Name: Eşzamanlı Elektrofizyolojik Kayıt ve kemirgen Beyindeki inhibitör Ajanların Mikro-enjeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Keşfedin kemirgen beyninde eşzamanlı elektrofizyolojik kayıt ve inhibitör ajanların mikro-enjeksiyonu için uygun maliyetli bir cam pipet yapımını. Bu yöntem, nöron aktivitesini gerçek zamanlı izlerken derin beyin yapılarını inaktive etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

CIHR (MOP231122) ve NSERC (RGPIN-2014-06503) hibeleriyle desteklenmiştir. Geneviève Cyr'e deneylerin hazırlanmasına ve laboratuvar çalışmalarının denetlenmesine yardımcı olduğu için teşekkür ederiz. MAL, Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi'nden (NSERC) burs aldı.

NOT: Tüm prosedürler Hayvanları Koruma ve Université de Montréal Etik inceleme kurulu Kanada Konseyi direktifleri doğrultusunda yapıldı. Kayıt enjeksiyon Pipet 1. Meclisi <ol><li> Bir pipet çektirmenin kullanarak yaklaşık 7 cm uzunluğunda bir cam kapiller (1 mm dış çapı) çekin. </li><li> Kılcal ucu kırın ve bir ışık mikroskobu altında diyafram kontrol edin. Iç çapı 40 mikron 30 mikron arasında olduğunu onaylayın. </li><li> Cam pipet olmayan konik ucundan çıkıntılı yaklaşık 1 cm cam kapiller içine 7 cm uzunluğunda gümüş tel yerleştirin. </li><li> Cam kapiller dikey olarak aşırı filament bükün. </li><li> Bir 30 G hipodermik iğnenin mil üzerinde esnek plastik bir yapışkan damlacık uygulanır. </li><li> Şekil 1 &#39;de sunulan şemadaki gibi cam pipet bir 30 G hipodermik iğne takın </stro&gt; ng. </li><li> Cam pipet ve hipodermik iğne arasındaki birleşme gelen uygun bir sızdırmazlık sağlamak için yapıştırıcı bir ikinci kaplama ekleyin. </li><li> Ucu tutkal uygun kür sağlamak için yaklaşık 12 saat boyunca yukarı bakacak şekilde kurumaya pipet bırakın. bitmiş sonucu, Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. </li></ol> Not: Bu yordam, akut deneyler ve pipet sterilizasyonu yapılır gerekli değildir. 2. Hayvan hazırlanması <ol><li> Bir anestezi kutusuna sıçan yerleştirin. </li><li> 5 ila 10 dakika süreyle% 4 izofluran kullanarak anestezi neden olur. </li><li> 37 ° C&#39;lik bir vücut ısısını korumak için ısıtma yastığı ve rektal prob ile bir stereotaksik tablo hayvan yerleştirin. % 2 izofluran ile anestezi korumak için burun konisi kullanın. Kulak çubukları ve dişlerin tutucu kullanarak sıçan başını sabitleyin. </li><li> Atropin öğrenci genişlemesi yardımcı olmak için damla% 1 dahil oftalmik merhem ya da göz damlaları, uygulayın. Kuruluğunu önlemek için, damla yağlama uygulamakYaklaşık her 30 dk s. </li><li> Kafa Tıraş ve% 10 povidon-iyot ile temizleyiniz. </li><li> Lokal anestezi için, cildi yukarı kaldırma ve iğne ucu takarak 2-3 yerlerde kafa derisi altında% 2 lidokain 0.5 ml enjekte edilir. </li><li> Bir ayak tutam performans ve hareket eksikliği gözlemleyerek anestezi yeterli düzeyde onaylayın. Buna ek olarak, normal değerler (300-400 atım / dak) içinde olduğundan emin olmak için kalp hızı izleme. </li><li> Koronal ve sagital sütür hem duyurmak için bir 10. neşter bıçağı ile medyan boyunca düz bir çizgi derisini İnsizyon. </li><li> Cerrahi spatula ile kafatası kapsayan doku bir kenara iterek Lambda ve Bregma noktaları açığa vurmak. </li><li> Bregma ve Lambda pozisyonları aynı düzlemde olacak şekilde kafatası Seviye. </li><li> Referans noktasını ayarlamak için, sağ bregmadan yukarıda ayarlamak için bir monte edilmiş cam tüp ile bir stereotaksik cihaz kullanın. Bu &quot;sıfır&quot; için ön-arka ve med olacakial yanal ölçümler koordine eder. </li><li> Stereotaksik