Name: Hydra Glutatyon kaynaklı Besleme Tepki Ölçüm (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: Keşfedin Hydra'da glutatyon kaynaklı besleme tepkisini ölçme yöntemini. Tentakel ve ağız arası mesafe ölçülerek beslenme davranışı nicelendirilir. Bu güvenilir analiz nörobiyoloji araştırmaları için kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, video prodüksiyonundaki yardımları için K. P. Madhu'ya, Nita Beliappa'ya ve Hindistan Bilim Eğitim ve Araştırma Enstitüsü Medya Merkezi personeline, Pune'a müteşekkirdir. Çalışma, Hindistan Hükümeti Biyoteknoloji Bölümü Mükemmeliyet Merkezi programı kapsamında SG'ye fon sağlanarak ve Hindistan Hükümeti Bilim ve Teknoloji Bölümü tarafından RK'ya doktora sonrası burs ile desteklenmiştir.

Besleme Tepki 1. Hydra Kültür ve Ölçüm <ol><li> Bir yer alan (1 mM Tris-HCI tamponu, pH 7.6, 1 mM NaCI, 1 mM CaCI2, 0.1 mM KCI ve 0.1 mM MgSO 4) Artemia ile bunların günlük olarak beslemek ve bir ortam içinde tutarak kültürde hidra polipler korumak 12 saat ışık-12 saat karanlık döngüsü altında 18 ° C'de cam kase daha önce 12 açıklandığı gibi. </li><li> Beslenme yanıtının ölçülmesi için bir 24 oyuklu plaka tek bir kuyusuna 5-6 dokunaçlarını sahip hidra polip olgun aktarın. Eğerek kuyudan kalan ortamı çıkarın, sonra hemen taze orta 500 ul ekleyin. </li><li> Hidra ortamda 9 iM glutatyon çözeltisi hazırlayın. Glutatyon çözüm oksidasyona eğilimli olduğundan, her zaman, her deney için taze hazırlanmış glutatyon çözümü kullanın. </li><li> Görüntü kaydı için hükme sahip bir mikroskop görüntüleme platformu için plaka aktarın. Davranış o böyle karanlık bir arka plan kullanınf hydra polip açıkça zıt arka plan karşı görüntülü olabilir. </li><li> Oda gözlem ve dalgalanan şiddetleri, hava akımları ve gürültü ışıklar hydra serbest davranışını görüntülenmesinde kullanılan. Hatta glutatyon yokluğunda - Bu tür bozukluklar arasında ayrıca hidra polip dokunaçlarıyla daralma gösterir neden olabilir. </li><li> Polip 5 dakika dinlenmek için izin verin. </li><li> Polip davranışı açıkça görüntülü olabilir ki iyi böyle bir merkez bölgesi boyunca yer olduğundan emin olun. Polip kuyunun kenarında ise, bir pipet kullanarak orta kızarma tarafından merkeze getirmek ve tekrar dinlenmek için izin verir. </li><li> Rahat bir durumda hidra'nin bir görüntü yakalayın. Bu sıfır zaman noktasında gözlem olacaktır. </li><li> Hızlı bir şekilde de 3 uM'lik bir son konsantrasyon elde etmek üzere 9 uM glutation çözeltisi ekleyin. Hidra'yla gösterilen deney ve yanıtın amacına bağlı olarak, glütatyon ve Choo farklı konsantrasyonları bir dizi testiGerekli uygun konsantrasyona se. </li><li> Hemen 4-5 dakika boyunca her 15-30 saniye sonra glutatyon çözüm ve yakalama görüntüleri ekledikten sonra Sayacı başlatmak. Time-lapse görüntüleme sırasında büyütme ayarlarını değiştirmeyin. </li><li> Yumuşak ve kuyudaki hayvanın konumu minimal mikroskop görüş alanında rahatsız ki, bu tür homojen akımı ile glutation solüsyonu ekleyin. Polip glutatyon çözüm ekledikten sonra yoğun hareket Ancak, görüntü yakalama için görüş alanındaki polip getirmek için çok yavaşça plakasını taşıyın. </li><li> Kontrol deneyinde, benzer diğer tüm parametreleri tutarken orta glutatyon eksik kullanımı. </li><li> 13:00 önce beslenme yanıtının ölçüde sirkadiyen ritmin olası etkisini önlemek için - günün ilk yarısında yukarıdaki deney tüm adımları gerçekleştirmek için emin olun. </li><li> GNU Image Manipulation Program (GIMP) kullanılarak çekilen görüntülerin her açın. </li> Tentacles ve hypostome her apikal ucu arasındaki mesafeyi belirlemek için ölçün&gt; Menü&gt; Araçlar edinilebilir "Tedbir" aracını kullanın. Ağız açıklığı herhangi bir görüntü gözlenmesi durumunda, açılan ağız merkezi ve tentacle apikal ucu arasındaki mesafeyi belirler. Tentacle yayılması gibi bu mesafeye bakın. <li> Öncesi ve glutatyon maruz kaldıktan sonra her polip için ortalama tentacle yayılmasını hesaplayın. Sonraki zaman noktalarında her birinde edilene sıfır zaman noktasında ortalama dokunaçlı yayılma oranı hesaplanır. Bu oran göreceli dokunaçlı yayılması çağrılır. </li><li> En az 20 polip ölçümleri tekrarlayın. </li></ol><img alt="Denklem 1" fo:content-width="3.5in" src="/files/ftp_upload/52178/52178eq1.jpg" width="400"> <img alt="Denklem 2" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52178/52178eq2.jpg" width="450"> 2. Yöntem Doğrulama kullanarakAçlık Modeli <ol><li> Açlık için ayrı bir cam kase için birkaç hydra polip aktarmak ve 5 gün boyunca onları beslemek yok. Benzer bir büyüklükte bir kapta artemia ile günde birkaç polip kontrol doyur. Hem deneysel ortamda mantar üremesini önlemek için günlük kase gelen orta değiştirin. </li><li> Deney gününde, 1 saat süre ile Artemia ile Hydra kontrol grubu besleme ve ortam tüm meyvelerin ve ölü Artemia çıkarılmasından sonra, daha sonraki deneyler için, bu Hidra kullanır. </li><li> Nedeniyle gözlem süresi için bir eğilim önlemek için önceki adım 1 'de tarif edilen yöntemle kontrol grubundan hidra ile karşılaştırıldığında aç Hydra besleme yanıtını ölçen aç her ölçümleri alternatif ve Hydra polipler kontrol eder. </li></ol>

