Name: Optimize Ex-ovo Kalkınma Gelişmiş Aşamaları Chick Embriyolar ekimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: Öğrenin, tavuk embriyolarında gelişim biyolojisi çalışmaları için optimize edilmiş ex ovo kültür tekniğini. Bu yöntem, Hamburger ve Hamilton evre 19'dan 40'a kadar embriyonik gelişimi gözlemlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz onun filme iş ve bu yazının video bölümünü düzenlemek için Mount Saint Vincent Üniversitesi Paul Poirier, Medya Yapımcı, teşekkür etmek istiyorum. Biz finansman için Kanada Doğal Bilim ve Mühendislik Araştırma Konseyi kabul.

Not: Tüm malzemeleri Tablo 1&#39;de verilmiştir. 1. Tavuk Embriyolar Saklama <ol><li> Yaklaşık% 40 nem ile Gallus 37 o C yatay Gallus gerginlik tavuk yumurta inkübe ve bir kez ya da günde iki kez yumurta açın. Yumurta kabuğu Torna yapışmasını embriyo önlemek için önemlidir. </li><li> 4 o C&#39;de yumurta tutmak, önceki aksi embriyo sarısı kitle ventral yer alacak ve ek olarak 3. adımda yumurta açılması zarar görür gibi kültür kurma 24 saat içinde yumurta açmak etmeyin &quot;halt&quot; kalkınma inkübasyon öncesinde en fazla bir hafta derece ama bu ideal değildir. </li></ol> 2. Tavuk Embriyolar Sahneleme <ol><li> Hamburger ve Hamilton 12 evreleme tablosunu kullanarak tavuk embriyoları Sahne. Eski-ovo kültürlenmesini kurmak için ideal bir sahne HH evre 19-20 (inkübasyon 3- etrafında gün) bec olduğunuause Bu kafa 53 hpf döner kısa bir süre sonra olduğunu. Not: HH evre 19-20 aşağıdaki morfolojik özellikleri ile karakterize edilir: Somitlerin kuyruk çoğunluğu içine uzatılır, ancak kuyruk çok uç kuyruk tomurcuk kıvrılmış, bölünmemiş kalır, allantois küçük ve damarsal sınırlıdır, bacak-tomurcuklar kanat-tomurcuklar daha büyük ve gözler pigmentlenmemiş veya grimsi bir renk var. </li></ol> 3. Shell Embriyo Çıkarma <ol><li> Kabuktan embriyo çıkarmadan önce,% 70 etanol ile kabuk sprey ve kurumaya bırakın. Bu embriyo zarar verir gibi hızla yumurta açmayın. </li><li> Dikkatli olmak dikkatli alt tarafında yumurta çatlak, yumurta yönünü değiştirmek için değil (yani, inkübasyon sırasında ventral oldu tarafı) ve steril içine embriyo serbest tekne (88 x 88 x 23 mm) tartın. Silin% 70 etanol ile tekneler tartın. Yumurta sarısı çuval zarar görmediğinden emin olmak için kontrol edin embriyo. Yumurta sarısı h Eğerkırık gibi hayatta olmayacak gibi, embriyo atın. </li><li> O canlı olmasını sağlamak için embriyo uyun; Kalp atıyor, damar normal görünür, ve hiçbir belirgin anormallikler mevcuttur. Tartmak tekne kenarları kuru olduğundan emin olun. </li><li> Bir pipet kullanarak, enfeksiyonu önlemek için albümin üzerine penisilin / streptomisin, 40 ul (5.000 birim penisilin, ml başına 5 mg streptomisin) bırakın. </li></ol> 4. Nem Odası Hazırlama <ol><li> Kim-mendil ve / veya bir steril plastik konteynerin (12 x 12 x 6 cm ebadında), alt pamuk emici bir ped küçük bir deste koyun,% 70 etanol ile silinmiştir. </li><li> Kim-mendil ve / veya pamuk su (yaklaşık 150 mi) biraraya getirildi steril damıtılmış su ilave edin. </li></ol> 5. Ex Ovo Kültür Montaj <ol><li> Nemli dolgu üstüne embriyo içeren tartmak tekne yerleştirin. Ardından, t üstünde bir kare steril petri kabına (9.5 x 9.5 cm) yeri yarısıO gevşek kapak oluşturmak için tekne tartın. </li><li> Onun kapaklı plastik kap örtün. Hala odasının içine iyi hava akışı sağlar kısmi mühür sağlanması, kapağın iki köşeleri aşağıya doğru bastırın. </li><li> Dikkatle istenilen aşamaya kadar 37 o C inkübatör içine kurulum yerleştirin. </li><li> Kontrollü nem inkübatör kullanılamaz ise, nem kontrolü yardımcı inkübatör su kapları yerleştirin. Nem odalarında ve inkübatör tüm suyu sterilize ve kuluçka döneminde gerektiği gibi doldurun. % 40 nem ideal. </li></ol>

