Name: Fare Kolorektal Afferent Endings in vitro Fonksiyonel Karakterizasyonu içinde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 9 s
Description: Keşfedin fare kolorektal aferent sinir uçlarının in vitro elektrofizyolojik kayıtlarla fonksiyonel karakterizasyonunu. Bu yöntem mekanosensitivite ve kimyasal yanıtları analiz ederek ağrı mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NIH ödülü R01 DK093525 (GFG) tarafından desteklenir. Dr. Amber Shaffer (Pittsburgh Üniversitesi) tarafından el yazmasının bilimsel incelemesini ve dilbilgisi düzenlemesini çok takdir ediyoruz ve şekillerin hazırlanmasındaki yardımı için Michael Burcham'a teşekkür ediyoruz.

NOT: Bu protokol gözden ve Pittsburgh Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. Modifiye Krebs Çözüm ve Test İlaç Alikot 1. Hazırlık <ol><li> 117,9 NaCl, 4,7 KCİ, 25 NaHCO 3, 1.3, NaH 2 PO 4, MgSO 4 1.2, 2.5 CaCl2, 11.1, D-glukoz, 2 sodyum bütirat, 20 sodyum asetat (mM olarak) içeren değiştirilmiş bir Krebs çözeltisi içinde 6 L yapmak 0.004 nifedipin (spontan kas kasılmaları bloke etmek için), ve 0.003 indometasin (endojen prostaglandin sentezini bloke etmek için). Sırasıyla doku diseksiyonu ve tek lif kayıt için buz-soğuk ve sıcak Krebs çözümleri kullanın. </li><li> Herhangi bir kimyasal çözümleri hazırlayın (örn, IS, kapsaisin, ATP) istenen konsantrasyonlarda alikotlarda. </li></ol> Kolorektumun-sinir Doku 2. Diseksiyon <ol><li> Uyutmak ve erkek fareler euthanize (6 - 8 haftalık, 20-30 g)10 yerine geçen bir akış oranında bir CO2 odası - farelerde kadar dakika başına bölme hacminin% 30 göğüs hareketinin olmaması ile gösterildiği gibi tamamen nefes durdurun. </li><li> Hemen sonra, torasik bölme kesmenin sağ atriyum delme ve buz soğukluğunda Krebs geniş bir hacmi (~ 500 mi) fare karkas içine daldırarak ötenazi, asıl bulbus olfaktoryusları aşağıdaki gibidir (4 ° C) bir karbojen (% 95 O2 ile kabarcıklar halinde % 5 CO2). </li><li> Dikkatle tüm iç organları ama kolon ve pelvik organları çıkarın. Biraz göğüs diyafram üzerinde T12 spinal segment boyunca yarısında fare transect ve buz soğuk içeren bir diseksiyon odasına kuyruk yarısını aktarmak, Krebs solüsyonu kabarmış. </li><li> Steromikroskopla, üretraya kavşaklarda transecting ile mesane ve üreme organları kaldırmak ve ortak iliak arterlere üzere iki kola ayrılır kadar inen / abdominal aorta çıkarın. PN veya surroundin gelen LSN Freeg künt diseksiyon ile dokular ve L6 ve S1 vertebra (PN için) sütun veya T13 ve (LSN) L1 vertebra sütuna ventral giriş noktasına kadar iliak dışından sinir izleyin. </li><li> Pubis eklemi ve sağ ve sol asetabuler eklemleri kesin ve iliyak kemiği kaldırmak. Sinir vertebra sütun girdiği yere kadar kolorektal yakın ekli kas ve bağ dokusundan ya PN veya LSN dikkatlice ücretsiz. </li><li> Dikkatle uzak kolorektal maruz iliak kemik rezeksiyonu. Sürekliliğinde bağlı PN veya LSN distal kolorektal parçalara ayır. </li><li> Doku odasının banyo bölmesine bağlı sinir kolorektal aktarın. Daha fazla diseksiyon ile aşırı bağ dokusu çıkarın, ve anti-mezenterik sınırı boyunca uzunlamasına kolorektal açın. </li><li> Yukarı bakacak şekilde mukozal tarafı, Chambe silikon üssü haline kayıt bölmesine bitişik kolorektumun mezenterik kenarını pinR ve bir zorlamalı tahrik düzenine bağlı kanca kesintiye kolorektal antimezenterik uzunluğu bağlamak (Şekil 1 &#39;de gösterilen ve Şekil 2A&#39;da fotoğraflandı). </li><li> Bir fare deliği ve kapısı banyo bölmesi bağlanır kayıt bölmesine, içine PN veya LSN uzatın. Yavaşça sinir uymak için bir hidrofil yüzey sağlar kayıt bölmesi, bir küçük cam ayna üzerine sinir gövde yatıyordu. Sıcak ile banyo bölmesini Superfuse (30-32 ° C), Krebs solüsyonu oksijenli ve mineral yağ ile kayıt bölmesini doldurun. </li></ol> 3. Tek-lif Kayıt ve Alıcı Field lokalizasyonu <ol><li> Dikkatle yüksek büyütme (- 60X 50) de stereomicroscope altında PN veya LSN&#39;den epinöriyuma (sinir kılıfı) geri soyma. ~ 100 mikron kalınlığında 8 sinir demetleri - ince forseps kullanarak, 5 içine sinir gövde alay. </li><li> Platin-iridyum başvuru yerleştirindoku bölmesi içinde Krebs çözeltisi ile temas halindeki elektrot. Sıralı aynı malzemeden yapılmış kayıt elektrot üzerine bireysel sinir demetleri yerleştirin. </li><li> Yavaşça yukarı okşayarak tarafından ve kolorektal yüzeye aşağı kolorektal afferentleri gelen AP uyandırmak için yumuşak bir boya fırçası kullanın. Saptanabilir AP (aksiyon potansiyeli) kayıtları ile kolon innerve sinir demeti (ler) bulun. NOT: PN ve SSN da idrar kesesi ve diğer pelvik organlar innerve. </li><li> Ayrıca 10 mikron kalınlığında ~ ince fasikül filamentler içine sinir demeti bölmek ve kayıt elektrot üzerine bireysel bir filamanın yerleştirmek için 30 G iğne uçları bir çift kullanın. </li><li> Elektriksel akım yayılması ~ 2 mm çapındaki üreten suprathreshold uyaran yoğunluğu (10 mA büyüklüğü, 0,3 Hz @ 0,5 msn süre), en afferent sonlar heyecanlandırmak için mukozal yüzeye dik yuvarlak uçlu eş elektrot yerleştirin. Sistematik (~ 1.5 mm adımlarını elektrot Taşı) Düzleşmiş kolorektumun uzunluğu ve genişliği boyunca açık sonlar yerelleştirilmesine. </li><li> Bir afferent biten heyecanlı olduğunda, asgari uyaran yoğunluğunu (uyaran eşik) gerektirir aktivasyon (açık alan, RF) siteyi kesin olarak belirlemek için elektrot konumunu ayarlamak. &gt; 3 mA 19 bir uyarıcı eşik sonlar atın. </li><li> Uyaran parazit ve aksiyon potansiyeli başlangıcı arasındaki iletim hızı 1 (CV)) alıcı alan (RF) en uyarıcı elektrot ve kayıt sitesi ve 2) iletim gecikmesi (örneğin, Şekil 2B arasındaki mesafe) hesaplayın . Özgeçmiş (m / sn) = uzaklık (mm) / iletim gecikmesi (msn). </li></ol> Mechanosensitive Kolorektal afferentlerin 4. Fonksiyonel Sınıflandırılması <ol><li> Elektriksel stimülasyon ile bir RF bulduktan sonra, RF aşağıdaki üç mekanik uyaranlara geçerlidir: <ol><li> Bir Calibra ucu basarak tarama uyaran Davranışted von Frey gibi naylon monofilament (0.4 ve 1 gr gücü) dik düzleştirilmiş kolorektumun üzerinde RF doğru. </li><li> Yavaşça RF küçük bir yüzey kayma gerilmesi oluşturmak için ince bir naylon iplik telinin (10 mg kuvveti) ile kolorektal mukozayı okşayarak tarafından okşayarak uyaran Davranış. </li><li> Rampalı bir germe kuvveti sağlayan bir bilgisayar kontrollü kuvvet aktüatörü kullanılarak çevresel streç Davranış - aşama 2.8 &#39;de tarif edilen kanca tırmık ile kolorektal anti-mezenterik kenarı boyunca çevresel yönde (0 5 mN / sn 170 mN) . </li></ol></li><li> Serozal olarak, mukozal (sondalama künt sadece cevap) afferentler sınıflandırır kas (çevresel streç cevap ve sondalama künt) kas / mukozal (çevresel streç, mukozal okşayarak cevap ve sondalama künt), ya da, (okşayarak mukoza ve sondalama künt cevap) MIA (üç mekanik uyarıcılara herhangi birine yanıt yok). </li><li> Sadece (mezenterik afferentleri içinZor LSN innervasyon), elektrik stimülasyonu ile seçici aktive mezenter sondalama / mekanik okşayarak kendi alıcı sonlar bulmak için. </li><li> Streç duyarlı afferentleri (kas ve kas-mukozal) için, rampalı streç sırasında ilk AP çağrıştırıyor kuvvet olarak tanımlanan tepki eşiğini belirlemek. </li><li> Serozal afferentlerin için, bilgisayar kontrollü kuvvet aktüatör tarafından yönlendirilen açık alan tarama punktat düzeylerini artan onların yanıtlarını kaydedin. </li></ol> Alıcı Endings 5. Kimyasal Uygulama / Modülasyon <ol><li> Mekanik uyarana bir temel yanıtı kaydedin (yani, rampalı streç, sondalama punktat veya mukozal okşayarak yanıt). </li><li> Coat alt boru (10 mm yüksekliğinde ve 4 x 4 mm 2 kare veya 4 pirinç veya paslanmaz çelikten, - 5 mm çapında) bir parçasının kenar vazelin ve kolorektal üzerinde açık alana üzerine yerleştirin. </li><li> KaldırKimyasal (lar), test edilecek içeren çözeltinin 5 dakika 170 ul - Krebs boru içine çözeltisi ve 3 için açık bir son maruz kalmaktadır. </li><li> Kimyasal uygulama sırasında aferentinin yanıtı Monitör (bazı afferentler kemosensitif vardır). </li><li> Kimyasal işlem sona erdirmek için kimyasal çözeltisi ve boru çıkarın. 4 içinde - 6 dakika, bazal yanıt aynı mekanik uyarana afferent cevabı test. </li><li> Yıkama-out yeterli bir süre (&gt; 15 dk) sonra yeniden mekanik uyaran yeniden uygulayın. </li></ol> 6. Kayıt ve Ayırıcı AP sivri <ol><li> 20 kHz akson kaydedilen elektrik sinyallerini dijital ortama aktarmak ve bir bilgisayara verileri kaydetmek. Bir ses monitör ile on-line sinyali izleyin. </li><li> Off-line AP ani analiz ve bireysel başak dalga formları 25 temel bileşen analizi dayalı tek birimleri ayırt. NOT: Bir rekor inci artık içermelidirbir, iki, kolayca discriminable aktif birimleri. </li></ol>

