Name: Farelerde Miyokard İnfarktüsü Oluşturan Minimal İnvaziv Cerrahi Prosedür (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-04T11:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 5 s
Description: Öğrenin farelerde minimal invaziv cerrahi ile yüksek tekrarlanabilirlikte miyokard infarktüsü oluşturma yöntemini. Sol inen koroner arter ligasyonu ve immünohistokimyasal analiz kullanılarak kalp hastalıkları araştırmalarında etik ve güvenilir sonuçlar elde edilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, RWTH Aachen Üniversitesi Tıp Fakültesi bünyesindeki Disiplinlerarası Klinik Araştırma Merkezi IZKF Aachen (EAL'nin genç araştırma grubu) tarafından desteklenmiştir. Makalenin eleştirel incelemesi için Dr. Rusu ve Ashley Christina Vourakis'e ve immünohistokimya boyama konusundaki profesyonel yardımları için Bayan Roya Soltan'a minnettarız.

NOT: Bu yazıda sunulan deneyler Alman düşüğe ve Avrupa hayvan bakımı kurallarına uygun şekilde yapılmaktadır. hayvanlar Dr. R. Tolba ve Dr A. Teubner (hayvan refahı memuru) gözetiminde, Laboratuar Hayvan Bilimi Enstitüsü, Universiy hastane Aachen, Almanya Hayvan tesisinde yetiştirilmektedir. 1. Hayvan Bakımı <ol><li> Gıda ve uzman veteriner kontrol ve tedaviye uygun erişimi sağlama uzmanlaşmış bakım ünitesinde fareler tutun. Hayvanlar taşınmış veya dışarıdan satın alınması halinde, prosedür girmeden önce bir haftalık konaklama temin edebilirsiniz. </li></ol> 2. Entübasyon <ol><li> , 8-10 haftalık erkek C57BL / 6 vahşi tip fareler anestezi 100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg ksilazin intraperitonal enjeksiyonu ile 25-27 gr. Ayak tutam refleksleri ile anestezi düzeyini izleyin. İşlem sırasında kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem yerleştirin. </li><li&gt; kurumun hayvan bakımı yönergeleri izleyerek, cerrahi prosedür başlamadan önce buprenophine 0.1 mg / kg vücut ağırlığı subkutan ile ağrı tedavisi yönetin. </li><li> Steril malzeme ve araçları kullanarak ameliyat sırasında enfeksiyonları önlemek için steril koşullarda korunmasını sağlamak. </li><li> Isıtılmış ameliyat masasında sırtüstü pozisyonda anestezi fare yerleştirin. Küçük bir jilet kullanarak ventral boyun bölgesinde ve göğüs kafesinin sol yarısında hem saç kaldırmak ve kesi öncesinde% 70 alkol ile dezenfekte edin. <ol><li> Boyun merkezinde cerrahi makas kullanılarak 0.5 sm&#39;lik bir küçük ortalama kesisi. Deri altında, steril kavisli forseps ile 2 yağlı organları geçmesi ve kaplama kas açıklık yoluyla stereomicroscope altında trakea görselleştirmek. </li></ol></li><li> Stereomikroskopta (Şekil 1A) kullanarak sözlü görünüme altında trakea içine entübasyon kanül tanıtın. Bir uçtan bir uca, metal kanül ayırtşeffaf doku ugh. Ve her an (Şekil 1B) çalışma sırasında, konumunu ve yerini. </li><li> Küçük hayvan ventilatöre kanül bağlayın ve havalandırma ayarları Kullanıma göre ayarlamak ilkelerine uygun (100-150 ul ve min başına 100-150 arasında bir solunum hızı arasındaki tidal hacim) üretmektedir. </li></ol> 3. Miyokard Enfarktüsü İndüksiyon <ol><li> Xiphoid sol axila arasındaki çizginin ortasında bir cilt kesisi az 0,5 cm gerçekleştirin. Altta yatan kaburga kas tabakası ayırmak için forseps kullanabilir. </li><li> Göğüs boşluğu 17 açılana kadar küçük bir makas kullanarak kaburgalar arasında küçük bir kesi yapın. Kronik enfarktüs, 4. interkostal alana (Şekil 1D) &#39;de, 5. interkostal alana (Şekil 1C) ve / veya iskemi / reperfüzyon modeli için kesi gerçekleştirmek: daha kolay bir yöntem numarası 2 inci ve aşağıdan 3 th </sup&gt; interkostal boşluk, sırasıyla). </li><li> Göğüs boşluğu açmak ve kalp görselleştirmek için kesi içine Ekartörleri yerleştirin. </li><li> Dikkatle aşırı fibrotik süreçleri engellemek için perikard çıkarın. </li><li> Derin konumlandırılmış açık kırmızı gemisi olarak sol inen koroner arter (LAD) gözünüzde canlandırın. LAD görüntülenmiştir edilemezse, tekrarlanabilir artırmak için bazı referans noktaları göz önünde bulundurun. <ol><li> Kronik enfarktüs modeli için, Şekil 1C gösterildiği gibi referans olarak ven sahip (kulak kepçesi ve apeks arasında) kalbin ventral tarafında ortasında bitişik harfleri yerleştirin. Bir transmural anterior ve posterior enfarktüsü elde etmek için 0/7 ipek sütür kullanılarak arter hem dallarını Bind. Gri renkli ligature konumunu gösterir (Şekil 1 C) eğer ihtiyaç duyulursa tekrarlanabilir. </li><li> Iskemi / reperfüzyon modelinde, LAD ana gövdenin (Şekil 1D) üzerinden, kulak kepçesi altında bitişik harfleri yerleştirin. ligçalıçtırdıgınızda kap bütünlüğünü korumak için, bir silikon tüpe yer almaktadır. gri renk Enfarktüslü alanı gösterir ve tüm kalp (Şekil 1D) görünmelidir. Iskemi döneminde kaburga temporal sütür koyun ve doku kurumasını önlemek için bir kompres kullanarak nemlendirin. Iskemi sonrasında silikon tüp kaldırmak ve reperfüzyon görselleştirmek için küçük makas ile dikiş kesti. </li></ol></li><li> Prosedürün başında kullanılan anestezik ve analjezik (2.1 ve 2.2 adımları) yanında, hayvanın uygun konfor sağlamak ya da kurumun hayvan bakım kurallara uymayı ameliyat sırasında% 0.5 izofluran kullanın. </li></ol> 4. Sütür ve Kurtarma <ol><li> Sıcak izotonik tuz çözeltisi ile doldurularak toraks kalan havayı ortadan kaldırın. </li><li> 3 dikiş 0/6 (Şekil 2A ve 2B&#39;de gösterildiği gibi) ile boğaz kapatın. Olarak sağlamak için, 90 ° &#39;lik bir açı ile medial dikiş yerleştirinŞekil 2&#39;de gösterildiği gibi, kaburgaların kapatma ealed (Şekil 2A, B). </li><li> 2 dikiş (Şekil 2C) ve 3-4 sütür 0/6 (Şekil 2D) ile deri ile kas tabakası kapatın. Daha fazla ekokardiyografik ölçüm için uygun bir pencere elde etmek için ayrı ayrı bu sütürler gerçekleştirin. </li><li> Ventilatörden entübasyon kanül ayırın ve spontan bir nefes sağlar. Daha sonra kimlik, yerel sistem (Kurumunuzdan hayvan refahı memuru sor) kullanarak fare işaretleyin. </li><li> O uyanana kadar kırmızı lamba altında sol tarafta fare yattı. Yeterli bilinci yerine kadar gözetimsiz bir hayvan bırakmayın. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirket olmak için ameliyat geçirmiş bir hayvan izin vermeyin. </li><li> Kurumunuzun hayvan bakımı yönergeleri izleyerek, önümüzdeki 3 gün boyunca buprenophine 0.1 mg / kg vücut ağırlığı, deri altından ile ağrı tedavisi yönetin. </li&gt; </ol> Miyokard İnfarktüsü 5. Analizi <ol><li> Ejeksiyon fraksiyonu, fraksiyonel kısalma, kalp debisi ve kalp boyutları: Düzenli ekokardiyografi (Şekil 3A) vasıtasıyla kalp fonksiyonlarının izlenmesi. </li><li> 100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg ksilazin intraperitonal enjeksiyonu ile hayvanlar anestezisi. Refleksleri eksikliği tarafından ameliyat öncesi uygun anesthetization onaylayın. </li><li> Göğüs boşluğu açın ve yoğun steril PBS solüsyonu yıkama kalan kanda yerleştirerek, kalp tüketim. </li><li> Gerekirse, göğüs boşluğundan, ya da kalbin çıkarıldıktan sonra infracted bölgelerin yaralanma kaçınarak kalp doğrudan kan toplamak. </li><li> Yıkandıktan sonra, doymuş KCl çözeltisi içinde Diastola kalp stop (steril PBS içinde 3M KCl süzülmüş). Histolojik analiz için% 10 formalin içinde kalbi düzeltmek ve Adım 5.7 ile devam edin. </li><li> Gerekirse, arabayı canlılığını ölçmekEvans-Mavi / Triphenyl tetrazolyum klorür (TTC) boyama ile kardiyak hücreleri. Yıkamadan ilk yerde bitişik harfleri yeniden sonra, aort kanülü kullanılarak 200 ul% 1 Evans mavi solüsyonla kalp serpmek ve -20 ° C&#39;de küçük bir plastik torba içinde kalp dondurma. <ol><li> 2 saat sonra, keskin bir bıçak kullanılarak 5 enine kaydırmaları ve imal tarafından tarif edildiği gibi, 37 ° C&#39;de TTC çözeltisi 10-15 dakika boyunca inkübe. % 10 formalin içinde 10 dakika süreyle slaytlar saptamak ve daha fazla analiz için mikroskopik slaytlar arasında koydu. </li><li> Enine bölümlendirilmeleri gerçekleştirmek için, ucunda kalbi konumlandırarak, parafin kalp dokusu gömün. 5 um&#39;lik bir seri bölümüne gerçekleştirin. İlk 20 bölümden toplayın ve bir sonraki 300 mikron atın. Mitral kapak seviyesi ulaşılıncaya kadar bölüm protokolü devam (Şekil 3A, B). Seri kesitler dışında tüm kalp boyunca 400 mikron toplanır ve f lekeli olabilirveya kalitatif ve kantitatif analiz. </li></ol></li><li> Gomori en tek-adım 6-8 boyama kullanarak enfarktüs boyutunu ölçün. </li><li> Her zamanki immünohistolojik boyama kullanarak seri bölümde anjiogenezisi, kollajen içeriği veya iltihap hücreleri işe analiz edin. </li></ol>

<ol><li>Liehn, E. A., Postea, O., Curaj, A., Marx, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+after+myocardial+infarction%2C+between+fantasy+and+reality%3A+the+role+of+chemokines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Repair after myocardial infarction, between fantasy and reality: the role of chemokines.</a> J Am Coll Cardiol. 58 (23), 2357-2362 (2011).</li>
<li>Liehn, E. A., Radu, E., Schuh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokine+contribution+in+stem+cell+engraftment+into+the+infarcted+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Chemokine contribution in stem cell engraftment into the infarcted myocardium.</a> Curr Stem Cell Res Ther. 8 (4), 278-283 (2013).</li>
<li>Alexander, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+transplantation+of+different+cell+types+sequentially+improves+heart+function+after+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Repetitive transplantation of different cell types sequentially improves heart function after infarction.</a> J Cell Mol Med. 16 (7), 1640-1647 (2012).</li>
<li>Liehn, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartmentalized+protective+and+detrimental+effects+of+endogenous+macrophage+migration-inhibitory+factor+mediated+by+CXCR2+in+a+mouse+model+of+myocardial+ischemia%2Freperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Compartmentalized protective and detrimental effects of endogenous macrophage migration-inhibitory factor mediated by CXCR2 in a mouse model of myocardial ischemia/reperfusion.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (9), 2180-2186 (2013).</li>
<li>Liehn, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ccr1+deficiency+reduces+inflammatory+remodelling+and+preserves+left+ventricular+function+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Ccr1 deficiency reduces inflammatory remodelling and preserves left ventricular function after myocardial infarction.</a> J Cell Mol Med. 12 (2), 496-506 (2008).</li>
<li>Liehn, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+monocyte+chemotactic+protein-1%2Fchemokine+CC+motif+ligand-2+competitor+limiting+neointima+formation+and+myocardial+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">A new monocyte chemotactic protein-1/chemokine CC motif ligand-2 competitor limiting neointima formation and myocardial ischemia/reperfusion injury in mice.</a> J Am Coll Cardiol. 56 (22), 1847-1857 (2010).</li>
<li>Liehn, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Double-edged+role+of+the+CXCL12%2FCXCR4+axis+in+experimental+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Double-edged role of the CXCL12/CXCR4 axis in experimental myocardial infarction.</a> J Am Coll Cardiol. 58 (23), 2415-2423 (2011).</li>
<li>Oral, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXC+chemokine+KC+fails+to+induce+neutrophil+infiltration+and+neoangiogenesis+in+a+mouse+model+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">CXC chemokine KC fails to induce neutrophil infiltration and neoangiogenesis in a mouse model of myocardial infarction.</a> J Mol Cell Cardiol. 60, 1-7 (2013).</li>
<li>Projahn, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+intramyocardial+release+of+engineered+chemokines+by+biodegradable+hydrogels+as+a+treatment+approach+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Controlled intramyocardial release of engineered chemokines by biodegradable hydrogels as a treatment approach of myocardial infarction.</a> J Cell Mol Med. 18 (5), 790-800 (2014).</li>
<li>Schuh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+insights+into+the+mechanism+of+cell-based+therapy+after+chronic+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Discoveries%22%5BJournal%5D)">Novel insights into the mechanism of cell-based therapy after chronic myocardial infarction.</a> Discoveries. 1 (2), e9(2014).</li>
<li>Schuh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+SDF-1+alpha+on+Endogenous+Mobilized+and+Transplanted+Stem+Cells+in+Regeneration+after+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">Effect of SDF-1 alpha on Endogenous Mobilized and Transplanted Stem Cells in Regeneration after Myocardial Infarction.</a> Curr Pharm Des. 20 (12), 1964-1970 (2013).</li>
<li>Zaragoza, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Animal models of cardiovascular diseases.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 497841(2011).</li>
<li>Kanzler, I., Liehn, E. A., Koenen, R. R., Weber, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+therapeutic+approaches+to+reduce+acute+atherosclerotic+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory therapeutic approaches to reduce acute atherosclerotic complications.</a> Curr Pharm Biotechnol. 13 (1), 37-45 (2012).</li>
<li>Liehn, E. A., Zernecke, A., Postea, O., Weber, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines%3A+inflammatory+mediators+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Chemokines: inflammatory mediators of atherosclerosis.</a> Arch Physiol Biochem. 112 (4-5), 229-238 (2006).</li>
<li>Kolk, M. V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LAD-Ligation%3A+A+Murine+Model+of+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction.</a> J. Vis. Exp. (32), 1438(2009).</li>
<li>Ryu, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+bone+marrow+mononuclear+cells+using+injectable+fibrin+matrix+enhances+neovascularization+in+infarcted+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Implantation of bone marrow mononuclear cells using injectable fibrin matrix enhances neovascularization in infarcted myocardium.</a> Biomaterials. 26 (3), 319-326 (2005).</li>
<li>Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, J., Giraud, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-based+Therapy+for+Heart+Failure+in+Rat%3A+Double+Thoracotomy+for+Myocardial+Infarction+and+Epicardial+Implantation+of+Cells+and+Biomatrix%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Cell-based Therapy for Heart Failure in Rat: Double Thoracotomy for Myocardial Infarction and Epicardial Implantation of Cells and Biomatrix.</a> J. Vis. Exp. (91), e51390(2014).</li>
<li>Xu, Z., Alloush, J., Beck, E., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Murine+Model+of+Myocardial+Ischemia-reperfusion+Injury+through+Ligation+of+the+Left+Anterior+Descending+Artery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery.</a> J. Vis. Exp. (86), e51329(2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

İşlem sırasında, bazı kritik noktalara dikkat edilmesi vardır: entübasyon, açılış göğüs boşluğu ve LAD bağ. ilk kritik adım denemelerinde önce hayvanın entübasyon olduğunu. Birçok grup trakea içine doğrudan kanül eklemek için fare ve ışık kaynağı sabitleme için dikey destek kullanıyorsunuz. Bu yöntem, belirsizlik trakea içine kanül doğru takılmasını ilişkin vardır ve acemiler tarafından en başarısız eğilimli. Küçük bir kesi yapmak, kanül konumu dolayısıyla varsayılan oranını azaltarak, tüm manevra sırasında kontrol edilebilir. Ayrıca, trakeotomi böylece komplikasyonların azaltılmasında ve çalışma süresini azaltarak, aştı. Bir sonraki adım, kritik göğüs boşluğunun açılması olduğunu. median sternotomi hayvanların kurtarma geciktirerek yüksek risk manevrasını temsil eder. 2-3 kaburgaların 15 kesim ima yanal sol kesi </sup&gt;, eksik toparlanma ve artmış mortalite yol açar. Biz asgari yükü sunan kaburga arasındaki modeli küçük, ayrık kesi kullanılan. Hayvanlar ameliyattan sonra çok hızlı bir şekilde kurtarmak ve mevcut kusurları veya rahatsız şifa yapamaz. Alt arası costal alan bir referans noktası olarak alınır. Bu göz önüne alındığında, kronik ve iskemi / reperfüzyon modeli için bağ yere doğru ve farklılaştırılmış erişim, ciddi sorunlar yükseltmek değil. bağ kendisi en kritik adımı temsil etmektedir. sol inen koroner arter görüntülenmiştir zordur ve genellikle olmadan görünümü bağlı olması gerekir. Bu nedenle, bazı anatomik referans noktaları doğru ligasyonu gerçekleştirmek için cerrah yardımcı işaret edilmektedir. Kronik enfarktüs modeli için, bağ majör ön ven (Şekil 2B) biten üstünde, kulak kepçesi ve apeks arasında, kalbin ventral tarafında ortasında yer alıyor. verim contro edilebiliretkilenen bölgelerde gri renk görünümünü görselleştirme ile lled. Enfarktüslü alan anterior görünür ve arka duvarı içermiyorsa, yeni bir dikiş ilk dikiş soluna yerleştirilebilir. LAD ana kök bu bölümünü tespitinde ciddi sorunlar söz konusu değildir, bu nedenle kulak kepçesi 18 altında her zaman görülebilir ve. Ancak, kulak kepçesi kanama riskini önemli sunar ve dikkatle ele alınması gerekir. prosedür uygun ekipman varlığı ile sınırlıdır. Küçük hayvanlar için bir vantilatör ve uygun anestezi sistemi pahalı ve oda gaz ve havalandırma sistemine bağlantı gerektirir. Dahası, hayvanların yakın bir gözetim prosedürü olası klinik tespit etmek sonra ilk hafta içinde gereklidir. Deney sırasında kalp fonksiyonunu incelemek için, yüksek çözünürlüklü ultrason, karmaşık Langendorf perfüzyon sistemi, ya da küçük intraventriküler kateter ölçümleri gereklidir, invyüksek maliyetler ve ek uzmanlık SORUN. Miyokard infarktüsü göz önüne alındığında, in vitro olayların karmaşıklığını yeniden kullanılabilir hiçbir alternatif yöntemler var. Ilgi alanına bağlı olarak, Langendorff sisteminde izole kalp ex vivo perfüzyon farklı uyaranlara veya ilaçlara yanıt kontraktilite, kalp fonksiyonlarının ve miyokard canlılığı hakkında bilgi sağlar. Bununla birlikte, kan bileşiklerinin ve bağışıklık sisteminin tüm müdahaleler hariç ve miyokardiyal enfarktüs sonrası yeniden modellendirme ve iyileştirme uzun çalışmalar için endike değildir. Miyokard enfarktüsü işlemini gerçekleştirdikten sonra, diğer tüm fonksiyonel analiz intraventriküler basınç ölçümlerinde, ultrason (küçük hayvan ultrason sistemleri) veya izole kalp Langendorff-perfüzyon gibi yapılabilir. Ayrıca, tüm biyolojik ve moleküler analizi, ge hücreleri, proteinler, mRNA&#39;lar, microRNA tespit etmek gerçekleştirilebilirnes veya miyokard enfarktüsü için yeni tedavi stratejileri geliştirmek için terapötik hedefler olarak kullanılabilecek diğer biyobelirteçler.

Miyokard infarktüsü sanayileşmiş ülkelerde başlıca ölüm nedenlerinden biridir. Tanı ve tedavi yaklaşımlarının yadsınamaz gelişmelere rağmen, kalp damar hastalıkları hala mortalitenin en önemli nedenidir. Geliştirilmiş yaşam beklentisi ve yaşam ile ilgili riskleri göz önüne alındığında, kardiyovasküler hastalıkların görülme sıklığında sürekli bir artış gelecekte bekleniyor. Bu nedenle, kardiyovasküler hastalığın tedavisi için yeni yaklaşımlar kurmak ve doğrulamak için bir ihtiyaç vardır. İnsan çalışmaların bilgi sınırlamalar muzdarip, bu çalışmalar genellikle açıklamak ve bu önemli sağlık problemlerine çözümler sunmak yerine getiremediğini, moleküler düzeyde mekanizmaları anlamak için yeterli değildir. Ayrıca, temel araştırma laboratuarda kardiyovasküler hastalık mekanizmalarını üretmek için karmaşıklığı ve zorluk nedeniyle sınırlıdır. Bu nedenle, kardiyo patofizyolojisi hakkındaki bilgilerimizi artırmak içindamar hastalıkları, bu hayvan modelleri 1,2 doğrulamak için gereklidir. Bununla birlikte, hayvan deneylerinde, çok sayıda neden gerekli olan farklı zaman noktalarında, miyokardiyal enfarktüs, analizden sonra iyileşmesinde rol oynayan moleküler olayların her kaskadlar tespit etmek. Miyokard infarktüsü deneyleri genelde hayvan modelleri kullanılarak yapılmaktadır. Küçük hayvanlarda 3-11 miyokard infarktüsü uyaran büyük hayvan modellerinde daha hücresel ve moleküler olayları incelemek için kullanılan en uygun ve verimli bir modeldir. Dahası, hiçbir diğer türler fareler 12 olarak transgenik ya da nakavt suşları kullanılabilirliğini sunuyor. Bu fare modelleri 13,14 (stent restenozu, ateroskleroz gibi) kalp damar rahatsızlıkları da dahil olmak üzere diğer hastalıklar, son derece yararlıdır. Buna ek olarak, düşük gebelik dönemi ve yavru sayısının yüksek miyokard INFA moleküler mekanizmaları incelemek için en cazip sistem olarak fare modelleri nitelemekrction 12. Bununla birlikte, farelerde kalp boyutu mikrocerrahi sırasında manipülasyon yüksek hassasiyet bekliyor. Böyle nitelikli ve vasıflı personel cerrahi öğretmek bir zaman tüketen ve iş yoğun bir süreçtir. Bu nedenle, biz burada böyle farelerde karmaşık miyokard infarktüsü modeli gerçekleştirmek için öğrenci veya teknisyen olarak bile ortalama niteliklere sahip işbirlikçileri, rehberlik ipuçları ve püf noktaları da dahil olmak üzere ayrıntılı bir mikrocerrahi prosedürü sunuyoruz. Başlangıçta, entübasyon trakeotomi kullanmadan kısa bir kanül vasıtası ile gerçekleştirilir. Torasik kesi kaburga ve / veya çevre dokulara yaralanması kaçınarak, interkostal bölgede yer almaktadır. Bu alt-adım hızlı toparlanma ve iyileşme 15 sağlamak için büyük önem taşımaktadır. hala önemli bir enfarktüs büyüklüğünü korurken bağ, yüksek hayatta kalma oranı, kronik iskemi ve iskemi / reperfüzyon modelleri için diferansiyeli yapılır. Deneyimlerimiz tha gösteriyoripek sütür kullanılarak t kriyo-yaralanmalar 16 kıyasla daha yüksek bir tekrarlanabilirlik sağlar. Sonuç olarak, burada tarif edilen yöntem, küçük hayvanlarda hem kronik iskemi ve iskemi / reperfüzyon modellerinde uygulanabilir. Bu prosedürde sunulan ipuçları ve püf noktaları, küçük hayvan modellerinde uygulamak bile düşük ya da ortalama yeterlilik ile personel sağlamak içindir.

<table><tbody><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Olympus</td><td>SZ/X9</td><td></td></tr><tr><td>Fare ventilatörü</td><td>Harvard Aparatı</td><td>730043</td><td>Model Minient 845</td></tr><tr><td>Çift Anestezi Sistemi (Masaüstü Versiyon)</td><td>Harvard Aparatı</td><td></td><td>Kompakt 8" x 11" ayak izine sahip, laboratuvar masalarında kullanım için bağımsız izofluran bazlı anestezi ünitesi.</td></tr><tr><td>Entübasyon kanülü</td><td>Harvard Aparatı</td><td>732737</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>FST, Almanya</td><td>9119700</td><td>standart uç kavisli 0,17 mm x 0,1 mm</td></tr><tr><td>Makas</td><td>FST, Almanya</td><td>9146011</td><td>düz</td></tr><tr><td>Vannas makas</td><td>Aesculap, Almanya</td><td>OC 498 R Ekartörler</td><td></td></tr><tr><td></td><td>FST, Almanya</td><td>1820010</td><td>2,5 mm genişliğinde</td></tr><tr><td>Ekartörler</td><td>FST, Almanya</td><td>1820011</td><td>5 mm genişliğinde</td></tr><tr><td>Tel kulplar</td><td>FST, Almanya</td><td>1820005</td><td>&nbsp; 10 cm</td></tr><tr><td>Tel kulplar</td><td>FST, Almanya</td><td>1820006</td><td>&nbsp; 14 cm</td></tr><tr><td>Ketamin %10</td> <td>CEVA, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin %2</td> <td>Medistar, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bepanthene göz ve burun kremi</td><td>Bayer, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Silikon tüp</td><td>IFK Isofluor, Almanya</td><td>ısmarlama ve nbsp; ürün</td><td>çapı 500 ve mikro; m</td></tr><tr><td>kesit kalınlığı 100 ve mikro; m</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>politetrafloretilen kateter</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PROLENE Sütür 6/0&nbsp;</td><td>ETHICON</td><td>8707H</td><td>polipropilen monofilament sütür, emilmez, iğne CC1, 13 mm, 3/8 Daire</td></tr><tr><td>7/0 İpek</td><td>Seraflex</td><td>IC 1005171Z</td><td></td></tr><tr><td>Ultrason&nbsp;</td><td>Vevo, Kanada</td><td>770 Vevo</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde miyokard İnfarktüsü oluşturan minimal İnvaziv cerrahi prosedür

Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

Miyokard infarktüsü hala son yıllarda stent geliştirme alanında önemli ilerlemelere rağmen, batı ülkelerinde ölüm ana nedeni olmaya devam etmektedir. Altında yatan mekanizmaların aydınlatılması ve yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için, geçerli hayvan modellerinde durumu zorunludur. Biz miyokard enfarktüsü mücadele in vivo koşullarda altında kalp ve damar hastalıkları patomekanizmaların yeni anlayışlar gerektiğinden, hayvan modelinin geçerliliği önemli bir yönüdür. Bununla birlikte, hayvan koruma, bu bağlamda oldukça önemlidir. Bu nedenle, bir yüksek tekrarlanabilirlik ve hayvanların hayatta kalma oranını garanti farelerde miyokard infarktüsü minimal invaziv ve basit bir model kurmak. Böylece, bu modeller hayvan deneyleri için 3R prensibi gereksinimlerini (Yedek, Sadeleştirme ve Azaltma) yerine getirir ve cardiov için terapötik stratejilerin daha gelişmekte için gerekli olan bilimsel bilgileri teminascular hastalıkları.

miyokard enfarktüsü prosedürü 25-30 dakika içinde meydana gelir ve% 10 mortalite oranını gösterir. Ameliyattan sonra, fareler sonraki 15 dakika içinde anestezi kurtarmak. Hiçbir fiziksel bozukluk işletilen fare gözlendi. Tamir işlemleri inflamatuar aşamasında rahatsız Ancak, post-kronik miyokard enfarktüsü sonrası kalp rüptürü riski daha yüksek bir hafta var. Kalp pompalama sırasında önemli ölçüde boyutlarını değiştirmek mümkün olduğundan, tüm toplanan kalpleri Diastola örneğin, aynı pozisyonda durdurulması için, önemlidir. Bu, doymuş KCI çözeltisi ile kalp perfüze ile elde edilebilir. Hücre-dışı K + konsantrasyonu blokları iyonik pompalar artan kalp aktivitesinin diyastolik durması ile sonuçlanan kardiyak hücreler membran dinlenme potansiyelini azaltır. enfarktüs alanı ultrason analizi (Şekil 3A, alt panel) görülebilir. KıyaslaNormal miyokard, iskemik bölgeler ince ve hipokinetik (Şekil 3A, üst panel) görünür. Kullanılan modele bağlı olarak, enfarktüs boyutu değişir. İskemi / reperfüzyon, ince, orta duvar indükler ve kalp (Şekil 3C) içinde ise, kronik enfarktüs modeli, apeks (Şekil 3B), dairesel, transmural enfarktüs indükler. Enfarktüs boyutunu belirlemek için birçok yöntem vardır. Amaç kalp canlılığı üzerinde doğrudan etkisi analiz ise, 18 boyama bir Evans-Mavi / TTC miyokardiyumun herhangi bir değişiklik görmek mümkün, en az 2 saat reperfüzyon sonrasında yapılması gösterilir. Bölümler boyama hemen sonra (Şekil 3B, orta panel) analiz edilebilir veya 2-3 gün (Şekil 3C, orta panel) için formalin içerisinde, cam slaytlar arasında tutulabilir. mavi alan iskemi etkilenmez sağlıklı miyokardı, temsil eder. kırmızı alan th içinde canlı miyokard temsile iskemik alanı (risk miyokard), beyaz alan ölü dokuyu temsil eder. Genellikle, enfarktüs boyutu risk alanından yüzdesi olarak ifade edilir. işlemleri biçimlenme sonra elde edilen, olgun yara kolayca Gomori en tek-aşamalı bir boyası ile immunohistolgy ile ölçülebilir. Blue lekeli enfarkte ve kırmızı lekeli sağlıklı ventriküler alanları (Şekil 3B ve C, sağ panel), mitral kapak kadar her düzeyde ilk bölümünde belirlenmiştir. , Farklı seviyelerde LAD bağlanması ile değişimini önlemek için, tüm bölümünden enfarktüsü olarak kabul edilir ve toplam sol ventrikül hacminin bir yüzdesi olarak ifade edilir. Kronik enfarktüs modelinde ve% 10-15 iskemi / reperfüzyon modelinde sonra% 15-20 arasında bir enfarktüs hacmi elde edilebilir. Bundan başka, kronik enfarkt modeli abartılı şekilde genişleme neden olacaktır, iskemi / reperfüzyon modelinde gözlemlenmemiştir (Şekil 3B ve C right panel). Gibi kullanılabilir geleneksel boyama işlemleri: CD31 anjiyojenezi ortaya çıkarmak için kullanılan boyama (kırmızı, Şekil 4A) veya düz kas aktini boyama miyofibroblastlar (yeşil, Şekil 4B) belirlemek gerekmektedir. Çift floresan boyama, aynı zamanda kardiyomiyositlerin mevcut olmaması otomatik immünofloresan (Şekil 4C) verir, enfarktüs alanında farklı hedef molekülleri tanımlamak için uygulanabilir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/52197/52197fig1.jpg"> Şekil 1: Medial insizyon ve entübasyon en kanül (A) ekleme. doku (B) açıklık yoluyla metal kanül stereomicroscopic görselleştirme. trakea halkaları (mavi oklar) ve kanül (siyah ok) işaret edilmektedir. Kronik enfarktüs mo için interkostal insizyondel ve LAD bağ (C). bağ referans olarak (mavi şematik, alt panel) ven ucunu alarak (kulak kepçesi ve apeks, alt panelde siyah arasında) kalbin ortasında yer almaktadır. Arterin iki kol (alt panelde kırmızı) bağlı olması. gri renk Enfarktüslü alanı gösterir ve kalbin (sağ alt panel) alt yarısı kısmında görünür. iskemi / reperfüzyon modeli için bağ, bir silikon tüpe (sağ taraf) (D) üzerindeki LAD ana gövdesini (alt panel kırmızı) bağlanma, kulak kepçesi altında yapılır. gri renk, tüm kalp (sağ alt panel) üzerindeki mevcut infracted alanı gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52197/52197fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52197/52197fig2.jpg"> Şekil 2: (A) 90 ° 'lik bir açı ile konumlandırılmıştır halinde insizyon ve iskemi / reperfüzyon (B, sol panel) kaburga dikiş., in vivo görüntüleme (Cı, sol panel ), kas sütür (C orta panel) ve cilt sütür (C sağ panel). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52197/52197fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52197/52197fig3.jpg"> Şekil 3: Ekokardiyografik görüntüler. Normal (A, üst panel) ve enfarkte alanlar (A, alt panel) görüntüleri, uzun eksende edinilen (boyuna, sol paneller) veya kısa eksen (enine, sağ paneller) 'de .. İnfarkt kronik dikilen tarafından uyarılan(B) ve reperfüzyon (C) ile, ardından bir saat iskemi. Evans Mavi / TTC lekelemesi perfüze (mavi) tanımlanmasını / perfüze olmayan alanlar gibi canlı (kırmızı) / ölü (beyaz) miyokard (B, C, orta paneller) sağlar. Gomori en tek adım boyama enfarkte alanlar (mavi) belirlenmesini sağlar ve normal bölgeler (kırmızı) (B, C, sağ paneller) onları ayırır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52197/52197fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/52197/52197fig4.jpg"> Şekil 4: Farklı renklendirmeler gibi tarif edilen yeni-anjiyogenez ile CD31 (A, kırmızı, basit oklar) veya miyofibroblastlar için düz kas aktini (B, g, infracted bölgede gerçekleştirilebilirReen basit oklar) yanı sıra çift boyama (Cı-CD31-kırmızı / düz kas aktin-yeşil)) çekirdek (mavi DAPI ile karşıt. Miyofibroblastlar daima endotel tabakasının (C oklar) eşlik küçük ya da büyük arterlerden düz kas hücreleri, kolayca ayırt edilebilir. Çift oklar eritrosit otofloresans etmektedir. Ölçek 50 mikron barlar.

Minimal invaziv manipülasyonlara sahip farelerde miyokard enfarktüsü için yüksek oranda tekrarlanabilir bir model tanımlanmıştır. Model kolayca gerçekleştirilebilir, bu da yüksek tekrarlanabilirlik ve hayatta kalma oranı ile sonuçlanır. Bu nedenle, açıklanan model, 3R ilkesinin (Değiştirme, İyileştirme ve İndirgeme) talep ettiği gibi gerekli hayvan sayısını azaltacaktır.

Farelerde Miyokard İnfarktüsü Oluşturan Minimal İnvaziv Cerrahi Prosedür

Myocardial infarction still remains the main cause of death in western countries, despite considerable progress in the stent development area in the last ...

Bu prosedürün genel amacı, minimal invaziv manipülasyonlarla farelerde yüksek oranda tekrarlanabilir bir miyokard enfarktüsünü indüklemektir. Bu, işlem sırasında entübasyon kanülü pozisyonunu kontrol etmek için stereo mikroskop altında entübasyon ile elde edilir. İkinci adımda, göğüs boşluğunu açmak ve hızlı iyileşmeyi kolaylaştırmak için kaburgalar arasında gizli bir yanal sol kesi yapılır.Sol inen koroner arterin ligatürü daha sonra uygun aşağı akış manipülasyonuna göre yerleştirilir. Sonuçta, enfarktüsün boyutu ve şekli standart immünohisto morfometrik analiz ile değerlendirilebilir. Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre temel avantajları, minimal invaziv olması, yüksek oranda tekrarlanabilir olması ve kolayca gerçekleştirilebilmesi, en az deneyime sahip bir araştırmacının bile küçük hayvan modellerinde uygulayabileceği bir yöntem elde etmesini sağlamasıdır.Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler, fare kalbinin boyutu yüksek hassasiyette manipülasyon gerektirdiğinden mücadele edecektir. Mikrocerrahi sırasında. Anestezi uygulanmış sekiz ila 10 haftalık bir erkek, C 57 BL altı vahşi tip fareyi ısıtılmış bir ameliyat masasına sırtüstü pozisyonda yerleştirerek başlayın.Ayak parmağınızı sıkıştırarak uygun sedasyon seviyesini onayladıktan sonra, hayvana göz merhemi sürün ve kılları ventral boyun bölgesinden çıkarmak için küçük bir tıraş bıçağı kullanın ve toraksın sol yarısı cildi% 70 etanol ve kuluçka dermi ile dezenfekte edin. Daha sonra boynun ortasında 0,5 santimetrelik küçük bir medyan kesi yapın. Derinin altına girdikten sonra, trakeanın örtücü kas boyunca görselleştirilmesini kolaylaştırmak için iki yağlı cisimden bir çift steril kavisli forseps geçirin.Stereo mikroskop ile entübasyon kanülünü oral yoldan trakeaya sokun. Kanül şeffaf doku içerisinden gözlenmelidir. Cihazın uygun şekilde yerleştirildiğini onayladıktan sonra, kanülü küçük hayvan ventilatörüne bağlayın ve miyokard enfarktüsünü indüklemek için ventilasyon ayarlarını 100 ila 150 mikrolitre arasında bir tidal hacme ve dakikada 100 ila 150 aspirasyon arasında bir solunum hızına ayarlayın.Daha sonra, ksifoid süreci ile sol Xi arasındaki deride 0,5 santimetreden daha kısa bir kesi yapın.Daha sonra forseps kullanarak, kronik bir enfarktüs için kas tabakasını alttaki kaburgalardan ayırın. Bir iskemi reperfüzyon modeli için beşinci interkostal boşlukta bir kesi yapın. İnsizyonu dördüncü interkostal boşlukta yapın.Daha sonra, göğüs boşluğunu açmak ve kalbi görselleştirmek için ekartörleri insizyona yerleştirin. Daha sonra aşırı fibrotik süreçleri önlemek için perikardımı dikkatlice çıkarın ve sol inen koroner arteri derin konumlandırılmış açık kırmızı damar olarak görselleştirin. Kronik enfarktüs modeli için, sol inen koroner arteri referans olarak kullanarak, kalbin ventral tarafının ortasına, oracle ve apeks arasına bir bağ yerleştirin.Daha sonra transmural anterior ve posterior enfarktüsü elde etmek için, arterin her iki dalını bağlamak için sıfır yedi ipek sütür kullanın. İskemi reperfüzyon modeli için, ligatürü oracle'ın altına ve bir silikon tüpün ve sol inen koroner arterin ana gövdesinin üzerine yerleştirin. İskemi döneminde, kaburgalara temporal dikişler yerleştirin ve dokunun kurumasını önlemek için dikişleri bir kompres ile nemlendirin.Daha sonra iskemiden sonra silikon tüpü çıkarın ve reperfüzyonu görselleştirmek için dikişi küçük bir makasla kesin. Enfarktüsü indükledikten sonra, kalan havayı ortadan kaldırmak için toraksı ılık izotonik tuz çözeltisi ile doldurun. Daha sonra toraksı 3 0 6 dikişle kapatın ve kaburgaların sızdırmaz bir şekilde kapanmasını sağlamak için medial dikişleri 90 derecelik bir açıyla konumlandırın.Kas tabakasını iki dikişle kapatın, ardından cildi gerektiği kadar üç ila dört dikişle kapatın. Daha sonra, fareyi daha sonra tanımlamak üzere işaretleyerek spontan nefese izin vermek için entübasyon kanülünü ventilatörden çıkarın ve hayvanı uyanana kadar kırmızı bir lambanın altına yerleştirin. Miyokard enfarktüsü verilerini analiz etmek için, ejeksiyon fraksiyonunu, fraksiyonel kısalmayı, kalp debisini ve kalp boyutlarını ekokardiyo ile düzenli olarak izleyin.Deneyin son noktasında, göğüs boşluğunu açın ve kalbi çıkarın. Kapsamlı yıkama için dokuyu steril PBS'ye yerleştirin. Daha sonra tüm kan alındıktan sonra, doymuş bir potasyum klorür çözeltisi ile kalbi diyastolde durdurun ve dokuyu gece boyunca% 10 formalin içinde sabitleyin.Kalp dokusunun ince bölümünü parafine gömün, dokunun enine kesitlenmesine izin vermek için kalbin ucunu montaj bloğunun altına yerleştirin. Ardından, sonraki 300 mikronu atarak beş mikronluk 20 seri bölüm toplayın. Mitral kapak seviyesine ulaşılana kadar her 300 mikronda bir 25 mikronluk kesitler toplamaya devam edin.Ardından, TTC boyamayı gerçekleştirmek için dokunun enfarktüs boyutunu ölçmek için mori'nin bir adım boyamasını kullanın. Bağı yeniden oluşturun ve kalbi 200 mikrolitre% 1 Evans mavisi çözeltisi ile perfüze etmek için bir aort kanülü kullanın ve kalbi yıkamadan eksi 20 santigrat derecede küçük bir plastik torbada dondurun. İki saat sonra, dokudan beş enine kesiti almak için keskin bir neşter kullanın ve bölümleri 10 ila 15 dakika inkübe edin.Üreticinin talimatlarına göre 37 santigrat derecede TTC çözeltisinde. % 10 formalin içinde 10 dakikalık bir fiksasyondan sonra, bölümleri cam mikroskop slaytlarına aktarın. Histolojik analiz için.Kullanılan modele bağlı olarak, enfarktüs boyutu farklı olacaktır. Kronik enfarktüs modeli, apeksin dairesel bir transmural enfarktüsünü indüklerken, iskemi reperfüzyon modeli, kalbin tamamı boyunca ince bir orta duvarı indükler. Enfarktüsün kardiyak canlılık üzerindeki doğrudan etkisini analiz etmek için, Evans mavisi TTC boyama, iskemiden etkilenmeyen sağlıklı miyokardın mavi, iskemik alan içindeki canlı risk altındaki miyokardın kırmızı ve ölü dokunun beyaz renkte ortaya çıkarılması için kullanılabilir.Genellikle enfarktüs boyutu, Maori'nin risk alanının yüzdesi olarak ifade edilir. Tek basamaklı boyama, mitral kapaktan önce elde edilen kalp dokusunun her seviyesinden ilk kesitte analiz edilen mavi lekeli enfarktüslü ve kırmızı lekeli sağlıklı ventrikül alanları ile yeniden şekillenme işlemi sonucu ortaya çıkan olgun yara izinin ölçülmesine olanak sağlar. Tüm kesitlerden gelen enfarktüs daha sonra toplam sol ventrikül hacminin yüzdesi olarak ifade edilir.Bu görüntülerde örneğin geleneksel boyama prosedürleri de gerçekleştirilebilir. Enfarktüslü dokuda sırasıyla anjiyogenez ve miyofibroblastların varlığını ortaya çıkarmak için CD 31 ve düz kas aktini için boyama kullanıldı. Kardiyomiyositlerin yokluğunda otofloresan gözlenmediğinden, enfarktüs alanındaki farklı hedef molekülleri tanımlamak için çift floresan boyama kullanın.Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde uygulanırsa 25, 30 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü takiben yüksek tekrarlanabilirliği sağlamak için yeterli ağrı yönetimi gereklidir. İntraventriküler, basınç ölçümleri, ultrason veya izole kalp akciğeri gibi diğer fonksiyonel analizler de yapılabilir.Perfüzyonun sonu.

minimal-invasive-surgical-procedure-inducing-myocardial-infarction

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Çok sayıda genetik manipülasyonlar ve / veya genler, proteinler, hücre ve / veya biyomalzemeler intramiyokardiyal enjeksiyonu, akut iskemi / reperfüzyon hasarı ve farelerde kronik remodeling çalışmaları zaman boyutu üzerine bindirilmiş. Bu video iskemi / reperfüzyon için mikrocerrahi prosedürleri, kalıcı koroner arter ligasyonu ve intramiyokardiyal enjeksiyon çalışmaları göstermektedir.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Farelerde Deneysel miyokardiyal enfarktüs indüklemek için kullanılan cerrahi prosedür kalp ve akciğer sol ön yüzeyine görselleştirmek için üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki sol torakotomi ile başlar. Sol koroner arter ligasyonu olduğu, göğüs kapalı ve fare kendiliğinden kurtarmak için izin verilir.

Fare Koroner Arter Ligasyonu için Modifiye Tekniği

Bu videoda, sol ön inen koroner arteri kalıcı olarak bağlayarak miyokard enfarktüsünün bir fare modelini oluşturmak için cerrahi bir prosedürü açıklıyoruz.

Miyokard Enfarktüsünün Murin Modelinin Oluşturulması: Fare Modelinde Sol Ön İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu İçin Cerrahi Bir İşlem

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Bir fare modelinde sol ön inen arter (LAD) ligasyonu için güvenilir bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, endotrakeal entübasyon, sol taraflı torakotomi yaklaşımı ve torasentezi içeren diğer yöntemlere göre nispeten daha az invazivdir. Bu yöntem hem akut hem de kronik miyokard enfarktüsü (MI) için bir model olarak kullanılabilir.

Kemirgen Sol Ön İnen (LAD) koroner arter ligasyonu: Miyokard İnfarktüsü Yönelik Gelişmiş ve Basitleştirilmiş Modeli

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Bu makalede, minimal invaziv bir yaklaşım kullanarak sıçanlarda miyokardiyal iskemi ve sonraki kronik reperfüzyon gerçekleştirmek için etkili bir yöntem sunar. Ayrıca sıçanların sol ventrikül hemodinamik fonksiyonu ekokardiyografi ve izole çalışma kalp yöntemleri ile değerlendirilmektedir.

Sıçanlarda Miyokard İnfarktüsü İndükleyen Yarı-Minimal İnvaziv Yöntem ve İzole Çalışan Kalp Sistemi Ile Kardiyak Fonksiyonun Değerlendirilmesi

Yeterli anestezi altında, fare kalbi interkostal boşluktan dışsallaştırıldı ve miyokard enfarktüsü, çoğu laboratuvarda kolayca bulunabilen malzemeler kullanılarak sol ön inen arteri (LAD) bağlayarak başarılı bir şekilde indüklendi.

Farelerde Miyokard Enfarktüsünün İndüksiyonu için Değiştirilmiş Basit Bir Yöntem

Burada, mikromanipülasyon yoluyla sol ön inen koroner arterin hassas ligasyonu ile farelerde miyokard enfarktüsü veya miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarını indükleyebilen basit ve tekrarlanabilir bir yöntem tanımlanmıştır.

Farelerde Miyokard Enfarktüsü ve Miyokard İskemi-Reperfüzyon Hasarının İndüksiyonu

Farelerde miyokard enfarktüsü bölgesi etrafında ultrason rehberliğinde hücre dağıtımı, hücre nakli için güvenli, etkili ve uygun bir yoldur.

Miyokard Enfarktüslü Farelerde Ultrason Rehberliğinde İndüklenen Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kardiyomiyosit İmplantasyonu

Burada sunulan, farelerde sol koroner arterin kalıcı olarak bağlanması için cerrahi bir prosedürdür. Bu model, miyokard enfarktüsü sonrası patofizyolojiyi ve ilişkili inflamatuar yanıtı araştırmak için kullanılabilir.

Sol Koroner Arter Ligasyonu: Miyokard Enfarktüsünün Cerrahi Murin Modeli

Öğrenin farelerde minimal invaziv cerrahi ile yüksek tekrarlanabilirlikte miyokard infarktüsü oluşturma yöntemini. Sol inen koroner arter ligasyonu ve immünohistokimyasal analiz kullanılarak kalp hastalıkları araştırmalarında etik ve güvenilir sonuçlar elde edilir.

Farelerde Miyokard İnfarktüsü Oluşturan Minimal İnvaziv Cerrahi Prosedür

Daha fazla video keşfet