Name: Gri tonlama Analizi İle Farelerde Saç Dökülmesi Kantitatif Analiz Yeni Bir Teknik (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Öğrenin farelerde saç dökülmesini gri tonlama analizi ile niceliksel olarak değerlendirme yöntemini. Bu teknik, alopesi araştırmalarında yeni tedavilerin etkinliğini tarafsız ve tekrarlanabilir şekilde ölçmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışmalara destek sağladıkları için Montefiore Çocuk Hastanesi, Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Bölümü'ne teşekkür ederiz. Ulusal Alopesi Areata Vakfı'na, C3H/HeJ aşılı farelerle yapılan çalışmalara maddi destek sağladığı için teşekkür ederiz.

Etik Beyanı: hayvanları içeren tüm çalışmalar kurumun IACUC tarafından onaylanmış olması gerekir (aşağıdaki veriler için, protokoller Montefiore IACUC, protokol # 11-6-240 ve # 13-7-100 tarafından onaylanmıştır). Fotoğraf sırasında hareketsiz tutarak tek bir amaç için belirtilen Hayvanlar hafif anestezi sağlanır, bu protokol için gerekli hiçbir acı prosedürler vardır. Fotoğraf 1. kazanılması <ol><li> Basılı metin ile kağıt kullanılarak jel görüntüleyici için görüş Set odak ve saha. Fotoğraflandı bölgede ışık kaynağının tekdüzelik doğrulayın. , Bütünlüğü sağlamak bir yansıtıcı fotoğrafçılık için ışık kaynağı yerleşik bir jel görüntüleyici kullanmanıza yardımcı olmak için. Bu daha gri tonlama analiz için uygun değildir hayvanın bir siluet yaratacak gibi, bir transillüminasyonu ışık kaynağı kullanmayın. NOT: Bu biraz ilgi (ROI) bölgede optik ortalamasının sağlayan odak, dışarı fare koyun ve olacak olacakÇevrede çok küçük (yani, &lt;10 piksel) bölgeler için quantal hataları azaltmaya yardımcı olur. Ilgi büyük bölgeleri ayarı odaklanarak bu reşit etkilenmez, ne de hayvanın büyüklüğüne farklılıklardan etkilenecektir. </li><li> Ketamin (100 mg / ml) / ksilazin (20 mg / ml) ile hayvanların anestezisi (2: 1), bu hızlı anestezi etkisi ve hızlı bir iyileşme sağlar ve çok sayıda hayvan çekim için en uygun olarak. NOT: Hayvan hala fotoğraf izin için yeterli zaman Anestezi teyit edilir. Hayvanlar genellikle 10-15 dakika içinde bu ışık anestezi kurtarmak gibi, veteriner göz merhem kullanılmasını tavsiye etti. </li><li> (Yakın olarak mümkün paralel) dikey hizalama jel görüntüleyici üzerinde anestezi hayvanları yerleştirin. <ol><li> Dorsal fotoğrafları için, genişletilmiş uzuvları ile yüzüstü pozisyonda hayvanları yerleştirin. </li><li> Ventral fotoğrafları için, hayvanlar yanal döndürülmüş değil özen, yatar pozisyonda hayvanları yerleştirin. </li&gt; </ol></li><li> Fotoğraflanan bölgede gri tonlama standart yerleştirin. </li><li> Erişim kapağını kapatın. Önemli: Ortam ışığı maruz varyasyonları tanıtabilirsiniz. </li><li> Edinimi lineer aralığında ilgi bölgeyi yerleştirir bir pozlama F-stop Set (F-stop okuma). NOT: Görüntü doymuş nerede En sistem gösterecektir. </li><li> Fotoğraf çekmek. </li><li> Değişim artan ya da standart ve ilgi bölgesi hem satın alma (referans bir lineer aralıkta kalması, 1 F-stop azaltarak lineer aralığında ilgi bölgeyi yerleştirir başka pozlama ayarı F-stop F- dur). </li><li> Fotoğraf çekmek. </li><li> Fotoğrafçılık tamamlandıktan sonra, bir ısınma masaya hayvanları yerleştirin ve sternum yatma korumak kadar monitör. Kafeslerine hayvanları dönün. Kez tüm hayvanlar tamamen iyileşti vivaryum hayvanların grubu döndürür. </li></ol> Işık Emme 2. sayısallaştırılması &lt;/ P&gt; <ol><li> Hayvanların görüntülerde ilgi Mark bölgeleri jel görüntüleyici yazılımı sağlanan kullanarak. <ol><li> Bütün hayvan dorsal görünümü için, mümkün olduğunca yanal kadar uzanan, alt ekstremite, üst ekstremite uzanan dikdörtgen ya da oval bir görüntü kullanın şekilde Şekil 1A gösterildiği gibi kutunun hiçbir kısmı hayvanın arkasına ötesine uzanır. NOT: Bir de bir serbest elle çizim aracını kullanarak ilgi alanı işaretlemek olabilir. </li><li> Pelvik bölgeyi kapsayan bir ve Şekil 1B gösterildiği gibi göğüs bölgesini kapsayan bir: Bütün hayvan ventral görünüm için, 2 dikdörtgenler kullanın. </li><li> Uygun faiz, yani, ilaç uygulama yeri, işareti daha küçük bir bölge için. </li></ol></li><li> Gri tonlama emme standart faiz Mark bölge (ler). </li><li> Ilgi işaretli bölgelerin her Tutanak emilim. </li></ol> 3. Analiz Emme seviyeleri obtaineilgi alanlarının d fotoğrafları arasında karşılaştırma için arka standart normalize edilmesi gerekebilir. emilim maruz kalma ilişkisi log-log (yani, ilişki günlüğü (maruziyet arasındaki lineer) ve log (emme)) &#39;dir. Bu ilişkiyi kullanarak, ilgi bölgenin emme emilimleri farklı zaman noktalarında (bir çalışma protokolü kapsamında, yani seri ölçümler) alınan da dahil olmak üzere farklı fotoğraf arasında doğrudan karşılaştırılmasına olanak sağlayacak bir standart arka plan değerine normalize olabilir. Bu düzeltmeleri gerçekleştirmek için prosedür isteğe adımlar 3.1 ve 3.2 ayrıntılı. <ol><li> Gri tonlama emme standart elde edilen değerleri kullanarak günlük (absorpsiyon) vs log (maruziyet) ve (İsteğe bağlı) Arsa eğrisi. </li><li> Aşağıdaki gibi (İsteğe bağlı) Her fotoğrafın standart varyasyonları için ayarlayın: <ol><li> S belirlenen (referans için ve F-stop (adım 1.6 belirlendiği gibi) okumak için F-Stop seçin) 1.8 TEP. </li><li> Okuma F-durağında tüm fotoğraflarda standart ortalama emilimini hesaplayın. Bu ortalama Referans Standart Değeri (RSV) &#39;dir. </li><li> (Delta-YG-1, delta-YG-2 ... ..delta-YG-X) standardına (delta-S) ve her tanımlanmış ROI için her fotoğrafta okuma ve referans F-stop ayarları arasında emilim farkı hesaplayın </li><li> Aşağıdaki gibi her ROI için düzeltilmiş emilimi hesaplayın: Düzeltilmiş emilimini (ROI-X) = Emilimini (ROI-X) okuma F-durağında + (RSV - standardın emilimi okuma F-durdur) * (delta-ROI-X / ö = S) </li></ol></li><li> Deneysel verileri derlemek ve sürekli değişkenler için standart istatistiksel teknikler kullanılarak veri analizi yapmak (yani, ANOVA, t-testi). </li></ol>