<ol><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 41, 391-394 (1974).</li>
<li>Gennaro, L. D., Packard, D. S., Stach, R. W., Wagner, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+differentiation+of+chicken+embryos+in+simplified+shell-less+cultures+under+ordinary+conditions+of+incubation%5BTitle%5D)+AND+%22Growth%22%5BJournal%5D)">Growth and differentiation of chicken embryos in simplified shell-less cultures under ordinary conditions of incubation.</a> Growth. 44, 343-354 (1980).</li>
<li>Tufan, C. A., Akdogan, I., Adiguzel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+culture+of+the+chick+embryo+as+a+model+system+in+the+study+of+developmental+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Shell-less culture of the chick embryo as a model system in the study of developmental neurobiology.</a> Neuroanat. 3, 8-11 (2004).</li>
<li>Duench, K., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP+and+Hedgehog+signaling+during+the+development+of+scleral+ossicles%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">BMP and Hedgehog signaling during the development of scleral ossicles.</a> Dev. Biol. 365 (1), 251-258 (2012).</li>
<li>Datar, S., Bhonde, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+Chick+Embryo+Culture+as+an+Alternative+in+vitro+Model+to+Investigate+Glucose-Induced+Malformation+in+Mammalian+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Diabet+Stud%22%5BJournal%5D)">Shell-less Chick Embryo Culture as an Alternative in vitro Model to Investigate Glucose-Induced Malformation in Mammalian Embryos.</a> Rev Diabet Stud. 2 (4), 221-227 (2005).</li>
<li>Chick embryos in shell-less culture. Tested studies for laboratory teaching. Fisher, C. J. 5th Workshop/Conference of the Association for Biology Laboratory Education (ABLE), , (1983).</li>
<li>Dunn, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+for+shell-less+culture+of+the+72-hour+avian+embryo%29%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Technique for shell-less culture of the 72-hour avian embryo).</a> Poultry Science. 53, 409-412 (1974).</li>
<li>Yalcin, H., Shekhar, A., Rane, A. A., Butcher, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex-ovo+chicken+embryo+culture+system+suitable+for+imaging+and+microsurgery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An ex-ovo chicken embryo culture system suitable for imaging and microsurgery applications.</a> J. Vis. Exp. (44), (2010).</li>
<li>Silver, P. H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Special+problems+of+experimenting+in+ovo+on+the+early+chick+embryo%2C+and+a+solution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morph%22%5BJournal%5D)">Special problems of experimenting in ovo on the early chick embryo, and a solution.</a> J Embryol Exp Morph. 8 (4), 369-375 (1960).</li>
<li>Spurlin, J., Lwigale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+to+increase+accessibility+to+late-stage+chick+embryos+for+in+ovo+manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">A technique to increase accessibility to late-stage chick embryos for in ovo manipulations.</a> Dev. Dyn. 242 (2), 148-154 (2012).</li>
<li>Dorrell, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+ovo+model+for+directly+visualizing+chicken+embryo+development%5BTitle%5D)+AND+%22American+Biology+Teacher%22%5BJournal%5D)">Ex ovo model for directly visualizing chicken embryo development.</a> American Biology Teacher. 74 (9), (2012).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Morph%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morph. 88, 49-92 (1951).</li>
<li>Drossopoulou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+anteroposterior+patterning+of+the+vertebrate+limb+based+on+sequential+long-and+short-range+Shh+signaling+and+Bmp+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A model for anteroposterior patterning of the vertebrate limb based on sequential long-and short-range Shh signaling and Bmp signaling.</a> Development. , 127-1337 (2000).</li>
<li>Sys, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+in+ovo+CAM-assay+as+a+xenograft+model+for+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The in ovo CAM-assay as a xenograft model for sarcoma.</a> J. Vis. Exp. (77), e50522(2013).</li>
<li>Franz-Odendaal, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+understanding+the+development+of+scleral+ossicles+in+chicken%2C+Gallus+gallus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Towards understanding the development of scleral ossicles in chicken, Gallus gallus.</a> Dev. Dyn. 237, 3240-3251 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar bu yazının sunulan bilgilere açısından hiçbir rakip mali çıkarlarını var.