<ol><li>Loomis, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+control+of+the+specific+feeding+reactions+of+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Ny.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Glutathione control of the specific feeding reactions of hydra.</a> Ann. Ny. Acad. Sci. 62, 209-228 (1955).</li>
<li>Beckmann, A., Ozbek, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nematocyst%3A+a+molecular+map+of+the+Cnidarian+stinging+organelle%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The Nematocyst: a molecular map of the Cnidarian stinging organelle.</a> Int. J. Dev. Biol. 56, 577-582 (2012).</li>
<li>Venturini, G., Carolei, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopaminergic+receptors+in+Hydra.+Pharmacological+and+biochemical+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Phys.+C%22%5BJournal%5D)">Dopaminergic receptors in Hydra. Pharmacological and biochemical observations.</a> Comp. Biochem. Phys. C. 102, 39-43 (1992).</li>
<li>Kass-Simon, G., Scappaticci, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamatergic+and+GABAnergic+control+in+the+tentacle+effector+systems+of+Hydra+vulgaris%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiologia%22%5BJournal%5D)">Glutamatergic and GABAnergic control in the tentacle effector systems of Hydra vulgaris.</a> Hydrobiologia. 530-531, 67-71 (2004).</li>
<li>Pierobon, P., Tino, A., Minei, R., Marino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+roles+of+GABA+and+glycine+in+the+modulation+of+chemosensory+responses+in+Hydra+vulgaris+%28Cnidaria%2C+Hydrozoa%29%5BTitle%5D)+AND+%22Hydrobiology%22%5BJournal%5D)">Different roles of GABA and glycine in the modulation of chemosensory responses in Hydra vulgaris (Cnidaria, Hydrozoa).</a> Hydrobiology. 178, 59-66 (2004).</li>
<li>Pierobon, P., Sogliano, C., Minei, R., Tino, A., Porcu, P., Marino, G., Tortiglione, C., Concas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+NMDA+receptors+in+Hydra%3A+a+biochemical+and+functional+study%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Putative NMDA receptors in Hydra: a biochemical and functional study.</a> Eur. J. Neurosci. 20, 2598-2604 (2004).</li>
<li>Alzugaray, M. E., Adami, M. L., Diambra, L. A., Hernandez-Martinez, S., Damborenea, C., Noriega, F. G., Ronderos, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allatotropin%3A+An+ancestral+myotropic+neuropeptide+involved+in+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Allatotropin: An ancestral myotropic neuropeptide involved in feeding.</a> PLoS ONE. 8, (2013).</li>
<li>Bellis, S. L., Laux, D. C., Rhoads, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+Hydra+glutathione+binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of Hydra glutathione binding proteins.</a> FEBS Lett. 354, 320-324 (1994).</li>
<li>Lenhoff, H. M. The discovery of the GSH receptor in Hydra and its evolutionary significance. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLenhoff%2C+HM+%22Glutathione+in+the+Nervous+System%22">Glutathione in the Nervous System</a>. Shaw, C. A. , Taylor&Francis. Bristol. 25-43 (1998).</li>
<li>Venturini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hydra+GSH+receptor.+Pharmacological+and+radioligand+binding+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Phys.+C%22%5BJournal%5D)">The hydra GSH receptor. Pharmacological and radioligand binding studies.</a> Comp. Biochem. Phys. C. 87, 321-324 (1987).</li>
<li>Reddy, P. C., Barve, A., Ghaskadbi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Description+and+phylogenetic+characterization+of+common+hydra+from+India%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Sci%22%5BJournal%5D)">Description and phylogenetic characterization of common hydra from India.</a> Curr. Sci. 101, 736-738 (2011).</li>
<li>Horibata, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+catabolic+pathway+of+glycosphingolipids+in+a+hydrozoan%2C+Hydra+magnipapillata.+Involving+endoglycoceramidase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Unique catabolic pathway of glycosphingolipids in a hydrozoan, Hydra magnipapillata. Involving endoglycoceramidase.</a> J. Biol. Chem. 279, 33379-33389 (2004).</li>
<li>Koizumi, O., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rise+of+feeding+threshold+in+satiated+Hydra%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Rise of feeding threshold in satiated Hydra.</a> J. Comp. Physiol. 142, 75-80 (1981).</li>
<li>Bellis, S. L., Kass-Simon, G., Rhoads, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+characterization+and+detergent+solubilization+of+the+putative+glutathione+chemoreceptor+from+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Partial characterization and detergent solubilization of the putative glutathione chemoreceptor from hydra.</a> Biochemistry. 31, 9838-9843 (1992).</li>
<li>Morita, H., Hanai, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taste+receptor+proteins+in+invertebrates+-+with+special+reference+to+glutathione+receptor+of+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">Taste receptor proteins in invertebrates - with special reference to glutathione receptor of hydra.</a> Chem. Senses. 12, 245-250 (1987).</li>
<li>Colasanti, M., Venturini, G., Merante, A., Musci, G., Lauro, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+involvement+in+Hydra+vulgaris+very+primitive+olfactory-+like+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide involvement in Hydra vulgaris very primitive olfactory- like system.</a> Journal of Neurosci. 17, 493-499 (1997).</li>
<li>Kuhn, A., Tsiairis, C. D., Williamson, M., Kalbacher, H., Grimmelikhuijzen, C. J., Holstein, T. W., Gründer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+homologous+subunits+form+a+high+affinity+peptide-gated+ion+channel+in+Hydra%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Three homologous subunits form a high affinity peptide-gated ion channel in Hydra.</a> J. Biol. Chem. 285, 11958-11965 (2010).</li>
<li>Wang, M., Yao, Y., Kuang, D., Hampson, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+family+C+G-protein-coupled+receptors+by+the+tripeptide+glutathione%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Activation of family C G-protein-coupled receptors by the tripeptide glutathione.</a> J. Biol. Chem. 281, 8864-8870 (2006).</li>
<li>Ruggieri, R. D., Pierobon, P., Kass-Simon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pacemaker+activity+in+hydra+is+modulated+by+glycine+receptor+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Phys.+C%22%5BJournal%5D)">Pacemaker activity in hydra is modulated by glycine receptor ligands.</a> Comp. Biochem. Phys. C. 138, 193-202 (2004).</li>
<li>Ramazani, R. B., Krishnan, H. R., Bergeson, S. E., Atkinson, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+automated+movement+detection+for+the+analysis+of+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Meth%22%5BJournal%5D)">Computer automated movement detection for the analysis of behavior.</a> J. Neurosci. Meth. 162, 171-179 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir rakip mali çıkar beyan etmemektedir.