<ol><li>McAndrews, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Hair+Loss+Association%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">American Hair Loss Association.</a> , 
 <a target="_blank" href="http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp">http://www.americanhairloss.org/men_hair_loss/introduction.asp</a> (2011).</li>
<li>Safavi, K. H., Muller, S. A., Suman, V. J., Moshell, A. N., Melton, L. J. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+alopecia+areata+in+Olmsted+County%2C+Minnesota%2C+1975+through+1989%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Incidence of alopecia areata in Olmsted County, Minnesota, 1975 through 1989.</a> Mayo Clin Proc. 70 (7), 628-633 (1995).</li>
<li>Hussein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy-induced+alopecia%3A+new+developments%5BTitle%5D)+AND+%22South+Med+J%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy-induced alopecia: new developments.</a> South Med J. 86 (5), 489-496 (1993).</li>
<li>Trueb, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotherapy-induced+hair+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Therapy+Lett%22%5BJournal%5D)">Chemotherapy-induced hair loss.</a> Skin Therapy Lett. 15 (7), 5-7 (2010).</li>
<li>Sato, N., Leopold, P. L., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+adenovirus-mediated+expression+of+Sonic+hedgehog+gene+on+hair+regrowth+in+mice+with+chemotherapy-induced+alopecia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Effect of adenovirus-mediated expression of Sonic hedgehog gene on hair regrowth in mice with chemotherapy-induced alopecia.</a> J Natl Cancer Inst. 93 (24), 1858-1864 (2001).</li>
<li>McGarvey, E. L., Baum, L. D., Pinkerton, R. C., Rogers, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+sequelae+and+alopecia+among+women+with+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Pract%22%5BJournal%5D)">Psychological sequelae and alopecia among women with cancer.</a> Cancer Pract. 9 (6), 283-289 (2001).</li>
<li>Baxley, K. O., Erdman, L. K., Henry, E. B., Roof, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alopecia%3A+effect+on+cancer+patients%27+body+image%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Nurs%22%5BJournal%5D)">Alopecia: effect on cancer patients' body image.</a> Cancer Nurs. 7 (6), 499-503 (1984).</li>
<li>Stough, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+effect%2C+pathophysiology%2C+and+management+of+androgenetic+alopecia+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clin+Proc%22%5BJournal%5D)">Psychological effect, pathophysiology, and management of androgenetic alopecia in men.</a> Mayo Clin Proc. 80 (10), 1316-1322 (2005).</li>
<li>Ogunmakin, K. O., Rashid, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alopecia%3A+the+case+for+medical+necessity%5BTitle%5D)+AND+%22Skinmed%22%5BJournal%5D)">Alopecia: the case for medical necessity.</a> Skinmed. 9 (2), 79-84 (2011).</li>
<li>Olsen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+clinical+trial+of+5%25+topical+minoxidil+versus+2%25+topical+minoxidil+and+placebo+in+the+treatment+of+androgenetic+alopecia+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Acad+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A randomized clinical trial of 5% topical minoxidil versus 2% topical minoxidil and placebo in the treatment of androgenetic alopecia in men.</a> J Am Acad Dermatol. 47 (3), 377-385 (2002).</li>
<li>Rossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1+mg+daily+administration+on+male+androgenetic+alopecia+in+different+age+groups%3A+10-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Ther%22%5BJournal%5D)">1 mg daily administration on male androgenetic alopecia in different age groups: 10-year follow-up.</a> Dermatol Ther. 24 (4), 455-461 (2011).</li>
<li>Gibbons, R. D., Fiedler-Weiss, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer-aided+quantification+of+scalp+hair%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Clin%22%5BJournal%5D)">Computer-aided quantification of scalp hair.</a> Dermatol Clin. 4 (4), 627-640 (1986).</li>
<li>Fleming, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+a+structural+analysis+of+dermatoscopic+imagery%5BTitle%5D)+AND+%22Comput+Med+Imaging+Graph%22%5BJournal%5D)">Techniques for a structural analysis of dermatoscopic imagery.</a> Comput Med Imaging Graph. 22 (5), 375-389 (1998).</li>
<li>Chamberlain, A. J., Dawber, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+evaluating+hair+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Australas+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods of evaluating hair growth.</a> Australas J Dermatol. 44 (1), 10-18 (2003).</li>
<li>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale*. , Imatest. 
 
