünü (Şekil 9-2) tutun. Fleksör kaslar (Şekil 9-3) ile dorsal kısmını atın. Yürüme bacak açıklıkları yoluyla pimleri ile öne sternum plaka Fix,ve posteriora A6. </li></ol> 3. İnce Diseksiyon <ol><li> Uzakta yönlendirilmiş ön kısmı ve tablolar 'kenarına doğru arka kısmı ile mikroskop altında örnek yerleştirin. </li><li> Sefalotorasik göğsüne en ön kısımlarını çıkarmak için Şekil 10A'da gösterildiği gibi, forseps kullanın. NOT: Torasik ganglionlar ve ilişkili sinirler kısmen bacak kas ve sefalotorasik göğsüne kapsamındadır. sefalotorasik sterna birbirinden ve ventral sinir kablosu bulunduğu orta boşluğu yürüme bacak yanal olarak yer alan boşluklar ayıran bir iskelet oluşturur. </li><li> Kalan exoskeletal Şekil 10B belirtildiği gibi yapıların -1 ve B2 arasındaki kasları kesin. Kapmak ve ventral sinir kordonu (Şekil 10C) ön ucunu kaldırmak için forseps kullanın. NOT: sinir kordonu sürecinde zarar görür, böylece NERV toplayıp önlemeke kablosu birden çok kez. </li><li> Sinir kablosunu (Şekil 10C-3) kaldırırken yanal göğüs sinirleri kesin. Çivileme için uygun uzunlukta bu sinirleri tutun. Forseps ile tutuklanmıştı ganglionlar, zincirinin sıkılmış kısmını çıkarın, (Şekil 10C-4) T4 tüm doku anterior uzak keserek. </li><li> Sola ön kısmı ile örnek yerleştirin ve A1 odaklanmak. Uygun uzunlukta (maks. 1 cm) onları bağlantılarını için de A1 sinirler N1 N2 ve kesin. </li><li> A2 odaklanın ve sinirleri N1, N2, ve bu segmentin N3 (Şekil 11) tespit. Karın ganglion A2-A5 sinirleri N1 her segmentin (Şekil 11A-1) iki sternum cuticular infoldings arasında ikamet ve kas ile kaplıdır. Posterior sternum cuticular içe katlanması boyunca bir kesim olun. Karın yan kenarının başlayın ve Şekil 11A gösterildiği gibi orta hat doğru devam edin. </li><li> Hedef N1 hala koy isedoku ile kırmızı kas demeti kesen, Şekil 11B (kırmızı ok) gösterildiği, ancak bu sefer ön sternum cuticular infoldings ve sinir N1 hem (Şekil 11B-2). </li><li> Mümkün (Şekil 11C-3) gibi distalde sinir N1 kesin. Sinir N1 tamamen görünür ve anterior ve posterior dalı (Şekil 11C) tespit edilebilir. </li><li> Taraf sinir N1 geçin ve ilk ganglion (Şekil 11D) yakınında, medial başlayan, arka sternum cuticular içe katlanması boyunca kasları kesti. Sinir hala dokusu ile örtülüdür ise, kas demeti kesen, ancak bu sefer ön sternum cuticular infoldings ve sinir N1 hem benzer 11B-2 Şekil. Kadar distalde mümkün olduğunca sinir N1 kesin. </li><li> Uygun uzunlukta (yaklaşık. 0.5 cm) bağlantılarını için bu ganglion sinirler N2 kesin. </li><li> Tekrar A3-A5 sinirler için 3,7-3,11 adımları. </li><li> Ner Cutolarak distalde mümkün (Şekil 12A) olarak ganglion A6 ves. Bu ganglion kaldırın ve sternum plaka ganglionlar zincirini izole başlamak için A6 birden sinirleri kapmak için forseps kullanın. </li><li> Sinir kablosu kaldırırken Şekil 12B (beyaz ok) gösterildiği gibi, ön yönde yavaşça çekin. Bireysel ganglion kaldırılır gibi, sinir kablosu (Şekil 12C), ventral tarafına tutturulabilir, ventral arter çıkarın. Sinir kordonu tamamen izole olduğu kadar bu (nazikçe) kesilmiş çekin dizisi devam edin. </li><li> Açık sylgard ile kaplı ve kerevit tuzlu (Şekil 12D) ile dolu bir Petri kabı ganglionlar izole zincirini aktarın. </li></ol> 4. Petri Dish içine Sinir Kablosu İğneleme NOT: Sinir kablosunu pin (takviyeleri bakınız) paslanmaz çelik tel kesilmiş küçük işaretçilerine kullanın. Forseps ile biten sadece sinir dokunun ve Squeez yokconnectives veya ganglionlar e. <ol><li> Yumuşak streç uygularken, düz bir çizgi olarak ganglion zincirini Pin. </li><li> Yukarı bakacak şekilde sırt tarafında ile Petri kabındaki sinir kablosunu (Şekil 13, siyah çizgi) düzenleyin. ganglionlar ventral tarafı kendi konveksite tarafından tespit edilebilir; sırt tarafı düz. Kenarlarına göğüs sinirleri Pin. Uzunlamasına ekseni boyunca sinir kablosu germe, A6 