Name: Küresellerde Memeli Hücrelerinin Büyük ölçekli Genişleme için sürekli Beslenme ile Besin Yönetmeliği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: Keşfedin sürekli besleme algoritmaları ile memeli hücre küresi büyümesini iyileştirme yöntemlerini. Karıştırmalı süspansiyon biyoreaktörlerinde besin düzenlemesi, insan hücresel tedavileri için ölçeklenebilir üretim sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, yararlı yorumları için Michael Garwood ve Sam Stein'a ve el yazması hazırlama konusundaki yardımları için Kristen M. Maynard'a teşekkür eder.

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

58 - biyolojik maddelerin ve hücre terapileri için üretimi için memeli hücre üreten ürünlerin büyük ölçüde 55 kültür ve memeli hücreleri izlenmesini gerektirir. Dahası, bu uygulamalar tanımlanmış ve valide kültür koşulları için çağrı. Sadece bu gereksinimleri karşılamak olmaz araştırma teknolojilerini kullanarak hücrelerin hacminin artırılması. besin ve atık ürünlerin birikimi dalgalanmalara yol açması, Manuel ortam değişiklikleri hücre kalitesi, canlılığı ve verimi azaltır. Biyoreaktör ...

Transplantasyon için uygulanabilir ve fonksiyonel insan hücrelerinin çok sayıda oluşturmak için, kültür koşullarının düzenlenmesi zorunludur. 3 - metabolik atıkların birikimi ile birlikte besinlerin tükenmesi, hücre ürününün 1 kalitesini azaltır yaşlanması ve metabolik değişikliklere önemli sebeplerindendir. Bu prosedür kültürünün süresi boyunca fizyolojik aralığında 4 glikoz düzenleyen ayarlanmış oran perfüzyon besleme sistemi ile birlikte karıştırılan bir biyoreaktör kullanarak küresellerde kültür memeli hücrelerinin bir yöntemi gösterir. Bu çalışmaların amacı için, fizyolojik aralığı 100 ila 200 mg / dl olarak tanımlandı. Aynı yöntemleri diğer besin ve laktat gibi metabolik atıkları regüle etmek için kullanılabilir. küçük hacimlerde statik kültürler (1-30 mi), genellikle experime hücre hatları korumak ve ayırt laboratuar ortamında kullanılanntal amaçlar. Hücre pasajı düzenli aralıklarla gerektiğinde komple ortam değişiklikleri ile gerçekleştirilir. En &quot;klasik&quot; kültür ortamı, besin sınırlamalar riski olmadan daha az sık ve orta değişiklikleri sağlamak için, yüksek glukoz konsantrasyonuna (bu çalışmalarda kullanılan DMEM 450 mg / dL) sahiptir. Ancak, bu toplu beslenme yöntemi hala, sık manipülasyon gerektiren hücre ortamında değişkenlik tanıtır ve kontaminasyon 5 riskini artırır - 9. Karıştırılan süspansiyon biyoreaktörler (SSB) daha iyi karışmasını sağlamak ve 3,10 işleme azalmış - 20, ama statik kültürler gibi, besin ve atık ürün düzeylerinde potansiyel zarar verici dalgalanmalar katkıda manuel orta değişiklikler gerektirir. SSB kültürlerin perfüzyon besleme sürekli infüzyon ve orta kaldırılması, fakat hücre büyümesi besin seviyelerindeki büyük değişikliklere göre bu sorunların bir sorun olmaya devam azaltır. düzeltilmiş besleme ra kullanımıTahmini hücre gereksinimlerine göre besin kullanım hesaplamalarından te hücre canlılığını optimize etmek için gerekli kararlı hücre ortamı sağlamak ve 21 işlev görebilir - 24. 25 özel pluripotent hücrelerin kültür ve genişleme için memeli hücrelerinin ölçeklenebilir SSB kültürler için yöntemleri tarif literatür büyük bir gövde var - diğerleri ile 32, adacık (beta) hücreleri 17,33,34 odaklanmış, ya da biyolojik ürünlerin 24 üretim, 35-38. Bu araştırılmıştır hücre tiplerinin bir çok sferoid kültürlerde yetiştirilebilir ve kullanılan hücre tipi için özel prosedürler sürekli bir besleme sisteminin uygulanması öncesinde optimize edilmelidir. 