Doğal Kadın Rats Bisiklet içinde Koşullandırılmışlıktan Korku Extinction incelenmesi için Protokol

Bu prosedürün genel amacı, gonadal hormonların Esra döngüsünün düşük ve yüksek hormonal durumları sırasında kadınlarda korku sönme davranışı üzerindeki etkilerini ve dışsal olarak uygulandığında östradiolün rolünü incelemektir. Bu, ilk olarak yetişkin dişi sıçanların esra döngüsünün izlenmesi ve deneyden önce hangi aşamada olduklarının belirlenmesi ile gerçekleştirilir. Daha sonra, kızgınlık evresinde olan hayvanlar, yerleşim ve korku koşullandırması için kendilerine tahsis edilen odalara yerleştirilir.

Ertesi gün hayvanlar kızgınlık dönemindeyken, dişilere östradiol veya araç enjekte edilir ve korku neslinin tükenmesi eğitimine tabi tutulur. Son olarak, üçüncü günde, hayvanlar bir gün önceki nesli tükenme seansının hatırlanmasını test etmek için aynı odaya geri yerleştirilir. Sonuç olarak, EST strase tanımlaması için vajinal sürüntü, araştırmacıların gonadal hormonlardaki doğal dalgalanmaları manipüle etmelerine ve korku yok olma hafızası üzerindeki etkilerini incelemelerine olanak tanır.

Bu protokol, cinsiyet farklılıkları alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olmak için kullanılabilir, örneğin korku yok olma süreçleri erkeklerde ve kadınlarda farklı mıdır? Ve eğer öyleyse, bu farklılıkları karşılayan hormonal ve nörobiyolojik mekanizmalar nelerdir? Bu protokolün en büyük avantajı, bunun için yöntemler paylaşarak neslinin tükenme korkusunda kadın neslinin araştırılmasına yardımcı olabilmesidir.

Bu yöntemlere yeni olan araştırmacılar genellikle eser döngüsünü güvenilir bir şekilde izlemekte zorlanırlar, çünkü prosedür zaman alıcı olabilir ve büyük ölçüde uygun tekniğe bağımlı olabilir. Bu çalışmaların sonuçları, korku ve anksiyete ile ilgili bozukluklar için cinsiyete özgü tedavi seçeneklerine katkıda bulunabilir. Kadınların bu psikopatolojileri geliştirme olasılığının erkeklerden iki kat daha fazla olduğu göz önüne alındığında bu önemli olabilir.

Lisa adamı, laboratuvarda doktora sonrası ve aynı zamanda gizli bakım. Laboratuvardaki bir araştırma görevlisi, kızgınlık döngüsünü izlemek için numune toplama prosedürünü gösterecektir. % 0.9'luk bir tuzlu su çözeltisi hazırladıktan sonra, pamuk uçlu bir aplikatörü sıvıya batırın ve fazla çözeltinin ucunu bir farenin kuyruğunu yukarı doğru tutarak ve sıkıntıya neden olmamaya dikkat ederek bir kağıt havlu kullanın.

Pamuk ucunu çok derin olmayan vajinal kanala nazikçe sokun ve hızlı bir şekilde önce gevşek vajinal hücreleri yakalamak için duvarların etrafında yuvarlayın. Çok fazla sıvı aktarmadan ucu çıkararak, aplikatör ucunu önceden etiketlenmiş bir mikroskop lamına nazikçe yuvarlayın ve numunenin lam üzerine aktarıldığından emin olun. Günlük EST ekstralarını daha iyi takip edebilmek ve tanımlayabilmek için en az iki tam döngü için numune toplayın ve art arda birkaç günü tek bir slayta aktarın.

Faz değişiklikleri Slaytlar kuruduktan sonra, 10 kez sabitleyiciye, ardından 10 kez boyama çözeltisine daldırın. Ve son olarak, beş kez karşı leke çözeltisine. Su ile nazikçe durulayın.

Mikroskop altında görüntülemeden önce slaytların tamamen kurumasını bekleyin Şartlandırma deneyinin başlamasından önce, dişileri üç gün boyunca günde 20 ila 30 dakika boyunca ev ışıkları açıkken şartlandırma odalarına önceden maruz bırakın. Önceden maruz kaldıkları kutuyu çalışma odası olarak atayın. Davranışı ve EST stres döngüsünü etkileyebileceğinden, kokuları gidermek için seanslar ve hayvanlar arasındaki kutuları iyice temizleyin.

Hayvanların EST ekstra döngüsünün kızgınlık aşamasında olduğu doğrulandıktan sonra, alışkanlık koşullandırma aşamasına başlayın. Hayvanın uyaran sırasında bir mobil cihaz geçirdiği saniyeleri ölçerek, ilk ton durumu uyaranından önce donmanın ön ton temel ölçümlerini alın. Zaman aralığı yokken, hareketsiz geçirilen saniyeyi deneme süresine bölerek donma yüzdesini hesaplayın.