 <a target="_blank" href="http://www.imatest.com/docs/q13/">http://www.imatest.com/docs/q13/</a> Forthcoming.</li>
<li>Freyschmidt-Paul, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+alopecia+areata+in+C3H%2FHeJ+mice+with+the+topical+immunosuppressant+FK506+%28Tacrolimus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Treatment of alopecia areata in C3H/HeJ mice with the topical immunosuppressant FK506 (Tacrolimus).</a> Eur J Dermatol. 11 (5), 405-409 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Matsushita, O., Sakon, J., Gensure, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+prevention+of+chemotherapy-induced+alopecia+with+PTH-CBD%2C+a+collagen-targeted+parathyroid+hormone+analog%2C+in+a+non-depilated+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Drugs%22%5BJournal%5D)">Treatment and prevention of chemotherapy-induced alopecia with PTH-CBD, a collagen-targeted parathyroid hormone analog, in a non-depilated mouse model.</a> Anticancer Drugs. 25 (1), 30-38 (2014).</li>
<li>Peters, E. M., Foitzik, K., Paus, R., Ray, S., Holick, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+strategy+for+modulating+chemotherapy-induced+alopecia%2C+using+PTH%2FPTHrP+receptor+agonist+and+antagonist%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A new strategy for modulating chemotherapy-induced alopecia, using PTH/PTHrP receptor agonist and antagonist.</a> J Invest Dermatol. 117 (2), 173-178 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Seymour, A., Sakon, J., Gensure, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+hormone+linked+to+a+collagen+binding+domain+promotes+hair+growth+in+a+mouse+model+of+chemotherapy+induced+alopecia+in+a+dose-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Anti-cancer+drugs%22%5BJournal%5D)">Parathyroid hormone linked to a collagen binding domain promotes hair growth in a mouse model of chemotherapy induced alopecia in a dose-dependent manner.</a> Anti-cancer drugs. 25 (7), 819-825 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu raporda ayrıntılı bir açıklama kemirgenlerde saç dökülmesi ölçülmesi için yeni bir teknik sağlanmaktadır. Bu teknik, en laboratuvarlarda hazır olan görüntü elde etme ve analiz, ekipman için bir jel görüntüleyici kullanır. ölçümler teknikte küçük varyasyonlar (Şekiller 4-5), tutarlı olduğu gösterilmiştir ve tedavi modelleri görme saç kaybı (Şekil 6) bir dereceye kadar iyi bir korelasyon vardır. Bu teknikler başarıyla alopesi 17 deneysel tedavilerin değerlendirilmesinde kull...