gerekli koordinatları montaj hareket ettirerek ilgi noktasını ayarlayın stereotaksik koordinatları not ve kraniyotomi yapılacaktır nerede işaretleri hedef alan etrafında bir kare çizin. </li><li> Yavaş yavaş kemik malzemeyi çıkarmak için baskı olmadan yavaş yavaş belirgin meydanda boyunca sterilize matkapla bir cerrahi matkap kullanın. Bu korteks üzerindeki lezyonlar ısı üretmek ve neden olacağından, aynı bölgede çok uzun inebilecek dikkatli olun. </li><li> Kraniotomiye sınırlayan kemik yeterince ince eriştiğinde, dikkatlice korteks maruz cımbız ile kranial bölümü çıkarın. </li><li> Sıkça doku kuruma önlemek için yapay beyin omurilik sıvısı ile maruz korteksi sulamak. NOT: injectrode ucu nüfuz kadar sağlam olduğu Dura mater kaldırma sıçan üzerinde gereksiz olduğunu. </li></ol> 3. Doldurma ve Enjeksiyon Sistemi montajı <ol><li> DoldurmakMineral yağ ile aspirasyon ile 5-10 ul mikroenjektör. </li><li> % 0.5 Chicago Sky Blue (CSB) ile 300 uM γ-aminobutirik asit (GABA) ya da% 0.5 CSB 9% 2 lidokain çözeltisi içeren bir çözelti ile, sabit bir cam pipet ile deri altı iğne doldurun. Tuzlu su ile bütün çözümleri seyreltin. <ol><li> Bol bir madde olması halinde, normal bir şırınga kullanılarak girip hava kabarcıklarının oluşumunu önlemek için normal önlemler tekniklerini kullanır. </li><li> Daha pahalı maddeler durumunda, injectrode doldurmak için mineral yağ kullanımı ve kimyasal madde daha sonra aspirasyon ile sokulabilir. Mineral yağ ve su arasındaki yoğunluk farkı nispeten yüksek olduğu için, bu madde, sulu çözeltiler enjeksiyon için iyi bir adaydır. Not: bir boya iki sıvı arasındaki mesafeyi teyit etmek için ilave edilebilir. </li></ol></li><li> Enjeksiyon pipet doldurmak için, aspirasyonla çözeltisi ile 1 ml şırınga girip daha sonra yavaş yavaş solüsyon enjekteEnjeksiyon pipet içine. </li><li> Temiz bu alanları swabbing ve ayrıca şırınga ile yavaşça çözüm enjekte ederek kaçaklar gözlemleyerek Şekil 1&#39;de gösterilen bölgelerde sızıntı olup olmadığını dikkat ediniz. </li><li> 1 ml şırınga çıkarın. Bunu yaparken, vakum enjeksiyon pipet gelen çözüm kaldırmaz, böylece pistonu hafif bir basınç tutmak için emin olun. </li><li> Aspirasyon mineral yağ ile mikroenjektör doldurun ve dolu enjeksiyon pipet sıkıca takın, sonra dikkatlice gazlı bez ile bir araya injectrode herhangi bir aşırı çözüm silerek temizleyin. </li><li> Ucu cam pipet ucu şekillendirme küçük bir damla görmek için yeterli çok küçük bir hacim, enjekte edilerek tıkalı olmadığından emin olun. </li><li> Mikropompa sistemi üzerinde injectrode monte ve iyi sabit olduğundan emin olun. </li><li> Dikkatle hedef koordinatlarında injectrode ucunu yerleştirin ve korteks yüzeyine ucu indirin. </li><li> Yavaşça injectr düşürmekUygun anatomik koordinatları kullanarak hedef yapısına stereotaksik aparatı (bu durumda üstün colliculus) kullanarak gazel. </li><li> Doku kuruma önlemek için sıcak agar ile maruz korteksi örtün. </li></ol> 4. Enjeksiyon ve Tersinir İnaktivasyonu <ol><li> Enjeksiyonu başlatmak için 40 nl / dak ve basın Run 400 nl 800 enjekte mikroenjeksiyon pompasını ayarlayın. O başak oranı enjeksiyon sırasında azalma gösterecektir unutmayın. NOT: deney düzeneği, sinirsel aktivite GABA doğum bitiminden sonra bir saat içinde iyileşti. Herhangi bir kalibre mekanik cihaz enjeksiyonu yapmak amacıyla mikroenjeksiyon şırınga baskı uygulamak için kullanılabilir. </li><li> Elektrofizyolojik veriler kazanılmasından sonra, yerel Hayvan Etik Topluluğu tarafından onaylanmış bir yöntem kullanılarak euthanize. </li></ol>