43 - Bu gösteri, bir perfüzyon besleme yöntemi bir karıştıran bioreaktör 39 sferoidler olarak yetiştirilen beta hücre hattı genişletmek için kullanıldı. Bu tarifnamede tarif edilen metod sağlarhedeflenen kültür koşullarını elde etmek için off-line glukoz ölçümlerine dayanarak oranı ayarlamaları beslenme basit uygulama. Bu yöntem ile besleme oranı ayarlama fizyolojik glukoz seviyesi artar, hücre verimleri gösterilir korumak için. Memeli hücreleri, enerji üretimi için, önemli bir besin, glikoz bağlıdır, bu yüzden, bu hücre hattının kullanılması bir çok kültürlenmiş memeli hücrelerine 44 bir modeli temsil etmektedir. Buna ek olarak, bu hat glukoz 45, kronik yüksek düzeyde duyarlı olan beta hücreleri, daha karmaşık örnek teşkil etmektedir. Bu çalışma için, β-TC6 hücreler, in vivo olarak Langerhans adacıklarında ortalama büyüklüğü yaklaşık kültür içinde parçacıklarının oluşturulması için bırakılmıştır. Perfüzyon biyoreaktör sistemi 17 - tüketimi glikoz ayarlanmış bir besleme oranı ile 19,21,46, canlılığı değişiklik olmaksızın, fizyolojik koşullar ve yüksek hücre verimi muhafaza ile sonuçlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>&#946; TC-6 Hücreleri</td><td>ATCC, Manassas, VA</td><td>CRL-11506</td><td>Fare İnsülinoma hücre hattı (yapışık hücre tipi)</td></tr> <tr><td>DPBS Ca Yok, Mg</td><td>İnvitrojen Yok, Carlsbad, CA</td><td>14190-144</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/14190144? ICID=arama-14190144">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/14190144? ICID=search-14190144</a></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagles Medium</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td></td><td>Ürün numaraları için aşağıya bakın&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM Yüksek Glikoz (500 mM)</td><td>Canlandırıcı, Carlsbad, CA</td><td>11965-092</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11965092">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11965092</a></td></tr><tr><td>DMEM Düşük Glikoz (100 mM)</td><td>Canlandırıcı, Carlsbad, CA</td><td>11885-084</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11885084%20(not%20that%20this%20medium%20already%20contains%20pyruvate)">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11885084 (bu ortamın zaten piruvat içerdiğini unutmayın)</a></td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>25030081</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081? ICID=arama-ürün">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081? ICID=arama-ürün</a></td></tr><tr><td>Sodyum Piruvat</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>11360070</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11360070? ICID=arama-ürün">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11360070? ICID=search-product</a></td></tr> <tr><td>Isı ile İnaktive Edilmiş Domuz Serumu</td><td>Gibco - Life Technologies</td><td>10082147</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/10082147">http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/10082147</a></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA</td><td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td><td>25200056</td><td><a href="https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25200056? ICID=arama-ürün">https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25200056? ICID=arama-ürün</a></td></tr><tr><td>T-150 Doku Kültürü İşlem Görmüş Şişeler</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>430825</td><td>http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=430825(Yaşam Bilimleri) & categoryname=</td></tr><tr><td>NuAire Hücre kültürü inkübatörü</td><td>Princeton, MN</td><td></td><td>US Autoflow. Herhangi bir su ceketli CO2 düzenleyici hücre kültürü inkübatörü kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td></td><td></td><td>Sorvall RT 7 (Herhangi bir benzer tezgah üstü santrifüj kullanılabilir)</td></tr><tr><td>Buzdolabı</td><td></td><td></td><td>Herhangi bir laboratuvar buzdolabı kullanılabilir (bu çalışmalar için küçük bir masa üstü versiyonu kullanılmıştır)</td></tr><tr><td>1 L Cam Şişe</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>1395-1L</td><td>Herhangi bir satıcı kullanılabilir. http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=1395-1L(Yaşam Bilimleri) & categoryname=</td></tr><tr><td>2 L Cam Şişe</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>1395-2L</td><td>Herhangi bir satıcı</td></tr><tr><td>250 ml karıştırılmış biyoreaktör kullanılabilir&nbsp;</td><td>Corning, Corning, NY</td><td>4500-250</td><td>http://catalog2.corning.com/LifeSciences/en-US/Shopping/ProductDetails.aspx?productid=4500-250(Yaşam