Hydra davranışı Beslenme Metazoan&#39;da en atalarının duyusal sistemlerinden birini temsil eder. Nematosist destekli av yakalama sonra yayımlanan kabuklu sıvısında GSH varlığı uzun zaman önce 1 tespit edildi, ancak GSHR protein ne de olası kodlayan gen / ler ne hidra bugüne kadar karakterize edilmiştir. Birkaç deneme GSH hidra 8, 14, 15, bağlama proteinleri karakterize etmek için yapılmıştır. Ancak, bu farazi reseptör proteinlerin kimlik besleme reaksiyona katkıda bulunması olasıdır karanlık ve ço...

Hydra, avı yakalamak için indirgenmiş glutatyonu (GSH) tespit etmek için sinir sistemine ve kemosensasyona sahip en ilkel organizmadır1. Nematod, kabuklular, böcek larvaları, kurbağa yavruları ve yumurtadan yeni çıkmış balıklar gibi çeşitli hayvanlarla beslenir1. Bu av organizmalarının hareketi, avın2. içine yerleştirilen hidradan nematokist adı verilen acı kapsüllerinin mekanosensoriyel boşalmasına neden olur. Yaralı avdan salınan sıvıda bulunan GSH, daha sonra avı ağza doğru getirmek için dokunaçların kıvrılmasını, ağzın açılmasını ve bunun sonucunda avın yutulmasını içeren hidradaki beslenme tepkisini aktive eder. Dopamin3, glutamat4, GABA, glisin5, NMDA reseptörleri6 ve allatotropin7 gibi çoklu moleküllerin hidradaki beslenme tepkisinde rol oynadığı gösterilmiştir. Ayrıca, GSH tarafından indüklenen kemosensoriyel yanıtın, hayvanın beslenme durumu tarafından modüle edildiği, açlıktan ölen hidranın gelişmiş beslenme tepkisi1 sergilediği gösterilmiştir. GSH duyarlılığındaki böyle bir artış biyolojik olarak önemlidir, çünkü açlık altında hidranın avını daha yüksek hassasiyette bulması gerekir. 
GSH tarafından indüklenen beslenme yanıtı mikroskop altında net bir şekilde gözlemlenebilse de, besleme yanıtı gözlemlerini ölçmek için tipik olarak kullanılan yöntemler nicel değildir. Vakaların çoğunda, hidranın ağzının açık kaldığı süre, beslenme tepkisinin bir ölçüsü olarak alınmıştır8,9; başka bir durumda ise nicelik, beslenme tepkisini10 gösteren bir popülasyondan çıkan hidra sayısına dayanıyordu. Bununla birlikte, hidra poliplerinin ağız açılma süresini gözlemlemek zahmetlidir ve gözlemler sırasında ağız oryantasyonunun yönü gibi kontrol edilemeyen parametrelerin neden olduğu değişikliklere tabidir. Benzer şekilde, beslenme yanıtı nicel bir parametre olduğundan, popülasyon temelli yaklaşımlar, bireysel gözlemcinin görüşü veya gözlemsel yanlılığından kaynaklanan varyasyonlara/hatalara tabidir. Bu sorunları aşmak için, dokunacın apikal ucunun hidra polipinin ağzından olan mesafesine dayalı olarak hidradaki (Hydra vulgaris Ind-Pune11) beslenme tepkisinin nispi nicelleştirilmesi için bir yöntem geliştirdik.