<ol><li>Naliboff, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+two+distinct+perceptual+alterations+in+irritable+bowel+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Evidence for two distinct perceptual alterations in irritable bowel syndrome.</a> Gut. 41, 505-512 (1997).</li>
<li>Verne, G. N., Robinson, M. E., Vase, L., Price, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+visceral+and+cutaneous+hyperalgesia+by+local+rectal+anesthesia+in+irritable+bowel+syndrome+%28IBS%29+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Reversal of visceral and cutaneous hyperalgesia by local rectal anesthesia in irritable bowel syndrome (IBS) patients.</a> Pain. 105, 223-230 (2003).</li>
<li>Verne, G. N., Sen, A., Price, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrarectal+lidocaine+is+an+effective+treatment+for+abdominal+pain+associated+with+diarrhea-predominant+irritable+bowel+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain%22%5BJournal%5D)">Intrarectal lidocaine is an effective treatment for abdominal pain associated with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome.</a> Journal of Pain. 6, 493-496 (2005).</li>
<li>Chey, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linaclotide+for+irritable+bowel+syndrome+with+constipation%3A+a+26-week%2C+randomized%2C+double-blind%2C+placebo-controlled+trial+to+evaluate+efficacy+and+safety%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Linaclotide for irritable bowel syndrome with constipation: a 26-week, randomized, double-blind, placebo-controlled trial to evaluate efficacy and safety.</a> Am J Gastroenterol. 107, 1702-1712 (2012).</li>
<li>Rao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+12-week%2C+randomized%2C+controlled+trial+with+a+4-week+randomized+withdrawal+period+to+evaluate+the+efficacy+and+safety+of+linaclotide+in+irritable+bowel+syndrome+with+constipation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">A 12-week, randomized, controlled trial with a 4-week randomized withdrawal period to evaluate the efficacy and safety of linaclotide in irritable bowel syndrome with constipation.</a> Am J Gastroenterol. 107, 1714-1724 (2012).</li>
<li>Busby, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologic+properties%2C+metabolism%2C+and+disposition+of+linaclotide%2C+a+novel+therapeutic+peptide+approved+for+the+treatment+of+irritable+bowel+syndrome+with+constipation+and+chronic+idiopathic+constipation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Pharmacologic properties, metabolism, and disposition of linaclotide, a novel therapeutic peptide approved for the treatment of irritable bowel syndrome with constipation and chronic idiopathic constipation.</a> J Pharmacol Exp Ther. 344, 196-206 (2013).</li>
<li>Mei, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+chemosensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Intestinal chemosensitivity.</a> Physiol Rev. 65, 211-237 (1985).</li>
<li>Mei, N., Lucchini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+data+and+ideas+on+digestive+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Auton+Nerv+Syst%22%5BJournal%5D)">Current data and ideas on digestive sensitivity.</a> J Auton Nerv Syst. 41, 15-18 (1992).</li>
<li>Su, X., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensitive+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+colon+of+the+rat+are+polymodal+in+character%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat are polymodal in character.</a> J Neurophysiol. 80, 2632-2644 (1998).</li>
<li>McMahon, S. B., Morrison, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+neurones+with+long+projections+activated+from+the+abdominal+viscera+of+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Spinal neurones with long projections activated from the abdominal viscera of the cat.</a> J Physiol. 322, 1-20 (1982).</li>
<li>Cervero, F., Sann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+evoked+responses+of+afferent+fibres+innervating+the+guinea-pig%27s+ureter%3A+an+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mechanically evoked responses of afferent fibres innervating the guinea-pig's ureter: an in vitro study.</a> J Physiol. 412, 245-266 (1989).</li>
<li>Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensitive+properties+of+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+urinary+bladder+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Mechanosensitive properties of pelvic nerve afferent fibers innervating the urinary bladder of the rat.</a> J Neurophysiol. 72, 2420-2430 (1994).</li>
<li>Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mechanosensitive+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+colon+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat.</a> J Neurophysiol. 71, 2046-2060 (1994).</li>
<li>Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+unmyelinated+afferent+fibres+by+mechanical+stimuli+and+inflammation+of+the+urinary+bladder+in+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Activation of unmyelinated afferent fibres by mechanical stimuli and inflammation of the urinary bladder in the cat.</a> J Physiol. 425, 545-562 (1990).</li>
<li>Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+type+of+unmyelinated+chemosensitive+nociceptor+in+the+acutely+inflamed+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+Actions%22%5BJournal%5D)">A novel type of unmyelinated chemosensitive nociceptor in the acutely inflamed urinary bladder.</a> Agents Actions. 25, 219-221 (1988).</li>
<li>Brierley, S. M., Jones, R. C. 3rd, Gebhart, G. F., Blackshaw, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Splanchnic+and+pelvic+mechanosensory+afferents+signal+different+qualities+of+colonic+stimuli+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Splanchnic and pelvic mechanosensory afferents signal different qualities of colonic stimuli in mice.</a> Gastroenterology. 127, 166-178 (2004).</li>
<li>Meyer, R. A., Davis, K. D., Cohen, R. H., Treede, R. D., Campbell, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+insensitive+afferents+%28MIAs%29+in+cutaneous+nerves+of+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanically insensitive afferents (MIAs) in cutaneous nerves of monkey.</a> Brain Res. 561, 252-261 (1991).</li>
<li>Handwerker, H. O., Kilo, S., Reeh, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unresponsive+afferent+nerve+fibres+in+the+sural+nerve+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Unresponsive afferent nerve fibres in the sural nerve of the rat.</a> J Physiol. 435, 229-242 (1991).</li>
<li>Feng, B., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+silent+afferents+in+the+pelvic+and+splanchnic+innervations+of+the+mouse+colorectum%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of silent afferents in the pelvic and splanchnic innervations of the mouse colorectum.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G170-G180 (2011).</li>
<li>Feng, B., La, J. H., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Irritable+bowel+syndrome%3A+methods%2C+mechanisms%2C+and+pathophysiology.+Neural+and+neuro-immune+mechanisms+of+visceral+hypersensitivity+in+irritable+bowel+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Irritable bowel syndrome: methods, mechanisms, and pathophysiology. Neural and neuro-immune mechanisms of visceral hypersensitivity in irritable bowel syndrome.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G1085-G1098 (2012).</li>
<li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+sensitization+of+mechanosensitive+and+-insensitive+afferents+in+mice+with+persistent+colorectal+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Long-term sensitization of mechanosensitive and -insensitive afferents in mice with persistent colorectal hypersensitivity.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G676-G683 (2012).</li>
<li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+colorectal+afferent+function+associated+with+TNBS-induced+visceral+hypersensitivity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered colorectal afferent function associated with TNBS-induced visceral hypersensitivity in mice.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G817-G824 (2012).</li>
<li>Feng, B., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+roles+of+stretch-sensitive+pelvic+nerve+afferents+innervating+mouse+distal+colon+and+rectum%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential roles of stretch-sensitive pelvic nerve afferents innervating mouse distal colon and rectum.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 298, G402-G409 (2010).</li>
<li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+guanylate+cyclase-C+attenuates+stretch+responses+and+sensitization+of+mouse+colorectal+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Activation of guanylate cyclase-C attenuates stretch responses and sensitization of mouse colorectal afferents.</a> J Neurosci. 33, 9831-9839 (2013).</li>
<li>Jolliffe, I. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJolliffe%2C+IT+%22Principal+component+analysis%22">Principal component analysis</a>. , 2nd, Springer. New York, NY. (2002).</li>
<li>La, J. H., Feng, B., Schwartz, E. S., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luminal+hypertonicity+and+acidity+modulate+colorectal+afferents+and+induce+persistent+visceral+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Luminal hypertonicity and acidity modulate colorectal afferents and induce persistent visceral hypersensitivity.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G802-G809 (2012).</li>
<li>Christianson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((plasticity+and+modulation+of+visceral+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">plasticity and modulation of visceral afferents.</a> Brain Research Reviews. 60, 171-186 (2009).</li>
<li>Kiyatkin, M. E., Feng, B., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+genetic+and+pharmacological+inhibition+of+TRPV1+and+P2X3+attenuates+colorectal+hypersensitivity+and+afferent+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Combined genetic and pharmacological inhibition of TRPV1 and P2X3 attenuates colorectal hypersensitivity and afferent sensitization.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 305, G638-G648 (2013).</li>
<li>Brumovsky, P. R., Feng, B., Xu, L., McCarthy, C. J., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystitis+increases+colorectal+afferent+sensitivity+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cystitis increases colorectal afferent sensitivity in the mouse.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 297, G1250-G1258 (2009).</li>
<li>Shinoda, M., Feng, B., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+and+central+P2X+receptor+contributions+to+colon+mechanosensitivity+and+hypersensitivity+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Peripheral and central P2X receptor contributions to colon mechanosensitivity and hypersensitivity in the mouse.</a> Gastroenterology. 137, 2096-2104 (2009).</li>
<li>Tanaka, T., Shinoda, M., Feng, B., Albers, K. M., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+visceral+hypersensitivity+by+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+family+receptor+%CE%B1-3+in+colorectal+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of visceral hypersensitivity by glial cell line-derived neurotrophic factor family receptor α-3 in colorectal afferents.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G418-G424 (2011).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Burada tarif edilen in vitro kolorektum-sinir hazırlık güzel visseral duyusal nöronlar diğer fonksiyonel olmayan yaklaşımlar (örn, hücresel, moleküler ve histolojik çalışmalar) tamamlar bireysel kolorektal aferentlerin, nöral kodlama işlevlerini (çalışmak için güçlü bir yaklaşım olduğu kanıtlanmıştır ) Detaylar için gözden 27. bkz. Nosisepsiyon ve uzun vadeli kolorektal aşırı duyarlılık katkıda Nöronal mekanizmalar ortaya konmuştur ve farmakolojik manipülasyonlar visseral ağrı hafifletmek ol...