Kültürleme ve her ikisi de pencereleme ex ovo avantajları ve zorlukları vardır. Burada avantaj ve yöntem ovo Strafor bardak ex ve burada gösterilen yönteme ovo Optimize ex pencere yöntemi zorlukları karşılaştırın. Bizim yöntem geç gelişim evrelerinde ve yöntem 1, 2 ovo geleneksel ex bizim ayrıntılandırmaları de manipülasyon ve civciv embriyo rahatlıkla izlenebilmektedir, 3 lisans öğretim laboratuvar derslerinde kullanmak üzere, ek çok k...

Ex ovo kültürü, tavuğun gelişimi çalışmasında önemli bir rol oynamıştır1, 2. Bu kültürleme yöntemi, nörolojik hastalıkları, uzuv gelişimini, kraniyofasiyal gelişimi incelemek ve diyabet ile ilişkili malformasyonları araştırmak için bir model olarak kullanılmıştır 3, 4, 5.
Ex ovo tekniğinin birçok çeşidi vardır. En yaygın yaklaşım, bir strafor kap6,7,8 veya bir cam kase5 kullanmaktır. Bu yöntemlerde, embriyoyu beşiklemek için fincan veya kase streç film ile kaplanır, fincanın üzerine bir kapak yerleştirilir ve embriyo daha sonra uygun nem oranına sahip bir inkübatöre yerleştirilir6. Ancak bu kurulum teknik olarak zor olabilir. İlk zorluk, embriyoyu beşiklemek için kullanılan plastik sargıdır. Bu sargı ile çalışmak zordur ve çoğu zaman bardağa çok iyi yapışmaz. Bu sorunu çözmek için, sargıyı yerinde tutmak için bardağın etrafına elastik bir bant yerleştirilir. Buna rağmen, sargı hala kayabilir, bu da embriyo için ölümcüldür. Plastik sargı, embriyo manipülasyonları ve gözlemleri sırasında kullanılabilecek forseps veya iğneler tarafından yırtılma veya delinme potansiyeline sahiptir. Son olarak, bu kurulum çok kararlı değildir ve öğrenciler bardakları kolayca devirebilir. Kapların yüksekliği, embriyoyu stereomikroskop altına yerleştirmeyi de çok zorlaştırır, bu da yüksekliği ölçmek için sınırlı bir hedefi vardır. Bu zorluklar, lisans öğrencilerinin ileri gelişim biyolojisi dersleri gibi öğretim laboratuvarlarında canlı civciv embriyoları ile çalışmasını zorlaştırmaktadır. 
Ex ovo yöntemindeki yukarıdaki zorluklar, araştırmacıların embriyonik civciv gelişimini görmek için pencereleme yöntemi 9,10'a yönelmelerine neden olmuştur. Bu teknikte, embriyonun üzerindeki yumurta kabuğunda bir delik veya "pencere" açılır. Delik, daha fazla embriyonik gelişime izin vermek için bant veya balmumu9 ile yeniden kapatılabilir. Pencereleme yönteminin embriyonik gelişimi görüntüleme yeteneği ve kolay bakım gibi bazı avantajları olmasına rağmen, bu yöntemin de çeşitli sınırlamaları vardır. Birincisi, tüm embriyoyu (özellikle geç aşamalarda) görmek için pencerenin oldukça büyük olması gerektiğidir. İkincisi, büyük pencerelerin kapatılması zordur; Uygun olmayan bir sızdırmazlık, sterilite ve hayatta kalma sorunlarına yol açacaktır. Erimiş balmumunun dolgu macunu olarak kullanılması, protokole başka bir elverişsiz ve dağınık adım ekler. Bu nedenle, pencereleme yöntemi genç evrelerdeki civciv embriyoları için ideal olsa da (HH 11 – HH 27), geç evrelerde tüm embriyonun görüntülenmesi kolay bir şekilde gerçekleştirilemez. 
Burada, yüksek teknolojili ekipman ihtiyacını ortadan kaldıran, stereomikroskop altında kullanımı kolay, embriyoya mikroskobik manipülasyonlar yapmak için yeterli desteği veren ve araştırmacıların embriyonun büyümesini bir bütün olarak gelişimin sonraki aşamalarına (HH 40-41'e kadar) iyi bir şekilde görmelerini sağlayan gelişmiş ve basit bir ex ovo kültür tekniğini11 açıklıyoruz. Ex ovo tekniğindeki bu ilerlemelerle, bireyler embriyonik gelişimin daha eksiksiz bir anlayışına erişim kazanırlar. Örneğin, daha sonraki aşamalara doğru büyüme, bireylerin kemikleşme, tüy gelişimi ve ileri uzuv ve göz gelişimi gibi bu zaman noktasına kadar gerçekleşmeyen gelişimsel süreçleri gözlemlemelerine olanak tanır. Tüm embriyo ve ekstraembriyonik zarlar ve damar sistemi açıkça görülebilir. Embriyonik manipülasyonlar (yani, inhibitörlere batırılmış boncukların implante edilmesi veya doku katmanları arasına bariyerlerin yerleştirilmesi) gibi daha ileri araştırmalar da yapılabilir ve araştırmacılar daha sonraki aşama embriyolarda manipülasyonların etkisini gözlemleyebilirler.

<table><tbody><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>Sigma</td><td>P4458</td><td>Donma / çözülme olaylarını önlemek için küçük alikotlar yapın</td></tr><tr><td>Kare Petri Kabı</td><td></td><td></td><td>9,5 cm x 9,5 cm</td></tr><tr><td>Tartı Teknesi</td><td>Fischer Scientific</td><td>8732113</td><td>88 x 88 x 23 mm</td></tr><tr><td>Kilitli kap</td><td>Kilitli</td><td>Yok</td><td>12 cm x 12 cm x 6 cm</td></tr></tbody></table>

