İzolasyon ve Kemirgen Aort eksizyonu; Kardiyovasküler Hastalığı Çalışmasında Çok Yönlü Tekniği
November 24th, 2014
Aort patolojisi ciddi morbidite ve mortaliteye yol açabilir, bu nedenle hastalığın ilerlemesi ve potansiyel tedavilerin araştırılması gereklidir. Burada, araştırmacılara kardiyovasküler hastalık araştırmalarında yardımcı olmak için murin aortunu izole etmek ve eksize etmek için bir protokol sunuyoruz.
Bu prosedürün genel amacı, murin aortunu steril bir şekilde izole etmek ve eksize etmektir. Bu, önce göğüs ve karın boşluğunu açığa çıkararak gerçekleştirilir. İkinci adım, soğuk, steril tuzlu su ile perfüze etmektir.
Daha sonra, göğüs ve karın boşluklarının organları çıkarılır ve kalbi aorta bağlı bırakır. Son adım, perivasküler yağ dokusunu ve advent dokusunu aorttan çıkarmaktır. Sonuç olarak, çevredeki tüm dokunun çıkarıldığını doğrulamak için bir diseksiyon mikroskobu kullanılır ve aort çeşitli deneysel analizler için kullanılabilir.
Dolayısıyla bu teknik, anevrizma gelişimi ve aterosklerotik plakların oluşumu gibi kardiyovasküler araştırma alanındaki temel soruları yanıtlamada yardımcı olur. Ve bunlara, gen ve protein ekspresyonu gibi moleküler biyolojideki değişikliklere bakarak bakabilirsiniz. Fareye ötenazi yaptıktan sonra, ötenazi durumunu bir ayak parmağı tutamıyla doğrulayın.
Daha sonra, karın kürkünü% 70 etanol ile ıslatarak cildi sterilize edin. Ardından, fareyi cerrahi tahtaya sırtüstü yatırın, uzantılar uzanmış şekilde sabitleyin. Ameliyata, ksifoid sürecinden hemen daha düşük olan karın derisini bulmak ve izole etmek için forseps kullanarak başlayın.
Ardından, cildi yukarı kaldırın ve makasla kesin. Bu, peritonun üst kısmını ve alt torasik boşluğu ortaya çıkarmalıdır. Daha sonra forseps ve makas kullanarak, ksifoid işlemini kaldırın ve subkostal kenarlar boyunca hemen daha düşük lateral insizyonlar yapın.
Göğüs boşluğunu incelemek için, işlem sırasında kalbe veya herhangi bir büyük damara zarar vermemeye dikkat ederek diyaframdan girin. Şimdi kraniyal, lateral insizyonları subkostal kenarlar boyunca uzatır. Böylece göğüs kafesinin ön kısmını çıkarın.
Bu kesilerin tamamlanması için kalbin göğüs ön duvarından çıkarılması için künt bir diseksiyon gerekebilir. Şimdi gazlı bez kullanarak, organlara erişimi kolaylaştırmak için fazla sıvıların göğüs boşluğunu temizleyin. Daha sonra forseps ve makas kullanarak akciğerleri lob lob çıkarın.
Kalp ve aort daha sonra tamamen açığa çıkarılmalı ve kalp ponksiyonu yoluyla kan toplamak için kolayca erişilmelidir. Kalbi perfüze etmek için perfüzyona devam etmeden önce bunu şimdi yapın, 10 cc'lik bir şırıngayı 10 mililitre steril buz gibi soğuk bir XPBS ile doldurun. Ardından 25 gauge bir iğne takın.
İğneyi dikkatlice sol ventriküle yerleştirin. Daha sonra sağ atriyumda bir kesi yapın, böylece bir sonraki adımda dolaşım sisteminde aşırı basınç oluşmaz. Şimdi, önümüzdeki iki ila üç dakika boyunca, PBS'yi şırıngadan yavaşça kalbe çıkarın.