sinirler ile devam edin. </li><li> Sinir kablosu için 90 ° açıyla A1 sinirleri dışarı Pin. </li><li> A2 geçin ve sinir kablosu (Şekil 1A) 35-45 ° göreli bir açıyla sinirler N2 pin. </li><li> . Şekil 14'de gösterildiği gibi çivileme önce anterior ve posterior dalları sinirleri N1 ayırın sinir N1 arka dalı forseps bir çift ön ve diğer pick up ince forseps iki çift kullanın. Sadece en uzak ucunu almak için özensinir dallarının s. Şimdi dikkatle onları ayrı çekin. </li><li> Sinir kablosu (Şekil 1A) bir 90 ° açıyla sinir N1 ön dalı Pin. Ön N1 şube ve sinir N2 arasındaki sinir N1 posterior dalı Pin. </li><li> Ganglionlar A3-A5 sinirler için adımlar 4,4-4,6 tekrarlayın. Boyuna sinir kordonu streç o yanı sıra çapraz yön sabitleme yaparken. </li></ol> 5. gangliyonlar Desheathing <ol><li> Deneycinin elleri hep sallayarak önlemek için kararlı bir düzlem üzerinde dinlenirken böyle bir şekilde hazırlanmasını yerleştirin. Desheath için ganglionlar alttan sinir kablosunu aydınlatır. </li><li> A5 herhangi karın ganglion A1 odaklanın. Ganglion ve sinirler N2 ve N3 (Şekil 15A kırmızı ok) arasında posterior, ganglion kılıf içinden küçük bir yan kesim yapmak için ince yaylı makas kullanın. </li><li> Çok f kullanarak ganglion kılıfı Pick upŞekil 15A-1 'de belirtildiği gibi ine forseps ve bağlaçlar, yukarıda kılıf boyunca enine kesim. Sıkmak veya makas ile sinir kablosunu kesmek için özen gösterin. </li><li> Hala tutarak ve forseps ganglion (Şekil 15B-2 ve -3) lateral sınırları boyunca kesmek devam ile ganglion kılıfı kaldırma. Kılıfını çıkarın. Alternatif olarak sabit, ancak sinir kablosu sıkışmayacak şekilde eklemlerin her iki tarafına da pin. </li><li> Tekrar A5 tüm karın ganglion A1 için 5,2-5,4 adımları. </li><li> Göğüs ganglionlar ve benzer bir şekilde ganglion A6 Desheathe. Ganglion A6 başlangıç ​​anterior ve posterior desheathe yönde devam etmek için. Ganglion zincirinin arka ucuna A6 ganglion kılıfını Pin. </li></ol> Motor Nöronlar 6. Ekstraselüler Kayıtlar <ol><li> I gösterilen hücre dışı kayıtlar için kullanılan tüm alet ve malzemeleri birleştirinn Şekil 16B ve takviyeleri sıraladı. Kayıt kurulumu genel bir bakış Şekil 16A gösterilmiştir. Amplifikatör kayıttan önce en az 30 dakika boyunca ısınmak böylece, bu deney (Şekil 16C) kullanılan tüm elektronik ekipman başlatın. Bilgisayarı açın ve kayıt yazılımı başlatın. </li><li> Mikroskop masaya ganglionlar zincirini yerleştirin ve aşağıdan aydınlatır. Ganglionlar (Şekil 17A ve B) hedef sinir ve yakın bir konumda referans elektrot yakın, ancak yan sylgard içine kayıt elektrodu yerleştirin. Kayıt elektrot (Şekil 17C) etrafında hedef sinir bükün. </li><li> Elektrot ve sinir arasındaki teması sağlamak ve yan (F igure 17D) onu pin, biraz sinir gerin. Modelleme kil kullanılarak mikroskop masaya elektrot kablolarını Fix, böylece istenilen konumda kalmak. </li><li> Kullanınvazelin ve (yuvarlatılmış ucu olan) bir 20 gauge iğne ile doldurulmuş şırınga (Şekil 17E-3) yıkama çözeltisine hedef sinir izole etmek. İlk kayıt elektrot etrafında sylgard bazı vazelin hafifçe sürün. Sonuç bir kayıt elektrotu (Şekil 17E-4) bulunduğu kısımda Sylgard kapsayan vazelin katmanıdır. Doğrudan bu katmanda hava kabarcıkları sinir üzerine kurulamak ve önlemek için dikkat edin. </li><li> Tuzlu (Şekil 17F) yüzey seviyesine kadar her taraftan vazelin ile kayıt elektrodu Seal. </li><li> Olan etkinlik izlenmelidir tüm hedef sinirler için bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Kaydetmeye başlayın. Sürekli ya da boşluk serbest edinim modu ve 5 kHz örnekleme hızı kullanın. Aşağıdaki parametrelere dışı amplifikatör ayarlayın; (sinyalini 1.000 kez güçlendirir kazanım yazılım ayarlarında bu büyütme parametresini dahil özen) 1.000 kazanmak bir2.000 Hz (yüksek kesim) 300 Hz (düşük kesim) ve da band geçiren filtre aralığı. </li></ol>

