Name: Boyuna için bir Spinal Odası implantasyon için bir Prosedürü İn Vivo Fare Omurilik Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 20 s
Description: Öğrenin fare omuriliğinde kronik optik görüntüleme için spinal odası implantasyon prosedürünü. Bu yöntem, tekrarlayan cerrahiler olmadan longitudinal hücresel davranış çalışmalarına olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Prosedürün geliştirilmesi boyunca yaptığı katkılar için Dr. Joseph R. Fetcho'ya teşekkür ederiz. ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden (R01 EB002019 C.B.S. ve DP'den Joseph R. Fetcho'ya OD006411) ve Kanada Ulusal Bilim ve Araştırma Konseyi'nden (M.J.F.'ye) mali destek için fon sağlandığını kabul etmek isteriz.

NOT: bakım ve bu yazıda tüm farelerin deney manipülasyon Cornell Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmıştır. 1. Cerrahi ayarlama <ol><li> Bir otoklav veya onaylı sterilizasyon prosedürleri kullanarak gerekli tüm araçları sterilize. En azından, bir neşter, makas, makas vanna, forseps, kuyumcu tornavida, pamuk bezlerden, retraktörlerinin bir dizi, implant (Şekil 1A) ve dağıtım sistemi (Şekil 1D, E) içerir. </li><li> % 70 etanol ve / veya uygun dezenfektanlarla, herhangi bir stereoskop kolları da dahil olmak üzere, tüm yüzeyleri silin. </li><li> Özel stereotaksi (Şekil 1D) bindirilirken ve steril örtüler ile setüstü çevreleyen bir steril alan oluşturun. Bir ısıtma yastığı (kontrollü tercihen geri bildirim) stereotaksi üstünde ve steril örtüler altına alınmalıdır. </li></ol> 2. hazırlanmasıCerrahi Fare <ol><li> Solunum hızı yaklaşık 1 nefes / sn yavaşlatır kadar bir indüksiyon odasında% 5 izofluran / oksijen altında fare anestezisi. </li><li> Izofluran pozlama devam etmek için bir burun konisi kullanılarak, steril alana uzak bir sahne alanı fare aktarın. % 2 izofluran azaltın. Kornea kurumasını önlemek için göz merhemi sürün. </li><li> Kolun, her bir enjeksiyon hacminin yaklaşık olarak% 50 veren, 30 G iğne ile 10/3 cc şırınga - kas içinden 29 ile arka ayakların içine 0.05 mg / 100 g fare de glikopirolat (bir antikolinerjik ilaç) uygulayınız. NOT: Glikopirolat fare anestezi altında iken akciğerlerde sıvı birikimini önlemek için hizmet vermektedir. </li><li> Elektrik makası kullanarak, 2 cm genişliğinde ve göğüs kemer merkezli tarafından fare dorsal, yaklaşık 3 cm uzunluğunda bir kısmını tıraş. De uzakta traş alanda herhangi kesilmiş saç temizleyin. </li><li> Traş deri altından ve uzak aşağıdaki enjeksiyon yönetme29 ile yama - 30 G iğne ile 10/3 cc şırınga: 1 ml / 100 gr fare% 5 glükoz tuzlu su içinde (hidrasyon), 5 mg / kg fare Ketoprofen (analjezi için bir NSAID), 0.2 mg / kg fare deksametazon ( antienflamatuar bir steroid) enflamasyonu azaltır. </li><li> Pamuklu kullanarak, yıkar arasında 1 dakika bekliyor, iyot ve% 70 etanol üç alternatif yıkar gerçekleştirmek. </li><li> Kesi yerinde ağrıyı azaltmak için 30 G iğne ve traş yama merkezine 3/10 cc şırınga - subkutan 29 kullanılarak% 0.125 bupivakain (periferik sinir bloğu) 100 ul yönetme. </li><li> Özel stereotaksi (Şekil 1D) Transfer fare, rektal termometre takın ve bupivakain yürürlüğe girmesi için yaklaşık 10 dakika bekleyin. </li></ol> 3. Açığa ve 3 Bitişik torakal vertebraların dorsal laminalar temizleyin <ol><li> Neşter bıçak kullanarak, faiz (Şekil 2A) ve omurlar üzerinde küçük (5 mm veya daha az) kesi oluşturun. </li><li&gt; Ya forseps kullanarak veya cerrahi makas ucu takmadan ve kolları yayarak, künt diseksiyon ile deride açılma boyutunu artırmak. </li><li> Bir neşter veya cerrahi makas kullanarak, yavaşça cilt ve altta yatan kas arasındaki bağ fasya ayırmak. </li><li> Mümkün (Şekil 2B) gibi büyük bir çalışma alanı sağlayan, cilt geri tutmak için Ekartörleri kullanın. Göğüs üzerindeki yükü artırır ve böylece nefes engel değil dikkat edin. </li><li> Forseps bir çift, kavrama örten kas yoluyla maruz kalacağı rostral-en vertebra kullanma. Bir neşter kullanarak, uzak tüm 3 vertebra (Şekil 2c) dorsal sürecinin iki tarafında doku kesti. </li><li> Bir neşter bıçak, pamuklu, ve / veya kemik kazıyıcı herhangi bir kombinasyonunu kullanarak, dorsal lamina (Şekil 2B) tüm örten doku kaldırmak. </li><li> Cerrahi makas kullanarak, dikkatle her iki Latera üzerinde omurları bağlı tendonları kesipomurganın (Şekil 2E) l kenarları. </li><li> Neşter kullanılarak, yavaşça temiz bir kıstırma yüzeyi temin etmek amacıyla, mümkün olduğu kadar vertebral kolonun yan kenarlarından kadar doku çıkarın. </li><li> Yavaşça bir kemik kazıyıcı ve / veya pamuklu çubukla kullanarak kalan yumuşak doku omurga debridman. Başka cerrahi makas (Şekil 2F) kullanarak herhangi bir yersiz doku uzak Trim. NOT: Bu sıkıştırma ve vertebra temiz maruz kaldığı dorsal laminektomi gerçekleştirmek hem de gereklidir. Bir cauterizer sonraki kanama kontrol edilmesinde faydalı olabilir. </li><li> Cilt (Şekil 2F) ek olarak omurga kolonu çevreleyen doku tutmak için Ekartörleri Shift. </li><li> Teslimat yazılarda dişleri implant yan barlar takın ve (Şekil 1E gibi) sonrası sahipleri içine bu yük. </li><li> SECUREL tutmak için yeterli basınç uygulayarak, yan çubuklar kullanarak 3 omurga Kelepçey (Şekil 2G, H) &#39;. 