<ol><li>Martin, J. H., Ghez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+inactivation+in+the+analysis+of+the+central+control+of+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Pharmacological inactivation in the analysis of the central control of movement.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 145-159 (1999).</li>
<li>Ponce, C. R., Hunter, J. N., Pack, C. C., Lomber, S. G., Born, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+indirect+pathways+to+visual+response+properties+in+macaque+middle+temporal+area+MT%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+Of+Neuroscience+The+Official+Journal+Of+The+Society+For+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Contributions of indirect pathways to visual response properties in macaque middle temporal area MT.</a> The Journal Of Neuroscience The Official Journal Of The Society For Neuroscience. 31 (10), 3894-3903 (2011).</li>
<li>Lomber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+advantages+and+limitations+of+permanent+or+reversible+deactivation+techniques+in+the+assessment+of+neural+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">The advantages and limitations of permanent or reversible deactivation techniques in the assessment of neural function.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 109-117 (1999).</li>
<li>Malpeli, J., Schiller, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+of+reversible+inactivation+of+small+regions+of+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A method of reversible inactivation of small regions of brain tissue.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 1 (2), 143-151 (1979).</li>
<li>Lomber, S. G., Payne, B. R., Horel, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cryoloop%3A+an+adaptable+reversible+cooling+deactivation+method+for+behavioral+or+electrophysiological+assessment+of+neural+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">The cryoloop: an adaptable reversible cooling deactivation method for behavioral or electrophysiological assessment of neural function.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 179-194 (1999).</li>
<li>Gonzalez-Perez, O., Guerrero-Cazares, H., Quiñones-Hinojosa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+deep+brain+structures+with+microinjections+for+delivery+of+drugs%2C+viral+vectors%2C+or+cell+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Targeting of deep brain structures with microinjections for delivery of drugs, viral vectors, or cell transplants.</a> Journal Of Visualized Experiments. (46), (2010).</li>
<li>Hupé, J., Chouvet, G., Bullier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+parameters+of+cortical+inactivation+by+GABA%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal parameters of cortical inactivation by GABA.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 129-143 (1999).</li>
<li>Casanova, C., McKinley, P., Molotchnikofff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responsiveness+of+Reorganized+Primary+Somatosensory+%28SI%29+Cortex+after+Local+Inactivation+of+Normal+SI+Cortex+in+Chronic+Spinal+Cats%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensory+%26+Motor+Research%22%5BJournal%5D)">Responsiveness of Reorganized Primary Somatosensory (SI) Cortex after Local Inactivation of Normal SI Cortex in Chronic Spinal Cats.</a> Somatosensory & Motor Research. 8 (1), 65-76 (1991).</li>
<li>Malpeli, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+inactivation+of+subcortical+sites+by+drug+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Reversible inactivation of subcortical sites by drug injection.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 119-128 (1999).</li>
<li>Minville, K., Casanova, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+frequency+processing+in+posteromedial+lateral+suprasylvian+cortex+does+not+depend+on+the+projections+from+the+striate-recipient+zone+of+the+cat%E2%80%99s+lateral+posterior-pulvinar+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Spatial frequency processing in posteromedial lateral suprasylvian cortex does not depend on the projections from the striate-recipient zone of the cat’s lateral posterior-pulvinar complex.</a> Neuroscience. 84 (3), 699-711 (1998).</li>
<li>Diao, Y., Wang, Y., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Representation+of+the+binocular+visual+field+in+the+superior+colliculus+of+the+albino+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Representation of the binocular visual field in the superior colliculus of the albino rat.</a> Experimental Brain Research. 52 (1), 67-72 (1983).</li>
</ol>

Açıklayacak hiçbir şeyimiz yok.