Bilimleri) & categoryname=</td></tr><tr><td>Karıştırma Plakası</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-496-104A</td><td>Herhangi bir inkübatör güvenli karıştırma plakası kullanılabilir, herhangi bir satıcı</td></tr><tr><td>Doku Kültürü Kapları 100 mm Çap</td><td>Nunc, Rochester, NY (Fisher Scientific)</td><td>1256598&nbsp;</td><td>Herhangi bir satıcı kullanılabilir (Fisher Sci aracılığıyla sipariş edilir)</td></tr><tr><td>FALCON 50 ml Konik Tüpler</td><td>Falcon, San Jose, CA</td><td>1256598</td><td>Herhangi bir satıcı kullanılabilir</td></tr><tr><td>Özel Parçalar için Kullanılan Delran Plastik</td><td>McMaster Carr</td><td>Çeşitli</td><td>Tercih edilen herhangi bir malzeme kullanılabilir, ancak Deran otoklav güvenli, reaktif olmayan ve işlenmesi kolay olduğu için seçilmiştir. http://www.mcmaster.com/#acetal-homopolymer-sheets/=rjrcac</td></tr><tr><td>Özel kapaklar için Paslanmaz Çelik Boru</td><td>McMaster</td><td>Carr Çeşitli</td><td>Herhangi bir satıcı kullanılabilir. http://www.mcmaster.com/#standard-stainless-steel-tubing/=rjrd91</td></tr><tr><td>Sürekli Besleme için Özel Modifiye Delran Biyoreaktör Kapakları</td><td>Özel yapım</td><td></td><td>Benzer bir ürün üreten herhangi bir satıcıdan haberdar değilim</td></tr><tr><td>Sürekli besleme için Özel Modifiye Cam Şişe Kapakları</td><td>Özel yapım</td><td></td><td>Bazı satıcılar (örn., Fischer Sci, Corning) aşağıdaki bağlantılarda benzer ürünler üretmektedir.</td></tr><tr><td>Masterflex Dijital Peristaltik Pompa</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>EW-77919-25</td><td>Herhangi bir hassas peristaltik pompa kullanılabilir. http://www.coleparmer.com/Product/L_S_Eight_Channel_Four_Roller_ Cartridge_Pump_System_115_230 _VAC/EW-77919-25</td></tr><tr><td>PVDF Boru Konnektörleri (çeşitli)</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>bağlantıya bakın</td><td>Herhangi bir satıcı kullanılabilir. http://www.coleparmer.com/Category/Cole_Parmer_PVDF_Premium _Luer_Fittings/55889</td></tr><tr><td>Pharmed BPT Boru L/S 16</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-16</td><td>Herhangi bir satıcı kullanılabilir. http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/WU-06508-16</td></tr><tr><td>Silahlı BPT Borusu L/S 14</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-14</td><td>Herhangi bir satıcı kullanılabilir. http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/WU-06508-14</td></tr><tr><td>Silahlı BPT Borusu L/S 13</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>WU-06508-13</td><td>Herhangi bir satıcı kullanılabilir. http://www.coleparmer.com/Product/Masterflex_PharMed_BPT_Tubing _L_S_13_25/ WU-06508-13</td></tr><tr><td>Millipore Millex GP PES membranı 0.22 & # 181; l steril şırınga filtresi (havalandırma ve orta filtrasyon için kullanılır)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>SLGP033RS</td><td>Herhangi bir satıcı kullanılabilir</td></tr><tr><td>25 ml Dereceli Pipet</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td>Herhangi bir satıcı kullanılabilir ve çeşitli boyutlar kullanılabilir</td></tr><tr><td>Pipetleyici</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-681-15E</td><td>Herhangi bir satıcı veya benzer ürün kullanılabilir</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-671-6</td><td>Herhangi bir satıcı veya benzer ürün kullanılabilir</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Gibco - Yaşam Teknolojileri</td><td>15250-061</td><td>Herhangi bir satıcı veya benzer ürün kullanılabilir. https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15250061</td></tr><tr><td>Ters Işık Mikroskobu</td><td>Leica</td><td></td><td>Herhangi bir satıcı veya benzer ürün kullanılabilir</td></tr><tr><td>Tek Dokunuşla Ultra Kan Şekeri Ölçüm</td><td>Cihazı Fisher Scientific</td><td>22-029-293</td><td>Herhangi bir satıcı veya benzer ürün kullanılabilir (örn., Bayer)</td></tr><tr><td>Tek Dokunuşla Ultra Şeritler</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-029-292&nbsp;</td><td>Herhangi bir satıcı veya benzer ürün kullanılabilir (örn., Bayer)</td></tr></tbody></table>