<table><tbody><tr><td>Soğutmalı İnkübatör</td><td>Panasonic&nbsp;</td><td>MIR-254-PE</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Leica</td><td>S8AP0&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Leica için kamera</td><td>&nbsp;</td><td>EC3</td><td></td></tr><tr><td>Azaltılmış glutatyon</td><td>Sigma</td><td>G4251</td><td>4 ° C'de saklanır. Oksidasyonu önlemek için açmadan önce şişeyi oda sıcaklığına getirin</td></tr><tr><td>Görüntü düzenleme programı</td><td>GIMP</td><td>Sürüm 2.8</td><td></td></tr></tbody></table>

hydra glutatyon kaynaklı besleme tepki Ölçüm

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Hydra, avı yakalamak için indirgenmiş glutatyonu (GSH) tespit etmek için sinir sistemine ve kemosensasyona sahip en ilkel organizmalar arasındadır. Av organizmalarının hareketi, avın içine yerleştirilen hidradan nematokistler adı verilen acı veren hücrelerin mekanosensoriyel boşalmasına neden olur. Avı ağza doğru getirmek için dokunaçların kıvrılmasını, ağzın açılmasını ve bunun sonucunda avın yutulmasını içeren hidradaki beslenme tepkisi, yaralı avdan salınan sıvıda bulunan GSH tarafından tetiklenir. Bugüne kadar bilinmeyen hidradaki beslenme yanıtının moleküler mekanizmasını tanımlayabilmek için, besleme yanıtını ölçmek için bir test oluşturmak gerekir. Burada, dokunaçların apikal ucu ile hidra ağzı arasındaki mesafenin ölçüldüğü ve GSH ilavesinden önce ve sonra bu mesafenin oranının belirlendiği besleme yanıtının niceliklendirilmesi için basit bir yöntem açıklanmaktadır. Göreceli dokunaç yayılımı olarak adlandırılan oranın, beslenme tepkisinin bir ölçüsünü verdiği bulundu. Bu test, açlıktan ölen hidranın günlük beslenen hidraya kıyasla gelişmiş bir beslenme tepkisi gösterdiği bir açlık modeli kullanılarak doğrulandı.

Glutatyon Hidra av içine çeken amacıyla ağzına doğru dokunaçlarıyla buruşmasına sergilemeye neden olur. Dokunaçlarıyla böyle kıvırma yakın hypostome için dokunaçlarıyla apikal uçlarını getiriyor. Bu Hücrelerin yayılması azalma veya Hücrelerin ve hypostome (Şekil 1), apikal ucu arasındaki doğrusal mesafe ile sonuçlanmaktadır. Göreceli tentacle yayılması, ya da ortalama ahtapotun kollarından oranı önce yayılmış ve glutatyon ekledikten sonra, zamanla azaltan çoklu polipler arasında ortalama. Nispi Hücreler...

Burada, indirgenmiş glutatyon formunun neden olduğu hidradaki beslenme tepkisinin nicelleştirilmesi için basit bir tahlili açıklıyoruz. Bu tahlil, dokunacın apikal ucu ile hidranın ağzı arasındaki mesafenin ölçülmesine dayanır.