Önerilen protokol mevcut geri dönüşümlü etkisizleştirme yöntemleri kaynaklanan sorunları çözmek için tasarlanmıştır. Özellikle bu proje özellikle derin beyin yapılarında nöral aktiviteyi modüle maddelerin kimyasal microinjections için kullanılan yöntemleri rafine yönelik. Kurulum bu tür ortaya çıkan bir teknik zorluk, her iki sondalar enjeksiyon yerinde kesin kayıtları elde etmek amacıyla in vivo aynı kısıtlı alanda kolokalize edilmesi ihtiyacıdır. Bu sorun, aynı sitede Enjeksiyon ve kayıt kapasitesine sahip ol...

kortikal alan ve alt kortikal çekirdeklerin inaktivasyonu, çeşitli beyin yapıları 2-4 arasındaki fonksiyonel ilişkiler çalışmalarında önemlidir. Son literatür beyin yapılarının 2,5 rolünü incelemek için kayıp fonksiyon-kimyasal veya kriyojenik teknikleri istihdam vardır. Çevre doku 6,7 kollateral hasarı en aza indirerek ilaç microinjections ilgili olarak, ilaçların küçük miktarlar kontrollü bir hızda, bir beyin bölgesine uygulanabilir. Bu teknik, nöronal aktivitenin farklı farmakolojik hedeflerin etkisini incelemek için spesifik agonistleri, ters agonistleri veya antagonistleri sunmak için de kullanılabilir. Bu tür etkileri de araştırmacılar, farklı kortikal ve subkortikal yapılar arasındaki ilişkileri incelemek için izin uzak yerlerden nöronal yanıtları değişiklikleri ölçerek ele alınabilir. Burada, biz bo yeteneğine sahip bir cihazın montajını, injectrode, göstermekelektrofizyolojik sinyaller kayıt ve hedef konumda ilaçların küçük miktarlarda teslim inci. Biz sıçan üstün colliculus, GABA, nöronal aktivitenin ortak bir inhibitörü enjekte edilerek bu sistemin yeteneklerini göstermek. Bu bölge bize injectrode yerelleştirme onaylamak için görsel uyarılmış multiunit aktiviteyi kullanmak için izin görsel uyarı, duyarlıdır. inaktivasyon reversibilitesinin GABA enjeksiyonu bitimini izleyen, normal nöronal aktivitenin iyileşme ile değerlendirildi. enjeksiyon bölgesinden çok üniteli etkinliğini izlemek için yeteneği istenen farmakodinamik yanıtı elde etmek için gerekli enjeksiyon oranları ve hacimlerin ince ayar için izin verir. En küçük etkili miktarlar enjekte edilir çünkü Bu nedenle, bu tekniğin bir avantajı, Şekilde, mikro neden olduğu doku hasarının sınırlayıcı potansiyelidir. önerilen protokol tek bir donanım necessar üretilmesi için bir maliyet açısından verimli bir yöntem sağlarilaç verme ve yerel nöronal etkinliği kayıt istendiği deneyleri yürütmek için y.

<table><tbody><tr><td>Enjeksiyon pompası (UltraMicroPump III)</td><td>WPI</td><td></td><td></td></tr>#UMP3 <tr><td>Enjeksiyon konsolu (Micro4 Kontrol Cihazı)</td><td>WPI</td><td>#SYS-MICRO4</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton şırınga</td><td>Hamliton</td><td>(80301) 701LT 10 ve mikro; L SYR</td><td>Şırıngalar 5 ile 10 &mu arasında; l Kullanılan</td></tr><tr><td>Esnek plastik yapıştırıcı</td><td>Lepage</td><td>393915</td><td>Jel formunun 30&nbsp'lik şafta uygulanması daha kolaydır; G hipodermik iğne kuruduğunda su geçirmez bir conta oluşturur.</td></tr><tr><td>Cam pipetler</td><td>WPI</td><td>#TW100F-4</td><td>İnce duvarlı, 1&nbsp; mm OD, 0.75&nbsp; mm ID kullanılan filament pipetler ile</td></tr><tr><td>720 İğne Pipet Çektirme</td><td>Kopf</td><td>720</td><td></td></tr><tr><td>Gümüş tel</td><td>A-M Systems, Inc.</td><td>782500</td><td>Çıplak 0.010"</td></tr></tbody></table>

eşzamanlı elektrofizyolojik kayıt ve kemirgen beyindeki inhibitör ajanların mikro-enjeksiyon

Simultaneous Electrophysiological Recording and Micro-injections of Inhibitory Agents in the Rodent Brain