<ol><li>Hughes, G. M., Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Co-Ordination+of+Swimmeret+Movements+in+the+Crayfish%2C+Procambarus-Clarkii+%28Girard%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">The Co-Ordination of Swimmeret Movements in the Crayfish, Procambarus-Clarkii (Girard).</a> J Exp Biol. 37 (4), 657-670 (1960).</li>
<li>Mulloney, B., Smarandache, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fifty+Years+of+CPGs%3A+Two+Neuroethological+Papers+that+Shaped+the+Course+of+Neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fifty Years of CPGs: Two Neuroethological Papers that Shaped the Course of Neuroscience.</a> Front Behav Neurosci. 4, 45(2010).</li>
<li>Murchison, D., Chrachri, A., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Separate+Local+Pattern-Generating+Circuit+Controls+the+Movements+of+Each+Swimmeret+in+Crayfish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">A Separate Local Pattern-Generating Circuit Controls the Movements of Each Swimmeret in Crayfish.</a> J Neurophys. 70 (6), 2620-2631 (1993).</li>
<li>Mulloney, B., Hall, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+organization+of+crayfish+abdominal+ganglia.+III.+Swimmeret+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Functional organization of crayfish abdominal ganglia. III. Swimmeret motor neurons.</a> J Comp Neurol. 419 (2), 233-243 (2000).</li>
<li>Davis, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lobster+Righting+Responses+and+Their+Neural+Control%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+R+Soc+Ser+B-Bio%22%5BJournal%5D)">Lobster Righting Responses and Their Neural Control.</a> Proc R Soc Ser B-Bio. 170 (1021), 435-456 (1968).</li>
<li>Mulloney, B., Smarandache-Wellmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurobiology+of+the+crustacean+swimmeret+system%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Neurobiology of the crustacean swimmeret system.</a> Prog Neurobiol. 96 (2), 242-267 (2012).</li>
<li>Huxley, T. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHuxley%2C+TH+%22The+crayfish%3A+An+introduction+to+the+study+of+zoology%22">The crayfish: An introduction to the study of zoology</a>. , MIT Press. Cambridge, MA. (1980).</li>
<li>Smarandache-Wellmann, C., Weller, C., Wright, T. M., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Five+types+of+nonspiking+interneurons+in+local+pattern-generating+circuits+of+the+crayfish+swimmeret+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Five types of nonspiking interneurons in local pattern-generating circuits of the crayfish swimmeret system.</a> J Neurophys. 110 (2), 344-357 (2013).</li>
<li>Skinner, F. K., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intersegmental+coordination+of+limb+movements+during+locomotion%3A+mathematical+models+predict+circuits+that+drive+swimmeret+beating%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Intersegmental coordination of limb movements during locomotion: mathematical models predict circuits that drive swimmeret beating.</a> J Neurosci. 18 (10), 3831-3842 (1998).</li>
<li>Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((During+fictive+locomotion%2C+graded+synaptic+currents+drive+bursts+of+impulses+in+swimmeret+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">During fictive locomotion, graded synaptic currents drive bursts of impulses in swimmeret motor neurons.</a> J Neurosci. 23 (13), 5953-5962 (2003).</li>
<li>Smarandache-Wellmann, C., Grätsch, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+coordination+in+distributed+neural+circuits%3A+Encoding+coordinating+information%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of coordination in distributed neural circuits: Encoding coordinating information.</a> J Neurosci. 34 (16), 5627-5639 (2014).</li>
<li>Mulloney, B., Hall, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+commissural+interneurons+integrate+information+from+intersegmental+coordinating+interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Local commissural interneurons integrate information from intersegmental coordinating interneurons.</a> J Comp Neurol. 466 (3), 366-376 (2003).</li>
<li>Mulloney, B., Harness, P. I., Hall, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursts+of+information%3A+Coordinating+interneurons+encode+multiple+parameters+of+a+periodic+motor+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Bursts of information: Coordinating interneurons encode multiple parameters of a periodic motor pattern.</a> J Neurophys. 95 (2), 850-861 (2006).</li>
<li>Smarandache, C., Hall, W. M., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordination+of+Rhythmic+Motor+Activity+by+Gradients+of+Synaptic+Strength+in+a+Neural+Circuit+That+Couples+Modular+Neural+Oscillators%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Coordination of Rhythmic Motor Activity by Gradients of Synaptic Strength in a Neural Circuit That Couples Modular Neural Oscillators.</a> J Neurosci. 29 (29), 9351-9360 (2009).</li>
<li>Smarandache-Wellmann, C., Weller, C., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Coordination+in+Distributed+Neural+Circuits%3A+Decoding+and+Integration+of+Coordinating+Information%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Coordination in Distributed Neural Circuits: Decoding and Integration of Coordinating Information.</a> J Neurosci. 34 (3), 793-803 (2014).</li>
<li>Chrachri, A., Neil, D., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-Dependent+Responses+of+2+Motor+Systems+in+the+Crayfish%2C+Pacifastacus+leniusculus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+A%22%5BJournal%5D)">State-Dependent Responses of 2 Motor Systems in the Crayfish, Pacifastacus leniusculus.</a> J Comp Physiol A. 175 (3), 371-380 (1994).</li>
<li>Chrachri, A., Neil, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+and+Synchronization+between+2+Abdominal+Motor+Systems+in+Crayfish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Interaction and Synchronization between 2 Abdominal Motor Systems in Crayfish.</a> J Neurophys. 69 (5), 1373-1383 (1993).</li>
<li>Skinner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Structure+of+the+4th+Abdominal-Ganglion+of+the+Crayfish%2C+Procambarus-Clarki+%28Girard%29+II.+Synaptic+Neuropils%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The Structure of the 4th Abdominal-Ganglion of the Crayfish, Procambarus-Clarki (Girard) II. Synaptic Neuropils.</a> J Comp Neurol. 234 (2), 182-191 (1985).</li>
<li>Skinner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Structure+of+the+4th+Abdominal-Ganglion+of+the+Crayfish%2C+Procambarus-Clarki+%28Girard%29+I.+Tracts+in+the+Ganglionic+Core%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The Structure of the 4th Abdominal-Ganglion of the Crayfish, Procambarus-Clarki (Girard) I. Tracts in the Ganglionic Core.</a> J Comp Neurol. 234 (2), 168-181 (1985).</li>
<li>Mulloney, B., Tschuluun, N., Hall, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Architectonics+of+crayfish+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Techniq%22%5BJournal%5D)">Architectonics of crayfish ganglia.</a> Microsc Res Techniq. 60 (3), 253-265 (2003).</li>
<li>Braun, G., Mulloney, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+modulation+of+the+swimmeret+motor+system+in+crayfish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Cholinergic modulation of the swimmeret motor system in crayfish.</a> J Neurophys. 70 (6), 2391-2398 (1993).</li>
<li>Davis, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motoneuron+Morphology+and+Synaptic+Contacts+-+Determination+by+Intracellular+Dye+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motoneuron Morphology and Synaptic Contacts - Determination by Intracellular Dye Injection.</a> Science. 168 (3937), 1358-1360 (1970).</li>
<li>Altman, J. S., Tyrer, N. M. Filling Selected Neurons with Cobalt through Cut Axons. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAltman%2C+JS+%22Neuroanatomical+Techniques%22">Neuroanatomical Techniques</a>. Strausfeld, N. J., Miller, T. A. , Springer. New York, NY. 373-402 (1980).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