optimize ex-ovo kalkınma gelişmiş aşamaları chick embriyolar ekimi

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Anatomi, embriyoloji ve gelişim biyolojisi alanındaki araştırmalar büyük ölçüde model organizmaların kullanımına dayanmıştır. Canlı embriyolardaki gelişimi incelemek için tavuk gibi model organizmalar sıklıkla kullanılır. Tavuk, düşük maliyeti ve minimum bakımı nedeniyle mükemmel bir model organizmadır, ancak opak bir yumurta kabuğu içinde bulundukları için gözlemsel zorluklar sunarlar. Embriyoyu geliştikçe düzgün bir şekilde görebilmek için, kabuğun pencereli olması veya çıkarılması gerekir. Embriyonik gelişim çalışmasında araştırmacılara yardımcı olmak için hem pencereleme hem de ex ovo teknikler geliştirilmiştir. Bununla birlikte, yöntemlerin her birinin sınırlamaları ve zorlukları vardır. Burada, tavuk embriyoları için HH 19 evresinden birçok organın geliştiği gelişimin geç aşamalarına (HH 40) kadar embriyonik gelişimin gözlemlenmesini sağlayan basit, optimize edilmiş bir ex ovo kültür tekniği sunuyoruz. Bu tekniğin hem lisans sınıflarında hem de embriyo manipülasyonlarının yapıldığı daha gelişmiş araştırma laboratuvarlarında benimsenmesi kolaydır.

Yöntemin ovo Bu eski geç gelişim evrelerinde (HH 40-41) (Şekil 1A ve 1B) gelişme erken aşamalarında (HH 19/20) embriyoların gözlem için izin verir. HH 19-20 de kültür kurma kültür embriyoların beka artırır. Hayatta kalma kültürü ve sahnede 21 sonra çok düşüktür (53 hpf önce) çevirerek kafasına önce, embriyo daha az sağlam embriyolar elde edilir, böylece kaldırılması üzerine kabuk daha sopa eğilimindedir. (Yaklaşık% 40 HH 40-41 kadar hayatta) Genel olarak, kültür ex...

Gelişim sırasında tavuk embriyosunu görüntülemek ve ona erişmek zor olabilir. Basit, uygun maliyetli ve bir sınıfta veya araştırma ortamında kolayca kullanılabilecek bir ex ovo yöntemi geliştirdik. Bu yöntem, embriyonik gelişimin geç aşamalarına kadar embriyoya erişim sağlar (HH 40).

