Gri tonlama Analizi İle Farelerde Saç Dökülmesi Kantitatif Analiz Yeni Bir Teknik

Bu prosedürün genel amacı, ışık emilimini kullanarak saç yoğunluğunun bir miktarını sağlamaktır. Bu, önce hayvanların bir jel görüntüleyicide fotoğraflanmasıyla gerçekleştirilir. Sonraki adımlar, fotoğraf üzerinde bir ilgi alanı tanımlamak ve ilgi alanı içindeki ışık emilimini belirlemektir.

Daha sonra ışık emilimi bir fotoğraf standardıyla karşılaştırılır. Sonuç olarak, bir müdahalenin saç büyümesi üzerindeki etkilerini göstermek için benzer şekilde muamele edilen hayvanlar arasında ışık emiliminin ortalaması alınabilir. Bu tekniğin temel avantajları, tarafsız, ölçülebilir ve tekrarlanabilir olmasıdır.

Bu son derece önemlidir çünkü sonuçların istatistiksel anlamlılığını belirlemek için standartları, Inova gibi istatistiksel teknikleri kullanmanıza izin verir. Bu protokol için, yansıtıcı fotoğrafçılık için yerleşik bir ışık kaynağına sahip bir jel görüntüleyici kullanın. Bu, iyi bir ışık homojenliği sağlarken, trans aydınlatma, analiz için uygun olmayan siluet oluşturur.

Jel görüntüleyiciyi hazırlayarak başlayın, odağı ve görüş alanını ayarlayın. Bazı basılı metinleri kullanarak, bu gerçekten işe yaradığı için fare biraz odak dışında olabilir. İlgilenilen küçük bölgelerdeki nicelik hatalarını azaltmak için, ilgilenilen bölgede mükemmel optik ortalama elde etmek amacıyla fotoğraflanan bölge boyunca ışık kaynağının tekdüzeliğini doğrulayın.

Sonra, hayvanı hazırlayın. Hızlı başlangıçlı ve kısa etki süresine sahip bir anestezi seçin ve hayvanları fotoğraf çekimi için hareketsiz tutacak kadar verin. Şimdi hayvanları görüntüleyiciye dikey olarak ve mümkün olduğunca paralele yakın bir şekilde yerleştirin.

Sırt fotoğrafları için, hayvanları uzuvları uzatılmış olarak yüzüstü pozisyona getirin. Ventral fotoğraflar için hayvanları sırtüstü pozisyona getirin. Yanal olarak döndürülmediklerinden emin olun.

Absorpsiyon değerleri görüntüler arasında çekilebilir, ancak makine bunun için tasarlanmamıştır. Bu nedenle, bir gri ölçek standardı eklemek, verileri derlerken absorpsiyon değerlerini normalleştirmemize olanak tanır. Şimdi gri tonlama standardını fotoğraflanan bölgeye yerleştirin.

Ardından hazneyi kapatın ve kameradaki hazneye girebilecek ortam aydınlatmasını azaltın. F stop'u, ilgilenilen alanın aşırı doygun veya az pozlanmamış olmasına neden olacak bir pozlamaya ayarlayın. Sonra bir fotoğraf çekin.

F durağı, görüntü doygun olacak şekilde seçilirse, gri tonlama değeri değere sabitlenir ve B hiçbir şekilde kullanılmaz. Ardından, ilgi alanını ve standardı doğrusal bir pozlama aralığında tutarak F.Stop'u bir değiştirin ve fotoğraf tamamlanmış olarak ikinci bir fotoğraf çekin. Hayvanları bir ısınma masasına koyun ve iyileşene kadar izleyin.

Sternal yaslanmalı. Daha sonra hayvanları kafeslerine ve nihayetinde tam iyileşme için vivaryuma geri koyun. Jel görüntüleme yazılımını kullanarak ışık emilimini ölçmek için, bütün bir hayvan sırtı görünümü için hayvanların görüntüleri üzerinde ilgilenilen bölgeleri işaretleyin.

Üst ekstremitelerden alt ekstremitelere kadar mümkün olduğunca yanal olarak uzanan bir boşluğun ana hatlarını çizmek için dikdörtgen bir görüntü, oval bir görüntü veya serbest bir el aleti kullanın. Bütün bir hayvan ventral görünümü için hayvanın sırtının kenar boşlukları içinde tutun. İki dikdörtgen kullanın.

Biri bakımlı olan pelvik bölgeyi örtmek için, diğeri ise tımarlı olmayan göğüs bölgesini örtmek için. Bir ilacın uygulandığı yer gibi daha küçük ilgi alanları da gerektiği gibi işaretlenebilir. İkinci olarak, ilgilenilen bölgeyi gri tonlama absorpsiyon standardında işaretleyin.

Ardından, fotoğraflar arasında karşılaştırma yapmak için işaretlenmiş her bir ilgi alanından emilimi kaydedin. Absorpsiyona maruz kalmanın günlük günlüğü ilişkisini kullanarak absorpsiyon seviyelerini arka plan standardına göre normalleştirin. Bunu yapmak için, absorpsiyon kütüğüne karşı maruz kalma günlüğünün bir eğrisini çizin.

Gri tonlama absorpsiyon standardından elde edilen değerleri kullanarak, her fotoğrafın standardındaki varyasyonları aşağıdaki gibi ayarlayın. İlk olarak, ROI'yi okumak için F-stop'u ve referans için F-stop'u seçin ve okuma F-stop'unda tüm fotoğraflarda standardın ortalama absorpsiyonunu hesaplayın. Bu ortalama, referans standart değer veya RSV'dir.

Ardından, her fotoğraftaki okuma ve referans F-Stop ayarları arasındaki absorpsiyon farkını hesaplayın ve standart ve tanımlanan her ROI için aynı hesaplamaları yapın. Şimdi bir F-stop'tan gelen verileri kullanarak, gösterilen formülü kullanarak her bir ROI için düzeltilmiş absorpsiyonu hesaplayın. Bunu takiben, alopesi ADA'yı modelleyen C3 HHEJ aşılanmış farelerin farklı maruziyetlerde açıklanan yöntem kullanılarak analiz edildiği verileri analiz etmek için standart istatistiksel yöntemler uygulayın.

Örtüşmeyen yatırım getirisindeki varyasyonlar beklendiği gibi sıkı bir şekilde ilişkilendirildi. Benzer karşılaştırmalar, üç haftalık bir süre boyunca aynı sıkı korelasyonu üretti. Fareler, beklenen saç dökülmelerini ölçmek için görüntülendi.

Görüntülenen farelerin %80'i bu zaman diliminde saç dökülmesi gösterdi. Karşılaştırıldığında, normal C 57 siyah altı fare, aynı zaman diliminde herhangi bir saç kaybı göstermedi. İkinci bir çalışmada, kemoterapiye bağlı alopesi, tarif edilen teknik kullanılarak ölçüldü.

Fareler üç hafta boyunca siklofosfamid ile tedavi edildi ve iki ay sonra kontrollere kıyasla önemli saç dökülmesi gösterdiler. Ana kopya oluşturulduktan sonra, her görüntü beş dakikadan daha kısa sürede analiz edilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, standart bir jel görüntüleme sistemi kullanarak kemirgenlerde saç büyüme miktarını nasıl ölçeceğinizi iyi anlamış olmalısınız.