küresellerde memeli hücrelerinin büyük ölçekli genişleme için sürekli beslenme ile besin yönetmeliği

Nutrient Regulation by Continuous Feeding for Large-scale Expansion of Mammalian Cells in Spheroids

Bu gösterimde, β-TC6 insülinoma hücre hattından oluşturulan sferoidler, besin seviyelerinin düzenlenmesinin hücre verimini nasıl iyileştirebileceğini göstermek için bir memeli adacık hücresi ürününün üretilmesinin bir modeli olarak kültürlendi. Önceki çalışmalarda, biyoreaktörler statik kültürlere göre artan kültür hacimlerini kolaylaştırdı, ancak hücre verimlerinde herhangi bir artış gözlenmedi. Toplu beslemeler arasında tüketilen glikoz gibi temel besin maddelerindeki sınırlamalar, hücre genişlemesinde sınırlamalara yol açabilir. Ortamdaki glikoz konsantrasyonlarındaki artışa rağmen, glikoz seviyelerinde büyük dalgalanmalar gözlendi. Sürekli besleme sistemlerinin kullanılması, glikoz seviyelerindeki dalgalanmaları ortadan kaldırdı ve toplu beslemeli statik ve SSB kültür yöntemleriyle karşılaştırıldığında hücre büyüme oranlarını iyileştirdi. Hesaplanan besin tüketimine dayalı olarak besleme hızının ayarlanmasıyla büyüme oranlarında ek artışlar gözlendi, bu da kültürde üç hafta boyunca fizyolojik glikozun korunmasına izin verdi. Bu yöntem diğer hücre tipleri için de uyarlanabilir.

Orta Glukoz Düzeyleri ve dalgalanmalar Standart SSB Kültürlerde Hücre Genişleme sınırla Glikoz düzeyleri kültür dönemi 3 boyunca statik kültürler ve SSB kültürlerde dalgalanma. Bu dalgalanmalar, 21 günlük kültür döneminde, hücre sayısı arttıkça yoğunlaştırmak ve statik ve SSB kültürleri hem de hemen hemen aynı idi. Bu gözlemler önceki yayında 3'te sunulmuştur. glikoz düzeyleri her iki yöntem için kültür dönemi süresince süper fizyolojik olabilir. Bu kro...

Sürekli büyümeye göre ayarlanmış besleme kullanan besin düzenlemesi, karıştırılmış süspansiyon biyoreaktörlerindeki kültürler için aralıklı toplu beslemeye kıyasla memeli hücre sferoidlerinin büyüme oranlarını iyileştirir. Bu çalışma, basit düzeltilmiş oranlı beslenen kültürlerin oluşturulması için gerekli yöntemleri göstermektedir.

Küresellerde Memeli Hücrelerinin Büyük ölçekli Genişleme için sürekli Beslenme ile Besin Yönetmeliği

In this demonstration, spheroids formed from the &#946;-TC6 insulinoma cell line were cultured as a model of manufacturing a mammalian islet cell product ...