3 vertebra bir seviye kenetlenmesini sağlamak için forseps kullanın. Çeşitli girişimler gerekli olabilir unutmayın. Yan çubukları düzeyi ve laminektomi gerçekleştirmeden önce paralel hem de emin olun. </li><li> Dikkatle temiz ve pamuklu çubuklarla kullanarak kenetlenmiş omurların dorsal yüzeyini kurulayın. </li></ol> 4. Bir dorsal laminektomi gerçekleştirin <ol><li> Medial kenetlenmiş vertebra epidural boşluğa vannas makas ipuçlarını yerleştirin ve hafifçe kolları sıkmak; kemik kuru ise, bu sırt tabakanın uzunluğu boyunca çatlak gerekir. Lamina serbest bırakmak için karşı tarafta bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Yavaşça dikkatle Lamina rostral ve kaudal ucunda herhangi bir bağ dokusu kesip ve uzak kaldırın, forseps ile dorsal işlemi ile gevşek lamina sürükleyici. </li><li> % 0.9 tuz ve / veya yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF) kullanarak, iyice herhangi bir kan overlyi yıkayacakomurilik ng. Aşırı sıvıyı emmek için pamuklu bezlerden kullanın. </li><li> Vannas makas kullanarak, dikkatlice implantın yan barlar kemiğin lateral kenarlarını kırpın. Yine, yıkayacak ve pamuk bezlerden ve tuzlu / ACSF kullanarak kanamayı kontrol. </li><li> 30 G iğne - periost bir kısmı müstakil ve omuriliği örten olması durumunda, yavaşça pamuk bezlerden ve / veya 29 kullanarak bu dokuyu. Prosedürün bu bölümünde omuriliği kesmemeye özen gösterin. Sıkıca sarılmış dura mater ile gevşek periost karıştırmayın. </li><li> Dikkatle, bir veya diş akrilik ve siyanoakrilat (Şekil 2I) her iki ile kemik kalan maruz kenarları mühür. Yapıştırıcılar maruz omurilik üzerine akmasına izin vermemeye özen gösterin. </li></ol> 5. Mühür Odası <ol><li> 4 slot yan barlar 4 delikli sıraya ve açılış maruz falso örter çok dikkatli bir üst plaka yerleştirinarkadaşları kablosu (Şekil 1B ve 2J). </li><li> Kuyumcu tornavida kullanarak, dikkatle forseps başka bir çift ile tornavidanın mili stabilize, ilk vidayı başlatın. Bu aşamada vidayı sıkın, ancak ilk birkaç konuları meşgul böylece o takmayın. Diğer 3 vida için bu işlemi tekrarlayın. NOT: Bu aşamada konumunu belirlemeye vidaları yardımcı titanyum ya da diğer manyetikleştirilebilir forseps kullanmak yararlıdır. </li><li> Yerde tüm 4 vida ile, vidalar sıkıca (Şekil 2K) güvencesindedir kadar her küçük artışlarla aynı miktarda dönüşümlü vida sıkın. Üst plaka Bu işlem sırasında flex için alışılmadık bir durum değildir unutmayın. Vida başı zarar verebilir ve aşırı düşüş baskısının kelepçesini yerinden ve / veya spinal kord yaralanması neden olacak gibi, çok fazla vidaları sıkın dikkat edin. </li><li> Omurilik ve cam pencere arasındaki boşluğu doldurmak için bir silikon elastomer kullanın. O doe Çünkükür esnasında asetik asit üretmek değil s, KwikSil marka elastomer ve karıştırma ipuçlarını kullanın. Maruz omuriliğe silikon liberal kısmını uygulayın. Karıştırma ucundan önce omuriliğe uygulamaya hava kabarcıkları içeren herhangi bir silikondan kurtulmak için özen gösterin. </li><li> Hızlı çalışarak, yavaşça üst plakada içerlek içine 5 mm # 0 lamel basın. Yavaş yavaş omurilik çevreleyen sıvı elastomer sıkmak, ancak spinal kord sıkıştırma (Şekil 2L) neden değil yeterli basınç uygulayın. Elastomer saatin ayarlanması yani lamel hızla uygulanan emin olun, yaklaşık 90 sn. </li><li> 5.5 - Bir başarısız sızdırmazlık durumunda, elastomer set kadar, yavaşça forseps ile implant çıkarın ve 5.4 tekrarlayın bekleyin. </li><li> Diş akrilik / siyanoakrilat ile dönen elastomerin kenarlarını kaplayabilir ve omurilik yüzeyi üzerinde kaymasını elastomer önlemek için mümkün olduğu kadar çevre kemik yapışır. </li><li> Ekartörleri çıkarın ve implantın kenarında cilt yukarı çekin. Siyanoakrilat kullanarak, implant (Şekil 2M, N) kenarlarına cilt uygun. </li><li> Yerleştirin # 0-80 - 1/4 &quot;üst plakanın kanatlarında (Şekil 1C ve 2 O) içine vidaları ayarlayın. </li><li> Diş akrilik kullanarak, üst plaka (Şekil 2P) vida yuvaları herhangi boşlukları mühür. </li></ol> 6. Ameliyat Sonrası Bakım <ol><li> Büyük bir temiz kafese anestezi ve yerden hayvan çıkarın. Kafes odası şey yırtılmayıp şekilde yeterince büyük olduğundan emin olun kafes boyunca normal lokomosyon sırasında (bir su şişesi ve / veya gıda için V-şekilli daldırma gibi). NOT: Bir standart sıçan kafes idealdir. </li><li> Hayvan kurtarır ısıtılmış bir yüzey üzerinde kafes yerleştirin. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete fareyi iade etmeyin. </li><li> Hayvan Beha kontrolağrı veya sıkıntı ve implant bütünlüğü belirtileri için 2 saat Postoperatif - 1 içinde VIOR. NOT: Normal koşullar altında, hayvan hareketine mütevazı tedirginlikler ile ambulasyon gerekir. </li><li> Ağırlığının ölçülmesi ve davranışlarını izlemek, ilk 72 saat için 12 saat - hayvana her 8 kontrol devam edin. Hayvanlar gece boyunca aktif ve hareketli olup olmadığını kontrol edin. Şasi biçiminde ıslak yiyecek, içecek ya da besin jeller, yiyecek topaklarına ile karıştırılır yemi ve içme suyu zemin seviyesinde sağlanmalıdır. Deri altı ya da karın içinden enjeksiyonlar ek nemlendirme gerektiğinde sağlanmalıdır. </li><li> Postoperatif, 24 ve 48 saat zaman noktalarında 5 mg / kg fare ketoprofen ve 0.2 mg / kg fare deksametazon deri altından yönetme. Buna ek olarak, 0.005-0.010 mg / 100 g fare 72 saat için bir deri altından enjeksiyon ile her 8 saat kullanılmalıdır. </li></ol> 7. in vivo olarak görüntülenmesi <ol><li> Altında fare anestezisiSolunum hızı kadar bir indüksiyon odasında% 5 izofluran / oksijen yaklaşık 1 nefes / sn yavaşlatır. </li><li> Geribildirim kontrollü ısıtma pedi ile özel stereotaksi (Şekil 1D) fare aktarın ve rektal termometre yerleştirin. % 2 izofluran azaltın. </li><li> Kolun, her bir enjeksiyon hacminin yaklaşık olarak% 50 veren, 30 G iğne ile 10/3 cc şırınga - 29 ile arka ayakların içine glikopirolat, 0.05 mg / 100 g fare intramüsküler uygulayın. </li><li> Deri altından tuzlu su içinde 1 ml / (hidrasyon) 100 g fare% 5 glukoz kez saat başına uygulayın. </li><li> Cerrahi (Şekil 1F) için kullanılan post-yuvalarına dişli odası sahipleri yerleştirin. Yüksekliğini ayarlayın ve üst plaka set vida üzerine mesajları bükün. </li><li> Her iki sahipleri ekli olan göğüs serbestçe ilham üzerine genişletebilirsiniz kadar, post-tutuculara sahipleri yükseltmek. NOT: sahiplerinin firma eki ve göğüs significan ücretsiz genişleme Hemtly nefes nedeniyle hareket eserler azaltır. </li><li> Istediğiniz gibi görüntüleme yapın. </li><li> Görüntüleme tamamlandığında, alt mesajlar, bölme sahipleri kapalı büküm kurtarmak için bir ısıtılmış yüzey üzerinde rektal termometre ve yer fareyi çıkarın. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete fareyi iade etmeyin. </li></ol>

<ol><li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li>
<li>Theer, P., Hasan, M. T., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+to+a+depth+of+1000+%CE%BCm+in+living+brains+by+use+of+a+Ti%3A+Al+2+O+3+regenerative+amplifier%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Letters%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging to a depth of 1000 μm in living brains by use of a Ti: Al 2 O 3 regenerative amplifier.</a> Optics Letters. 28 (12), 1022-1024 (2003).</li>
<li>Kobat, D., Durst, M. E., Nishimura, N., Wong, A. W., Schaffer, C. B., Xu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+tissue+multiphoton+microscopy+using+longer+wavelength+excitation%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Deep tissue multiphoton microscopy using longer wavelength excitation.</a> Optics Express. 17 (16), 13354-13364 (2009).</li>
<li>Horton, N. G., Kobat, D., Wang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo%2C+Deep+Tissue+Three-Photon+Imaging+at+the+1700-nm+Spectral+Window%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">In Vivo, Deep Tissue Three-Photon Imaging at the 1700-nm Spectral Window.</a> Biomedical Optics. 7 (3), (2012).</li>
<li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term%2C+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nature Protocols. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li>
<li>Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long-term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice.</a> Nature Protocols. 5 (2), 201-208 (2010).</li>
<li>Drew, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+methods%22%5BJournal%5D)">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nature methods. 7 (12), 981-984 (2010).</li>
<li>Misgeld, T., Kerschensteiner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+the+diseased+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of the diseased nervous system.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7 (6), 449-463 (2006).</li>
<li>Svoboda, K., Yasuda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+two-photon+excitation+microscopy+and+its+applications+to+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Principles of two-photon excitation microscopy and its applications to neuroscience.</a> Neuron. 50 (6), 823-839 (2006).</li>
<li>Kerr, J. N. D., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+in+vivo%3A+watching+the+brain+in+action%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Imaging in vivo: watching the brain in action.</a> Nature Reviews Neuroscience. 9 (3), 195-205 (2008).</li>
<li>Lichtman, J. W., DENK, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Big+and+the+Small%3A+Challenges+of+Imaging+the+Brain%27s+Circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The Big and the Small: Challenges of Imaging the Brain's Circuits.</a> Science. 334 (6056), 618-623 (2011).</li>
<li>Dombeck, D. A., Khabbaz, A. N., Collman, F., Adelman, T. L., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Large-Scale+Neural+Activity+with+Cellular+Resolution+in+Awake%2C+Mobile+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging Large-Scale Neural Activity with Cellular Resolution in Awake, Mobile Mice.</a> Neuron. 56 (1), 43-57 (2007).</li>
<li>Wienisch, M., Blauvelt, D. G., Sato, T. F., Murthy, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-Photon+Imaging+of+Neural+Activity+in+Awake%2C+Head-Restrained+Mice.+%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromethods%22%5BJournal%5D)">Two-Photon Imaging of Neural Activity in Awake, Head-Restrained Mice. </a> Neuromethods. 67 (18), 45-60 (2011).</li>
<li>Greenberg, D. S., Houweling, A. R., Kerr, J. N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population+imaging+of+ongoing+neuronal+activity+in+the+visual+cortex+of+awake+rats%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Population imaging of ongoing neuronal activity in the visual cortex of awake rats).</a> Nature Neuroscience. 11 (7), 749-751 (2008).</li>
<li>Thrane, A. S., Thrane, R. V., Zeppenfeld, D., Lou, N., Xu, Q., Nagelhus, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+anesthesia+selectively+disrupts+astrocyte+calcium+signaling+in+the+awake+mouse+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">General anesthesia selectively disrupts astrocyte calcium signaling in the awake mouse cortex.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 109 (46), 18974-18979 (2012).</li>
<li>Dombeck, D. A., Graziano, M. S., Tank, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+Clustering+of+Neurons+in+Motor+Cortex+Determined+by+Cellular+Resolution+Imaging+in+Awake+Behaving+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Functional Clustering of Neurons in Motor Cortex Determined by Cellular Resolution Imaging in Awake Behaving Mice.</a> Journal Of Neuroscience. 29 (44), 13751-13760 (2009).</li>
<li>Connor, D. H., Peron, S. P., Huber, D., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+activity+in+barrel+cortex+underlying+vibrissa-based+object+localization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Neural activity in barrel cortex underlying vibrissa-based object localization in mice.</a> Neuron. 67 (6), 1048-1061 (2010).</li>
<li>Kerschensteiner, M., Schwab, M. E., Lichtman, J. W., Misgeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+axonal+degeneration+and+regeneration+in+the+injured+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of axonal degeneration and regeneration in the injured spinal cord.</a> Nature Medicine. 11 (5), 572-577 (2005).</li>
<li>Ylera, B., Ertürk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronically+CNS-Injured+Adult+Sensory+Neurons+Gain+Regenerative+Competence+upon+a+Lesion+of+Their+Peripheral+Axon%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Chronically CNS-Injured Adult Sensory Neurons Gain Regenerative Competence upon a Lesion of Their Peripheral Axon.</a> Current Biology. 19 (11), 930-936 (2009).</li>
<li>Dray, C., Rougon, G., Debarbieux, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+by+in+vivo+imaging+of+the+dynamics+of+vascular+and+axonal+networks+in+injured+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis by in vivo imaging of the dynamics of vascular and axonal networks in injured mouse spinal cord.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (23), 9459(2009).</li>
<li>Dibaj, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NO+mediates+microglial+response+to+acute+spinal+cord+injury+under+ATP+control+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">NO mediates microglial response to acute spinal cord injury under ATP control in vivo.</a> Glia. 58 (9), 1133-1144 (2010).</li>
<li>Kim, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+microscopy+imaging+of+intact+spinal+cord+and+cerebral+cortex+reveals+requirement+for+CXCR6+and+neuroinflammation+in+immune+cell+infiltration+of+cortical+injury+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning microscopy imaging of intact spinal cord and cerebral cortex reveals requirement for CXCR6 and neuroinflammation in immune cell infiltration of cortical injury sites.</a> Journal of Immunological Methods. 352 (1-2), 89-100 (2010).</li>
<li>Dibaj, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+imaging+reveals+distinct+inflammatory+activity+of+CNS+microglia+versus+PNS+macrophages+in+a+mouse+model+for+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">In Vivo imaging reveals distinct inflammatory activity of CNS microglia versus PNS macrophages in a mouse model for ALS.</a> Plos One. 6 (3), 17910(2011).</li>
<li>Davalos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinogen-induced+perivascular+microglial+clustering+is+required+for+the+development+of+axonal+damage+in+neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Fibrinogen-induced perivascular microglial clustering is required for the development of axonal damage in neuroinflammation.</a> Nature Communications. 3, 1227(2012).</li>
<li>Dibaj, P., Steffens, H., Zschüntzsch, J., Kirchhoff, F., Schomburg, E. D., Neusch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+reveals+rapid+morphological+reactions+of+astrocytes+towards+focal+lesions+in+an+ALS+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging reveals rapid morphological reactions of astrocytes towards focal lesions in an ALS mouse model.</a> Neuroscience Letters. 497 (2), 148-151 (2011).</li>
<li>Bareyre, F. M., Garzorz, N., Lang, C., Misgeld, T., Buning, H., Kerschensteiner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+reveals+a+phase-specific+role+of+STAT3+during+central+and+peripheral+nervous+system+axon+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging reveals a phase-specific role of STAT3 during central and peripheral nervous system axon regeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (15), 6282-6287 (2011).</li>
<li>Nikic, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reversible+form+of+axon+damage+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">A reversible form of axon damage in experimental autoimmune encephalomyelitis and multiple sclerosis.</a> Nature Medicine. 17 (4), 495-499 (2011).</li>
<li>Misgeld, T., Nikic, I., Kerschensteiner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+single+axons+in+the+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of single axons in the mouse spinal cord.</a> Nature Protocols. 2 (2), 263-268 (2007).</li>
<li>Davalos, D., Akassoglou, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Imaging+of+the+Mouse+Spinal+Cord+Using+Two-photon+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy.</a> J. Vis. Exp. 59, 2760(2012).</li>
<li>Farrar, M. J., Bernstein, I. M., Schlafer, D. H., Cleland, T. A., Fetcho, J. R., Schaffer, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+in+vivo+imaging+in+the+mouse+spinal+cord+using+an+implanted+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Nature.+Methods%22%5BJournal%5D)">Chronic in vivo imaging in the mouse spinal cord using an implanted chamber.</a> Nature. Methods. 9 (3), 297-302 (2012).</li>
<li>Fenrich, K. K., Weber, P., Hocine, M., Zalc, M., Rougon, G., Debarbieux, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vivo+imaging+of+normal+and+pathological+mouse+spinal+cord+with+subcellular+resolution+using+implanted+glass+windows%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Long-term in vivo imaging of normal and pathological mouse spinal cord with subcellular resolution using implanted glass windows.</a> The Journal of Physiology. 590 (16), 3665-3675 (2012).</li>
<li>Figley, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Spinal+Cord+Window+Chamber+Model+for+In+Vivo+Longitudinal+Multimodal+Optical+and+Acoustic+Imaging+in+a+Murine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">A Spinal Cord Window Chamber Model for In Vivo Longitudinal Multimodal Optical and Acoustic Imaging in a Murine Model.</a> Plos One. 8 (3), 58081(2013).</li>
<li>Fenrich, K. K., Weber, P., Rougon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implanting+Glass+Spinal+Cord+Windows+in+Adult+Mice+with+Experimental+Autoimmune+Encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Implanting Glass Spinal Cord Windows in Adult Mice with Experimental Autoimmune Encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 82, 50826(2013).</li>
<li>Romanelli, E., Sorbara, C. D., cacute, I. N., Dagkalis, A., Misgeld, T., Kerschensteiner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular%2C+subcellular+and+functional+in+vivo+labeling+of+the+spinal+cord+using+vital+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Cellular, subcellular and functional in vivo labeling of the spinal cord using vital dyes.</a> Nature Protocols. 8 (3), 481-490 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur ve rekabet eden mali çıkarları yoktur.

Burada gösterilen tekniği tekrarlanan, time-lapse sağlar, birçok hafta dışarı dorsal fare SC in vivo görüntüleme sonraki cerrahi prosedürler için gerek kalmadan ameliyat sonrası. Bu prosedür tekrar cerrahi görüntüleme çalışmaları üzerinde veya hücresel dinamikleri hakkında bilgiler kaybolur portmortem histolojik yaklaşımlar üzerinde önemli bir gelişme gösterir. Biz daha önce 30 in vivo SKY patolojiyi incelemek için bu tekniğin değerini göstermiştir var. görüntüleme maksimum uzunluk boyutu SC dorsal yüzeyi üzerinde yoğun, fibröz doku büyümesi ile saptanmıştır. Zamanla, bu büyüme görüntü kontrastı ve çözünürlük kaybı ile sonuçlandı. Bu büyüme, aynı zamanda alternatif cerrahi hazırlıkları 31 görülmüştür. Biraraya, dikkatli bir şekilde bir sızdırmazlık yüzeyi, kan ürünleri çıkarmak için, dorsal SC yüzeyinin yıkama ile bu büyüme minimize edilebilir gözlediksiyanoakrilat ile kesilmiş kemik, silikon elastomer iyice odasının kenarları sızdırmazlık ve dorsal SC ve cam kapak arasındaki interstisyel boşluk en aza indirir. Son zamanlarda, bir polikarbonat odacığı kullanılarak kendi benzer başka bir yaklaşım 32 gösterilmiştir. Bizim paslanmaz çelik parçalar için durum böyle değildir X-ışınını akustik görüntüleme cihazları ile uyumlu olduğundan, polikarbonatın kullanılması avantajlıdır. Ancak, 3D yazıcılar şimdi her yerde teknoloji ile, oda parçaları belirli ihtiyaçlarını karşılamak için geniş bir malzeme çeşitli imal edilebilir. Biz son zamanlarda açık bir fotopolimer bizim tüm parçaları baskılı var. Kapalı odasının Bir anahtar dezavantajı ilaçlar veya SC görüntüleme 34 için uygun eksojen boyaların tekrarlanan dozlarda yönetmek için yetersizlik. Ancak, bugünkü sistemin mekanik stabilite yararlanarak, biz zaten başarılı bizim şimdiki odasına kullandıkly da kapalı bir bölme sistemi (yayınlanmamış çalışma), çoklu zaman noktalarında ilaç verme izin veren bir deri altından implante edilen enjeksiyon portuna bağlı bir intratekal kateter çapa. Üstelik, üst plaka modüler doğası, bu hazırlık gelecekteki versiyonları terapötik maddeler ve floresan etiketler iki tekrarlı uygulama için izin vermek için açılıp kapanabilir bir bölmeyi içerir. Bu ilaç iletimi için elektrotlar, optik geçme ve bağlantı noktaları kayıt için bağlantı elemanları ile üst plakaları tasavvur edilmesi de mümkündür. Bu tür eklemeler olasılıkla Fenrich ark. 31 daha minimalist sistemini kullanarak uygulamak daha zor olacaktır. Sonuç olarak, bizim odası farklı deneyler dayalı olabilir bunun üzerine bir ağ geçidi platform sağlar.

Sağlam organizmalarda in vivo mikroskopi time-lapse gibi immünohistokimya gibi geleneksel tek-zaman noktası analizi erişilemez karmaşık biyolojik süreçlerin, direkt görüntülenmesini sağlar. Özel olarak, çoklu foton mikroskobu (MPM) 1, örneğin, 2,3 kadar ve 4 1 mm&#39;den daha fazla görüntüleme elde edilmiştir kemirgen neokorteks gibi, doku saçılma görüntüleme için izin verir. Tek bir prosedür haftalar ve aylar beyne optik erişim sağlar 5-7 olan cerrahi preparatları ile bir araya getirildiğinde, bu mikroskopi yaklaşımlar sağlıklı ve hastalıklı ülkelerde 8-11 beyinde dinamik süreçleri incelemek için kullanılmıştır. Buna ek olarak, protokoller davranış deneyleri sırasında hücresel çözünürlüklü fonksiyonel görüntüleme için izin uyanık (yani, sigara, anestezi), hayvanlarda in vivo görüntüleme için temin 12,13 geliştirilmiştir. Bu protokoller, comparis kullanılmaktadırkorelasyon nöronal aktivitenin 14 ons, anestezi ve uyanık hayvanlarda 15 sinyalizasyon astrosit kalsiyum, görev özgü nöronal kümelerin 16 belirlenmesi ve nöronların yeteneği bıyık stimülasyonu 17 üzerine nesne konumunu ayırt etmek. Bir hastalık mekanizması 18 gibi akut aksonal dejenerasyon tanımlaması (AAD) sağlayan, fare omurilik (SC) tatbik edilmiştir, sağlıklı ve patolojik mekanizmalar, in vivo görüntüleme zaman atlamalı aydınlatmak için bu yaklaşım potansiyeli göz önüne alındığında. Daha sonraki çalışmalar, arka kök gangliyon (DRG) akson rejeneras-yonunun 19 akson rejenerasyonu 20 kan damarlarının yeri, yaralanma 21 karşılık glial kemotaksis, deneysel otoimmün ensefalomiyelit T-hücresi göçü (EAE) 22, aktivite ile ilgili periferal lezyonların etkileri araştırıldı amyotroph yanıt mikrogliya 23,24 ve astrositler 25ic lateral skleroz (ALS), SC yaralanması (SKY) 26 sonra aksonal filizlenme içinde STAT-3 rolü ve EAE 27 akson kaybı ve kurtarma mekanizması. Bu yaklaşımların başarısına rağmen, tüm bu çalışmalar zaman noktalarında erişilebilir sayısını sınırlayarak, her görüntüleme zaman noktasında hayvanın cerrahi açıklıklar tekrarlanan gerekli başka böylelikle kısa vadeli dinamikleri çalışmaları sınırlayan, tek bir görüntüleme oturumu ya sınırlı ya da alındı ve karıştırıcı deneysel eserler olasılığını arttırır. Bu ameliyatlar için protokoller önceden 28,29 yayınlanmıştır. Son zamanlarda, biz tekrar ameliyatları için gerek kalmadan birden fazla haftalarda fare SC zaman atlamalı MPM görüntüleme etkin bir kronik omurilik odasının implantasyonu için bir teknik 30 yayınladı. Kısaca, bu cerrahi hazırlık alt torakal laminektomi ve dört parçalı odasının implantasyonu performans dahil. odası dahillaminektomi çevreleyen omurlar ve bir cam lamel SC üzerine yerleştirilir ve silikon elastomer ile güvenli kelepçeli üç özel işlenmiş paslanmaz çelik parçalar. Bu teknik, tekrar ameliyatları için gerek kalmadan sağlıklı ve yaralı devletler postoperatif fazla 5 hafta dışarı rutin görüntüleme için izin verdi. Görüntüleme zaman noktalarının sayısı sadece hayvan anestezi indüksiyon tahammül hangi frekansı ile sınırlı idi. Görüntüleme süresi SC yüzeyi üzerine yoğun, fibröz doku büyümesi ile sınırlı kalmıştır. Ayrıca, cerrahi implant motor fonksiyon üzerinde uzun süreli etkisi olduğu belirlenmiş. Bizim ilk yayınlanmasından bu yana, aynı zamanda SC uzun vadeli görüntüleme sağlayan alternatif yaklaşımlar başka 31-33 tarif edilmiştir. Bu protokol, geliştirdiğimiz omurga bölme yerleştirilmesi için prosedürü gösterir.

<table><tbody><tr><td>Vannas makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15000-04</td><td></td></tr><tr><td>forseps, makas, neşter vb.</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>çoklu&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ekartör kiti -manyetik fiksatör</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18200-02</td><td></td></tr><tr><td>ekartör kiti -ekartör</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>18200-09</td><td>diğer ekartörler de kullanılabilir</td></tr><tr><td>ekartör kiti -elastomer</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>18200-07</td><td></td></tr><tr><td>geri besleme kontrollü ısıtma battaniyesi</td><td>CWE Inc.</td><td>Model: TC-1000 Fare&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Bölüm No. 08-13000</td><td></td></tr><tr><td>stereotax</td><td></td><td>bakınız Farrar ve diğerleri, Nat. Meth., 9, 297, 2012, Ek (çevrimiçi)</td><td></td></tr> <tr><td>omurilik odası</td><td></td><td>bakınız Farrar ve diğerleri, Nat. Meth., 9, 297, 2012, Ek (çevrimiçi)</td><td></td></tr> <tr><td>omurga odası sahipleri</td><td></td><td>bakınız Farrar ve diğerleri, Nat. Meth., 9, 297, 2012, Ek (çevrimiçi)</td><td></td></tr> <tr><td>Siyanoakrilat yapıştırıcı</td><td>Loctite</td><td>Loctite 495</td><td>çoklu tedarikçiler</td></tr><tr><td>Teets Cold Cure Mercan Tozu (diş akrilik tozu)</td><td>Teets</td><td>Mfg. Bölüm: 8101</td><td>birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Teets Cold Cure Liquid (dental akrilik sıvı)</td><td>Teets</td><td>Mfg. Bölüm: 8501</td><td>çoklu tedarikçi</td></tr><tr><td>Glikopirrolat</td><td>MWI Veteriner Malzemeleri</td><td>MWI SKU: 29706 (Baxter 1001901602)</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>Bupivakain</td><td>MWI Veteriner Malzemeleri</td><td>MWI SKU: 029841 (Hospira 116301)</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>MWI Veteriner Malzemeleri</td><td>MWI SKU: 002800 (Pfizer 2193)</td><td></td></tr><tr><td>Deksametazon</td><td>MWI Veteriner Malzemeleri</td><td>MWI SKU: 501012 (VetOne 1DEX032)</td><td></td></tr><tr><td>KwikSil Elastomer World</td><td>Precision Inc.</td><td>KWIK-SIL</td><td></td></tr><tr><td>KwikSil Karıştırma İpuçları</td><td>World Precision Inc.</td><td>KWIKMIX (KWIKMIX)</td><td></td></tr></tbody></table>

boyuna için bir spinal odası implantasyon için bir prosedürü İn vivo fare omurilik görüntüleme

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

Memeli neokorteksindeki çalışmalar, canlı kemirgenlerde tekrarlanan, hızlandırılmış in vivo görüntüleme ile kortikal yapının, aktivitenin ve nörodejeneratif hakaretlere verilen yanıtın benzeri görülmemiş bir şekilde çözülmesini sağlamıştır. Bu çalışmalar, tekrarlanan cerrahi prosedürler olmadan uzun bir süre optik erişim sağlayan basit cerrahi prosedürlerle mümkün olmuştur. Buna karşılık, omuriliğin benzer çalışmaları daha önce her biri invaziv bir cerrahi gerektiren sadece birkaç görüntüleme seansı ile sınırlıydı. Daha önce açıklandığı gibi, 8 haftaya kadar sürekli optik erişim sağlayan, omurganın mekanik stabilitesini koruyan, görüntüleme sırasında dışarıdan kolayca stabilize edilebilen ve sadece tek bir ameliyat gerektiren bir omurga odası geliştirdik. Burada, omurga odasının tasarımı ve ilgili cerrahi aletler gözden geçirilmekte ve cerrahi prosedür ayrıntılı olarak gösterilmektedir. Kısaca bu videoda cerrahi alanın ve farenin ameliyata hazırlanması, omurga omurlarının pozlandırılması ve uygun doku debridmanı, implantın verilmesi ve omur klemplenmesi, haznenin tamamlanması, taşıyıcı sistemin çıkarılması, cildin sızdırmazlığı ve son olarak ameliyat sonrası bakım gösterilecektir. Doğrusal olmayan mikroskopi kullanılarak kronik in vivo görüntüleme prosedürü de gösterilecektir. Son olarak, sonuçlar, sınırlamalar, tipik değişkenlik ve sorun giderme için bir kılavuz tartışılmaktadır.

Yukarıdaki prosedür izlenerek, ameliyat, her aşamada, Şekil 2'de belirtilen cerrahi her bir aşama için sonuçlar taklit etmelidir. Özel bakım cam altındaki hava kabarcıklarını yok etmek için silikon elastomer uygulanırken alınan ya da en azından emin olmak gerekir ilgi alanı (Şekil 2L) periferinde yer. Deneyimli bir cerrah için, ameliyat sırasında ya da ilk 24 saat içinde cerrahi girişimden ya ötenazi gerektiren cerrahi komplikasyonlar operasyonların yaklaşık% 20 oluşur. Bu komplikasyonlar en sık aşırı yumuşak doku kanama veya güvenli Vertebral kolon odasına takmak için doğacak. Başarıyla implante odalarında, pencere genellikle birden hafta (Şekil 3) için optik şeffaf kalır. En iyi çabalarına rağmen, opak, lifli, neoplastik büyüme genellikle kısmi obscuri sonuçlanan, bir kaç gün içinde oluştururPencerenin ng (Şekil 3C - F, siyah kesikli çizgi). Floresan yapılar bu fibröz doku altında 2PEF mikroskopi kullanılarak görmek zordur. Biz başarıyla implante pencerelerin yaklaşık 50% postoperatif fazla 5 hafta açık kalan, sonuçların bimodal dağılımını bulmak ve yaklaşık 50% 1 içinde Karartılmış olma - 3 hafta. 2PEF görüntüleme engel değil, - görüntüleme penceresi deneyimi veya dura (F, yeşil yıldız Şekil 3D) Yukarıdaki neovaskülarizasyon sadece mütevazı bir derece içinde net, çoğu yerde kalır pencereler için. Daha önceki çalışmada, 30 kafa penceresi preparasyonlar 5 görülene benzer Orta bir iltihap gösteren pencere ve komşu vertebralar altında mikroglia artış ancak astrosit yoğunluğu göstermiştir. Dorsal kök Gangl bir alt kümesi olarak sarı floresan proteini (YFP) ifade eden transjenik farelerdeia (DRG) nöronları (YFPH hattı, Jackson Labs), aksonlar açıkça operasyon sonrası hafta ayırdedilebilir olmuştur (Şekil 4A ve b) ve uzun bir hayvanda dört ay gibi (veri gösterilmemiştir). Kan damarları (Şekil 4A ve B), kan plazması içinde dekstran etiketli retro orbital enjekte floresan Teksas Kırmızısı görülür hale getirilir. Mikroglia bir CX3CR1 knock-in fare GFP ifade eden farelerde görselleştirilmiştir (CX3CR1-GFP, Jackson Labs) YFPH hattı (Şekil 4C) geçti. Kontrast ve çözünürlük nedeniyle daha önce 30 tarif lifli büyümesi oluşumuna zaman (Şekil 4C) üzerinden alçakgönüllülükle kötüleşti. Biz rutin her 12 saat olduğunca sık ölüm olmadan tek oturumda 3 saat görüntülü ve. Oturum süresi ve sıklığı laboratuvar hayvanlarında ağrı ve sıkıntı eşlik etik hususlar ile anestezi indüksiyonu, eşlik eden hayvan tolerans ile sınırlıdır. &lt; keep-together.within-sayfa = "always"&gt;: fo p class = "jove_content" <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52196/52196fig1highres.jpg"> Şekil 1. Özel bir cerrahi paketi implantasyonu sırasında odası teslim kolaylaştırır ve daha sonraki görüntüleme oturumları sırasında odasına stabilize. İki yan barlar ve bir üst plaka (A) spinal odasının (C) içine küçük vidayı kullanarak (B) monte edilir. Uzatılabilir mesaj (D) bir ameliyat masası tutma pimleri kullanarak omur (E) yan çubukların teslimat sıkma sağlar. Daha sonraki görüntüleme oturumları yerine implant (F) kanatlarında kümesi vidalar aracılığıyla odasına eklemek için içten dişli mesajları kullanın. Bu rakamın Panel b Nature Publishing Group izni ile Farrar ve ark., Nature Yöntemleri, 2012 30 modifiye edilmiştir.96 / 52196fig1large.jpg "target =" _ blank "&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için burayı tıklayınız. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52196/52196fig2highres.jpg"> Şekil 2. Bir dorsal laminektomi yapılır ve kronik görüntüleme odası omuriliğe optik erişim sağlamak için implante edilir. Prosedür montaj açıklanmıştır. İlk olarak, cilt (paneller A, B, protokol bölümleri 3,1-3,4) ve kaslar (C; 3.5) üç alttaki vertebra ortaya çıkarmak için çekilir. Bu üç omurga üzerinde uzanan doku çıkarılır (D, E, K; 3,6-3,10) her iki tarafına (3.12 G, H) üzerine sıkıştırılmış önce ve yan işlemleri, temiz kazınır. Dikkatle, merkezi vertebra dorsal lamina kaldırılır ve kemik kenarları (I mühürlü (J; 5.1) uygulanır ve vidalar pozisyon (K; 5.3) içine tutturulmuş silikon elastomer ve kapak cam (5.5 L) ile odasını mühürleme önce odasına güvenceye alın. Sevkiyat pimleri (M, 5.8) çıkarıldıktan sonra, deri odası içinde deri kenarlarına yapıştırılmıştır (M, N, 5.8) ve ayar vidası kanat (O; 5.9) eklenir. (P; 5,10) Son vida yuvaları diş akrilik ile mühürlenir. Ve fare kurtarmak için temiz bir kafes yerleştirilir <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52196/52196fig2large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için burayı tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52196/52196fig3highres.jpg"> Şekil 3. Kronik omurilik odası optik şeffaf ov kalırBirden çok hafta er. Bir kaç dakika (A) ameliyat sonrası üç hafta (F) arasında değişen omurilik beyaz ışık ve görüntüler. Vasküler görülecek her zaman noktalarında (sarı oklar) tanımlanabilir. Küçük bir değişiklik, bir gün, cerrahi girişimden (B) görülür. Yoğun lifli büyümesi (C - Sağ alt kesikli çizgi ile sınırlanan F) mevcut en erken üç gün ve görüntüleme alanının kısmi şaşırtmaca sonuçları olduğunu. Hafif neovaskülarizasyon (D, E, F, yeşil yıldız) da mevcut, ancak. Beyaz ışık veya 2PEF görüntüleme orijinal damarsal belirsiz değil <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52196/52196fig3large.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/52196/52196fig4highres.jpg"><pclass>Şekil A kronik spinal odası tekrar ameliyatları için gerek kalmadan tekrarlanan çoklu foton görüntüleme sağlar 4.. spinal dorsal Funiculi DRG akson (yeşil) bir alt kümesi YFP ifade transgenik farelerin Tekrarlanan görüntüleme kord ve damar boya enjeksiyonu (A, B) işaretli damar (kırmızı). mikrogliada (leylak rengi) aktivitesi de Thy1-YFP / CX3CR1-GFP çift transgenik fareler (C) zamanla izlenebilir. Akson ve mikroglia görünür kalırken, zamanla alçakgönüllülükle kontrast ve çözünürlük düşüş (C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52196/52196fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> </pclass>

Bu videoda, bir canlı fare dorsal spinal kord üzerinde kronik optik görüntüleme odasını yerleştirmeye yönelik bir prosedür açıklanmaktadır. odası, cerrahi işlem ve kronik görüntüleme gözden ve gösterilmiştir.