Ağrı ve aşırı duyarlılık belirgin biyopatolojik neden veya doku hasarının olmaması durumunda, irritabl bağırsak sendromu (IBS) gibi mide-bağırsak işlev bozuklukları, mustarip hastalarda baskın şikayetleri bulunmaktadır. Örneğin, IBS hastaları (karın alan palpasyonla yani, hassasiyet) normal bağırsak fonksiyonu sırasında rektal balon şişkinlik ve artan duyarlılığı artan tepkiler de dahil olmak üzere aşırı duyarlılık, yanı sıra somatik sevk aşırı duyarlılık gösterirler 1. Arasında, daha iyi anlaşılması, kolorektal ileticileri hedefleme IBS hastalarında (guanilat siklaza Cı agonisti linaclotide 4-6 oral yoldan, örneğin, lokal anestezik 2,3 intra-rektal instilasyon) ağrı ve aşırı duyarlılık azaltmada etkili olduğu kanıtlanmıştır çünkü kolorektumun afferent innervasyon önemlidir. Kolorektal afferentlerin dahil viseral afferentleri,/ Kimyasal besleyici- ve termal modaliteleri (örneğin, 7-9) yanıt yeteneğine sahiptir. Ancak, mekanik uyaranlara (yani, mechanosensitive afferentleri) yanıt visseral afferentlerin olmuştur mekanik uyaranlara (örn, lümen distansiyonu, streç), genellikle rahatsızlık ve ağrı 10-16 olmak üzere bilinçli duyumlar, yol olanlardır çünkü çoğu iyice okudu. Buna ek olarak, organlar da yaygın, mekanik duyarsız afferentleri (MIAS) tarafından innerve sessiz ya da uyku nosiseptörleri 17 adlandırılır. Normal fizyolojik şartlar altında, MIAS mekanik uyarıya yanıt ya da çok yüksek bir tepki 18 eşikleri, ancak aktif hale gelir ve patofizyolojik koşullarda mechanosensitivity kazanmak ve aşırı duyarlılık katkıda bulunabilir yoktur. Burada tarif edilen in vitro hazırlık ve protokolü kullanarak, biz geliştirdik ve denize bir elektrik uyaran stratejisi istihdam<html> kolorektal 19 hem mechanosensitive ve MIA sonlar tarafsız kimlik izin alıcı sonlar için rch. kolorektal innervasyon lomber splanknik (SSN) ve pelvik sinir (PN) yollar türetilen ve beş mechanosensitive sınıflar (serozal, mukozal, kas, kas-mukozal, mezenterik) ve bir MIA sınıfına 20 olarak kategorize edilebilir kolorektal afferentler içerir. Bu in vitro hazırlanmasını kullanarak, kolorektal MIAS elde edilen mechanosensitivity LSN yolunun PN yolunda MIAS% 71 ve MIAS% 23 duyarlı enflamatuar bir çorba (IS), kendi açık alanları arasında kısa maruz kaldıktan sonra (duyarlı) bulundu 19. Ayrıca, uzun süreli davranış viseral aşırı duyarlılık bağlamında MIAS uzun süreli hassasiyet (en fazla 28 gün) belgelenmiştir (zimosan 21 ya da 2,4,6-trinitrobenzen sülfonik asit içinin tedavi uygulanan farelerde, örneğin, (TNBS) 22) . mechanosensitive afferentlerin, kas ve kas-mukozal afferentleri arasında jove_content &quot;&gt; (yani, streç duyarlı) ve zararlı kolorektal distansiyon 23,24 kodlamasını işine yaramak tonik kolorektumun çevresel streç kodlamak tek sınıflardır. Bir bilgisayar-kontrollü kullanma Zorlamalı tahrik düzeni, biz düzleştirilmiş kolorektal doku çevresel yönde bir standart, homojen ve yeniden üretilebilir bir rampalı streç uygulanan ve streç duyarlı ileticilerin, düşük eşik değeri ve yüksek eşik 23 kategorize. Buna ek olarak, germe sensitizasyon zaman sürecini intrakolonik zimosan 21 veya TNBS 22 tedavisinden sonra -duyarlı afferentleri visseral ağrı ve aşırı duyarlılık streç duyarlı kolorektal aferentlerin bir rolü olduğunu düşündürmektedir, davranışsal visseral aşırı duyarlılık başlangıcı, sebat ve / veya kurtarma karşılık gelir.