Bu işlemin genel amacı, kontrollü besin koşulları altında çok sayıda hücreyi kültürlemektir. Bir hücre kültürü laboratuvarında bulunan geleneksel ekipmanı kullanarak. İlişkili algoritmalar, besin maddelerinin deneysel aralıklar içinde kontrolüne ve manipülasyonuna izin verir.Bu yöntem, büyük ölçekli hücre kültürü uygulamaları için temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. İnsan hücresel tedavileri gibi. Bu tekniğin temel avantajı, besin ve gazların eşit dağılımı ile hücrelerin büyük ölçekte tesis kültürüdür.Bu, statik veya toplu beslenen hücre kültürlerinden daha yüksek hücre yoğunluklarına izin verir, verimi artırır ve hücre kaybını azaltır. Bu, çoğu hücre kültürü laboratuvarında yaygın olarak bulunan ekipmanla yapılabilir. Bu yöntemin görsel gösterimi, yeni araştırmacılar için yararlı olabilir, çünkü kullanılan bu tekniklerin, steril koşullar altında belirli bir sırayla önceden oluşturulması gereken çok sayıda adım nedeniyle ustalaşması zor olabilir.Besleme sistemi için gerekli olan beş ana bileşeni toplayın. Orta boy bir rezervuar, peristaltik pompa, karıştırılmış biyoreaktör, atık rezervuarı ve özel tasarlanmış boru numune alma seti. Bir litrelik cam şişe kullanarak orta rezervuarı oluşturun.İki litrelik bir cam şişe kullanarak atık haznesi. 250 mL hacimli bir cam reaktör kullanılarak karıştırılmış biyoreaktör. Ortam değişimini kontrol etmek için dijital bir peristaltik pompa veya sekiz kanallı pompa kafasına sahip benzer bir pompa kullanın.Rezervuarı ve modifiye edilmiş biyoreaktör kapaklarını sert ve otoklavlanabilir plastikten monte edin. Steril filtreler aracılığıyla havalandırma sağlamak ve rezervuarlar ile biyoreaktörler arasında orta transfere izin vermek için paslanmaz çelik boru geçiş portları ile. Gözenekli cam havalandırma tüplerinden imal edilmiş bir çıkış borusunu modifiye edilmiş karıştırılmış süspansiyon biyoreaktör kapağına takın.Poliviniliden florür boru konektörlerinden ve dayanıklı peristaltik pompa borularından otoklavlanabilir perfüzyon boru setlerini birleştirin. Bölümün uzunluğu, farklı bileşenler arasındaki mesafeye bağlıdır. Besleme hattını iki boru çapı kullanarak monte edin.Biyoreaktörden orta rezervuara olan mesafeyi kapsayacak birincil boru için L/S 14'ü kullanın. Uygun PVDF adaptörlerini kullanarak, pompa bölümü için boru uzunluğunun ortasına L/S 13 boruluk bir sıralama uzunluğu yerleştirin. Daha kısa pompa bölümü borusunun her iki tarafında iki parça L/S 14 boruyu birleştirmek için standart PVDF hortum dikenli boru adaptörlerini kullanın.Daha büyük çaplı L/S 16 boru kullanarak atıkların uzaklaştırılması için kesit boru bölümünü monte edin ve pompalama bölümü için ortasına L/S 14 borunun kısa bir bölümünü yerleştirin. Bu, PVDF hortum dikenli adaptörler kullanılarak besleme hattı tertibatı ile aynı şekilde yapılır. Seti üç kısa L/S 14 boru uzunluğundan oluşturarak boru setinin son bileşenini monte edin.T tipi bir HVDF konektörü ve iki boru uzunluğunda iki küçük hortum kelepçesi ile birbirine bağlanır. Numune düzeneğini, biyoreaktörün kapağına takılı paslanmaz çelik numune konektörüne bağlayın. Sterilizasyondan sonra, kenetlenmiş uzunluklardan birine gaz tahliyesi için steril bir gaz filtresi takılacaktır.Diğeri steril bir numune alma şırıngasına bağlantı için kullanılır. Numune alma düzeneğini, metin protokolünde açıklandığı gibi deneye başlamadan önce biyoreaktöre bağlıyken otoklavlayın. Sürekli besleme sürecini bozmadan biyoreaktörden gerektiği gibi steril numuneler toplamak için bu düzeneği kullanın.Döner şişenin, orta tankın, atık kaplarının ve numune portlarının kapaklarındaki uygun yerlere steril havalandırma delikleri takın. Hücreleri metin protokolünde açıklandığı gibi kültürleyin ve hasat edin. Hücrelerin bir biyogüvenlik kabininde iki ila üç dakika boyunca tripsin içinde oda sıcaklığında inkübe etmesine izin verin ve ardından bunları konik bir tüpe toplayın.Daha sonra küçük bir hücre örneği toplanır ve tripan mavisi ile boyanır. Metin protokolünde açıklandığı gibi tripan mavisi boyama ile bir mikroskop ve standart hemositometre kullanarak hücre yoğunluğunu sayın. Her koşul için steril karıştırılmış süspansiyon biyoreaktörlerine istenen sayıda toplam hücre ekleyin.