Burada ticari olarak erişilebilir ve uygun fiyatlı parçalar kullanarak tek kullanımlık &quot;injectrode&quot; yapımı için bir yöntem açıklanmaktadır. Bir tarama sisteminin etkilenen nöronal popülasyonundan elektrofizyolojik sinyalleri kayıt sırasında bir ilacın enjeksiyonu sağlar geliştirildi. Bu yöntem, ticari çözümler için basit ve ekonomik bir alternatif sağlar. Bir cam pipet bir hipodermik iğne ve gümüş filament ile birleştirilmesi suretiyle modifiye edildi. injectrode ilaç iletimi için ticari bir mikroenjektör pompasına bağlanmıştır. Bu ilaç dağıtım sitesinden kaynaklanan çoklu ünite dışı sinyalleri aracılığıyla gerçek zamanlı farmakodinamikler geri bildirim sağlayan teknikle sonuçlanır. Kavramının bir kanıtı olarak, eş zamanlı olarak injectrode yoluyla ilaçların teslimi ile, sıçanlarda ışık yanıp söner tarafından ortaya üstün colliculus gelen nöronal aktivitenin kaydetti. injectrode kayıt kapasitesi inj fonksiyonel karakterizasyonu izin veririlaç dağıtım lokalizasyonu üzerinde hassas kontrol lehine ection sitesi. Injectrode yüklü kimyasal madde seçimi anatomik deneyler için işaretleyiciler izleme dahil olmak üzere, geniş bir şekilde, bu yöntemin uygulanması, aynı zamanda, buradan çok gösterilmiştir ötesine uzanır.

injectrode inşaat tel bükülmüş bir kısmı ile bir cam pipet (D) içine beslenir ve açıklıktan dışarı doğru çıkıntı yapan, Şekil 1 bir gümüş tel (C) &#39;de gösterilmiştir. A 30 G iğne (B) bağlı ve yapıştırıcı ile cam pipet açılmasına kapatılır. Pipet püskürtme maddesi ile doldurulduktan sonra, cam mikro şırınga (A), bir iğne takılır. Mikro şırınga iğnesi (E) ve nerede gümüş tel cam pipet (F) çıkıntı bağlanır iyi bir mühür var olması önemlidir. 2 injectrode Montaj tamamlandıktan sonra neye...

Burada, ikili işlevlere sahip bir cam pipet yapıyoruz: ilaçların mikroenjeksiyonları ile derin beyin yapılarının inhibisyonu ve eşzamanlı elektrofizyolojik kayıtlar yoluyla etkilerinin gerçek zamanlı olarak izlenmesi.

Eşzamanlı Elektrofizyolojik Kayıt ve kemirgen Beyindeki inhibitör Ajanların Mikro-enjeksiyon

Here we describe a method for the construction of a single-use &#8220;injectrode&#8221; using commercially accessible and affordable parts. A probing ...

