Boyuna için bir Spinal Odası implantasyon için bir Prosedürü İn Vivo Fare Omurilik Görüntüleme

Bu videoda, bir canlı fare dorsal spinal kord üzerinde kronik optik görüntüleme odasını yerleştirmeye yönelik bir prosedür açıklanmaktadır. odası, cerrahi işlem ve kronik görüntüleme gözden ve gösterilmiştir.

Bu prosedürün genel amacı, tekrarlanan cerrahi nöbetlere gerek kalmadan uzunlamasına optik görüntülemeyi mümkün kılmak için bir farenin dorsal omuriliği üzerine bir görüntüleme odası implante etmektir. Bu, önce üç torasik omurun açığa çıkarılması ve omurganın üzerindeki yumuşak dokunun çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, odanın yan parçalarını kullanarak açıkta kalan omurları klemplemek ve dorsal laminektomi yapmaktır.

Daha sonra, odanın üst plakası açıkta kalan omuriliğin üzerine sıkıca tutturulur ve silikon elastomer ve bir kapak camı kullanılarak kapatılır. Son adım, yapıştırıcılar kullanarak implantın etrafındaki cildi kapatmak ve hayvanın iyileşmesine izin vermektir. Sonuç olarak, çoklu foton floresan mikroskobu, omurilikteki hücresel davranışı ve doku yapısını zaman içinde hücre altı çözünürlükle görüntülemek için kullanılır.

Yeni metodolojimizin, omuriliğin tekrarlanan cerrahi olarak açılması gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, potansiyel enfeksiyon, cerrahi travma veya hayvan stresi gibi tekrarlanan cerrahi ile ilişkili komplikasyonlar olmadan uzun bir süreye yayılmış neredeyse rastgele sayıda görüntüleme zaman noktasına sahip olma yeteneğidir. Bu yöntem için ilk olarak, şeffaf zebra balığında omurilik yaralanmasını takiben boylamsal görüntülemenin önceki başarısını düşündüğümüzde aklımıza geldi. Daha sonra bu paradigmayı memeli modeline genişletmeye karar verdik.

Bu prosedüre, flor kullanılarak anestezi uygulanan bir farenin torasik kemer bölgesini tıraş ederek başlayın. Ardından kesilen saçları çıkarın. Daha sonra, salin, ketoprofen ve deksametazon karışımını fareye deri altından uygulayın.

Pamuklu çubuk kullanarak. İyot ve% 70 etanol için üç alternatif yıkama yapın ve yıkamalar arasında bir dakika bekleyin. Bundan sonra, insizyon bölgesindeki ağrıyı azaltmak için traş edilmiş yamanın merkezine deri altından 100 mikrolitre% 0.125 Bupivakain uygulayın.

Ardından fareyi özel stereo saldırılara aktarın. Rektal termometreyi yerleştirin ve bupivakainin mikroskop altında etkili olması için yaklaşık 10 dakika bekleyin. Bir neşter bıçağı ile ilgilenilen omurların üzerinde beş milimetrelik bir kesi oluşturun.

Bundan sonra, künt diseksiyon ile derideki açıklığın boyutunu arttırın. Ardından, cilt ile alttaki kas arasındaki bağ fasyasını nazikçe ayırın. Ekartörlerle daha geniş bir çalışma alanı için cildi geride tutun ve göğüste herhangi bir ağırlığı artırmamaya ve nefes almayı engellememeye dikkat edin.

Ardından, bir çift forseps ile üstteki kasın içinden açığa çıkacak olan rostral, çoğu omuru kavrayın. Dorsal sürecin her iki tarafındaki dokuyu üç omurdan uzakta kesin. Daha sonra, üstteki tüm dokuyu dorsal laminattan çıkarın.

Daha sonra, omurganın her iki yan kenarındaki omurlara bağlı tendonları dikkatlice kesin. Temiz bir sıkıştırma yüzeyi sağlamak için omur kolonunun yan kenarlarından mümkün olduğunca fazla dokuyu nazikçe çıkarın. Ardından, kalan yumuşak dokunun omurlarını nazikçe debride edin.

Bir kemik kazıyıcı ve pamuklu çubuk kullanarak, cerrahi makası kullanarak uyumsuz dokuları kesin. Ardından, omur kolonunu çevreleyen dokuyu geri tutmak için ekartörleri ayarlayın. Deri ile birlikte, implant kenar çubuklarını dağıtım direklerindeki tırnaklara takın ve bunları direk tutuculara yerleştirin.

Sonra, üç omuru kelepçeleyin. Kenar çubuklarını, onları güvenli bir şekilde tutmak için yeterli basınç uygulayarak kullanın. Ardından, üç omurun düz bir şekilde kenetlenmesini sağlamaya yardımcı olmak için forsepsleri kullanın.

Laminektomiyi gerçekleştirmeden önce kenar çubuklarının hem düz hem de paralel olduğundan emin olun. Bundan sonra, pamuklu çubuklar kullanarak kelepçelenmiş omurların sırt yüzeyini dikkatlice temizleyin ve kurulayın. Bu prosedürde, Vana makasının uçlarını medial klempli omurun epidural boşluğuna yerleştirin ve tutamakları hafifçe sıkın.