Hydra Glutatyon kaynaklı Besleme Tepki Ölçüm

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Bu videoda, Hydra'daki beslenme davranışını ölçmek için bir yöntem açıklıyoruz. İndirgenmiş glutatyon formuna yanıt olarak, Hydra çeşitli hayvanlarda, nematodlarda, kabuklarda ve yumurtadan yeni çıkmış balıklarda beslenir. Bu iki hücreli katmanlı hayvanın dış katmanında nematosist adı verilen özelleşmiş hücreler bulunur.Nematokistlerin, çevredeki sıvıdaki avın hareketi ile aktive edildiğinde, tel çekme ipliklerinin boşalmasına neden olan tetikleyicileri vardır. Isırma iplikleri avın içine yerleştirilir. Yaralı av glut glikoz salgılar.İyon hidro, çevredeki sıvıdaki glutatyonu tespit etmek için bir kemoterapi hissine sahiptir. Bu, sinir sistemini içeren bir beslenme davranışını tetikler. Hydra'daki beslenme davranışı, avı bir hiperskopa doğru getirmek, ağzın açılmasını ve avın yutulmasını sağlamak için dokunaçların kıvrılmasını içerir.Aslında, çevreye glut iyonu eklemek, avın yokluğunda bile hidrada beslenme reaksiyonuna neden olur. Kemoterapi hissi ve sinir sisteminin etkileşimini anlamak için davranışı nicelleştirmemiz ve doğru ve güvenilir ölçümler oluşturmamız gerekir. Daha önceki birkaç raporda, ağzın hidro açık kaldığı süre, beslenme tepkisinin bir ölçüsü olarak alınmıştır, ancak hidro poliplerde ağız açılma süresini gözlemlemek sıkıcıdır ve gözlemler nedeniyle ağzın yönü gibi kontrol edilemeyen parametrelerin neden olduğu değişikliklere tabidir.Davranışın nicelleştirilmesinin bir başka yöntemi, beslenme tepkisini gösteren bir popülasyondaki hidra sayısına dayanır. Bununla birlikte, beslenme yanıtı bireysel bir nicel parametre olduğundan, popülasyona dayalı yaklaşımlar, bireysel gözlemcinin görüşünün neden olduğu öznel varyasyonlardır. Burada anlattığımız alternatif yöntemin temel avantajları, uygulanmasının çok kolay ve yüksek oranda tekrarlanabilir olmasıdır.Hidrayı 12 saatlik ışık altında 18 santigrat derecede tutun. Bir ortamda 12 saatlik karanlık döngüler bir cam kapta bulunur ve beslenme tepkisini ölçmek için günlük olarak EMIA ile beslenir. Bir olgun hidro polipi 24 Kuyulu bir plakanın kuyusuna aktarın, bir pivot kullanarak artık ortamı kuyudan çıkarın.Bu, plakayı eğerek, fazla ortamı atarak ve ardından hemen 500 mikrolitre taze ortam ekleyerek kolaylaştırılır Glutatyon Çözeltisinin Hazırlanması. Hidro ortam kullanılarak dokuz mikromolar bir glutatyon çözeltisi hazırlanır. Unutmayın, glutatyon çözeltisi oksidasyona eğilimlidir, bu nedenle her zaman taze hazırlanmış glutatyon çözeltisi kullanın.Her Deney için, plakayı bir mikroskobun görüntüleme platformuna aktarın. Görüntü kaydı için hüküm sahibi olmak, hidro polipin davranışının zıt arka plana karşı net bir şekilde görüntülenebilmesi için koyu bir arka plan kullanın. Polipin, rahat durumda bir hidra görüntüsü yakalayan kuyunun orta kısmı boyunca yerleştirildiğinden emin olun.Bu bir sıfır zaman noktası gözlemi olacaktır. Kuyuda üç mikromolar nihai konsantrasyona ulaşmak için hızlı bir şekilde dokuz mikromolar glutatyon çözeltisi ekleyin. Glutatyon solüsyonu ekledikten hemen sonra zamanlayıcıyı başlatın ve büyütme ayarlarını değiştirmeden dört ila beş dakika boyunca her 15 veya 30 saniyede bir görüntü yakalayın.