Bu prosedürün genel amacı, çoklu ünite nöronal aktiviteyi izlerken sıçan superior kollikulusuna nörotransmitterlerin mikroenjeksiyonunu yapmak için uygun maliyetli bir enjeksiyon yolu oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle bir cam kılcal boru ve dikey bir mikro pipet çekici kullanılarak cam bir pipet oluşturularak gerçekleştirilir. İkinci adım, bir gümüş telin, telin bir bölümü konik olmayan uçtan dışarı çıkacak şekilde kılcal borunun içine yerleştirilmesidir.Ardından, cam pipet ile hipodermik iğne arasında sızdırmaz bir mühür oluşturmak için yapıştırıcı kullanılır. Son adımlar, pipetin Chicago gökyüzü mavisi renkli bir GABA solüsyonu ile doldurulması, mineral yağı ile doldurulmuş bir mikro şırıngaya bağlanması ve bir mikro enjektöre sabitlenmesidir. Nihayetinde, erişilebilir ve uygun maliyetli parçalarla yapılan bu enjektör düzeneği, bir ilaç enjeksiyonu öncesinde, sırasında ve sonrasında inaktive edilen bölgenin nöronal aktivitesi kaydedilirken derin beyin yapılarını inaktive etmek için kullanılabilir.Bu tekniğin, gaz tabanlı basınç darbeleri ve fotik enjeksiyon sistemleri gibi mevcut diğer yöntemlere göre birkaç avantajı vardır. Bunlardan biri, aşırı enjeksiyondan kaynaklanan doku hasarını sınırlayan ve ilaç iletimi üzerinde fonksiyonel tabanlı kontrol sağlayan maliyet etkin bir yöntem olmasıdır. Bu sistemin sunduğu bir diğer avantaj ise, nöral deaktivasyonun zamansal bileşeni üzerinde etkili kontrol sağlayan kombine kayıt yeteneğidir.Kayıt enjeksiyon pipetlerini hazırlamak için, öncelikle bir cop dikey model için bir milimetre dış çapında yedi santimetrelik bir kapiler çekin. Seven 20 veya benzeri bir ünite kullanın. Isıtıcıyı 18'e ve solenoidi bire ayarlayın; ardından, eldiven giymiş halde, bir açıklık oluşturmak için ucu manuel olarak kırın ve iç çapın 30 ile 40 µm arasında olduğunu mikroskop altında doğrulayın.Bunu vizör cetveli ile ölçün. Bu işlem, 0,3 ila 0,6 mega ohm arasında nispeten düşük bir empedans sağlayacaktır. Ardından, konik olmayan uçtan, yaklaşık yedi santimetre uzunluğunda gümüş bir teli pipete yerleştirin ve telin bir ila iki santimetresini pipetin dışında bırakın.Bu fazla teli kapilerle dik açı yapacak şekilde bükün. Ardından, 30 gauge'lik bir hipodermik iğne alın ve gövdeye esnek plastik yapıştırıcı uygulayın. Sonra iğneyi yavaşça pipete yerleştirin.Mümkün olduğu ölçüde, pipet ile iğne arasındaki birleşim yerinde sızdırmazlık sağlamak için daha fazla yapıştırıcı ekleyin. Pipet ucu yukarıya bakacak şekilde, düzeneği yaklaşık 12 saat boyunca kurumaya bırakın.Sıçan anestezi edildikten ve stereotaksik çerçeveye yerleştirildikten sonra, oftalmik pomad uygulayın ve başını temizce tıraş edin. Lokal anestezik uygulayıp cerrahi anestezi düzlemini onayladıktan sonra, 10 numara bistüri ucu kullanarak kafa derisini median hat boyunca insize edin. Bu işlem, koronal ve sagital sütürleri açığa çıkaracaktır.Ardından cerrahi bir spatula kullanarak Lambda ve bgma anatomik referanslarını belirleyin. Bu işaretçiler aynı yatay düzlemde olacak şekilde başın konumunu ayarlayın. Daha sonra, cam tüp gibi ince ve sert bir işaretleyiciyi bgma üzerine sıfırlayın.Ardından, bgma'dan alınan koordinatları kullanarak tüpün konumunu ilgilenilen bölgeye göre ayarlayın. Kraniyotomi için hedef alanın etrafına keçeli kalemle bir kare çizin. Şimdi, cerrahi olarak sterilize edilmiş matkapla, işaretler boyunca kemiği yavaşça çıkarın.Kemik inceldiğinde sürtünmeye bağlı kafa kaynaklı doku hasarını önlemek için mümkün olduğunca az basınç kullanarak başlayın ve matkabı hareket ettirmeye devam edin; ardından kare kesiti cımbızla dikkatlice çıkarın. Enjeksiyon ileride buradan geçeceği için Dora MA'nın çıkarılmasına gerek yoktur. Açığa çıkan korteksi serebrospinal sıvı ile irige tutun.Enjekte edilecek maddeyi hazırlamak için öncelikle beş ila 10 µL'lik şırıngayı mineral yağ ile doldurun. Ardından, incelenecek ilacı bir boya ile birlikte fizyolojik salin içerisinde hazırlayın. Burada %0,5 Chicago sky blue, 300 µM gaba ile karıştırılmıştır.Şimdi, önce bir mililitrelik bir şırıngayı hazırlanmış solüsyonla doldurup ardından şırıngayı kullanarak pipeti doldurarak enjeksiyon pipetini doldurun. Şırıngayı çıkarırken, vakumun enjeksiyon yolundan solüsyonu çekmemesi için piston üzerinde hafif bir basınç uygulayın. Olası sızıntı noktalarında sıvı kaçağı olup olmadığını kontrol edin.Fazla sıvıyı bir pamuklu çubukla temizleyin ve sızıntı olup olmadığını yeniden kontrol edin. Şimdi, mineral yağı içeren mikro şırıngayı enjeksiyon yoluna takın. Ardından, fazla çözeltiyi silerek temizleyin.Gazlı bez ile. Enjeksiyon ucunu kontrol edin. İçinden küçük çözelti damlalarının akması mümkün olmalıdır, aksi takdirde uç tıkanmıştır veya şimdi enjektörü bir mikro pompa sistemine güvenli bir şekilde monte edin.Ardından, enjeksiyon yolunun konumunu hedef koordinatlara taşıyın ve elektrodu, görsel uyarılmış potansiyellerin kaydedilmesi yoluyla tanımlanabilen superior colliculus'a indirin. Tıkanmayı önlemek için, elektrot indirilirken düşük bir enjeksiyon hızıyla küçük bir pozitif basınç uygulayın. Hedef yapıya ulaşıldığında enjeksiyonu durdurun.Enjeksiyon yapıldıktan sonra, kurumayı önlemek için açıkta kalan korteksi sıcak agar ile kapatın. Elektrodun son yerleşiminden sonra, elektrodun etrafındaki dokunun stabilize olması için 30 dakika bekleyin. Ardından, superior colus'ta nöronal aktivasyon gerçekleşene kadar, dakikada 40 nanolitre hızla 400 ila 800 nanolitre çözelti enjekte edin; inhibitör çözeltinin enjeksiyonu sırasında elektrot spike'larda bir azalma göstermelidir.Süperiyor kolus'ta görselle uyarılmış potansiyeller elde edildi. GABA enjeksiyonu sonrası kontralateral göze 300 milisaniyelik bir flaş uygulamasının ardından, flaş stimülasyonuna yanıt olarak gelişen spike aktivitesi 45 ila 60 dakika boyunca baskılandı. Bu prosedür gerçekleştirilirken, yükleme sırasında sızıntı olup olmadığının kontrol edilmesi ve ilaç solüsyonunun enjeksiyon ucundan serbestçe akıp akmadığının doğrulanması önemlidir.