Alopesi (saç dökülmesi) çok farklı nedenlere bağlı bir psikolojik ve duygusal sıkıntı olay olabilir. Erkek tipi kellik 35 yaş 1 ile erkeklerin yaklaşık üçte ikisini etkileyen alopesi en sık nedenidir. Saç dökülmesi benzer bir model polikistik over sendromlu kadınlarda görülebilir. Bu hastalıkların her ikisinde de, saç dökülmesi aracılı androjen. Alopesi zamanda nüfusun 2 1.7% etkileyen bir otoimmün hastalık, alopesi areata gibi oluşabilir. Alopesi kemoterapi 3 gibi bazı tıbbi tedaviler, bir yan etkisi olarak ortaya çıkabilir. Kemoterapi hastalarının büyük bir oranı (% 65-85) alopesi 4,5 ölçüde deneyim. saç dökülmesi psikolojik sonuçları iyi kemoterapi ortamda incelenmiştir. Kemoterapi kaynaklı alopesi anksiyete, depresyon, olumsuz beden imgesi, alçaltılmış benlik saygısı ve 6,7 refah azaltılmış anlamda neden olabilir. Yüksek pekadın kanser hastalarının rcentage (47-58%) kemoterapinin en travmatik yönü olarak saç dökülmesi düşünün ve% 8 düşüş tedaviye kadar saç dökülmesi 4,6 korkusuyla. Saç dökülmesi 8,9 psikolojik ve hatta tıbbi sonuçlarını azaltmak için tedavi desteklemek için androjenik alopesi kanıtlar da vardır. Aynı şekilde, Alopesi areata ciddi psikolojik sonuçları 2 olduğu rapor edilmiştir ve saç dökülmesi yamalı doğası saç dökülmesi çoğu diğer nedenleri daha tatsız kozmetik sonuç yol açabilir. Hafif anti-androjenik etkileri (örneğin, spironolakton) sahip ilaçlar alopesi için bir tedavi olarak sınırlı başarı ile kullanılmış iken, alopesi için birinci etkin bir ilaç minoksidil 10 idi. Bu antihipertansif saç büyümesine neden gözlenen bir yan etkisi vardır ve şimdi alopesi pek çok biçimi için topikal bir tedavi olarak kullanılır. Ancak, tepkiler, bazı konular yalnızca yavaş gösteren, genellikle eksikGerçek büyütme 10 yerine saç dökülmesi ing. Finasterid kısmi sistemik androjen blokajı pahasına androjenik alopesi iyileştirmeler sonucunda, dihidrotestosteron için testosteron bloke dönüşüm II 5α-redüktaz tip rekabetçi bir antagonistidir. Uzun vadeli (10 yıl) tedavisi ile yanıt oranı% 50 civarında 11 vardır. Genel olarak, bu alandaki önemli araştırma rağmen, hala saç dökülmesi için yeterli tedavinin yoktur. On yıllardır, bilim adamları ve klinisyenler klinik denemelerde derisi saç büyümesini ölçmek için yöntemler araştırılmıştır. Alopesi tedavi ilaçların geliştirilmesi ile, saç büyüme ve tedaviye özellikle, tepki ölçme, güvenilir, ekonomik ve minimal invaziv aracı için daha büyük bir ihtiyaç olmuştur. Saç dökülmesi bozukluğu olan hastalarda saç yoğunluğu kesin bir ölçümü için görüntü analizi tekniği techniqu kullanarak çeşitli geçmişte, tutarlı ve geçerli sonuçlar eldedijital görüntü 12 analizi, tek tek kılların görüntü analizi ve cilt 13 lezyonlar, ve tanımlanmış bir kafa derisi bölgesi 14 saç kütlesi ölçmek için mikroskobik tarama dahil olmak üzere, es. Yukarıdaki yöntemler, saç klinik deneylerde müdahaleler büyüme teşvik etmek için etkinliğinin gelişmiş bir değerlendirme temin ederken, ne yazık ki, bu yöntemler, klinik öncesi araştırmalarda kemirgen çalışmaları uygulanmamıştır. Amacımız araştırmacılar daha doğru değerlendirmek ve alopesi çeşitli formları için yeni tedavi yaklaşımları karşılaştırmak sağlayacak farelerde saç dökülmesi, ölçmek için tutarlı ve güvenilir bir yöntem geliştirmektir. Biz kahverengi veya siyah saçlı farelerde saç yoğunluğu hızlı ve güvenilir ölçümü sağlayacak en laboratuvarlarda hazır ekipman kullanarak bir metodoloji geliştirdik. Bu metodoloji waxin gelen kemoterapi kaynaklı alopesi, alopesi areata ve alopesi fare modellerinde test edilmiştirörn. Ayrıntılı bir protokol doğrulama C57BL / 6 veri ve C3H / farelerin HeJ suşları da dahil olmak üzere bu ölçümleri, performans sunulmuştur. Bu teknik saç gövdesine pigmentlerden ışık emiliminin tespit dayandığı için, beyaz fareler veya Albino farelerde saç büyümesi tespit etmek için kullanılamaz.