<html> Kerevit anatomisi ve karın ganglionlar önce 5, 18, ​​19, 20 tarif edilmiştir ve önemli sinirlerin kesilmesi önlemek için diseksiyon önce onlarla aşina olmak için tavsiye edilir. Bu izole sinir kablosu bozulmasını önlemek için 23 ° C&#39;nin altındaki sıcaklıklarda hazırlık tutmak için kritik öneme sahiptir. Bu yıkama çözeltisine, soğuk kerevit tuzlu su ile 20-30 dk değiştirilmesiyle kolayca elde edilebilir. Bu koşullar altında, gangliyonların zincir kadar 12 saat boyunca ele...

kerevit swimmerets duruş kontrolünde bir işlevi yerine ve hayvanlar ileri yüzmek ritmik zaman yendi, kendi Burrows veya kadın kendi yumurta 5, 6 havalandırır havalandırın. Sinyal kerevit, Pacifastacus leniusculus ve swimmerets, beşte ikinci gelen çiftler meydana Karın 7 her tarafında bir uzuv ile karın segment. merkezi sinir sistemi hayvanda yanı sıra izole edilmiş sinir kablosu hazırlanmasında yüzgeç hareketini tahrik kendi ritmik motorlu kalıbında üretir. Duyu geri bildirim veya azalan girişi mevcut olduğunda üretilen ritmik motorlu model kurgusal lokomosyon 1, 2 denir. Yüzgeç sisteminde bu motorun model sağlam hayvan ölçülen swimmerets aktivitesi herhangi parametrede farklı değildir. Her bir yüzgeç hareketi bulunan ve bir c sınırlı bir mikro devre ile tahrik edilirhemiganglion 1 orresponding -. 3 Her mikrodevre beş tanımlanan olmayan çivileme internöronlardan içeren bir desen üreten çekirdek vardır. Onlar işlevsel olarak karakterize edilebilir ya Güç İnme önleyici (IPS) ya da Return İnme önleyici (IRS) 8. Kendi alternatif aktivite karşılıklı inhibisyonu 9 ile tahrik edilir ziyade bu IPS ve IRS internöron, endojen osilatörler değildir. Bu internöron doğrudan yüzgeç motor nöronları inhibe Çünkü, alternatif PS-RS hareketi 10 oluşturulur. Hareket ancak, sadece, aynı zamanda farklı bağımsız microcircuits koordinasyon aktivitesi üretilmesini gerektirir, ancak değildir. Yüzgeç sisteminde bu koordinasyon uzuvlar doğru zamanlarda aktif olmasını sağlar koordine mikro devre ile kurulur. Bu mikrodevreli, her segmentteki 11-15 belirlenmiş üç nöronlar tarafından inşa edilmiştir. Bu protokol, th sağlare ilk kez bir adım-adım diseksiyonu kılavuz ganglionlar (A6 T4, Şekil 1) zincirini izole etmek. Biz izole karın sinir kablosunu pin ve her ganglion desheathe nasıl gösterir. Bu izole edilmiş sinir sistemi hazırlanırken, yüzgeç hareketten sorumlu nöronlar elektrofizyolojik ve morfolojik deneylerinde kullanılmak üzere hazırdır. Bu protokolün ikinci bölümü yüzgeç motorlu modelinin temel özelliklerini gösterir. Bu hücre dışı kayıt için bir adım-adım kılavuzunu yüzgeç motor nöronların aktivitesini içerir. RS motor nöronların aksonları PS motor nöronların aksonları aynı sinirin posterior dalı ile (Şekil 1) proje ise, sinir N1 ön dalı ile proje 4. Bu nedenle onların faaliyet diferansiyel pim elektrotlar ile bu şubelerden kaydedilebilir. <img alt="Sinir dallarını vurgulayan anatomi çalışması için nöral yapı diyagramı ve etiketli çizim." fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/52109/52109fig1highres.jpg" width="200" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 1,"> Şekil 1: karın ganglion 6 (A6) ve T4 şematik diyagram göğüs ganglion 4 (T4) İzole sinir sistemi:. Torasik ganglion 4; T5: Torasik ganglion 5; A1, A2 ... A6 karın ganglion 1, karın ganglion 2 ... karın ganglion 6; N1: sinir N1; N2: sinir N2; N3: sinir N3; PS: Güç-inme; RS: dönüş inme. Yön kısaltmalar: A = ön; P = arka. Bu diseksiyon prosedürü ve gösterdi elektrofizyolojik tekniği lisans öğrencileri için uygundur ve fizyoloji öğrenci uygulamalı dersler tamamlayabilir. gangliyonların izole zincir sinir sistemi işlevini, koordinasyon veya yüzgeç microcircuits 6 modülasyonunu olarak hareket yeteneği 16, 17 adaptif davranış nöronal kontrol çalışması için deneyler bir dizi kullanılmıştır. kerevit yüzgeç sistemi böylece çok büyük bir miktarını temin ilginç öğretim veya tTüm kerevit ve kurgusal motorlu modelinin dışı kayıt ventral sinir kordonu diseksiyonu ile başlayan fırsatlar yağıyor.

