Yerelleştirme, Kimlik ve Eksizyon Kemirgen Yağ depolarının

Bu prosedürün genel amacı, adipoz üzerinde ve adipoz tarafından farklı faktöriyel etkilerin analizi için adipoz depose'un tanımlanmasını ve eksizyonunu göstermektir. Bu, önce yetişkin bir farenin iç organlarını ve yağ depolarını açığa çıkararak gerçekleştirilir. İkinci adımda, depoları daha iyi ortaya çıkarmak için organlar ve gereksiz dokular çıkarılır ve depoların karşılık gelen yerlerinde tanımlanmasına izin verilir.

Son adımda, yağ dokusu daha sonra kontaminasyonu önlemek için özel bir dikkatle çıkarılır. Sonuç olarak, bu depozların izolasyonu ve eksizyonu, histolojik analiz, protein ekspresyonu, enzim aktivitesi ve gen ekspresyonu analizinin yanı sıra in vitro çalışmalar için doku sağlar. Bu özel protokolün mevcut metodolojilere göre ana avantajı, minimum diseksiyon ve minimum kontaminasyon ile çoklu depo izolasyonuna izin vermesidir.

Dolayısıyla bu prosedür obezite alanıyla ilgili soruları cevaplamaya yardımcı olabilir. Örneğin, yağ dokusunun insan hastalıkları üzerindeki zararlı ve hatta yararlı etkileri. Kahverengi yağ dokusunu izole etmek için, etanol, temizlenmiş, ötenazi yapılmış bir yetişkin fareyi sırtüstü pozisyonda masaya yaslanarak yerleştirin.

Daha sonra diyaframın hemen altındaki cildi kaldırmak için forseps kullanın ve cildi makasla kesin. Peritonu ortaya çıkarmak için farenin çevresini enine kesin. Daha sonra bir elinizle alt uzantıları ve karnı tutarak, diğer elinizle cildi başa doğru çekin ve farenin üst yarısını kelebek şeklindeki kahverengi yağ deposunu veya yarasayı ortaya çıkarın.

Ardından, scape'i ve ilgili yarasa deposunu bulun. Daha sonra, kelebeğin üzerindeki herhangi bir yüzeysel beyaz yağı dikkatlice çıkarmak için bir diseksiyon mikroskobu kullanın ve ilişkili herhangi bir kastan kaçınmaya dikkat ederek interskapular kahverengi yağı inceleyin. Deri altı veya subq yağ dokusunu izole etmek için, bir elinizle üst uzantıları ve toraksı tutun ve diğer elinizle cildi ayaklara doğru çekerek farenin alt yarısını deglove edin ve üçgen kasık altı birikintilerini ortaya çıkarın.

Daha sonra fareyi sırtüstü pozisyona getirin ve gonadal yağı karın boşluğundan izole etmek için subq yağ üçgenlerini dikkatlice inceleyin. Peritonu diyaframın hemen altından enine kesmek için makas kullanın. Daha sonra karın organlarını ortaya çıkarmak için peritonu diyaframdan rektuma, orta koronalle kesin ve her iki epidermal yağ deposunu testisler epi ve vasa deia'dan dikkatlice inceleyin.

Perivasküler yağ dokusunu izole etmek için, hayvanı sırtüstü pozisyonda tutun ve üst ve alt uzantıları dışa doğru uzatın. Daha sonra, vücudun üst kısmı boyunca gerginlik oluşturmak için ksifoid sürecini forseps ile kaldırın ve diyaframı yatay olarak keserek torasik boşluğun alt kısmını açığa çıkarın. Göğüs kafesini başa doğru üst kısımdan sternumun hemen yanına doğru kesin ve ardından köprücük kemiğinin hemen altındaki göğüs kafesini kaldırın.

Klavikulanın alt uzunluğu boyunca her iki yönde aksillaya doğru kesme. Göğüs boşluğu ve içeriği artık açıkça görülebilir olmalıdır. Alan sıvıdan arındırıldıktan sonra, akciğerleri çıkarmak ve kalbi açığa çıkarmak için bronşları ve bağlantı damarlarını kesin.