<table><tbody><tr><td>KODAK Gel Logic 100 Görüntüleme Sistemi</td><td>Eastman Kodak Company, Rochester, NY, USA</td><td></td><td>Fotoğraflar elde etmek ve analiz etmek için jel görüntüleyici, yansıtıcı fotoğrafçılık için dahili ışık kaynağına sahip olmalıdır.</td></tr><tr><td>Kodak/Tiffen Q-13 Gri Ölçek</td><td><a href="http://www.imatest.com/docs/q13/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Imatest</a></td><td></td><td>Gri ölçek standardı</td></tr><tr><td>C57BL/6J Fareler</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>Temsili çalışma için fareler</td></tr><tr><td>C3H/HeJ greftli fare</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>Temsili çalışma için fareler</td></tr></tbody></table>

gri tonlama analizi İle farelerde saç dökülmesi kantitatif analiz yeni bir teknik

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

Alopesi erkek tipi saç dökülmesi, polikistik over sendromu ve alopesi areata gibi birçok farklı koşullar, oluşabilir saç dökülmesi yaygın bir şeklidir. Alopesi Kanser hastalarının kemoterapinin bir yan etkisi olarak ortaya çıkabilir. Bu çalışmada, amacımız araştırmacılar doğru değerlendirmek ve alopesi bu çeşitli formları için yeni tedavi yaklaşımları karşılaştırmak sağlayacak farelerde saç dökülmesi, ölçmek için tutarlı ve güvenilir bir yöntem geliştirmektir. yöntem fare üzerinde siyah (veya gri) saç miktarına kaba orantılı olarak meydana hafif emilimini, ölçme, farelerin görüntüleri elde etmek ve süreç standart bir jel görüntüleyici kullanır. Bu şekilde sayısal edilmiştir Veriler daha sonra standart istatistiksel teknikler (örneğin, ANOVA, t-testi) kullanılarak analiz edilebilir. Bu metodoloji, balmumu gelen kemoterapi kaynaklı alopesi, alopesi areata ve alopesi fare modellerinde test edilmiştir. Bu raporda, ayrıntılı protokol pres olduğunuodaklılık doğrulama C57BL / 6 veri ve C3H / farelerin HeJ suşları da dahil olmak üzere bu ölçümleri, gerçekleştirmek için. Bu yeni teknik, göreceli uygulama basitliği, çoğu araştırma laboratuarlarında hazır olan ekipman güven ve objektif uygulayarak, subjektif değerlendirmeler daha sağlamdır nicel değerlendirmesi dahil bir dizi avantaj sunmaktadır. Farelerde tüylerin miktarının gelişmeler alopesi modellerinin çalışma artırmak ve klinik öncesi çalışmalarda umut verici yeni tedavilerin değerlendirilmesi kolaylaştıracaktır.

Bu teknik C3H / HeJ engrafted fareler, 16 areata alopesi fare modeli kullanılarak valide edildi. Bu hayvanlar zamanla ilerler küresel saç kaybı gelişebilir. Ancak, saç dökülmesi yamalar oluşur ve önemli değişkenlik tanıtan ve nitel değerlendirmeler engellemekle, bir fare diğerine değişebilir. Bu model geçerliliği bir değerlendirme olarak fare üzerinde farklı konumlarda optik yoğunluk ölçümleri arasındaki ilişkiyi test etmek için bir fırsat sağladı. Aynı fare korelasyon ilk soru ön...