<table><tbody><tr><td>4 kanallı hücre dışı amplifikatör: MA 102&nbsp;</td><td>Amplifikatör</td><td>Elektroniklabor, Zoologie, Universit&auml; t zu K&ouml; ln, Almanya</td><td></td></tr><tr><td>hava tablası</td><td></td><td>Teknik Üretim Şirketi (TMC) AMETEK Ultra Precision Technologies'in bir birimi, Peabody, MA, ABD</td><td>63-534</td></tr><tr><td>Axon Digidata 1440A</td><td>Sayısallaştırıcı</td><td>Axon Instruments, Moleküler Cihaz Tasarımı, Union City, CA</td><td>DD1440A</td></tr><tr><td>büyük kova&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Clampex & Clampfit</td><td>pClamp 10, kayıt ve analiz yazılımı</td><td>Moleküler Cihazlar Tasarımı, Union City, CA</td><td>pClamps 10 Esnek</td></tr><tr>ışık kılavuzlu standart<td>soğuk lamba kaynağı</td><td>(fiber optik demet)&nbsp;</td><td>Euromex mikroskoplar hollanda, Arnhem, BD</td><td>LE.5211 & LE.5235</td></tr><tr><td>bilgisayar ve monitör</td>, sıvı atıklar için <td>kayıt yazılımı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>kabı ve pipeti</td> ile donatılmıştır.<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>kerevit tuzlu&nbsp;</td><td>içerir (mM cinsinden): 5.4 KCl, 2.6 MgCl2, 13.5 CaCl2 ve 195 NaCl, 10mM Tris bazı ve 4.7mM maleik asit ile tamponlanmış; 3 saat havalandırılır. 7.4 pH değerine ayarlayın.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>dekstran, Teksas Kırmızısı (3000MW, lizin sabitlenebilir)</td> <td>floresan boya, lizin sabitlenebilir</td><td>Life Technologies GmbH, Darmstadt, Almanya</td><td>D3328</td></tr><tr><td>diseksiyon kabı ve nbsp;</td><td>(U x G x Y) 15x7x5 cm; siyah silikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>faraday kafesi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>sabitleme pimleri</td><td></td><td></td><td></td></tr> ile astarlı <tr><td>forseps (biyoloji, Dumont #5)</td><td>Forseps: Biyoloji, uç 0,05 x 0,02 mm, uzunluk 11cm, INOX</td><td>Fine Science Tools (FST), Almanya</td><td>11252-20</td></tr><tr><td>forseps (biyoloji, Dumont #55)</td><td>Forseps: Biyoloji, uç 0,05 x 0,02 mm, uzunluk 11cm, INOX</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST), Almanya</td><td>11255-20</td></tr><tr><td>forseps (elektronik, Dumont #5)</td><td>Forseps: Standart, uç 0,1 x 0,06 mm, uzunluk 11 cm, INOX</td><td>Fine Science Tools (FST), Almanya</td><td>11251-20</td></tr><tr><td>hücre içi elektrot</td><td>Borosilikat cam kılcal damarlar (dış/iç çap: 1 mm/0,5 mm), filamentli</td><td>Sutter Instruments, Novato, CA</td><td>BF100-50-10</td></tr><tr><td>Leica S8 Apo StereoZoom</td><td>Diseksiyon Mikroskobu&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Yakınlaştırma 1x - 8x</td><td>Leica, Almanya</td><td>10446298</td></tr><tr><td>mikroskop masa</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>aynası</td>, <td>aşağıdan</td><td></td><td></td>hazırlık</tr><tr><td>modelleme kili</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Olympus SZ61</td><td>Diseksiyon Mikroskobu&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Yakınlaştırma 0.67x - 4.5x</td><td>Olympus, Almanya</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı&nbsp;</td><td>94 x 16 mm; şeffaf silikon ile kaplı</td><td>Greiner bio-one, Almanya</td><td>633180</td></tr><tr><td>halka makas</td><td>ThoughCut, kesici kenar: keskin/künt, düz: 13cm</td><td>Fine Science Tools (FST), Almanya</td><td>14054-13</td></tr><tr><td>yaylı makas veya alternatifi: Vannas yaylı makas</td><td>kesme kenarı: 8 mm, uç çapı: 0,2 mm, düz: 10 cm veya kesme kenarı 2,5 mm, uç çapı 0,075 mm, düz: 8 cm</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST), Almanya</td><td>15024-10 ve&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 15000-08</td></tr><tr><td>öğrenci Vannas&nbsp; yaylı makas veya alternatif:&nbsp; Moria Yaylı Makas</td><td>kesme kenarı: 5 mm, uç çapı: 0,35 mm, düz: 9 cm veya kesme kenarı: 5 mm, uç çapı 0,1 mm, düz: 8 cm</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST), Almanya</td><td>91500-09 veya&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 15396-00</td></tr><tr><td>Sylgard</td><td>184 Silikon Elastomer Baz ve Kürleme Maddesi; siyah sylgard için aktif karbon</td><td>ekleyin Dow Corning, Midland, MI, ABD</td><td></td></tr><tr><td>şırınga vazelin ile doldurulmuş ve yuvarlak uçlu</td><td></td><td></td><td></td> 20 gauche iğne ile donatılmıştır</tr></tbody></table>

kerevit ve yüzgeç sistemi: sinir kordon ve motorlu pattern extracellular recordings ve diseksiyon için pratik kılavuzu

The Swimmeret System of Crayfish: A Practical Guide for the Dissection of the Nerve Cord and Extracellular Recordings of the Motor Pattern

Burada kerevit karın sinir kordonu diseksiyonu göstermektedir. Hazırlık son iki göğüs gangliyonları (T4, T5) ve karın ganglionlar zincirini (A6 A1) içermektedir. Yüzgeç sistemi: ganglion Bu zincir pleopods (swimmerets) koordineli lokomosyon sürücüler santral sinir sistemi (MSS) kısmını kapsamaktadır. Bu kerevit her yüzgeç ritmik alternatif aktivite 1-3 üretir kendi bağımsız desen üreten çekirdek tarafından tahrik beş yılı aşkın bir süredir bilinmektedir. motor nöronlar, her yüzgeç ve kas anatomik ve fonksiyonel olarak farklı popülasyonlar 4 iki içermektedir innerve. Bir yüzgeç geri çekilmesi (güç inme, PS) sorumludur. Diğer yüzgeç protraksiyonuna (dönüş inme, RS) sürücüler. Yüzgeç sisteminin motor nöronlar kendiliğinden in vivo olarak kaydedilen model ile aynı olan bir hayali motor modelini üretmek mümkün </em&gt; 1. Bu raporun amacı, ritim üreten ağları ve öğrencilerin pratik laboratuar dersleri için bağımsız microcircuits koordinasyonu çalışmak için ilginç ve kullanışlı bir model sistemini tanıtmaktır. sağlanan protokol, ganglionlar izole zincirinin çivileme ganglionlar desheathing ve izole sinir sisteminden ekstraselüler swimmerets kurgusal motorlu desen kayıt, kerevit karın sinir kordonu diseksiyon için adım adım yönergeler içerir. Ayrıca, biz dendritler hücre kaydedilen yüzgeç nöronların aktivitesini izleyebilirsiniz. İşte biz de kısaca bu teknikleri tanımlamak ve bazı örnekler sunmak. Ayrıca, yüzgeç nöronların morfolojisi çeşitli boyama teknikleri kullanılarak değerlendirilebilir. Burada boya dolu nöronlar ve yüzgeç motor nöron havuzları Dolgularda (iyontoforez ile) hücre içi örnekler sunmak. Bizim laboratuvardaBiz hücresel düzeyde microcircuits arasındaki kurgusal lokomosyon, MSS aktivitesine duyusal geribildirim etkisi ve koordinasyon temel fonksiyonlarını incelemek için bu hazırlık kullanın.