Optimize Ex-ovo Kalkınma Gelişmiş Aşamaları Chick Embriyolar ekimi

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

Bu yöntemin genel amacı, tavuk embriyoları için hamburger ve Hamilton Evre 19'dan evre 40'a kadar gelişimin geç aşamalarına kadar embriyonik gelişimin gözlemlenmesini sağlayan optimize edilmiş bir X ovo kültür tekniği sunmaktır. Bu yöntem, gelişim biyolojisi laboratuvar ortamındaki öğrenciler için olduğu kadar, bu X ovo kültür yöntemini kurmak için tavuk embriyosunu model organizma olarak kullanmak isteyen araştırmacılar için de yararlıdır. İlk önce yumurtalar hazırlanır.Yumurtalar, yaklaşık üç buçuk gün boyunca %40 nem ile 37 santigrat derecede kuluçkaya yatırıldı, bu da kabaca hamburger ve Hamilton evre 19 ile ilişkilidir. Yumurtalar %70 etanol püskürtülerek hazırlanır, böylece kabuk çatladığında embriyo kontamine olmaz. Yumurtalar püskürtüldükten sonra bir an kurumaya bırakılır.Nem odası hazırlanırken, nem odası bir Ziploc kabından yapılır. Nem odasını inşa etmenin ilk adımı, bir ila iki santimetrelik bir emici dolgu tabakası eklemektir. Bu durumda, Kim silmek, ancak pamuklu dolgu katmanları da kullanılabilir.Bu emici dolgu tabakası, burada gösterilen Ziploc kabının tabanına sığar. Emici tabaka yerleştirildikten sonra, kabın tabanına yaklaşık 150 mililitre damıtılmış su dökülür. Bu suyun büyük bir kısmı Dolgu tarafından emilmelidir.Nem odası artık tamamlanmıştır ve yan tarafa yerleştirilebilir. Embriyo kabuktan çıkarıldığında onu beşiklemek için küçük, steril bir yol teknesi kullanılır. Teknenin kuluçka makinesindeki yumurtaların oryantasyonuna bağlı olarak 8,8 santimetre kare ölçülerinde olduğu gibi, embriyo yumurtanın üst yüzeyinde bulunur ve bu nedenle kabuğun karşı taraftan çatlatılması gerekir.Kabuk daha sonra hafifçe kırılır ve yumurta tekneye çok yakın yerleştirilir. Tek bir yumuşak hareketle, yumurta ayrılır ve embriyo nazikçe Tekne'ye doğru serbest bırakılır. Embriyo daha sonra boyunduruğun hala sağlam olduğundan ve embriyonun burada gösterildiği gibi görünür bir kalp atışı ile ve belirgin bir anormallik olmadan yaşayabilir olduğundan emin olmak için incelenir.Daha sonra, enfeksiyonla savaşmaya yardımcı olmak için embriyoya bir antibiyotik ekliyoruz. Donma çözülme sıklığını en aza indirmek için mil başına 5.000 birim penisilin ve beş miligram streptomisin konsantrasyonunda penisilin streptomisin tahsis edilir. Olay. Alikottan 40 mikrolitre alınır ve bir pipet kullanılarak