ME östrus fazı sırasında nesli tükenme eğitimi vermek için, sıçanları ESTRO'nun son gününde sürüntü ile belirlenen şekilde şartlandırın. Hayvanları şartlandırma odasına yerleştirin ve tek başına bir CS alışkanlık denemesi yapın. 30 saniye boyunca bir CS tonu indükleyin.

Bir sonraki denemeden önce ortalama üç dakika bekledikten sonra, koşullandırmadan önce toplam beş deneme için CS tek başına denemeyi dört kez daha tekrarlayın. Ayak şoku ızgara zeminini bir elektrik stimülasyon jeneratörüne bağlayın. Alışma seansından hemen sonra koşulsuz uyaran veya US olarak 0,5 ila 0,6 miliamperlik bir stimülasyon seviyesi ve CS olarak dört kilohertz 80 desibel tonu kullanın.

32. CS tonu sunarak eşleştirilmiş CS US korku koşullandırma denemelerine başlayın, ardından yaklaşık üç dakikalık bir deneme arası aralıkla ayrılmış 0,5 saniyelik bir US şoku izleyin. Koşullandırma seansının sonunda eşleştirilmiş denemeyi altı kez daha tekrarlayın. Hayvanları ikinci günün ertesi gününe kadar ev kafeslerine ve hayvan tesisine geri koyun.

Protokolün birinci gününden geçen tüm hayvanlar için ME östrus fazını temizledikten ve tanımladıktan sonra, hormonu deri altından uygulamak için kilogram başına 15 mikrogram almak için susam yağında yeterli estradiol veya% 0.9 salin hazırlayın. Kürek kemiği arasındaki gevşek cildi boynundan hafifçe bir tutamla kaldırın ve şırıngayı cilt kıvrımlarının oluşturduğu üçgene yerleştirin. Hayvanlar enjeksiyonlarını aldıktan 30 dakika sonra, onları şartlandırma odalarına yerleştirin ve tek başına 20 CS yaparak nesli tükenme eğitimine başlayın.

Her biri 32. dört kilohertz, 80 desibel tonundan oluşan denemeler ve 24 saat sonraki denemeler arasında yaklaşık üç dakika var. Üçüncü gün, hayvanları kendilerine atanan kondisyon odalarına yerleştirdikten sonra birinci ve ikinci günlerde seansları tamamlayan hayvanları sürüntüyle temizleyin. Geri çağırma oturumunun tamamlanmasının ardından, denemeler arasında yaklaşık üç dakika olacak şekilde tek başına üç C denemesi gerçekleştirerek nesli tükenme geri çağırma seansına başlayın, hayvanları ev kafeslerine geri koyun ve verileri bu korku neslinin tükenmesi protokolündeki metin protokolüne göre analiz edin.

İyi sönen ve nesli tükenme eğitiminin anısını koruyan hayvanlar, nesli tükenme Geri Çağırma sırasında davranış testinin son gününde düşük korku sergiledi. Burada gösterildiği gibi, erkek ve dişi sıçanlar koşullu korku ifadesinde önemli ölçüde farklılık göstermez. Her aşamada, hayvanlar yüksek ve düşük östrojen ES faz grupları olarak ayrı ayrı analiz edildiğinde bir cinsiyet farkı ortaya çıkar.

Bu grafik, estro fazının, EST ekstra döngüsünün düşük östrojen mees fazı sırasında nesli tükenme eğitimi alan dişi sıçanlar olan korku neslinin tükenme hafızası üzerindeki etkisini göstermektedir. Üçüncü gündeki yok olma hafızasını ve PROE'lerde eğitim almış olanları hatırlamayın. Bununla birlikte, metrik dişilere, neslinin tükenmesinden önce kilogram başına 15 mikrogram östradiol dozu deri altına enjekte edildiğinde, nesli tükenme hatırlama sırasında düşük donma ile gösterildiği gibi, korku neslinin tükenme hafızasının konsolidasyonu, artmış gibi görünmektedir.

Bu nedenle, bu veriler gonadal hormonların korku yok olma hatırlamayı modüle edebileceğini ve ayrıca koşullu korku yok olma davranışlarında cinsiyet farklılıklarına aracılık edebileceğini göstermektedir. Kanülasyon cerrahisi ve immünohistokimya gibi ek prosedürler, östradiol beyinde korku, yok olma, hafıza konsolidasyonunu modüle etmek için nerede hareket ediyor ve östradiol bu bölgelerdeki nöronal aktiviteyi nasıl değiştiriyor? Bu videoyu izledikten sonra, doğal geri dönüşümlü dişi sıçanların nasıl çalışılacağı ve östradiolün net ex uzantısındaki etkisinin nasıl çalışılacağı konusunda net bir anlayışa sahip olmalısınız.