İstenen toplam kültür hacmine ulaşmak için ortamı bir pipet kullanarak karıştırılmış süspansiyon biyoreaktörüne ekleyin. Karıştırılmış süspansiyon biyoreaktörünü hücrelerle birlikte bir hücre kültürü inkübatörü içindeki bir karıştırma plakasına taşıyın. Biyoreaktörlerdeki kültür hücreleri, 37 santigrat derecede, %5 karbondioksit, %100 bağıl nem ve sferoidlerin oluşmasına izin vermek için 70 rpm'lik bir karıştırma hızıyla üç gün boyunca beslenmeden yapılır.Küresel oluşumundan sonra, karıştırılmış süspansiyon biyoreaktörünü inkübatörden çıkarın. Sürekli besleme sistemi bileşenlerini bir biyolojik güvenlik kabininde birleştirin. Önce taze bir orta hazneyi istenen kültür ortamıyla doldurun ve ardından besleme hattının bir tarafına bağlayın.Ayrıca taze orta rezervuarın steril bir filtre ile uygun şekilde havalandırıldığından emin olun. Ortamı biyoreaktöre girmeden önce filtrelemek için biyoreaktör giriş portunda steril bir filtre değiştirilmelidir. Atık hattını orta atık rezervuarına bağlayın ve atık rezervuarının steril bir filtre ile uygun şekilde havalandırıldığından emin olun.Karıştırılmış süspansiyon biyoreaktörünü, sferoid oluşumu ile aynı kültür parametrelerini kullanarak inkübatörün içindeki karıştırma plakasına koyun. Taze orta boy rezervuarı yakındaki bir mini buzdolabına koyun. Besleme hatlarının, kapıların kapanmasını engellemeden buzdolabından çıkabildiğinden emin olun.Besleme hatlarının buzdolabının veya inkübatörün kapıları tarafından sıkıştırılmaması da çok önemlidir. Atık ortam rezervuarı, inkübatörün dışındaki tezgah üstüne uygun bir yere yerleştirilebilir. Kalan boru uçlarını inkübatöre geçirin ve besleme hattını biyoreaktörün giriş portundaki filtreye bağlayın.Ardından atık hattını çıkış borusu portuna bağlayın. Daha sonra, besleme ve atık hatlarının pompa bölümünü pompa kafasına yerleştirin, böylece besleme hatları ortamı taze ortam rezervuarından karıştırılmış süspansiyon biyoreaktörüne pompalayacak ve atık hatları ortamı biyoreaktörden pompalayacak ve atık ortam rezervuarına ortam. Metin protokolünde açıklandığı gibi ayarlanmış ilerleme hızı denklemini kullanarak ilerleme hızını hesaplayın.Kültürde istenen glikoz konsantrasyonunu korumak için gereken besleme hızını tahmin etmek için büyüme hızı tahmini ve orta glikoz ölçümleri ile birlikte hücre sayımı bilgileriyle en son numuneyi kullanın. Hesaplanan besleme hızına göre pompa hızını ayarlayın. İlerleme hızı hesaplamasını tekrarlayın ve her örnekleme noktası için pompa hızını ayarlayın.Statik karıştırılmış süspansiyon biyoreaktörleri ve sürekli beslenen karıştırılmış süspansiyon biyoreaktör kültürü yöntemleri kullanılarak Beta-TC6 insülinoma sferoid kültürlerinden orta glikoz ölçümleri gösterilmiştir. Standart yüksek glikozlu ortam ile besleme. Sürekli besleme, glikoz dalgalanmalarını ortadan kaldırabilir, ancak ortamdaki ortalama glikoz seviyeleri kültür periyodu boyunca önemli ölçüde değişir ve fizyolojik aralığın çok üzerindedir.Ayarlanan besleme, dalgalanmaları ortadan kaldırmanın yanı sıra, kültür periyodu boyunca glikoz konsantrasyonlarını fizyolojik seviyelere yakın tutabilir. Burada, 21 günlük kültür periyodu boyunca hücre sayısında kat değişikliği olarak rapor edilen hücre büyümesi, düzenli ortam değişiklikleri, sabit besleme hızı karıştırılmış süspansiyon biyoreaktör kültürleri ve ayarlanmış besleme hızı karıştırılmış süspansiyon biyoreaktör kültürleri ile karıştırılmış süspansiyon biyoreaktör kültürleri ile karşılaştırılmıştır. Bu prosedürü takiben, yeni hücre hatları için besin gereksinimleri veya spesifik deneysel sonuçlar gibi ek soruları yanıtlamak için değişen koşullar gibi diğer yöntemler de önceden oluşturulabilir.Geliştirildikten sonra, bu teknik, hücre biyolojisi alanındaki araştırmacıların, kanserli veya diğer bozuklukları olan insanlardan alınan hücrelerdeki metabolik gereksinimleri keşfetmelerinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, kültür koşullarını daha iyi kontrol etmek ve hücre verimini en üst düzeye çıkarmak için bir bolluk hücre kültürü sisteminin nasıl monte edileceğini iyi anlamış olmalısınız. İnsan hücreleriyle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman kan yoluyla bulaşan patojenlerden korunma gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.

