Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for <em>In Vitro</em> Myelination Assays

Haley M. Peckham; Anita H. Ferner; Lauren Giuffrida; Simon S. Murray; Junhua Xiao

doi:10.3791/52179

Üretim ve seçici transduce İlköğretim Oligodendrosit Öncü Hücreler için Lentivirüste kullanımı iç...

JoVE Journal
Developmental Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Developmental Biology

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Üretim ve seçici transduce İlköğretim Oligodendrosit Öncü Hücreler için Lentivirüste kullanımı için İn Vitro Myelinasyon Tahliller

Full Text

15,063 Views

10:00 min

January 12, 2015

DOI: 10.3791/52179-v

Haley M. Peckham¹, Anita H. Ferner¹, Lauren Giuffrida¹, Simon S. Murray^1,2, Junhua Xiao^1,2

¹Department of Anatomy and Neuroscience,The University of Melbourne, ²The Florey Institute of Neuroscience and Mental Health Research,The University of Melbourne

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Burada, oligodendrosit öncü hücrelerini, merkezi sinir sistemi miyelinasyonunun in vitro modeli aracılığıyla oligodendrositlerdeki rollerini spesifik olarak sorgulamak amacıyla, ilgilenilen proteinleri aşırı eksprese etmek üzere viral olarak manipüle etmek için esnek ve stratejik bir temel sunan protokoller sunuyoruz.

Bu prosedürün genel amacı, oligodendrosit öncü hücrelerini veya OPC'leri viral olarak manipüle etmek, ilgilenilen proteinleri aşırı eksprese etmektir. CNS Miyelinasyon Ulusu'nun in vitro çalışması için, bu ilk olarak bir lentiviral vektörün klonlanmasıyla gerçekleştirilir. Sonraki adımlar, lentivirüsü üretmek ve deney için en uygun viral konsantrasyonu belirlemektir.

Bunu takiben, diseke edilmiş ve kültürlenmiş OPC'ler lentivirüs ile transdüksiyona tabi tutulur. Son adım, transdüksiyona uğrayan OPC'leri DRG'den diseke edilen kültürlenmiş nöronlar üzerine tohumlamaktır. Sonuç olarak, miyelinizan kokültürler, western blot analizi ile miyelin protein ekspresyonu açısından değerlendirilir ve immün boyama ile miyelinli aksonal segmentlerin oluşumu için görselleştirilir.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos