İzolasyon ve Kemirgen Aort eksizyonu; Kardiyovasküler Hastalığı Çalışmasında Çok Yönlü Tekniği

Bu prosedürün genel amacı, murin aortunu steril bir şekilde izole etmek ve eksize etmektir. Bu, önce göğüs ve karın boşluğunu açığa çıkararak gerçekleştirilir. İkinci adım, soğuk, steril tuzlu su ile perfüze etmektir.

Daha sonra, göğüs ve karın boşluklarının organları çıkarılır ve kalbi aorta bağlı bırakır. Son adım, perivasküler yağ dokusunu ve advent dokusunu aorttan çıkarmaktır. Sonuç olarak, çevredeki tüm dokunun çıkarıldığını doğrulamak için bir diseksiyon mikroskobu kullanılır ve aort çeşitli deneysel analizler için kullanılabilir.

Dolayısıyla bu teknik, anevrizma gelişimi ve aterosklerotik plakların oluşumu gibi kardiyovasküler araştırma alanındaki temel soruları yanıtlamada yardımcı olur. Ve bunlara, gen ve protein ekspresyonu gibi moleküler biyolojideki değişikliklere bakarak bakabilirsiniz. Fareye ötenazi yaptıktan sonra, ötenazi durumunu bir ayak parmağı tutamıyla doğrulayın.

Daha sonra, karın kürkünü% 70 etanol ile ıslatarak cildi sterilize edin. Ardından, fareyi cerrahi tahtaya sırtüstü yatırın, uzantılar uzanmış şekilde sabitleyin. Ameliyata, ksifoid sürecinden hemen daha düşük olan karın derisini bulmak ve izole etmek için forseps kullanarak başlayın.

Ardından, cildi yukarı kaldırın ve makasla kesin. Bu, peritonun üst kısmını ve alt torasik boşluğu ortaya çıkarmalıdır. Daha sonra forseps ve makas kullanarak, ksifoid işlemini kaldırın ve subkostal kenarlar boyunca hemen daha düşük lateral insizyonlar yapın.

Göğüs boşluğunu incelemek için, işlem sırasında kalbe veya herhangi bir büyük damara zarar vermemeye dikkat ederek diyaframdan girin. Şimdi kraniyal, lateral insizyonları subkostal kenarlar boyunca uzatır. Böylece göğüs kafesinin ön kısmını çıkarın.

Bu kesilerin tamamlanması için kalbin göğüs ön duvarından çıkarılması için künt bir diseksiyon gerekebilir. Şimdi gazlı bez kullanarak, organlara erişimi kolaylaştırmak için fazla sıvıların göğüs boşluğunu temizleyin. Daha sonra forseps ve makas kullanarak akciğerleri lob lob çıkarın.

Kalp ve aort daha sonra tamamen açığa çıkarılmalı ve kalp ponksiyonu yoluyla kan toplamak için kolayca erişilmelidir. Kalbi perfüze etmek için perfüzyona devam etmeden önce bunu şimdi yapın, 10 cc'lik bir şırıngayı 10 mililitre steril buz gibi soğuk bir XPBS ile doldurun. Ardından 25 gauge bir iğne takın.

İğneyi dikkatlice sol ventriküle yerleştirin. Daha sonra sağ atriyumda bir kesi yapın, böylece bir sonraki adımda dolaşım sisteminde aşırı basınç oluşmaz. Şimdi, önümüzdeki iki ila üç dakika boyunca, PBS'yi şırıngadan yavaşça kalbe çıkarın.

PBS ejeksiyonu sırasında, insizyondaki atriyumdan dökülecek sıvıyı emmek için steril gazlı bez kullanın. PERFUSE sekizinin tamamı dışarı atıldığında, kalan sıvıyı göğüs boşluğunun temiz bir görünümünü engelleyen gazlı bezle emdirin. GI içeriğini ortaya çıkarmak için, karın duvarından kıvrak bir şekilde kesin ve insizyonu supra kasık bölgesine kadar uzatın.

Bir kez orada, sabitlenebilen veya eksize edilebilen bir deri flebi yapmak için alt ekstremitelere doğru iki taraflı olarak kesin. Devam etmek birkaç organı, karaciğerin loblarını, pankreas, dalak, bağırsakları ve alt yemek borusunu çıkarır. Bu, aortun görünümünü açar.

Bu bölgede aorttan renal arterlere kadar yüzeysel dallar olduğu için perren bölgesini diseksiyon yaparken ekstra dikkatli olun. Bu diseksiyonu hassas ve dikkatli bir şekilde yapın, çünkü GI bakterileri diğer dokuları kontamine edebilir, temizlenen alanı bir XPBS ile durulayın ve fazla çözeltiyi gazlı bezle emin, aort kolayca erişilebilir olmalıdır. Bu yüzden makas ve forseps ile aortu omurgadan ayırın.

Künt bir diseksiyon uygundur ve diseksiyon mikroskobunun kullanılması şiddetle tavsiye edilir. Aort, koddly veya kranly başlayarak çıkarılabilir. Önemli olan, dokuları temizlemek ve ayırmak için düzenli bir bitki işlemidir.

Perivasküler yağ dokusunu diseke ederken, aort duvarına zarar vermemek için ince mikro makas kullanarak çıkarın. Bu, aort düz kas hücrelerini kültürlerken fibroblast kontaminasyonu olasılığını en aza indirir. Perivasküler, yağ dokusu ve adventitinin dikkatli eksizyonu çok önemlidir.

Artık herhangi bir doku, hücre kültüründe kontaminasyona neden olabilir, ancak aynı zamanda moleküler tahlillerinizi de önyargılı hale getirebilir. Bu işlem kullanılarak kalpten çıkan sağlam bir aort damarı göğüs ve karın boşluklarına doğru inmektedir. Renal arterler hala bağlı olarak elde edildiğinde, abdominal aort anevrizmalarının çalışmasında tanısal olan morfometrik değişiklikleri ölçmek için aort in situ olarak görüntülenebilir.

Daha sonra, hemat, toin ve eoin boyası gibi histolojik değişikliklere bakmak için aort çıkarılabilir, sabitlenebilir ve boyanabilir veya elastin bantlarına bakmak ve böylece aortun yapısal bütünlüğünü görmek için ver Hoff Van Geen boyaması ile boyanabilir. Aort hücreleri ayrıca birincil hücre izolasyonu ve canlılık çalışmaları ve protein lokalizasyonu gibi in vitro çalışmalar için de kullanılabilir. Prosedürü takiben, protein ekspresyonuna, enzim aktivitesine ve gen ekspresyonuna bakmak için protein ve RNA izolasyonu gibi diğer teknikleri kullanabilirsiniz.