Mideyi ve yemek borusunu tanımladıktan sonra, mideyi serbest bırakmak için yemek borusunu gastroözofageal bileşkede kesin. Ardından, bağırsakları ve çevresindeki mezenteri tanımlayın. Mezenterden yüzeysel olarak kesin ve ardından mideyi, bağırsağı, kolonu, pankreası ve dalağı serbest bırakmak için kolonu rektuma mümkün olduğunca yakın kesin.

Organlar çıkarıldığında, hepatik damarları kesin ve mezenteri bağlayın ve karaciğerin tüm loblarını çıkarın. Böbrekleri çevreleyen iç organı ve yağı kesin, böbrekleri aortun farklı segmentleri için coğrafi belirteçler olarak hizmet etmek üzere in vivo olarak aorta bağlı bırakın. Daha sonra böbreklerin etrafındaki alan açık olduğunda, aortu omurgaya olan dorsal bağlantısından ve yemek borusuna olan ventral bağlantısından ayırmak için mikro makas ve mikro forseps kullanın.

Toraksta, aortu kalpteki kökeninden iliak bölgedeki bifurkasyona kadar takip edin ve ayırın. Aort yağ dokusunu izole etmek için bu noktada subklavyen damarlar tanımlanabilir. Kalpteki aort kavşağını ve kökünü daha iyi ortaya çıkarmak için bu damarları boyundan aort köküne kadar izole edin.

Daha sonra timusu çıkarın ve kalbin hareketine izin vermek için brakiyosefalik, sol ortak karotis ve sol subklavyen arterleri kesin. Son olarak, aortu çevreleyen perivasküler yağ dokusunu veya P VVA T tabakasını görüntülemek için bir diseksiyon mikroskobu kullanın. Ardından, dokuyu aorttan nazikçe çekmek için mikro forseps ve PVAT'ın aort ile olan bağlanmasını diyaframın bulunduğu yerin hemen üstünde, torasik bölgeden başlayarak nazikçe kesmek için mikro makas kullanın.

Ardından, dokuyu aorttan nazikçe çekmek için mikro forseps ve diyaframın bulunduğu yerin hemen üstündeki torasik bölgeden başlayarak PVAT'ın aorta bağlanmasını nazikçe kesmek için mikro makas kullanın. Bu işlemi, aort damarının iliak bifurkasyonunun hemen üstünde ve böbrek dalları yarasasının altında bulunan infrarenal aort bölgesinde bitiren aortun tüm uzunluğu boyunca tekrarlayın. Ve wat örnekleri, deri altı adipositlerin ve perivasküler primer hücre hatlarının h ve e boyama ile histolojik analiz ile ayırt edilebilir.

Adipositler daha sonra kültürlenebilir ve mikrodizi analizi için preadipositlerden adipositlere ayırt edilebilir. Bu temsili görüntülerde, örneğin, kültürlenmiş preadipositlerin adipositlere dönüşümü, yağ kırmızısı O boyama adipositleri ile doğrulandı, izole edildi, kültürlendi ve bu yöntemle farklılaştırıldı, daha ileri in vitro analizler için kullanılabilir. Bu temsili deneyde, MM P iki'nin enzimatik aktivitesinin, tedavi edilmemiş kontrollere kıyasla deneysel bir tedaviye yanıt olarak izole edilmiş perivasküler adipositlerde azaldığı gözlenmiştir.

Bu prosedürü denerken, kontaminasyonu en aza indirmek için eldivenlerinizi değiştirmeyi ve aletlerinizi sık sık temizlemeyi unutmamanız önemlidir. Yani bu dokular toplandıktan sonra üzerlerinde çeşitli işlemler yapılabilir. Örneğin, hücre kültürü, histolojik analiz, protein ölçümü ve hatta gen ekspresyonu.

Daha sonra bu sonuçlar, farklı depolar arasındaki ilişkiyi, benzerlikleri ve farklılıkları anlamaya yardımcı olmak için kullanılabilir.