Ölçümler için gim versiyon iki, gim kullanıyoruz. GNU Görüntü işleme programı, internetten ücretsiz olarak indirilebilen bir yazılımdır. Yakalanan görüntülerin her birini gim olarak açın.Bu program, menü araçlarından kullanılabilen bir ölçüm aracına sahiptir. Hiperler arasındaki mesafeyi ölçmek, stoma, dokunaçların her birinin apikal ucu bu araç kullanılarak ölçülebilir. Bu mesafeye dokunaç yayılması denir.Glutatyondan önce ve sonra her polip için ortalama dokunaç yayılımını hesaplayın. Sıfır zamanda ortalama dokunaç yayılımının oranını hesaplayın. Sonraki zaman noktalarının her birinde buna işaret edin.Buna göreceli dokunaç yayılımı diyelim. Açlık için en az 20 Polip için bu tür ölçümler yapın. Birkaç hidro polipi ayrı bir cam kaseye aktarın ve beş gün boyunca beslemeyin.Deney günü kontrol poliplerini günlük olarak artia ile besleyin. Hydra'nın kontrol grubunu bir R için artia ile besleyin ve bu hidrayı sonraki deneyler için kullanın. Alternatif zaman, aç ve kontrollü hidro poliplerin her birinin ölçümleri nedeniyle herhangi bir yanlılığı önlemek için, bu videoda daha önce açıklanan yöntemle kontrol grubundan alınan hidra ile karşılaştırıldığında aç hidranın beslenme tepkisini ölçün.Glutatyon, hidranın dokunaçların ağza doğru kıvrılmasını sergilemesine neden olur. Bu tür bir kıvrılma, dokunaçların apikal uçlarını hipo fırtınaya yaklaştırır. Bu, dokunaçların apikal uçları ile hiper fırtına veya dokunaç yayılımı arasındaki doğrusal mesafenin azalmasına neden olur.Bağıl dokunaç, orta eklendikten sonra yayılır. Glutatyon eksikliği sadece geçici olarak azalır. Yaklaşık bir dakika içinde bire geri döner.Açlığın, glutatyonun neden olduğu beslenme davranışının artmasına neden olduğu bilinmektedir. Glutatyon eklendikten bir dakika sonra yayılan dokunaç, personel grubu için tok gruba kıyasla önemli ölçüde daha düşüktü. Tüm hayvanlar yiyecekleri tespit etmek için kemoterapi hissi kullanır.Hydra, yaralı avdan salınan glutatyon şeklinde kimyasal bir sinyal kullanır, Beyin benzeri bir yapıya sahip olmayan basit bir sinir sistemine sahiptir, bu nedenle kemoterapi hissinin moleküler mekanizması ve beslenme durumuna bağlı modülasyonu da basit olabilir. Bu mekanizmayı anlamak, daha yüksek hayvanlarda beslenme düzenlemesinin evrimine ışık tutabilir. Bununla birlikte, ne glutatyonu bağlayabilen reseptör ne de aşağı akış sinyal kaskadının diğer bileşenlerini bu tarihe kadar Haida'da rapor etmemiştir.Yaygın kemos duyusal sinyal yollarının farmakolojik inhibitörleri ve bu tür sinyal proteinlerinin ve glutatyon reseptörünün ekspresyonunu değiştirmek için ileri moleküler biyolojik tekniklerin kullanılması, beslenmenin moleküler mekanizmasını anlamak için güçlü araçlar olabilir. Bununla birlikte, Hydra'da, bu tür deneysel araştırmaların neden olduğu herhangi bir değişikliğin kapsamını anlamak için değiştirilmiş beslenme davranışının güvenilir bir ölçüsüne ihtiyaç vardır. Burada sadece güvenilir değil, aynı zamanda gerçekleştirmesi kolay ve yüksek oranda tekrarlanabilir bir yöntem sunduk.