Kemik kuru ise, dorsal lamina boyunca çatlamalıdır. Gevşek laminayı tutarken laminayı serbest bırakmak için bu işlemi karşı tarafta tekrarlayın Forseps ile dorsal işlemle nazikçe, laminanın rostral ve kıvrık uçlarındaki herhangi bir bağ dokusunu dikkatlice kesin. Ardından, omuriliğin üzerindeki kanı %0,9 salin veya yapay serebral omurilikle iyice yıkayın, fazla sıvıyı pamuklu çubuklarla emdirin.

Bundan sonra, kemiğin yan kenarlarını kesin ve implantın kenar çubuklarına ilerleyin. Daha sonra pamuklu çubuklar ve tuzlu su kullanarak kanamayı kontrol edin. Periosteumun bir kısmının ayrılması ve omuriliğin üzerini örtmesi durumunda, pamuklu çubuklar ve 29 ila 30 gauge iğne kullanarak dokuyu nazikçe çıkarın.

Omuriliğe zarar vermemeye dikkat edin ve gevşek periosteuumu sıkıca sarılmış bir datorla karıştırmayın. Sonunda. Kemiğin kalan açıkta kalan kenarlarını diş, akrilik ve siyanoakrilat ile kapatın.

Yapıştırıcının açıkta kalan omuriliğe girmesini önlemek için özellikle dikkat edin. Şimdi, üst plakayı hayvanın üzerine dikkatlice yerleştirin, böylece dört yuva kenar çubuklarındaki dört delikle aynı hizada olacak ve açıklık açıkta kalan omuriliğin üzerine gelecek şekilde. Bir kuyumcu tornavidası kullanarak, tornavidanın milini başka bir forseps ile sabitleyerek ilk vidayla dikkatlice başlayın.

Bu aşamada vidayı sıkmayın, ancak ilk birkaç diş yerine oturacak şekilde yerleştirin. Bu işlemi diğer üç vida için de tekrarlayın. Dört vidanın tümü yerindeyken, tüm vidalar sıkıca sabitlenene kadar her bir vidayı aynı küçük artışlarla dönüşümlü olarak sıkın.

Ardından, omurilik ile cam pencere arasındaki boşluğu doldurmak için hızlı eşik marka silikon elastomeri kullanın ve açıkta kalan omuriliğe uygulayın. Uygulamadan önce karıştırma ucundaki hava kabarcıkları içeren silikonlardan kurtulduğunuzdan emin olun. Ardından, üst plakadaki ek parçaya hızlı bir şekilde beş milimetrelik bir kapak fişi yerleştirin.

Omuriliği çevrelemek için sıvı elastomeri kademeli olarak sıkmak için yeterli basınç uygulayın, ancak omurilik sıkışmasına neden olmaz. Daha sonra, sızan elastomerin kenarlarını diş, akrilik ve siyanoakrilat ile kaplayın ve elastomerin omurilik yüzeyi üzerinde kaymasını önlemek için elastomeri mümkün olduğunca çevredeki kemiğe yapıştırmak için yapıştırıcıları kullanın. Ardından, ekartörleri çıkarın ve cildi implantın kenarı boyunca yukarı doğru çekin.

Cildi implantın kenarlarına yapıştırmak için siyanoakrilat kullanın. Bundan sonra, vidaları üst plakanın kanatlarına yerleştirin. Ardından, hayvanı kurtarma için kafese geri yerleştirmeden önce diş akrilik kullanarak üst plakanın vida yuvalarındaki boşlukları kapatın.

Görüntüleme seanslarından önce, fareyi tekrar uyuşturun ve implantın açıkta kalan vidalarını stabilizasyon için dişli direklere takın. Bu şekil, kronik bir omurga odasının birkaç hafta boyunca optik olarak şeffaf kaldığını göstermektedir. Bunlar, ameliyattan birkaç dakika ila üç hafta sonra değişen omuriliğin beyaz ila açık görüntüleridir.

Vasküler yer işaretleri tüm zaman noktalarında tanımlanabilir. Ameliyat sonrası bir günde çok az değişiklik görülür. Yoğun fibröz aşırı büyüme, pencerenin bir kısmında üç gün gibi kısa bir sürede bulunur ve görüntüleme alanının kısmen gizlenmesine neden olur.

Hafif neovaskülarizasyon da mevcuttur, ancak beyaz ışıkta veya iki PEF görüntülemede orijinal vaskülatürü gizlemez. Kronik omurga odası, tekrarlanan ameliyatlara gerek kalmadan tekrarlanan çoklu foton görüntülemeye izin verir Gösterilmiştir. İşte omuriliğin dorsal fii'sindeki DRG aksonlarının bir alt kümesinde YFP'yi eksprese eden transgenik bir farenin görüntüleri.

Damar sistemi, kırmızı ile gösterilen intravasküler boya enjeksiyonu ile işaretlendi. Mikroglia aktivitesi zaman içinde uylukta, bir YFP CX'te, üç CR'de, bir GFP çift transgenik farede de izlenebilirken, aksonlar ve mikroglia görünür kalır. Kontrast ve çözünürlük zaman içinde mütevazı bir şekilde azalır.

Bir kez ustalaştı. Bu teknik geliştirildikten sonra düzgün bir şekilde uygulandığı takdirde yaklaşık bir saat içinde yapılabilmektedir. Bu teknik, omurilik yaralanmasından sonra akson geri dönüşünün zamansal ve mekansal heterojenliğini keşfetmemizin yolunu açtı.

Ve fareler.