<table><tbody><tr><td>Leica MZ16 stereo mikroskop</td><td>Leica Microsystems Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica IC D kamera</td><td>Leica Microsystems Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amplifikatör</td><td>Dünyası Hassas aletler, Inc.</td><td>SYS-DAM80</td><td>Düşük gürültülü diferansiyel amplifikatör</td></tr><tr><td>İki bölmeli doku odası</td><td>Özel yapım</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Power1401</td><td>Cambridge Electronic Design Limited</td><td>Power1401</td><td>Veri toplama, analog sinyal girişi/çıkışı</td></tr><tr><td>Spike2 v5.02</td><td>Cambridge Electronic Design Limited</td><td></td><td>Power1401 Ses monitörü Natus ile çalışan yazılım paketi</td></tr><tr><td></td><td></td><td> </td><td></td>8</tr><tr><td>Kare nabız stimülatörü</td><td>Natus</td><td>S48</td><td>Elektrik uyaranları iletmek için</td></tr><tr><td>Fotoelektrik izolasyon ünitesi</td><td>Natus</td><td>PSIU6</td><td>Gürültüyü azaltmak için uyaran izolasyonu</td></tr><tr><td>Konsantrik bipolar mikroelektrot</td><td>FHC Inc.</td><td>CBFFG75</td><td>Elektriksel uyaranları iletmek için</td></tr><tr><td>Çift modlu kol sistemi</td><td>Aurora Scientific Inc.</td><td>Seri 300C</td><td>Mekanik uyaranları iletmek için</td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11252-00</td><td>İnce uçlu forseps</td></tr></tbody></table>