measuring-glutathione-induced-feeding-response-in-hydra

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video, mikroglia kullanarak nanopartiküllerin nörotoksik etkilerini değerlendirmek için bir yöntem göstermektedir. Mikroglia'yı nanopartiküllerle aktive etme, mikroglia'dan türetilmiş proinflamatuar sitokinleri izole etmek için şartlandırılmış medyayı filtreleme ve şartlandırılmış besiyeri ile hipotalamik nöron toksisitesini test etme adımlarını ana hatlarıyla belirtir.

Mikroglia'yı Vekil Biyosensör Olarak Kullanarak Nöronlarda Nanopartikül Kaynaklı Toksisitenin Belirlenmesi

Bu makale FRET kullanarak canlı hücreler glutamin dinamiklerini izlemek için nasıl gösterecektir. Genetik olarak kodlanmış sensörler hücrealtı çözünürlükte biyolojik moleküllerin gerçek zamanlı izlenmesini sağlar. Deneysel tasarım, deneysel ayarları teknik detayları ve post-deneysel analizler için düşünceler genetik olarak kodlanmış glutamin sensörler için ele alınacaktır.

Genetiği Kodlanmış Sensörleri kullanarak glutamin Akı Görüntüleme

Bölücü hücreleri öldüren bitki kaynaklı bir toksin olan kolşisinle çift tedaviyle sinirsiz Hydra vulgaris üretilebilir. Bu Hydra tek başlarına beslenemez veya yemez. Bu yazıda, sinirsiz Hydra vulgaris'in laboratuarda uzun süreli bakım için geliştirilmiş bir yöntem anlatılmaktadır.

Sinirsiz Kuşak ve Uzun Süreli Bakım<em&gt; Hydra</em

Nicel gıda alımı deneyleri boyalı gıda ile sağlam sağlamak ve yüksek üretilen iş besleme motivasyon değerlendirileceği anlamına gelir. Gıda tüketimi tahlil ile thermogenetic birleştiren ve optogenetic ekranlar iştah yetişkin temel sinir devreleri araştırmak için güçlü bir yaklaşımdır Drosophila melanogaster.