nutrient-regulation-continuous-feeding-for-large-scale-expansion

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Spheroids, 2B hücre kültürü tek katmanlı modellere kıyasla bir hücrenin ortamını daha doğru bir şekilde temsil etmek için kullanılan bir tür 3B hücre kültürü modelidir. Örnek protokolde, bilim adamlarının bir kolorektal kanser hücre hattından sferoidler ürettiğini ve sferoidlerin büyümesini izlemek için canlı hücre görüntüleme uyguladığını göreceğiz.

Hücre Hatlarından Küresel Üretim: Üç Boyutlu (3D) Bir Hücre Kültürü Yöntemi

Bu ticari olarak temin edilebilen mikro plakalar kullanılarak, üniform bir boyut ve bileşimin kontrollü tümör küremsi (bin yüz binlerce) büyük sayılar üretmek için bir protokol getirmektedir.

Microwell Tabaklar kullanma büyüklüğü kontrollü Tümör küremsi Büyük Sayılar üretimi

Burada, hücre agregasyonu yoluyla 3B hücre sferoidlerinin oluşumu için hızlı ve esnek bir protokol açıklıyoruz. Bu, birden fazla hücre tipine kolayca uyarlanır ve hücre göçü, istila veya anoikis tahlilleri dahil olmak üzere çeşitli uygulamalarda ve hücre-matris etkileşimlerini görüntülemek ve ölçmek için uygundur.

3D Sfero Üretim için bir Verimli ve esnek Hücre Toplama Yöntemi

Burada insan nazal epitel hücreleri kültürleri üç boyutlu küresel oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Pulcuklarının sonra sürücüye Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatörü (CFTR) teşvik-bağımlı iyon ve CFTR işlevi için bir proxy gibi küresel luminal boyutunda değişiklik miktarının sıvı salgılanması.

İnsan nazal epitel hücre pulcuklarının nesil bireyselleştirilmiş Kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatör çalışma için

Burada, gen transfeksiyonuna veya retroviral vektörlere ihtiyaç duymadan, memeli pluripotent hücrelerini verimli bir şekilde üretmek için kimyasal epigenetik silme kullanımını mekanosensing ile ilgili ipuçlarıyla birleştiren bir yöntem sunuyoruz. Bu nedenle, bu strateji translasyonel tıp için umut vericidir ve kök hücre organoid teknolojisinde kayda değer bir ilerlemeyi temsil etmektedir.