Alopesi, kemoterapinin bir yan etkisi de dahil olmak üzere birçok farklı durumda ortaya çıkabilen yaygın bir saç dökülmesi şeklidir. Farelerde saç dökülmesini ölçmek için, gri tonlamalı bir analiz yapmak için standart bir jel görüntüleyici kullanarak, umut verici yeni alopesi tedavilerinin incelenmesini kolaylaştırmak için bir yöntem geliştirdik.

Gri tonlama Analizi İle Farelerde Saç Dökülmesi Kantitatif Analiz Yeni Bir Teknik

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and ...

Bu prosedürün genel amacı, ışık emilimini kullanarak saç yoğunluğunun bir miktarını sağlamaktır. Bu, önce hayvanların bir jel görüntüleyicide fotoğraflanmasıyla gerçekleştirilir. Sonraki adımlar, fotoğraf üzerinde bir ilgi alanı tanımlamak ve ilgi alanı içindeki ışık emilimini belirlemektir.Daha sonra ışık emilimi bir fotoğraf standardıyla karşılaştırılır. Sonuç olarak, bir müdahalenin saç büyümesi üzerindeki etkilerini göstermek için benzer şekilde muamele edilen hayvanlar arasında ışık emiliminin ortalaması alınabilir. Bu tekniğin temel avantajları, tarafsız, ölçülebilir ve tekrarlanabilir olmasıdır.Bu son derece önemlidir çünkü sonuçların istatistiksel anlamlılığını belirlemek için standartları, Inova gibi istatistiksel teknikleri kullanmanıza izin verir. Bu protokol için, yansıtıcı fotoğrafçılık için yerleşik bir ışık kaynağına sahip bir jel görüntüleyici kullanın. Bu, iyi bir ışık homojenliği sağlarken, trans aydınlatma, analiz için uygun olmayan siluet oluşturur.Jel görüntüleyiciyi hazırlayarak başlayın, odağı ve görüş alanını ayarlayın. Bazı basılı metinleri kullanarak, bu gerçekten işe yaradığı için fare biraz odak dışında olabilir. İlgilenilen küçük bölgelerdeki nicelik hatalarını azaltmak için, ilgilenilen bölgede mükemmel optik ortalama elde etmek amacıyla fotoğraflanan bölge boyunca ışık kaynağının tekdüzeliğini doğrulayın.Sonra, hayvanı hazırlayın. Hızlı başlangıçlı ve kısa etki süresine sahip bir anestezi seçin ve hayvanları fotoğraf çekimi için hareketsiz tutacak kadar verin. Şimdi hayvanları görüntüleyiciye dikey olarak ve mümkün olduğunca paralele yakın bir şekilde yerleştirin.Sırt fotoğrafları için, hayvanları uzuvları uzatılmış olarak yüzüstü pozisyona getirin. Ventral fotoğraflar için hayvanları sırtüstü pozisyona getirin. Yanal olarak döndürülmediklerinden emin olun.Absorpsiyon değerleri görüntüler arasında çekilebilir, ancak makine bunun için tasarlanmamıştır. Bu nedenle, bir gri ölçek standardı eklemek, verileri derlerken absorpsiyon değerlerini normalleştirmemize olanak tanır. Şimdi gri tonlama standardını fotoğraflanan bölgeye yerleştirin.Ardından hazneyi kapatın ve kameradaki hazneye girebilecek ortam aydınlatmasını azaltın. F stop'u, ilgilenilen alanın aşırı doygun veya az pozlanmamış olmasına neden olacak bir pozlamaya ayarlayın. Sonra bir fotoğraf çekin.F durağı, görüntü doygun olacak şekilde seçilirse, gri tonlama değeri değere sabitlenir ve B hiçbir şekilde kullanılmaz. Ardından, ilgi alanını ve standardı doğrusal bir pozlama aralığında tutarak F.Stop'u bir değiştirin ve fotoğraf tamamlanmış olarak ikinci bir fotoğraf çekin. Hayvanları bir ısınma masasına koyun ve iyileşene kadar izleyin.Sternal yaslanmalı. Daha sonra hayvanları kafeslerine ve nihayetinde tam iyileşme için vivaryuma geri koyun. Jel görüntüleme yazılımını kullanarak ışık emilimini ölçmek için, bütün bir hayvan sırtı görünümü için hayvanların görüntüleri üzerinde ilgilenilen bölgeleri işaretleyin.Üst ekstremitelerden alt ekstremitelere kadar mümkün olduğunca yanal olarak uzanan bir boşluğun ana hatlarını çizmek için dikdörtgen bir görüntü, oval bir görüntü veya serbest bir el aleti kullanın. Bütün bir hayvan ventral görünümü için hayvanın sırtının kenar boşlukları içinde tutun. İki dikdörtgen kullanın.Biri bakımlı olan pelvik bölgeyi örtmek için, diğeri ise tımarlı olmayan göğüs bölgesini örtmek için. Bir ilacın uygulandığı yer gibi daha küçük ilgi alanları da gerektiği gibi işaretlenebilir. İkinci olarak, ilgilenilen bölgeyi gri tonlama absorpsiyon standardında işaretleyin.Ardından, fotoğraflar arasında karşılaştırma yapmak için işaretlenmiş her bir ilgi alanından emilimi kaydedin. Absorpsiyona maruz kalmanın günlük günlüğü ilişkisini kullanarak absorpsiyon seviyelerini arka plan standardına göre normalleştirin. Bunu yapmak için, absorpsiyon kütüğüne karşı maruz kalma günlüğünün bir eğrisini çizin.Gri tonlama absorpsiyon standardından elde edilen değerleri kullanarak, her fotoğrafın standardındaki varyasyonları aşağıdaki gibi ayarlayın. İlk olarak, ROI'yi okumak için F-stop'u ve referans için F-stop'u seçin ve okuma F-stop'unda tüm fotoğraflarda standardın ortalama absorpsiyonunu hesaplayın. Bu ortalama, referans standart değer veya RSV'dir.Ardından, her fotoğraftaki okuma ve referans F-Stop ayarları arasındaki absorpsiyon farkını hesaplayın ve standart ve tanımlanan her ROI için aynı hesaplamaları yapın. Şimdi bir F-stop'tan gelen verileri kullanarak, gösterilen formülü kullanarak her bir ROI için düzeltilmiş absorpsiyonu hesaplayın. Bunu takiben, alopesi ADA'yı modelleyen C3 HHEJ aşılanmış farelerin farklı maruziyetlerde açıklanan yöntem kullanılarak analiz edildiği verileri analiz etmek için standart istatistiksel yöntemler uygulayın.Örtüşmeyen yatırım getirisindeki varyasyonlar beklendiği gibi sıkı bir şekilde ilişkilendirildi. Benzer karşılaştırmalar, üç haftalık bir süre boyunca aynı sıkı korelasyonu üretti. Fareler, beklenen saç dökülmelerini ölçmek için görüntülendi.Görüntülenen farelerin %80'i bu zaman diliminde saç dökülmesi gösterdi. Karşılaştırıldığında, normal C 57 siyah altı fare, aynı zaman diliminde herhangi bir saç kaybı göstermedi. İkinci bir çalışmada, kemoterapiye bağlı alopesi, tarif edilen teknik kullanılarak ölçüldü.Fareler üç hafta boyunca siklofosfamid ile tedavi edildi ve iki ay sonra kontrollere kıyasla önemli saç dökülmesi gösterdiler. Ana kopya oluşturulduktan sonra, her görüntü beş dakikadan daha kısa sürede analiz edilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, standart bir jel görüntüleme sistemi kullanarak kemirgenlerde saç büyüme miktarını nasıl ölçeceğinizi iyi anlamış olmalısınız.