RS ve PS, bir ganglion motor nöronların eşzamanlı dışı kayıtları ile, bu motor nöron havuzları alternatif etkinliği, kurgusal lokomosyon desen temsil (Şekil 18) izlenebilir. <img alt="Nöronal impuls analizi, RS, PS etiketli sinyalleri içeren diyagram; Deney düzeneği ve dalga şekilleri." src="/files/ftp_upload/52109/52109fig18highres.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 18"> Şekil 18: Bir ganglion ve diferansiyel pim elektrot yerleştirme şematik</...

Burada kerevit abdominal sinir kordonunun diseksiyonunu tarif ediyoruz. Ayrıca, yüzücü motor nöronlarından hayali hareketi kaydetmek için elektrofizyolojik bir teknik de gösteriyoruz.

Kerevit ve yüzgeç Sistemi: Sinir Kordon ve Motorlu Pattern Extracellular Recordings ve Diseksiyon için Pratik Kılavuzu

Here we demonstrate the dissection of the crayfish abdominal nerve cord. The preparation comprises the last two thoracic ganglia (T4, T5) and the chain of ...

Bu prosedürün genel amacı, elektrofizyolojik çalışmalarda kullanmak için abdominal sinir kordonunu kerevitten ayırmaktır. Bu, önce kerevitin uyuşturulmasıyla gerçekleştirilir. Daha sonra, kerevitin ventral plakasını izole etmek için brüt bir diseksiyon yapılır.Daha sonra merkezi sinir sistemini raik gangliyonlardan abdominal gangliyonlara tamamen izole etmek için ince bir diseksiyon yapılır. Altı. Son olarak, elektrofizyolojik deneyleri kolaylaştırmak için ganglion kılıfı tüm gangliyonlardan çıkarılır.Sonuçta, abdominal ganglion zinciri ekstra veya hücre içi kayıtlar için kullanılır. Merkezi örüntü üreteçlerinin koordinasyonunu incelemek veya tanımlanmış nöronların morfolojisini ve sinaptik bağlamını araştırmak. Bu yöntem, izole sinir sistemindeki kurgusal FLA kargaşasını kaydedebilmek veya abdominal gangliyonların veya belirli nöronların morfolojisini karakterize edebilmek için sinir ağı işlevi üzerinde uygulamalı deneyim sağlamak gibi sinirbilim alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Bu yöntem kerevitlerin yüzme oranı sistemi hakkında fikir verebilir. Kerevitlerde kuyruk çevirme davranışını yönlendiren nöronal bir ağ gibi diğer sistemlere de uygulanabilir: Kerevit ile çalışmak, Pacific Stacia, Linea, Guus. Bir hayvanı metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra, ventral tarafı yukarı kaldırın ve her iki pençeyi de göğüs kafesine yakın tabanlarından kesmek için güçlü bir makas kullanın.Ardından sol ve sağ euro bölmelerini çıkarın. Pençe açıklığından perfüze etmek için soğuk salin kullanmadan önce hayvanın ventral tarafı yukarı bakacak şekilde siyah sard ile kaplı bir diseksiyon kabına yerleştirin. Ardından, kerevit balığının gözlerinin hemen arkasında tek bir enine kesim yapmak için güçlü bir makas kullanın ve kafasını çıkarın.Ardından, karnı son torasik segmentlerle birlikte toraksın geri kalanından izole etmek için taban eklemlerinin yakınındaki tüm yürüme bacaklarını çıkarın. Makasın ucunu ikinci yürüme bacağının açıklığına sokun ve karşı tarafa kesin. Kesiği göğüs kafesinden her iki tarafa uzattıktan ve metin protokolünde anlatıldığı gibi bazı iç organları açığa çıkardıktan sonra, göğüs kafesinin ön kısmını çıkarın.Şimdi iç organları çıkarın ve hayvanı soğuk tuzlu suyla durulayın. Diseksiyona, sternal plakanın tüm uzunluğu boyunca lumon ve yüzücü sıçanlar arasında maksimum yanal pozisyonda bir kesi ile devam edin. Aynı kesimi diğer tarafta da yapın.Kerevit balığının karın tarafı ventral tarafı yukarı bakacak şekilde diseksiyon kabına yerleştirin. Numuneyi arkaya, tellson'a ve anterior olarak karabaz kalıntılarına sabitlemek için böcek pimleri kullanın. Çanağı, numuneyi kaplayacak şekilde kerevit tuzlu su ile doldurun.Yürüyen bir bacak açıklığından tutmak için sol elinizde kaba forseps kullanın ve numuneyi çekerek açın. Büyük iki dorsal fleksör kas zincirini tanımlayın. Onları sabitleyin ve ventral tabanlarını ve sternal arteri kesin.İlk abdominal gangliyonları A'yı ve ilişkili sinirleri N, bir, N, iki'yi ortaya çıkarın. Şimdi ikinci karın segmentine geçiyoruz. Ventral tabana yakın kas ipliklerinin temelini çıkarın.Abdominal ganglion A iki, ilişkili sinirler N bir, N iki ve N üç ile şimdi görülebilir. Sinir kordonundan en uzak pozisyonda N üç sinirini kesin. Abdominal gangliyonları olan sonraki üç abdominal segment için bu adımları tekrarlayın.