Memeli Pluripotent Hücreleri Üretmek için Epigenetik Modifikasyonu ve Biyomekanik İpuçlarını Birleştiren İki Adımlı Bir Strateji

Bu protokol, Caco2 kolon adenokarsinom hücrelerinden üç boyutlu küreseller üretmek ve yetiştirmek için yeni, sağlam ve tekrarlanabilir bir kültür sistemi sunar. Sonuçlar, kemoterapiye yanıt da dahil olmak üzere kanser kök hücre biyolojisini incelemek için bu yaklaşımın uygunluğu için ilk kavram kanıtını sağlar.

Kolon Kanseri Kök Hücrelerini İncelemek İçin Üç Boyutlu Bir Küresel Model

Bu protokoller, kullanıcıların Denizatı hücre dışı akı analizini kullanarak 3D kanser hücre hattı kaynaklı sferoidlerde mitokondriyal enerji metabolizmasını araştırmalarına yardımcı olacaktır.

Hücre Dışı Akı Analizi Kullanarak Tek 3D Mikrodoku Sferoidlerinin Mitokondriyal Enerji Metabolizmasını Keşfetmek

Bu protokol, üç farklı sferoid tipinin üretimi için bir yöntemi, onları büyük ölçekli yüksek içerikli tarama ve analiz için uygun hale getirecek şekilde detaylandırmaktadır. Ek olarak, küresel ve bireysel hücre seviyelerinde nasıl analiz edilebileceğini gösteren örnekler sunulmaktadır.

Yüksek İçerikli Tarama ve Analiz Uygulamaları için Büyük Ölçekli Sferoid Üretimi için Sağlam Bir Yöntem

Görüntü yakalama ve proteomik kullanarak yüksek tekrarlanabilirliğe sahip sferoidlerin yetiştirilmesi ve fenotipik karakterizasyonu için bir protokol sunuyoruz.

Fonksiyonel 3D Küresel Hücre Kültürlerinin Yarı Otomatik Fenotipik Analizi

Organoidler, organ geliştirme, ilaç keşfi ve hastalık araştırmaları için kişiselleştirilmiş doku modellemesinde devrim yaratıyor. Organoid mühendisliği, karmaşık sentetik dokular oluşturmaya doğru ilerler. Amaç, doku mühendisliğini ilerletmek için morfogenez, assembloid teknolojisi ve biyomatrisleri entegre etmektir. Bu protokol, karaciğer organogenezinin modellenmesine ve sentetik doku yapımı için kılavuzların oluşturulmasına yardımcı olur.

Karaciğer Organogenezini Modellemek, Assembloidler Oluşturmak ve İnsan Hücre Hatlarını Kullanarak Sentetik Dokular Tasarlamak için İn Vitro Yetiştirme Teknikleri

Burada, takip çok parametreli canlı hücre mikroskobu gerçekleştirmek için farklı çok hücreli sferoid oluşturma yöntemlerini açıklıyoruz. Floresan ömür boyu görüntüleme mikroskobu (FLIM), hücresel otofloresan, boyama boyaları ve nanopartiküller kullanılarak, canlı üç boyutlu (3D) kanser ve kök hücre türevli sferoidlerde hücre metabolizması, hipoksi ve hücre ölümünün analizi için yaklaşım gösterilmiştir.

Çok Hücreli Sferoidlerin Üretimi ve Çok Parametreli Canlı Hücre Floresan Ömür Boyu Görüntüleme Mikroskobu (FLIM)

Keşfedin sürekli besleme algoritmaları ile memeli hücre küresi büyümesini iyileştirme yöntemlerini. Karıştırmalı süspansiyon biyoreaktörlerinde besin düzenlemesi, insan hücresel tedavileri için ölçeklenebilir üretim sağlar.

Küresellerde Memeli Hücrelerinin Büyük ölçekli Genişleme için sürekli Beslenme ile Besin Yönetmeliği

Daha fazla video keşfet