simultaneous-electrophysiological-recording-micro-injections

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz, sinirsel aktivite ve kan oksijenlenme seviyesi bağımlı (BOLD) MRG sinyal arasındaki ilişkinin araştırılması için bir platform sağlayan, aynı anda fonksiyonel manyetik rezonans görüntüleme ve kemirgen beyin elektrofizyolojik kayıt için bir yöntem geliştirdik.

Kemirgen Beyin aynı anda fMRI ve Elektrofizyoloji

Bir prosedür elektroansefalogram, elektromiyogram ve serebral laktat konsantrasyon takip edilir iken optogenetically kortikal piramidal nöronların etkinlik işlenmesi için tarif edilmektedir. Onlar kendiliğinden uyku / uyanıklık döngüsü geçmesi ise Deneysel kayıtları kablo-tethered fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir. Optogenetic cihaz laboratuar monte edilmiştir; kayıt ekipman ticari olarak temin edilebilmektedir.

Eşzamanlı Elektroensefalografi, Kemirgen Serebral Korteks Laktat Konsantrasyonu ve Nöronal Faaliyet Optogenetic Manipülasyon Gerçek zamanlı ölçüm

Bu protokol, anestezi uygulanmış bir sıçanın hedeflenen beyin bölgelerine hassas ilaç iletimi için bir enjekrodun montajını ve kullanımını, ardından kaydedilen elektrik sinyalleri aracılığıyla nöronal aktivitenin izlenmesini ana hatlarıyla belirtir.

Sıçan Beyninde Elektrofizyolojik Kayıt ile İlaç Mikroenjeksiyonu

Bu video, anestezi uygulanmış bir sıçanın birden fazla bölgeden beyin aktivitesinin elektrofizyolojik kayıtları için hazırlanmasına yönelik ayrıntılı prosedürü göstermektedir. Kafatasına erişmek için kafa derisi kesilir ve elektrotları yerleştirmek ve sabitlemek için kesin yerlerde delikler açılır. Tungsten mikrotel elektrotlar daha sonra verileri kaydetmek için hedeflenen konuma yerleştirilir.

Sıçanlarda Birden Fazla Bölgeden Beyin Aktivitelerinin İn Vivo Elektrofizyolojik Kayıtları

Video, bütünleştirici bir mikro sürücü dizisi kullanılarak bir sıçandaki birden fazla beyin bölgesinden eşzamanlı elektrofizyolojik kaydı göstermektedir. Kayıt elektrotları koku soğancığına, referans elektrotları frontal kortekse ve mikro sürücü dizisi elektrotları hipokampusa yerleştirilir. Sıçanın serbestçe yiyecek aramasına izin verilir ve implante edilen tüm elektrotlardan eşzamanlı kayıt, dizi kullanılarak kaydedilir.