PBS ejeksiyonu sırasında, insizyondaki atriyumdan dökülecek sıvıyı emmek için steril gazlı bez kullanın. PERFUSE sekizinin tamamı dışarı atıldığında, kalan sıvıyı göğüs boşluğunun temiz bir görünümünü engelleyen gazlı bezle emdirin. GI içeriğini ortaya çıkarmak için, karın duvarından kıvrak bir şekilde kesin ve insizyonu supra kasık bölgesine kadar uzatın.
Bir kez orada, sabitlenebilen veya eksize edilebilen bir deri flebi yapmak için alt ekstremitelere doğru iki taraflı olarak kesin. Devam etmek birkaç organı, karaciğerin loblarını, pankreas, dalak, bağırsakları ve alt yemek borusunu çıkarır. Bu, aortun görünümünü açar.
Bu bölgede aorttan renal arterlere kadar yüzeysel dallar olduğu için perren bölgesini diseksiyon yaparken ekstra dikkatli olun. Bu diseksiyonu hassas ve dikkatli bir şekilde yapın, çünkü GI bakterileri diğer dokuları kontamine edebilir, temizlenen alanı bir XPBS ile durulayın ve fazla çözeltiyi gazlı bezle emin, aort kolayca erişilebilir olmalıdır. Bu yüzden makas ve forseps ile aortu omurgadan ayırın.
Künt bir diseksiyon uygundur ve diseksiyon mikroskobunun kullanılması şiddetle tavsiye edilir. Aort, koddly veya kranly başlayarak çıkarılabilir. Önemli olan, dokuları temizlemek ve ayırmak için düzenli bir bitki işlemidir.
Perivasküler yağ dokusunu diseke ederken, aort duvarına zarar vermemek için ince mikro makas kullanarak çıkarın. Bu, aort düz kas hücrelerini kültürlerken fibroblast kontaminasyonu olasılığını en aza indirir. Perivasküler, yağ dokusu ve adventitinin dikkatli eksizyonu çok önemlidir.
Artık herhangi bir doku, hücre kültüründe kontaminasyona neden olabilir, ancak aynı zamanda moleküler tahlillerinizi de önyargılı hale getirebilir. Bu işlem kullanılarak kalpten çıkan sağlam bir aort damarı göğüs ve karın boşluklarına doğru inmektedir. Renal arterler hala bağlı olarak elde edildiğinde, abdominal aort anevrizmalarının çalışmasında tanısal olan morfometrik değişiklikleri ölçmek için aort in situ olarak görüntülenebilir.
Daha sonra, hemat, toin ve eoin boyası gibi histolojik değişikliklere bakmak için aort çıkarılabilir, sabitlenebilir ve boyanabilir veya elastin bantlarına bakmak ve böylece aortun yapısal bütünlüğünü görmek için ver Hoff Van Geen boyaması ile boyanabilir. Aort hücreleri ayrıca birincil hücre izolasyonu ve canlılık çalışmaları ve protein lokalizasyonu gibi in vitro çalışmalar için de kullanılabilir. Prosedürü takiben, protein ekspresyonuna, enzim aktivitesine ve gen ekspresyonuna bakmak için protein ve RNA izolasyonu gibi diğer teknikleri kullanabilirsiniz.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu makale, kardiyovasküler hastalığın incelenmesi için kritik öneme sahip olan murin aortun izolasyonu ve eksizyonu için bir protokol sunmaktadır. Aortun patolojisi, morbidite ve mortalite açısından önemli olduğu için anlaşılması esastır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Kardiyovasküler hastalık
- Murin modeller
- Patoloji araştırması
Arka Plan
- Aortun patolojisi ciddi sağlık sorunlarına yol açabilir.
- Hastalık ilerlemesine ilişkin araştırmalar, tedavilerin geliştirilmesi için kritik öneme sahiptir.
- Aortun izolasyonu, detaylı deneysel analizlere olanak tanır.