fare kolorektal afferent endings in vitro fonksiyonel karakterizasyonu içinde

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

Bu video ayrıntılı olarak, bir fare kolorektum sinir preparatı kullanılarak bir in vitro tek lif elektrofizyolojik kayıt protokolünü gösterir. yaklaşımı tarafsız kimlik ve bireysel kolorektal afferentlerin fonksiyonel karakterizasyonu sağlar. Bir veya birkaç afferent kaynaklanan yayılan aksiyon potansiyeli (AP) dışı kayıtları (yani, tek-lif) kolorektumda alıcı alanlar (RFS) alay sinir lifi fasiküller yapılır. kolorektum pelvis (PN) veya bel splanknik (LSN) sinir bağlı ve boylamasına açılmıştır ya çıkarılır. Doku düz tutturulmuş ve oksijene edilmiş Krebs çözeltisi ile perfüze, bir kayıt bölümü içinde yer almaktadır. Odak elektriksel stimülasyon işlevsel beş mechanosensi içine afferentler kategorize (sondalama mukozal okşayarak ve çevresel streç künt) ayrıca üç farklı mekanik uyaranlarla test edilmektedir kolorektal afferent sonlar, bulmak için kullanılırtive sınıflar. Bu mekanik uyaranlara hiçbiri yanıt sonlar mekanik duyarsız afferentleri (MIAS) olarak kategorize edilir. Kimyasallara RFS lokalize maruz mechanosensitive ve MIAS sensitizasyon (yani, gelişmiş yanıt, azaltılmış eşik, ve / veya mechanosensitivity edinimi) için değerlendirilebilir Hem (örneğin, iltihabi çorba (IS), kapsaisin, adenozin trifosfat (ATP)). Biz ekipman ve kolorektum-sinir kayıt hazırlık, ekli PN veya LSN, sinir liflerinin gelen kolorektum, tek-lif kayıt RFS belirlenmesi ile kolorektumun hasat ve RF kimyasalların lokalize uygulamasını açıklar. Buna ek olarak, hazırlık ve standart mekanik uyarım uygulama zorlukları da tartışılmıştır.

Kurulum, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Bu, bir silikon-kaplı banyo bölmesi ve bitişik bir mineral yağ ile doldurulmuş bölmesine bağlı sinir kolorektal barındıran bir ölçüye doku odasını kapsamaktadır. İki bölmeli odası CNC makinesi ile akrilik plastik bir katı blok işlenmiş edildi; Her iki bölmelerin alt sonradan kolorektal doku aşağı kolay pimini izin firma silikon ile kaplı. Alay sinir liflerinin hücre dışı AP yüksek ortak mod reddetme oranı (CMRR ~ 60 dB) ile düşük-gürültü, pille çalışan diferansiy...

Bu video, bir in vitro fare kolorektum sinir preparatı üzerinde tek lifli elektrofizyolojik kayıtların yürütülmesi için bir protokolü göstermektedir.