çevredeki albümine eklenir.Artık embriyo dikkatlice nem odasına yerleştirilmeye hazırdır. Nem odasına girdikten sonra, kontaminasyonu önlemeye yardımcı olmak için embriyoya bir kapak verilir. Teknenin üzerine dokuz buçuk santimetre kare büyüklüğünde kare bir Petri kabı kapağı yerleştirilir.Petri kabı ile yol teknesi arasında embriyoya giden oksijeni kısıtlayacak bir conta oluşmaması için yol teknesinin kenarında nem olmadığından emin olmak önemlidir. Daha sonra nem haznesini tamamlamak için Ziploc kabının üzerine bir kapak yerleştirilir. Bununla birlikte, kapağın sadece iki köşesi yerine bastırılır, diğer köşeler açık bırakılır ve hava akışının embriyoya ulaşmasına izin verilir.Nem odası tamamlandıktan sonra, embriyonun dört buçuk gün sonra gelişmeye devam edebilmesi için 37 derecelik bir inkübatöre yerleştirilir. Nem odası inkübatörden çıkarılabilir ve embriyo yaklaşık 34. aşamada gözlemlenebilir. Bu noktada öğrenciler, damar sistemi, büyük göz ve uzuv tomurcukları dahil olmak üzere embriyoyu kolayca gözlemleyebilirler.Embriyo, diseksiyon mikroskobu altında daha fazla gözlemlenebilir ve embriyonik manipülasyonlar gibi daha ileri araştırmalar yapılabilir. Embriyo bu aşamada gözlemlendikten sonra, 37 derecelik bir inkübatöre geri döndürülebilir ve 14 günlük kuluçka süresi olan en az 40. aşamaya kadar gelişmeye devam edecektir. Sonuç olarak, Bu yöntem, civciv embriyolarının yumurta kabuğu dışında kültürlenmesinin optimizasyonunu göstermektedir.Öğrencilere yoğun bir laboratuvar ortamında civciv embriyo gelişimini gözlemleme fırsatı sunar ve buna ek olarak, araştırmacılara Manipülasyon yapıyorlarsa embriyolara erişim sağlar.

optimized-ex-ovo-culturing-chick-embryos-to-advanced-stages

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Ovo elektroporasyon Civciv kuş embriyonun genetik manipülasyon sağlayan bir tekniktir. Bu tekniğin yaygın uygulamalar genlerin fonksiyonel analiz ve olası artırıcı unsurları içerir. Bu video HH 10 civciv embriyosunda nöral tüp elektroporasyon göstermektedir. Enjeksiyon tekniği ve uygun yumurta taşıma tartışılmıştır.

HH Sahne 10 Tavuk Embriyolar Ovo Electroporations

Bu video Yeni kültür, civciv embriyolarının 24 saat kadar yumurta dışında kültür olan bir yöntem gösteriyor. Bu yöntem, erken gelişme (14 som ilkel bir çizgi.) Fare E7-9 karşılık gelen bir süre çalışma sağlar. In situ hibridizasyon ve immünohistokimya, bu tekniğin Uygulamaları elektroporasyon içerir.