Çoklu Beyin Bölgelerinden Elektrofizyolojik Kayıt için Bir Mikro Sürücü Dizisi Yöntemi

Bu video, anestezi uygulanmış bir sıçanda birlikte lokalize elektroensefalografi (EEG) ve lokal alan potansiyellerinin (LFP'ler) eşzamanlı kayıtları için prosedürü göstermektedir. İşlem, sıçanın hazırlanmasını ve uyarıcı elektrotların bıyık pedlerine takılmasını içerir. Yüzey EEG ölçümleri için farenin kafatasına bir EEG örümcek elektrodu yerleştirilir. Aynı zamanda, çok kanallı bir mikroelektrot, lokalize bir beyin bölgesinden nöral aktiviteyi kaydetmek için kafatasındaki bir çapak deliğinden...

Anestezi Uygulanmış Bir Sıçanda Eş Zamanlı Elektroensefalografik ve Lokal Alan Potansiyeli Kayıtları

Kaynak: Lai, J., et al. Kemirgen beyninde inhibitör ajanların eşzamanlı elektrofizyolojik kaydı ve mikro enjeksiyonları. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, sıçan superior colliculus'ta eşzamanlı nöronal kayıt ve inhibisyon için mikroenjeksiyon tabanlı bir tekniği göstermektedir. Prosedür, stereotaksik hedeflemeyi, kafatası delmeyi ve nöronal aktiviteyi kaydederken inhibe edici bir nörotransmitter sağlayan bir injectrodun yerleştirilmesini içerir. Işık stimülasyonu aksiyon potansiyellerini...

Bir Sıçanda Nöronal Aktivitenin İnhibisyonu ve Elektrofizyoloji Kullanılarak Tespiti

Uyanık farelerde hücre dışı nöral aktiviteyi aynı anda kaydetmek ve kayıt bölgelerinin yakınında birden fazla nöroaktif madde salmak için elektrotların yapımı için yöntemler sunuyoruz. Bu teknik, ilgilenilen nörona varsayılan yerel sinaptik girdilerin ayrıntılı analizine izin verir.

Uyanık Farelerde Nöroaktif Maddelerin Microiontophoretic Uygulaması ile birlikte Nöronal Faaliyet dışı Kaydı

Bu iletişim kuralı ortak yerelleştirilmiş elektroansefalografi (EEG) ve multi-Laminer yerel alan bir imzalat köstebeğiyle potansiyel eşzamanlı kayıt için basit bir yöntem açıklanır. Bir elektrot yerleştirilmesi için kafatası delinen burr deliği EEG sinyal önemsiz bozulma üretmek için gösterilir.

Co yerelleştirilmiş elektroansefalografi ve yerel alan potansiyel kemirgen eşzamanlı kayıt

4 aminopyridine uyarılan epileptiform aktivite kayıt ve elektrik modülasyon elektrot dizileri kullanma kemirgen beyin dilimler halinde gerçekleştirme göstermektedir. Özel kayıt odası doku canlılığı uzun süreli deneysel oturumları boyunca korur. Elektrot eşleme yaşamak ve uyarıcı çiftlerinin seçimi özel bir grafik kullanıcı arabirimi tarafından yapılmaktadır.

Kayıt ve modülasyon Epileptiform aktivite elektrot dizilerin birleştiğinde kemirgen beyin dilimleri içinde

Elektrofizyoloji ve deneysel probların (yani nanosensörler, mikroelektrotlar) isteğe bağlı ilaç infüzyonu için tasarlanmış bir mikroenjekrode sistemi salıyoruz. Yaygın olarak bulunan mikroakışkan bileşenler, sondayı içeren bir kanülle birleştiğinde. Makak korteksindeki mussimol infüzyonu sırasında elde edilen sonuçlarla birlikte mikroenjekrode konstrüksiyonu için adım adım protokol dahildir.

Kombine İlaç İnfüzyonu ve Elektrofizyolojisi için Mikroenjekrode Sistemi

Keşfedin kemirgen beyninde eşzamanlı elektrofizyolojik kayıt ve inhibitör ajanların mikro-enjeksiyonu için uygun maliyetli bir cam pipet yapımını. Bu yöntem, nöron aktivitesini gerçek zamanlı izlerken derin beyin yapılarını inaktive etmeyi sağlar.

Eşzamanlı Elektrofizyolojik Kayıt ve kemirgen Beyindeki inhibitör Ajanların Mikro-enjeksiyon

Daha fazla video keşfet