Üçe beş. Abdominal gangliona ulaşırken, altı. Sternal plakayı altılı bir sinirin arkasına doğru kesin.Ventral kısmı tutun ve sabitleyin. Mikroskop altında tuzlu su ile doldurulmuş tabakta sırt tarafı yukarı. Sefalon torasik kıç tarafının en ön kısımlarını çıkarmak için forseps kullanın.Sonra kalan dış iskelet yapıları arasındaki kasları kesin. Ventral sinir kordonunun ön ucunu dikkatlice kaldırdıktan sonra, torasik sinirleri yanal olarak kesin. Bir'e odaklanın ve birin N ve N iki sinirlerini sabitlemek için en fazla bir santimetre uzunluğunda kesin.Ardından, A ikiye geçin ve bu segmentin N bir, N iki ve N üç sinirlerini tanımlayın. Abdominal gangliyonların birinde sinirler, iki ila beş. Her segmentteki kıvrımlarda iki sternal kütiküler arasında bulunur ve kas sistemi ile kaplıdır.Daha sonra karnın yan kenarından başlayarak, posterior sternal kütiküler kıvrım boyunca bir kesi yapın ve metin protokolüne göre N'yi ortaya çıkardıktan sonra orta hatta doğru ilerleyin. Gerekirse, siniri mümkün olduğunca distal olarak kesin. Karşı tarafa ilerleyin ve N sinirini ganglionun yakınındaki orta hattan izole etmeye başlayın, posterior sternal kütiküler sargı boyunca keserek lateral kenara doğru ilerleyin.Şimdi bu ganglionun iki sinirini iğnelemek için uygun bir uzunlukta kesin. Ardından abdominal gangliyonlar için gösterilen adımları tekrarlayın. Mümkün olduğunca distal olarak üç ila beş için bir iki.Ganglionun sinirlerini altı kesin. Ganglionu kaldırmak ve ganglion zincirini sternal plakadan izole etmeye başlamak için altılı birden fazla siniri tutmak için forseps kullanın. Sinir kordonunu tamamen izole ettikten sonra, ganglion zincirini şeffaf eşik koruması ile kaplı bir petri kabına aktarın ve hafif bir streç dokunuş uygularken paslanmaz çelik telden kesilmiş küçük pimler kullanarak tuzlu su ile doldurun.Ganglion zincirini, sinir kordonu sırt tarafı yukarı gelecek şekilde düz bir çizgide sabitleyin. Sadece son iki torasik gangliyonu tutun ve torasik sinirleri yana doğru sabitleyin. Birinin sinirlerini, sinir kordonuna göre 90 derecelik bir açıyla sabitleyin.Daha sonra ikiye ilerleyin ve sinirleri N iki, sinir kordonuna göre 35 ila 45 derecelik bir açıyla sabitleyin. N bir sinirler metin protokolüne göre ayrılıp sabitlendikten sonra, N sinirinin ön dalını sinir kordonuna 90 derecelik bir açıyla sabitleyin. Daha sonra N sinirinin arka dalını, bir ön N bir dal ile sinir N iki arasına sabitleyin.Tüm abdominal gangliyonların kılıfına çıkarılması gerektiğinden, ganglionun arkasındaki ganglion kılıfından ve N iki ve N üç sinirleri arasında küçük bir yanal kesi yapmak için ince yaylı makas kullanın. Bağın üzerindeki kılıf boyunca enlemesine kesin. Ardından, kılıfı çıkarmadan önce ganglionun yan sınırları boyunca kesmeye devam edin.Gerekirse, hücre dışı kayıtları gerçekleştirmek için kılıfı kaldırmak için ince forseps kullanın. Metin protokolünde listelenen aletlerin ve reaktiflerin kurulumunu takiben, ganglion zincirini mikroskop tablasına yerleştirin ve aşağıdan aydınlatın. Kayıt elektrodunu hedef sinire yakın sil korumasına ve referans elektrodu gangliyonlara yakın ancak lateral bir konuma yerleştirin.Ardından hedef siniri kaydın etrafında bükün. Siniri gerdikten ve sabitledikten sonra, hedef siniri banyo solüsyonundan izole etmek için vazelin ile doldurulmuş bir şırınga ve yuvarlak uçlu 20 gauge bir iğne kullanın. Aktivitesinin kaydedilmesi gereken tüm sinirler için bunu tekrarlayın.Son olarak, burada gösterildiği gibi kayda başlayın, ipsilateral PS iki ila PS beş motor nöronlarının hücre dışı PS aktivitesi, beşte bir PS patlaması ile başlar ve uyarma dalgası ön yönde yayılır. Ek olarak, her segmentte bir patlamanın başlangıcından bir sonraki patlamanın başlangıcına kadar ölçülen süre sabit kalır ve ritim periyotlarının ve patlamanın periyodu olarak tanımlanır. Süreler farklı hazırlıklar arasında değişebilir, ancak segmentler arasındaki faz gecikmesi, ritmin frekansından bağımsız olarak döngünün yaklaşık dörtte birinde sabit kalır.Bu koordinasyon modelleri en iyi burada görülen faz histogramlarında görülebilir. Burada keskin mikro elektrotlar kullanılarak, Ps.Motor nöronlarının dendritlerinden elde edilen hücre içi kayıtlar, aynı hemi ganglionunun tüm PS motor nöronlarının hücre dışı olarak kaydedilen aktivitesi ile bireysel nöronların enfaz salınımlarını gösterir. Hücre içi olarak kaydedilen nöronları tanımlamak için, hücreler keskin mikro elektrotlar ve iyontoforez kullanılarak doldurulabilir.Bu şekilde, iki di dolu PS motor nöronunun ventral sodası, N sinirinin tabanının arkasına yerleştirilmiştir. Birincil nörit anterior olarak çıkıntı yapar ve lateral nöro hap içinde dallanır. Akson, N bir sinirinin arka dalından kas sistemine uzanır.Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa 45 dakika ila bir saat arasında yapılabilir. Bu prosedürü denerken, sinir dokusunu sağlıklı tutmak için salini düzenli aralıklarla değiştirmeyi unutmamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, hücresel koordinasyon mekanizmasını analiz etmek, iyonik akımları ölçmek veya nöromodülatörlerin belirli hücrelerin ritmik aktivitesi üzerindeki etkisini incelemek gibi ek soruları yanıtlamak için motor nöronların veya nöronlar arası nöronların hücre içi kaydı gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir.