Nicel gıda alımı deneyleri birleştirerek ve zorla iştah Drosophila içinde çalışmaya nöronların aktive

Bu el yazması oksidatif stres xenobiotic kaynaklı incelenmesi için genetik olarak kodlanmış fluorogenic gazetecilere canlı hücre görüntüleme bir uygulamada kullanımını açıklar. Bu deneysel yaklaşım eşsiz kronolojik zamanmekansal çözünürlük, duyarlılık ve özgüllük eksiklikleri toksikolojik oksidatif stres tespiti için kullanılan geleneksel yöntemlerden birçoğu kaçınırken sunmaktadır.

Genetik olarak kodlanmış Fluorogenic sensörleri kullanarak toksikolojik oksidatif stres ilişkin Değerlendirmeler yaklaşımlar görüntüleme

Bu makalede, ayrılmış primer hipokampal kültürlerde glutamat reseptörü (GluR) kaçakçılığı çalışması için bir yöntem sunulur. Endojen veya aşırı ifade reseptörlerinin farmakolojik yaklaşımlar ile birlikte etiketlenmesi için antikor beslemeli bir yaklaşım kullanarak, bu yöntem, GluR yüzey ifadesini düzenleyen moleküler mekanizmaların belirlenmesi için izin verir veya geri dönüşüm süreçleri.

Disanated primer hipokampal kültürlerde glutamat reseptör kaçakçılığı çalışması için antikor beslenme yaklaşımı

Burada açıklanan, farklı makro besin kalitesinde diyetlere maruz kalan Drosophila melanogaster larvaları tarafından belirli bir zaman aralığında yenen yiyecek miktarının kolorimetrik olarak ölçülmesini sağlayan bir protokoldür. Bu tahliller nöronal termogenetik ekran bağlamında gerçekleştirilir.

Drosophila Larvaları Kullanılarak Termogenetik Nöronal Ekranda Makro besin alımının nicelleştirilmesi

Bu makalede, konfokal canlı mikroskopi kullanılarak primer hipokampal ve kortikal nöronlarda bazal redoks durumundaki farklılıkları ve akut pertürbasyonlara redoks yanıtlarını belirlemek için bir protokol açıklanmaktadır. Protokol, diğer hücre tiplerine ve mikroskoplara minimum değişiklikle uygulanabilir.

Primer Nöronlarda Mitokondriyal Glutatyon Redoksu Durumunun Oranmetrik Gösterge Kullanılarak Canlı Görüntülenmesi

Hem oksitlenmiş hem de indirgenmiş glutatyon formlarının (sırasıyla GSSG ve GSH) miktar tayini, Orto-ftalaldehit (OPA) kullanılarak elde edilmiştir. OPA, GSH'ye konjuge edildiğinde yüksek oranda floresan hale gelir, ancak indirgenene kadar GSSG'yi konjuge edemez. Burada, normalizasyon için protein miktar tayini kullanarak her ikisini de ölçmek için multiparametrik bir tahlili açıklıyoruz.

İn Vitro Kültürlenmiş Memeli Hücrelerinde Orto-ftalaldehit Kullanılarak Oksitlenmiş ve İndirgenmiş Glutatyon Formlarının Hızlı Miktar Tayini

Bu protokol, sıvı kültürdeki bakterilerin klirensinin ölçülmesine dayalı olarak Caenorhabditis elegans besleme hızını ölçmek için bir testi tanımlar.

Bakteriyel Klerensi Ölçerek Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının Ölçülmesi

Zaman geçişli görüntüleme kullanılarak, Hydra kürelerinin tam yenilenme süreci takip edilebilir. Bu protokol, Hydra sferoidlerinin oluşumunu tanımlar, çeşitli montaj stratejilerini tartışır ve dönen disk konfokal mikroskopisi ile ışık tabakası floresan mikroskopisi kullanılarak uzun süreli, canlı görüntülemenin nasıl yapılacağını detaylandırır.

Yenilenen Hydra Sferoidlerinin Hazırlanması ve Canlı Görüntülemesi

Keşfedin Hydra'da glutatyon kaynaklı besleme tepkisini ölçme yöntemini. Tentakel ve ağız arası mesafe ölçülerek beslenme davranışı nicelendirilir. Bu güvenilir analiz nörobiyoloji araştırmaları için kullanılabilir.

Hydra Glutatyon kaynaklı Besleme Tepki Ölçüm

Daha fazla video keşfet