Fare Kolorektal Afferent Endings in vitro Fonksiyonel Karakterizasyonu içinde

This video demonstrates in detail an in vitro single-fiber electrophysiological recording protocol using a mouse colorectum-nerve preparation. The ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, fare rektumundaki ekstrinsik aferent sinir uçlarını in vitro ortamda fonksiyonel olarak karakterize etmektir. Bu işlem, kolorektal bölgenin ve buna bağlı pelvik veya lomber splanknik sinirle birlikte süreklilik arz edecek şekilde hasat edilip dokunun in vitro bir kayıt odasına yerleştirilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci bir adım olarak, bireysel sinir aksonlarından tek lif elektrofizyolojik kayıtlar alınabilmesi için pelvik veya lomber splanknik sinir gövdesi ince filamentlere ayrılır. Ardından, reseptif alanların tarafsız elektriksel stimülasyonu ile bireysel kolorektal sinir uçları belirlenir ve üç farklı mekanik stimülüse verilen yanıt profillerine göre fonksiyonel olarak sınıflandırılır.Ek olarak, sinir uçlarına uygulanan kimyasallara verilen yanıtlar, reseptif alanın bir pirinç boru parçasıyla izole edilmesi ve mevcut çözeltinin kimyasal veya kimyasal karışımı içeren bir çözeltiyle değiştirilmesi yoluyla test edilebilir. Sonuçlar, fare kolorektal bölgesinin beş farklı mekanosensitif uç sınıfı tarafından innerve edildiğini göstermektedir. Ayrıca, kolorektal uçların yaklaşık %25'i mekanik olarak duyarsızdır veya sessiz nosiseptörlerdir.Bu yöntem, bizim ve diğer araştırmacıların kolorektal bölgenin duyusal innervasyonunu incelemek için kullandığı bir yöntemdir. Birçok gastrointestinal bozukluk, duyusal innervasyonun hassaslaşması veya uyarılabiliteleğindeki bir değişiklikle ilişkili olduğu için bu araştırma yaklaşımını kullanmaya önem veriyoruz. Hassaslaşma mekanizmalarını anlama konusundaki ilgimiz, irritabl bağırsak sendromu gibi gastrointestinal bozukluklarla tipik olarak ilişkilendirilen ağrı ve rahatsızlık hissini modüle etmekte faydalı olabilecek terapötik stratejilerin geliştirilmesine yardımcı olma isteğimizle ilgilidir.Doku diseksiyonu ve sinir ayırma adımlarının uzmanlaşması oldukça zor olduğu için bu yöntemin görsel gösterimi kritiktir. Distal kolorektal bölgeyi uyaran sinirler, diseksiyon sırasında kolayca zarar görebilir.Bu nedenle, bu deneyi tekrarlamak isteyenler için dikkatli bir diseksiyon ve ardından gelen ayırma aşamaları oldukça kritiktir. Bir fareyi ötanize ettikten hemen sonra kanını boşaltın, torasik boşluğu açın, sağ atriyumu delin ve fare gövdesini yaklaşık yarım litre buz gibi soğuk Creb solüsyonuna daldırın. Daha sonra, kolon ve pelvik organlar dışındaki tüm viseral organları dikkatlice çıkarın.Ardından, farenin gövdesini torasik diyaframın hafifçe üzerinden T 12 seviyesinden kesin ve gövdenin kaudal yarısını, buz soğukluğunda bubble crebs çözeltisi içeren bir diseksiyon odasına aktarın. Stereoskop altında, mesaneyi ve üreme organlarını üretra ile birleştikleri noktalardan keserek çıkarın. Ayrıca, ortak iliak arterlere ayrılana kadar inen aortayı çıkarın.Şimdi, pelvik veya lomber splanknik boyun sinirlerini çevreleyen dokulardan serbest bırakın. Sinirleri, iliak kanadın dışından vertebral kolona giriş noktalarına kadar takip edin. Gösterildiği üzere, pelvik sinirler L6 ve S1 vertebral kolonuna, lomber splanknik sinirler ise T13 ve L1'e girer.İşte sol ve sağ pelvik sinirlerin diseksiyonu. Ardından, pubik simfizi kesin ve sağ ile sol asetabular eklemleri kesin. Daha sonra iliak kemiği çıkarın. İliak kemik çıkarıldıktan sonra, bağlı siniriyle birlikte distal kolorektumu serbestleştirerek diseke edin.Çevredeki kas ve bağ dokusundan ayrılan sinir. Sinir, mekanik hasara karşı hassastır. Çevresindeki dokudan serbest bırakıldığından, siniri çekmekten veya sıkıştırmaktan kaçınmak için özel bir dikkat gösterilmelidir.Ardından, ilişkili siniriyle birlikte kolorektal segmenti doku haznesine aktarın. Kolorektal segmenti anti-mezenterik sınır boyunca boylamasına açın ve mukozal yüzeyi yukarı gelecek şekilde konumlandırın. Sonrasında, siniri bir fare deliği ve kapı aracılığıyla banyo haznesine bağlı olan kayıt bölmesine doğru uzatın.Sinir gövdesini küçük bir cam aynanın üzerine yerleştirin. Ayna hidrofiliktir ve sinir ona yapışacaktır. Şimdi, kayıt bölmesinin yanına, kolorektal bölgenin mezenterik kenarını iğneyle sabitleyin.Şimdi, kurulumu tamamlamak için bir banyo bölmesini sıcak oksijenle doyurulmuş Creb solüsyonuyla süper-perfüze edin ve kayıt bölmesini mineral yağ ile doldurun. Kolorektumun anti-mezenterik uzunluğunu, stereo mikroskop altında yüksek büyütmede, bir kuvvet aktüatörüne bağlı olan kanca dizisine sabitleyin. İnce pensler kullanarak, izole edilmiş pelvik veya lomber splanknik sinirden sinir kılıfını dikkatlice soyun.Sinir gövdesini, her biri yaklaşık 100 mikron kalınlığında olan beş ila sekiz sinir demetine ayırın. Şimdi referans elektrodu doku haznesindeki Krebs çözeltisiyle temas ettirin. Ardından, kolorektal ENS'den aksiyon potansiyellerini uyarmak için münferit sinir demetlerini sırayla kayıt elektrodunun üzerine yerleştirin.Yumuşak bir boya fırçası kullanarak kolorektal yüzeyi nazikçe fırçalayın. Böylece kolonun sinirleri ileten sinir demetini veya demetlerini belirleyin. Şimdi, bir çift 30 gauge iğne ucu kullanarak, sinir demetini 10 mikron