a-new-technique-for-quantitative-analysis-hair-loss-mice-using

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Kazanç ya da kayıp fonksiyon-arabuluculuk lentivirüs kullanarak bir saç kökü yenilenme modeli Doku özgü analizi.

Saç Rejenerasyon sırasında epitelyal-mezenkimal Sinyal Rapid Genetik Analizi

Bu videoda, baskılanmış nötrofil yanıtı olan immün yetmezliği olan bir fareye insan derisinin aşılanması için bir yöntem gösterilmektedir. Yöntem, farenin greft yatağına insan bölünmüş kalınlıkta derisinin uygulanmasını, mühürlenmesini ve geri kazanım için örtülmesini içerir. Sonunda, insan derisi farenin derisine yapışır, vaskülarizasyon ve dolaşım sağlar ve başarılı bir deri ksenogrefti ile sonuçlanır.

Bir fare modelinde insan derisi grefti için bir teknik

Bu video, bir fare kulak kepçesinin kıl foliküllerinde mekanik olarak uyarılmış afferent çıktı ve sinir terminali etiketlemesinin birleşik kaydını göstermektedir. Bir floresan membran boyasına maruz kalmadan önce ve sonra saç folikülü sinir terminallerinin mekanik stimülasyonu, üretilen aksiyon potansiyellerinin elektrofizyoloji kaydı ve saç foliküllerindeki sinir terminali etiketlemesinin görselleştirilmesi ile ilgili adımları ana hatlarıyla belirtir.