Boyuna için bir Spinal Odası implantasyon için bir Prosedürü İn Vivo Fare Omurilik Görüntüleme

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Bu prosedürün genel amacı, tekrarlanan cerrahi nöbetlere gerek kalmadan uzunlamasına optik görüntülemeyi mümkün kılmak için bir farenin dorsal omuriliği üzerine bir görüntüleme odası implante etmektir. Bu, önce üç torasik omurun açığa çıkarılması ve omurganın üzerindeki yumuşak dokunun çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, odanın yan parçalarını kullanarak açıkta kalan omurları klemplemek ve dorsal laminektomi yapmaktır.Daha sonra, odanın üst plakası açıkta kalan omuriliğin üzerine sıkıca tutturulur ve silikon elastomer ve bir kapak camı kullanılarak kapatılır. Son adım, yapıştırıcılar kullanarak implantın etrafındaki cildi kapatmak ve hayvanın iyileşmesine izin vermektir. Sonuç olarak, çoklu foton floresan mikroskobu, omurilikteki hücresel davranışı ve doku yapısını zaman içinde hücre altı çözünürlükle görüntülemek için kullanılır.Yeni metodolojimizin, omuriliğin tekrarlanan cerrahi olarak açılması gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, potansiyel enfeksiyon, cerrahi travma veya hayvan stresi gibi tekrarlanan cerrahi ile ilişkili komplikasyonlar olmadan uzun bir süreye yayılmış neredeyse rastgele sayıda görüntüleme zaman noktasına sahip olma yeteneğidir. Bu yöntem için ilk olarak, şeffaf zebra balığında omurilik yaralanmasını takiben boylamsal görüntülemenin önceki başarısını düşündüğümüzde aklımıza geldi. Daha sonra bu paradigmayı memeli modeline genişletmeye karar verdik.Bu prosedüre, flor kullanılarak anestezi uygulanan bir farenin torasik kemer bölgesini tıraş ederek başlayın. Ardından kesilen saçları çıkarın. Daha sonra, salin, ketoprofen ve deksametazon karışımını fareye deri altından uygulayın.Pamuklu çubuk kullanarak. İyot ve% 70 etanol için üç alternatif yıkama yapın ve yıkamalar arasında bir dakika bekleyin. Bundan sonra, insizyon bölgesindeki ağrıyı azaltmak için traş edilmiş yamanın merkezine deri altından 100 mikrolitre% 0.125 Bupivakain uygulayın.Ardından fareyi özel stereo saldırılara aktarın. Rektal termometreyi yerleştirin ve bupivakainin mikroskop altında etkili olması için yaklaşık 10 dakika bekleyin. Bir neşter bıçağı ile ilgilenilen omurların üzerinde beş milimetrelik bir kesi oluşturun.Bundan sonra, künt diseksiyon ile derideki açıklığın boyutunu arttırın. Ardından, cilt ile alttaki kas arasındaki bağ fasyasını nazikçe ayırın. Ekartörlerle daha geniş bir çalışma alanı için cildi geride tutun ve göğüste herhangi bir ağırlığı artırmamaya ve nefes almayı engellememeye dikkat edin.Ardından, bir çift forseps ile üstteki kasın içinden açığa çıkacak olan rostral, çoğu omuru kavrayın. Dorsal sürecin her iki tarafındaki dokuyu üç omurdan uzakta kesin. Daha sonra, üstteki tüm dokuyu dorsal laminattan çıkarın.Daha sonra, omurganın her iki yan kenarındaki omurlara bağlı tendonları dikkatlice kesin. Temiz bir sıkıştırma yüzeyi sağlamak için omur kolonunun yan kenarlarından mümkün olduğunca fazla dokuyu nazikçe çıkarın. Ardından, kalan yumuşak dokunun omurlarını nazikçe debride edin.Bir kemik kazıyıcı ve pamuklu çubuk kullanarak, cerrahi makası kullanarak uyumsuz dokuları kesin. Ardından, omur kolonunu çevreleyen dokuyu geri tutmak için ekartörleri ayarlayın. Deri ile birlikte, implant kenar çubuklarını dağıtım direklerindeki tırnaklara takın ve bunları direk tutuculara yerleştirin.Sonra, üç omuru kelepçeleyin. Kenar çubuklarını, onları güvenli bir şekilde tutmak için yeterli basınç uygulayarak kullanın. Ardından, üç omurun düz bir şekilde kenetlenmesini sağlamaya yardımcı olmak için forsepsleri kullanın.Laminektomiyi gerçekleştirmeden önce kenar çubuklarının hem düz hem de paralel olduğundan emin olun. Bundan sonra, pamuklu çubuklar kullanarak kelepçelenmiş omurların sırt yüzeyini dikkatlice temizleyin ve kurulayın. Bu prosedürde, Vana makasının uçlarını medial klempli omurun epidural boşluğuna yerleştirin ve tutamakları hafifçe sıkın.Kemik kuru ise, dorsal lamina boyunca çatlamalıdır. Gevşek laminayı tutarken laminayı serbest bırakmak için bu işlemi karşı tarafta tekrarlayın Forseps ile dorsal işlemle nazikçe, laminanın rostral ve kıvrık uçlarındaki herhangi bir bağ dokusunu dikkatlice kesin. Ardından, omuriliğin üzerindeki kanı %0,9 salin veya yapay serebral omurilikle iyice yıkayın, fazla sıvıyı pamuklu çubuklarla emdirin.Bundan sonra, kemiğin yan kenarlarını kesin ve implantın kenar çubuklarına ilerleyin. Daha sonra pamuklu çubuklar ve tuzlu su kullanarak kanamayı kontrol edin. Periosteumun bir kısmının ayrılması ve omuriliğin üzerini örtmesi durumunda, pamuklu çubuklar ve 29 ila 30 gauge iğne kullanarak dokuyu nazikçe çıkarın.Omuriliğe zarar vermemeye dikkat edin ve gevşek periosteuumu sıkıca sarılmış bir datorla karıştırmayın. Sonunda. Kemiğin kalan açıkta kalan kenarlarını diş, akrilik ve siyanoakrilat ile kapatın.Yapıştırıcının açıkta kalan omuriliğe girmesini önlemek için özellikle dikkat edin. Şimdi, üst plakayı hayvanın üzerine dikkatlice yerleştirin, böylece dört yuva kenar çubuklarındaki dört delikle aynı hizada olacak ve açıklık açıkta kalan omuriliğin üzerine gelecek şekilde. Bir kuyumcu tornavidası kullanarak, tornavidanın milini başka bir forseps ile sabitleyerek ilk vidayla dikkatlice başlayın.Bu aşamada vidayı sıkmayın, ancak ilk birkaç diş yerine oturacak şekilde yerleştirin. Bu işlemi diğer üç vida için de tekrarlayın. Dört vidanın tümü yerindeyken, tüm vidalar sıkıca sabitlenene kadar her bir vidayı aynı küçük artışlarla dönüşümlü olarak sıkın.Ardından, omurilik ile cam pencere arasındaki boşluğu doldurmak için hızlı eşik marka silikon elastomeri kullanın ve açıkta kalan omuriliğe uygulayın. Uygulamadan önce karıştırma ucundaki hava kabarcıkları içeren silikonlardan kurtulduğunuzdan emin olun. Ardından, üst plakadaki ek parçaya hızlı bir şekilde beş milimetrelik bir kapak fişi yerleştirin.Omuriliği çevrelemek için sıvı elastomeri kademeli olarak sıkmak için yeterli basınç uygulayın, ancak omurilik sıkışmasına neden olmaz. Daha sonra, sızan elastomerin kenarlarını diş, akrilik ve siyanoakrilat ile kaplayın ve elastomerin omurilik yüzeyi üzerinde kaymasını önlemek için elastomeri mümkün olduğunca çevredeki kemiğe yapıştırmak için yapıştırıcıları kullanın. Ardından, ekartörleri çıkarın ve cildi implantın kenarı boyunca yukarı doğru çekin.Cildi implantın kenarlarına yapıştırmak için siyanoakrilat kullanın. Bundan sonra, vidaları üst plakanın kanatlarına yerleştirin. Ardından, hayvanı kurtarma için kafese geri yerleştirmeden önce diş akrilik kullanarak üst plakanın vida yuvalarındaki boşlukları kapatın.Görüntüleme seanslarından önce, fareyi tekrar uyuşturun ve implantın açıkta kalan vidalarını stabilizasyon için dişli direklere takın. Bu şekil, kronik bir omurga odasının birkaç hafta boyunca optik olarak şeffaf kaldığını göstermektedir. Bunlar, ameliyattan birkaç dakika ila üç hafta sonra değişen omuriliğin beyaz ila açık görüntüleridir.Vasküler yer işaretleri tüm zaman noktalarında tanımlanabilir. Ameliyat sonrası bir günde çok az değişiklik görülür. Yoğun fibröz aşırı büyüme, pencerenin bir kısmında üç gün gibi kısa bir sürede bulunur ve görüntüleme alanının kısmen gizlenmesine neden olur.Hafif neovaskülarizasyon da mevcuttur, ancak beyaz ışıkta veya iki PEF görüntülemede orijinal vaskülatürü gizlemez. Kronik omurga odası, tekrarlanan ameliyatlara gerek kalmadan tekrarlanan çoklu foton görüntülemeye izin verir Gösterilmiştir. İşte omuriliğin dorsal fii'sindeki DRG aksonlarının bir alt kümesinde YFP'yi eksprese eden transgenik bir farenin görüntüleri.Damar sistemi, kırmızı ile gösterilen intravasküler boya enjeksiyonu ile işaretlendi. Mikroglia aktivitesi zaman içinde uylukta, bir YFP CX'te, üç CR'de, bir GFP çift transgenik farede de izlenebilirken, aksonlar ve mikroglia görünür kalır. Kontrast ve çözünürlük zaman içinde mütevazı bir şekilde azalır.Bir kez ustalaştı. Bu teknik geliştirildikten sonra düzgün bir şekilde uygulandığı takdirde yaklaşık bir saat içinde yapılabilmektedir. Bu teknik, omurilik yaralanmasından sonra akson geri dönüşünün zamansal ve mekansal heterojenliğini keşfetmemizin yolunu açtı.Ve fareler.