Erken Civciv Embriyolar ex vivo (Kültür) Kültür Yöntemi

Civciv chorioallantoic membran (CAM), anjiyogenez ve tümörogenez çalışmak için eşsiz bir doğal bağışık yetmezliği olan, destekleyici bir kültür ortamı. Bu video makale piliç farklı adımları gösteriyor.

Civciv Ex ovo Kültür ve Ex ovo CAM Testi: Gerçekten Nasıl Çalışır?

Bu makalede, biz uzun vadeli sağlamak için basit bir yöntem...

Bir Eski-ovo</emGörüntüleme ve Mikrocerrahi Uygulamaları için uygundur> Tavuk Embriyo Kültürü Sistemi

Bu videonun genel amacı hedef retina enjeksiyon nasıl gerçekleştirileceği göstermek için...

Embriyonik Chick Retina Ovo Elektroporasyon

Daha sonra kuluçka dönemlerinde (Hamburger ve Hamilton evresi (SS) 22 yaşından büyük) az tavuk embriyosu gen transferi yöntemi açıklanmıştır. Bu yöntem, dezavantajların...

Tarafından Eski Tavuk Embriyolar içine Gen Transferi<em&gt; Ex ovo</em&gt; Elektroporasyon

Burada, iletilen ışık ve floresan mikroskobu kullanarak hızlandırılmış görüntüleme için civciv embriyolarını ex ovo kültürlemek için yeni bir teknik sunuyoruz. Batık filtre kağıdı sandviçi, sıvı bir kültür ortamına tamamen batırılmış civciv embriyolarının kültürlenmesine izin veren, iyi bilinen filtre kağıdı taşıyıcı tekniğinin1 bir çeşididir.

Uzun vadede bir Batık Filtre Kağıdı Sandviç Ex Ovo Time-lapse Görüntüleme

Bu protokol, kontrastlı ultrason görüntüleme ve mikrokabarcık aracılı ilaç dağıtımını incelemek için 5 ila 8 günlük tavuk embriyolarının ve bunların koryoallantoik membranının (CAM) in vivo bir model olarak nasıl elde edileceği ve kullanılacağına dair üç yöntemi açıklamaktadır.

Kontrastlı Ultrason Görüntüleme ve Mikrokabarcık Aracılı İlaç Dağıtım Çalışmaları için Tavuk Ex Ovo Embriyolarının ve Korioallantoik Membran Damarlarının In Vivo Model Olarak Hazırlanması

Tam embriyo kültürü için geliştirilmiş bir platform, pregastrülasyon aşamalarından ileri organogenezine kadar altı güne kadar postimplantasyon fare embriyolarının sürekli ve sağlam ekstre gelişimini sağlar. Bu protokolde statik plakalar ve dönen şişe sistemleri kullanılarak başarılı embriyo kültürü için standart prosedürü detaylandırıyoruz.

Ex Utero Pregastrülasyondan İleri Organogenez'e Fare Embriyolarının Kültürü

Bu makalenin genel amacı, tavuk embriyolarına eksojen materyallerin hücre içi enjeksiyonunda nasıl gerçekleştirileceğini tanımlamaktır. Bu yaklaşım, tavuk embriyolarının gelişimsel biyolojisini incelemek için çok yararlıdır.

Burada: Ovo Tavuk Embriyolarında İntravasküler Enjeksiyon

Öğrenin, tavuk embriyolarında gelişim biyolojisi çalışmaları için optimize edilmiş ex ovo kültür tekniğini. Bu yöntem, Hamburger ve Hamilton evre 19'dan 40'a kadar embriyonik gelişimi gözlemlemeyi sağlar.

Optimize Ex-ovo Kalkınma Gelişmiş Aşamaları Chick Embriyolar ekimi

Daha fazla video keşfet