kalınlığında filamentlere ayırın ve filamentlerden birini kayıt elektrodunun üzerine yerleştirin.Bu adım, yüksek düzeyde el-göz koordinasyonu ve el becerisi gerektirir. Ardından, afferent sinir uçlarını elektriksel olarak uyarmak için yuvarlak uçlu konsantrik elektrodu mukoza yüzeyine dik olarak konumlandırın ve eşik üstü bir yoğunlukta stimülasyon uygulayın. Bu işlem, iki milimetrelik bir yarıçap boyunca akım yayılımı sağlar.Reseptif uçları bulmak için, elektrodu düzleştirilmiş kolon rektumunun uzunluğu ve genişliği boyunca sistematik olarak 1,5 milimetrelik adımlarla hareket ettirin. Bir afferent uç uyarıldığında, yanıt vermek için en düşük uyarı şiddetini gerektiren reseptif alanı tam olarak belirlemek için elektrot konumunu ve uyarı şiddetini ayarlayın. Eğer uyarı eşiği üç miliamperden fazlaysa, o sinir ucunu eleyin ve başka bir sinir filamentini incelemeye geçin.Şimdi, reseptif alandaki uyarıcı elektrot ile kayıt bölgesi arasındaki mesafeden ve stimulus artefaktı ile aksiyon potansiyeli başlangıcı arasındaki iletim gecikmesinden faydalanarak iletim hızını hesaplayın. Elektriksel stimülasyon ile bir reseptif alan belirledikten sonra, üç mekanik stimülasyon uygulayın. İlk olarak, naylon monofilaman gibi kalibre edilmiş bir von fray ucunu, düzleştirilmiş kolorektal dokudaki reseptif alana dik olarak bastırarak bir yoklama stimülasyonu uygulayın.0,4 gram ve bir gram kuvvet üreten monofilamanlar kullanın. İkinci olarak, reseptif alanda küçük bir yüzey makaslama gerilmesi oluşturmak için ince bir naylon filament şeridi ile kolorektal mukozayı nazikçe okşayarak bir okşama uyarımı uygulayın. Üçüncü olarak, çevresel germeyi bilgisayar kontrollü bir kuvvet aktüatörü kullanarak gerçekleştirin.Kolorektumun antimesenterik kenarı boyunca sirkümferansiyel bir yönde artan bir kuvvet uygulanmasını sağlayın. Şimdi, üç testin sonuçlarına dayanarak ENS'yi serozal, mukozal, muskular, muskular mukozal veya MIAA (mekanik olarak duyarsız afferent) olarak sınıflandırın.Kimyasal duyarlılığı test etmek için, önceki bölümde olduğu gibi kademeli çevresel, germe veya dik mekanik sondaj yoluyla mekanik bir uyarana karşı bazal yanıtı kaydederek başlayın. İlk olarak, bir pirinç veya paslanmaz çelik tüp parçasının alt kenarını petrol jeli ile kaplayın ve bunu kolorektal bölgedeki reseptif alanın üzerine yerleştirin. Şimdi tüpün içindeki Krebs çözeltisini aspire edin ve çözeltiyi 170 µL test çözeltisi ile değiştirin.Afferentteki yanıtlar izlenirken tüpü üç ila beş dakika boyunca konumunda bırakın. Tüpü dört ila altı dakika içinde çıkardıktan hemen sonra, afferent yanıtını başlangıç yanıtındakiyle aynı mekanik stimülasyon ile test edin. 15 dakika veya daha fazla süre geçtikten sonra, reaktiflerin yıkanıp temizlendiği kabul edilebilir.Ardından mekanik stimülasyon tekrar uygulanır. Baz hat karıncalarıyla karşılaştırmak için, reseptif bir alan bulmak amacıyla disekt edilmiş bir sinir stimüle edildi. Reseptif alan, aksiyon potansiyelinin iletim gecikmesi kullanılarak bir aksiyon potansiyeli yanıtı ile tanımlandı.Hesaplanan iletim hızı saniyede 0,43 metre olup, bu değer miyelinize olmayan bir C lifinin aralığıyla tam olarak örtüşmektedir. Reseptif alan belirlendikten sonra, elde tutulan von fray benzeri monofilamanlarla dik olarak uyarıldı ve ayrıca elde tutulan ince bir naylon filamanla nazikçe okşandı. Prob takibine verilen AFR yanıtları, kolorektal bölgenin aynı noktasına hassas zamanlanmış ve tekrarlanabilir bir dizi mekanik kuvvet uygulayan bilgisayar kontrollü bir kuvvet aktüatörü ile de değerlendirildi.Benzer şekilde, kolorektuma aynı aktüatör gücüyle çevresel germe uygulanmıştır. Yanıtlar; yoklama, okşama ve germe yanıtlarına göre ayırt edilebilir ve germe duyarlı bir afferentten gelen yanıtlar, beş dakika ara ile uygulanan üç ardışık çevresel germe ile tetiklenmiştir. Spike sayıları düzenli olarak sabitlenmiş ve yüksek tekrarlanabilirliği, yanıt büyüklüğünü ve yanıt eşiğini ortaya koyan uyaran yanıt fonksiyonları olarak görüntülenmiştir.Sırasıyla şu kimyasallar uygulandı. Mekanik olarak duyarsız bir aferentten inflamatuar çorba uygulamasının ardından asidik hipertonik solüsyon uygulamasıyla ens'nin doğrudan aktivasyonu gerçekleşti. Sinir ucunda aktivasyon meydana gelmedi, ancak meno duyarlılığının kazanıldığı belirginleşti.Bir gerilmeye duyarlı, meno duyarlı afferent, inflamatuar bir karışımın uygulanmasının ardından reseptif alanın mekanik gerilmesine karşı da duyarlı hale getirilmiştir. Uzmanlaşıldığında, doku diseksiyonunu tamamlamak ve tek lif kaydına ulaşmak genellikle üç ila dört saat sürer. Tipik bir deney, baştan sona tam bir gün alır. Bu videoyu izledikten sonra, kolonrektal bölgeyi sinirleri bağlı halde cerrahi olarak nasıl çıkaracağınızı ve hasat edeceğinizi anlamış olmalısınız.Ardından, tarafsız bir elektriksel arama stratejisi kullanarak, kolonun sinir uçlarını uyaran pelvik sinir veya lomber splanknik sinirdeki tekil Ahern liflerinden kayıt alabilmelisiniz. Daha sonra, kolon rektumundaki reseptif uçları tanımlayabilmeli ve bu uçlara doğrudan kimyasallar uygulayarak hem mekanosensitiviteyi hem de kemosensitiviteyi test edebilmelisiniz. Bu hazırlık, kolorektal bölgedeki temel fizyolojik soruların yanı sıra patofizyolojik mekanizmaları da incelemenize olanak tanıyan güçlü bir modeldir.