Fare kılı foliküllerinde mekanik olarak uyarılmış afferent çıktının ve sinir terminali etiketlemesinin birleşik kaydı

Bu tür saç folikülleri ve sinir uçları gibi - - mekansal organizasyon farklı desen sergileyen Memeli cilt yapıları çeşitli bir dizi içerir. Düz bir montaj olarak cilt analiz deri yapıları tam kalınlığı yüksek çözünürlüklü görüntüler üretmek için bu doku 2-boyutlu geometri yararlanır.

Fare Cilt ve Saç Folikül Desenlendirme ve Duyusal Akson Morfoloji Analizi Uygulanması Düz ​​Görüntüleme Dağı

Bu protokol, farelerde ikili, tam kalınlıkta eksizyonel yaraların nasıl üretileceğin ve yaraların morfometrik analiziçin nasıl izlendiğini, hasat edilip hazırlanacağını açıklar. Morfometrik kusurları tanımlamak, tam olarak ölçmek ve tespit etmek için seri histolojik bölümlerin nasıl kullanılacağına iliş bir açıklama dahildir.

Murine Eksizyonel Yara İyileştirme Modeli ve Histolojik Morfometrik Yara Analizi

Burada, farelerde kraniyomaksillofasiyal kemik gelişiminin mevcut yöntemlerle mümkün olandan daha iyi değerlendirilmesi için farelerde kraniyomaksillofasiyal kemiklerin 3D modellerini segmentlere ayırmak ve ölçmek için mikrobilgisayarlı tomografiye dayanan bir yöntemi derinlemesine açıklıyoruz.

Üç Boyutlu Mikrobilgisayarlı Tomografi Kullanılarak Farelerde Kraniyomaksillofasiyal Malformasyonların Analizi

Kapillaroskopi, mikrovasküler sistemin doğrudan, ucuz ve non-invaziv görüntülenmesi için erişilebilir bir araçtır. Bu protokolün amacı, araştırmacıların farelerin tırnak yataklarında periferik mikrovasküler morfolojinin görselleştirilmesi için kapillaroskopi kullanmalarını sağlamaktır.

Kapillaroskopi Kullanılarak Farelerde Çivi Yatağı Mikrovasküler Morfolojisinin İnvaziv Olmayan Görüntülenmesi

Mevcut protokolün amacı, C57Bl/6x129J laboratuvar farelerinde fiziksel kırılganlığı değerlendirmek için talimatlar ve kılavuzlar sağlamaktır. Fiziksel kırılganlık indeksinde kullanılan her bir ölçüme ilişkin spesifik ayrıntılar açıklanmaktadır. Kırılganlık sonuçlarını raporlamak için çeşitli yöntemler de sunulmaktadır.

Yaşlanan Fare Modelinde Kırılganlık Değerlendirmesi

Bu çalışma, farelerin ön pençe derisindeki düşük eşikli mekanoreseptör (LTMR) akson terminallerinin görselleştirilmesi için in vivo iki fotonlu görüntüleme yaklaşımını sunmaktadır. Bireysel aksonların tekrarlanan, yüksek çözünürlüklü görüntülemesi kullanılarak, bu yöntem gelişim sırasında ve yetişkinlerde deri duyusal devresinin yapısı ve işlevini incelemek için yeni bir platform sağlar.

Fare Derisindeki Dokunma Duyusal Akson Morfolojisinin İntravital İki Fotonlu Görüntülemesi

Bu makale, bir roman protokol ve reaktif bileşikler ve tedavilerin yüksek içerik analizi kullanarak nöronlar ve astrositler ortak kültürleri üzerinde nörotoksik etkileri hassas ölçümü için tasarlanmıştır ayarlamak açıklamaktadır. Sonuçlar yüksek bir içerik analizi nörotoksisite değerlendirmesi için heyecan verici yeni bir teknoloji temsil ettiğini göstermektedir.

Nörotoksisite Yüksek İçerik Analizi Nöronal ve Astrosit Hücre Co-Kültür Testi

Öğrenin farelerde saç dökülmesini gri tonlama analizi ile niceliksel olarak değerlendirme yöntemini. Bu teknik, alopesi araştırmalarında yeni tedavilerin etkinliğini tarafsız ve tekrarlanabilir şekilde ölçmeyi sağlar.

Gri tonlama Analizi İle Farelerde Saç Dökülmesi Kantitatif Analiz Yeni Bir Teknik

Daha fazla video keşfet