the-swimmeret-system-crayfish-practical-guide-for-dissection-nerve

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Serbestçe hayvanlar davranıyor sinirsel aktivite desen non-invaziv ölçümler, yüksek hız videografisi ile nörofizyolojik kayıtları birleştirerek elde edilir.

Serbestçe Hayvanlar Behaving Sinir Devre Etkinleştirme kayıtları

Omurgasızlar omurgalıların için açıklanan benzer bir otonom sempatik gibi tepki gösterir. Bir organizmanın iç durumu değerlendirmek için biyolojik bir indeksi ölçümü için kardiyo-vasküler ve ventilasyon sistemlerinin koordinasyonu sağlar.

Serbestçe Kerevit Hareketli Kalp ve Ventilatuar Oranları Ölçüleri

Kerevit bacak açıcı kas kas fenotip, sinaptik fizyolojisi ve plastisite tarihsel önemi ve deneysel çok yönlülük için sunulmuştur.

Kerevit Açıcı Kas NMJ Tarihsel ve Fizyolojisi gösteri

Bu makale, sinaptik yanıtları elektrofizyolojik kayıtlar yapmak bir kerevit yürüyüş bacak ekstansör kas ve sinir terminalleri, yüksek ve düşük çıkış sinir terminallerine brüt morfolojik farklılıklar göstermektedir görselleştirildiği nasıl gösteriyor.

Kerevit Bacak ekstansör kas Yüksek ve Düşük Çıkış NMJs Fizyolojik Kayıtlar

Deneyleri, kas yapısı, sinaptik tepkiler, iyon gradyanlar ve membran potansiyelleri üzerine geçirgenlik etkilerini inceleyerek deneyim kazanmak için öğrenciler için kolay bir yaklaşım göstermektedir. Ayrıca, duyu-MSS-motor-kas devre nöronal devre bileşiklerin etkilerini test etmek için bir araç göstermek için sunulmuştur.

Membran Potansiyelleri, Synaptic Yanıtları, Sinir Devresi, Nöromodülasyon ve Kerevit kullanarak kas Histoloji: Öğrenci Laboratuvarı Egzersizler

Bu deneyin temel amacı, primer duyusal nöronlar bir hayvan için proprioseptif bilgi olarak eklem hareketleri ve pozisyonları bilgi iletmek nasıl anlamak için. Bu raporun ek bir amacı diseksiyon mikroskobu altında diseksiyon ve nöron inceleyen hazırlık anatomi mevcuttur.

Kerevit Karın kas Reseptör Organlar: Propriyoseptör Öğrenci Laboratuvar Egzersiz

Bu biyolojik membranlar elektrik modelleri kullanarak nasıl anlaşılabilir bir gösteri. Ayrıca öğrenci yönelik laboratuarlar için kerevit ventral sinir kordonundan aksiyon potansiyelleri kayıt prosedürleri göstermektedir.

Devre Biyolojik Membranlar Modelleme ve Aksonlar Elektrik Sinyalleri Ölçme: Öğrenci Laboratuvar Egzersizler

Bu makale sülükler kullanılarak üç sinir sistemi hazırlıkları anlatmaktadır: Hücre içi kayıt ventral gangliada nöronların, ventral ganglionlar nöronları kültüre ve duyusal alanları haritaya innerve deri bir yama kayıt.

Hücre içi Kaydı, Duyu Alan Haritalama ve Sülük de Kültüre Belirlenen Nöronlar Hirudo medicinalis</i

Fizyolojik ve anatomik teknikler kabuklu yürüme bacaklarda eklem proprioseptörlere ve kas gerginliği reseptörleri için işlevini ve yapısını ele gösterilmiştir.

Yengeç Parmak Propriyoseptör ve Gerilim reseptörleri: Öğrenci Laboratuvarı Egzersizler

Bu makale sürekli kayıt ve kerevit kardiyak ve Lokomotor faaliyetlerin analizleri için bir noninvaziv biomonitoring sistemi sunar. Bu sistem yakın kızılötesi optik sensör, video izleme modülü ve fizyolojik durumuna yansıtır ve kerevit davranış sırasında kalp atışı dalgalanmaları karakterize kerevit sinyal değerlendirmek için yazılım oluşur.

Kerevit kardiyak ve davranışsal faaliyetlerinin sürekli noninvaziv ölçme

Model omurgalı saç hücresi sisteminde motor komutlar sırasında afferent nöron aktiviteslerindeki değişiklikleri izlemek için bir protokol açıklıyoruz.

Zebra Balıklarında Yüzme Sırasında Posterior Lateral Line Afferent Neurons'un Aktivitesi

Öğrenin kerevit karın sinir kordonu diseksiyonu ve yüzgeç motor nöronlarından ekstraselüler kayıt tekniklerini. Bu yöntem, kurgusal lokomosyon ve motor kontrol çalışmaları için sinirbilim araştırmalarına temel oluşturur.

Kerevit ve yüzgeç Sistemi: Sinir Kordon ve Motorlu Pattern Extracellular Recordings ve Diseksiyon için Pratik Kılavuzu

Daha fazla video keşfet