a-procedure-for-implanting-spinal-chamber-for-longitudinal-vivo

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Fare spinal kolon stabilize ve tekrarlayan gerçekleştirmek için minimal invaziv bir...

Fare Omurilik İki foton Mikroskop kullanarak in vivo Görüntüleme

Omuriliğe (gen ve hücre) tedavilerin teslimat için kullanılan cerrahi teknik ve cihaz Kısa görsel açıklama. Bu teknik, hayvan içinde gösterdi ama tamamen çevrilebilir ve şu anda insan uygulaması için kullanılmaktadır olmasıdır.

Terapiler Omurilik Teslimat için Cerrahi Tekniği: Göttingen Minipigs Prosedürü gösterilmesi

Kaynak: Pietruczyk, E. A., et al. Farede laminektomi ve omurilik penceresi implantasyonu. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, in vivo görüntüleme için anestezi uygulanmış bir fareye bir omurilik penceresinin implantasyonunu göstermektedir. Protokol, bir borosilikat kapak camı ve 3D baskılı bir arka plaka kullanarak açıkta kalan omuriliği stabilize eder. Bu yöntem, kan-beyin bariyeri dinamiklerini ve nörovasküler etkileşimleri incelemek için yüksek çözünürlüklü iki foton mikroskobunu mümkün kılar.

In Vivo Görüntüleme için Bir Farede Omurilik Penceresi İmplantasyonu

Deneysel otoimmün ensefalomiyeliti incelemek için yetişkin farelerin açıkta kalan omurilikleri üzerine cam pencerelerin implante edilmesi ve bakımı için bir yöntem açıklıyoruz. Bu pencereler, iki foton mikroskobu kullanarak canlı hayvanlarda hücre altı düzeyde hücre dinamiklerini izlemek için omuriliğe kronik optik erişim sağlar.

Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis Erişkin Farelerde Cam Omurilik Windows&#39;u implante

Akson ve miyelin yaralanmalarının dinamiklerini gerçek zamanlı olarak aynı anda görselleştirmek için iki foton uyarımlı hızlandırılmış mikroskopi kullanan bir protokol sunuyoruz. Önerilen bu protokol, yaralanma sonrası merkezi miyelinli akson kaderini etkileyebilecek ve kalıcı klinik sakatlığa katkıda bulunabilecek hem içsel hem de dışsal faktörlerin çalışmasına izin vermektedir.

Bir Ex vivo Lazer kaynaklı Omurilik Felçlileri Modeli Gerçek zamanlı aksonal Dejenerasyon mekanizmaları değerlendirmek için

Fare omuriliği görüntülenmesi için yeni bir ex vivo hazırlık. Bu protokol, omurilik boyunca canlı hücresel etkileşimlerin iki foton görüntüleme için izin verir.

Fare Omurilik Hücresel Dynamics İki foton Görüntüleme

Demiyelinizan hastalıklar, lizolesitinin CNS'ye fokal olarak uygulanmasıyla hayvanlarda modellenebilir. Fare omuriliğine tek bir lizolesitin enjeksiyonu, zamanla kendiliğinden onarılan bir lezyon oluşturur. Amaç, de- ve remiyelinizasyon ile ilgili faktörleri incelemek ve onarımı geliştirmek için ajanları test etmektir.

Lisolesitin Odak Enjeksiyon Deneysel Demyelizasyon ve Kemirgen Omurilik remiyelinizasyon

Bu protokol, intravital mikroskopi ile görselleştirmeyi kolaylaştırmak için bir farenin omuriliğine cam pencere nin yerleştirilmesini açıklar.

Farede Laminektomi ve Omurilik Penceresi İmplantasyonu

Uyarılmış Raman saçılması (SRS) mikroskopisi, biyomoleküllerin spesifik kimyasal bağların içsel titreşimine dayanarak etiketsiz görüntülenmesini sağlar. Bu protokolde, canlı farelerin omuriliğindeki hücresel yapıları görselleştirmek için entegre bir SRS ve iki fotonlu floresan mikroskobun enstrümantal kurulumu açıklanmaktadır.

İn vivo Kombine İki Foton Floresan ve Stimüle Raman Saçılma Mikroskobu ile Biyolojik Dokuların Görüntülenmesi

Bu protokol, omurilik cerrahisi yapmak ve kemirgenlerde omurilik üzerine optik bir şaft implante etmek ve sabitlemek için cerrahi bir prosedürü detaylandırır.

Optoelektronik cihazların kemirgen omuriliğine implantasyonu

Bu protokol, uyanık farelerde omuriliğin ultrason stimülasyonu için özel olarak tasarlanmış bir ultrason dönüştürücü fiksasyon sistemini tanımlar. Yöntem, ultrason dönüştürücüsünün doğru konumlandırılmasını sağlamak için bir sabitleme sistemi kullanır ve aynı zamanda deney deneklerinin stimülasyon hassasiyetinden ödün vermeden serbestçe hareket etmesine izin verir.

Farelerde Omurilik Nöromodülasyonu için Ultrason Transdüserlerinin Fiksasyonu

Öğrenin fare omuriliğinde kronik optik görüntüleme için spinal odası implantasyon prosedürünü. Bu yöntem, tekrarlayan cerrahiler olmadan longitudinal hücresel davranış çalışmalarına olanak tanır.

Boyuna için bir Spinal Odası implantasyon için bir Prosedürü İn Vivo Fare Omurilik Görüntüleme

Daha fazla video keşfet