- Bu protokol araştırmacıların araştırmalarında yardımcı olur.
Çalışmanın Amacı
- Murin aortu izole etmek için güvenilir bir yöntem sağlamak.
- Kardiyovasküler hastalıklara ilişkin araştırmaları kolaylaştırmak.
- Aortik patolojinin anlaşılmasına katkıda bulunmak.
Kullanılan Yöntemler
- Torasik ve abdominal boşluğu açmak.
- Soğuk, steril salin ile perfüzyon yapmak.
- Kalbin aortay bağlı kalması sağlanarak organları çıkarmak.
- Aorttan perivazküler adipoz dokusu ve adventis dokusunu çıkarmak.
Ana Sonuçlar
- Murin aortun başarılı bir şekilde izole edilmesi.
- Çevreleyen dokuların tamamen çıkarılmasının bir diseksiyon mikroskobu kullanılarak doğrulanması.
- Aortun çeşitli deneysel analizler için hazırlanması.
Sonuçlar
- Protokol, aortun izolasyonu için sistematik bir yaklaşım sağlar.
- Bu yöntem, kardiyovasküler araştırmalara önemli ölçüde yardımcı olabilir.
- Gelecekteki çalışmalar bu temel teknik üzerinde geliştirebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Isolation of the murine aorta enables direct assessment of vascular pathology in preclinical models, supporting target validation and mechanistic de-risking in cardiovascular drug discovery. This technique provides quantitative morphometric and molecular readouts that improve predictive confidence in early-stage therapeutic evaluation. By facilitating reproducible tissue preparation, it strengthens translational continuity from discovery through preclinical validation.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of aortic tissue to clarify disease mechanisms and validate therapeutic targets in atherosclerosis and aneurysm models.
- Operational Value: Supports functional target validation through molecular analysis of protein and gene expression in isolated tissue.
- Predictive Value: Enhances portfolio triage by providing direct readouts of target engagement and pathway modulation.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Prepares validated aortic tissue for downstream assays, including viability studies and protein localization.
- Operational Value: Enables standardization of tissue preparation for reproducible compound evaluation in in vitro systems.
- Scalability: Supports platform reuse across multiple experimental readouts such as histology, molecular profiling, and primary cell isolation.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Maintains disease relevance by preserving aortic structure for histologic and elastin band analysis.
- Operational Value: Ensures continuity from discovery through preclinical validation by enabling consistent tissue preparation.
- Risk Mitigation: Supports risk-adjusted advancement decisions via quantifiable morphometric changes diagnostic of abdominal aortic aneurysm.
Pipeline & Workflow Integration
The aorta isolation technique fits within the discovery continuum, supporting hypothesis testing in early discovery, assay readiness in screening, and quantitative analytics in preclinical evaluation.
- Discovery Biology: Facilitates hypothesis testing and pathway clarification through direct tissue analysis.
- Screening: Enables assay readiness via standardized tissue preparation and removal of confounding perivascular tissue.
- Analytics: Delivers quantitative morphometric and molecular measurements for comparative condition analysis.
- Translational Research: Connects to preclinical continuity through histologic staining and elastin band assessment.
- Enterprise Reuse: Functions as a reusable capability for cardiovascular pathology studies across multiple projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence through direct assessment of aortic pathology and target modulation.
- Operational Value: Standardization and reproducibility in tissue preparation for molecular and histologic assays.
- Strategic Value: Improved go/no-go decisions via reduced biological uncertainty in cardiovascular models.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization based on quantifiable aortic structural and functional readouts.
Implementation Considerations
- Requires expertise in murine dissection and sterile tissue handling.
- Dependent on dissection microscope and surgical instrumentation for precision tissue isolation.
- Necessitates cross-team standardization of perfusion and excision protocols.
- Involves adaptation considerations when applying to different disease models or strain backgrounds.
- Limited by terminal nature of the procedure, requiring animal sacrifice per sample.