in-vitro-functional-characterization-mouse-colorectal-afferent

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, fare proksimal kolon halkası veya pcLoop segmenti oluşturmak için cerrahi bir prosedürü ve ardından bağırsak epitel geçirgenliğini incelemek için segmente intraluminal floresan belirteçleri enjeksiyonunu açıklıyoruz.

Fare Proksimal Kolon Döngü Modelinin Oluşturulması: İntraluminal Enjeksiyonu Takiben Serumda Floresan İşaretleyicilerin Saptanmasıyla Proksimal Kolon Halkası Oluşturmak ve Bağırsak Geçirgenliğini Ölçmek İçin Cerrahi Bir Prosedür

Bu video, her iki uçta kanüle edilmiş ve intraluminal basıncı artırmak için salin ile infüze edilmiş bir ex-vivo sıçan kolonundaki kolonik afferent sinirlerin aktivitesini kaydetmek için bir yöntemi göstermektedir. Basınç arttıkça, sinir sinyali yükselir ve uyarıldığını gösterir.

Bir Ex Vivo Sıçan Kolonunda Kolon Afferent Sinirlerinden Elektrofizyolojik Kayıt

Bu video, doku basıncının ve hareket değişikliklerinin afferent sinir aktivitesi üzerindeki etkilerini incelemek için diseke edilmiş bir fare jejunal segmentindeki mezenterik afferent sinirlerden gelen elektrik sinyallerinin kaydedilmesi sürecini göstermektedir.

Bir Ex Vivo Fare Jejunum Segmentinde Mezenterik Afferent Sinir Aktivitesinin Kaydedilmesi

Kaynak: Fried, D. E., Gulbransen, B. D. In Situ Ca2+ Enterik sinir sisteminin görüntülenmesi. J. Vis. Uzm.  (2015)Bu video kalsiyumu göstermektedir fare Kolonik Myenterik pleksus preparatlarında enterik nöronların ve glia'nın aktivitesini görselleştirmek ve analiz etmek için görüntüleme.

Bir Fare Kolonik Myenterik Pleksusunda Enterik Nöron ve Glia Aktivitelerinin Kalsiyum Görüntülemesi

Bu enterik sinir sisteminin nöronal ve glial bileşenlerin doğrudan çalışma için bir hücre kültür protokolü göstermektedir. Lamelleri bir nöron / glia karışık kültür, immünohistokimyasal elektrofizyoloji, bireysel nöron ve glia fonksiyonu incelemek için yeteneği sağlayan yetişkin fare myenterik pleksustan...

Bir<em&gt; In-vitro</emYetişkin Mouse myenterik Pleksus izole edilen enterik Nöronlar ve Glia bir&gt; hazırlanması

Son birkaç yılda, yeni nesil endoskoplar kemirgen kolit ve kolorektal tümörlerin değerlendirilmesinde önemli bir tanı araştırma yardımcıları olarak ortaya çıkmıştır. Bu farelerde enflamasyonun ve kolorektal tümörleri endoskopik değerlendirme, hem de kolit ve kolorektal tümörleri endoskopik şiddetini belge ondalık tanımlayıcıları kullanan yeni bir skorlama sistemi için bu tarifnamede detaylı bir protokol mevcut.

Bir Geçerliliği Endoskopik Puanlama Sisteminin Kullanılması Kolit ve Kolorektal Tümörlerin Şiddetini Değerlendirmek için Farelerde esnek Kolonoskopi

Farelerde kolon patolojilerinin tedavisi için terapötiklerin etkinliğinin rijit bir endoskop kullanılarak uzunlamasına izlenmesi için yöntemleri açıklıyoruz. Bu protokol, canlı farelerde tek bir tümörün terapötik yanıtının karakterizasyonu ve ayrıca potansiyel hastalık nüksünü izlemek için kolayca kullanılabilir.

Canlı Fareler Seri endoskopik Görüntüleme kullanma Bağırsak Patolojilerde Yeni Therapeutics Etkinliğinin Non-invaziv Değerlendirme

Bu makale, yetişkin farelerde kolonik motilitenin nöral regülasyonundaki değişiklikleri tanımlamak için bir video görüntüleme tekniği ve yüksek çözünürlüklü uzay-zamansal haritalamayı açıklamaktadır. Gastrointestinal (GI) fonksiyon üzerindeki ince etkiler, GI hastalığı hakkındaki anlayışımızı ilerletmek için izole doku preparatlarında bu yaklaşım kullanılarak tespit edilebilir.

Video Görüntüleme ve Spatiotemporal Haritalar Fare Gastrointestinal Motilite Analiz

Mezenterik afferent sinirler, normal homeostaz ve patofizyoloji ile ilgili bilgileri gastrointestinal sistemden beyne doğru iletir. Gastrointestinal afferent sinir aktivitesi, bağlı afferent sinirlere sahip izole bağırsak segmentlerinin bir organ banyosuna monte edilmesi, sinirin izole edilmesi ve bazal ve uyarılmış aktivitenin değerlendirilmesi ile değerlendirilebilir.

Fare jejunal ve Kolon Segmentlerde Mezenterik Afferent Sinir Faaliyet Vitro kaydedilmesi

Anormal duyusal fonksiyonu altında yatan visseral ağrı ve diğer semptomlar işlevsel ve enflamatuar barsak hastalıkları. Bir ex vivo sıçan colorectum hazırlık kolon afferent sinirlerin Elektrofizyolojik kayıt için bir protokol burada sunulmaktadır.

Vitro Sıçanlarda kolon Afferent liflerinin Elektrofizyolojik özellikleri karakterizasyonu

Enterochromaffin (EC) hücreleri küçük bir alt gastrointestinal epitel hücrelerinin oluşturmaktadır. EC hücreleri elektriksel olarak heyecanlı ve kültür ve EC hücreleri tanımlayan zorlukları fizyolojik çalışmalar sınırlı henüz serotonin, bırakın. Burada sunulan yöntem bir birincil kültür model tek EC hücrelerin incelenmesi için mükellef tarafından Elektrofizyoloji kurar.

Tüm cep telefonu Elektrofizyoloji birincil kültürlü fare Enterochromaffin hücre

Keşfedin fare kolorektal aferent sinir uçlarının in vitro elektrofizyolojik kayıtlarla fonksiyonel karakterizasyonunu. Bu yöntem mekanosensitivite ve kimyasal yanıtları analiz ederek ağrı mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

Fare Kolorektal Afferent Endings in vitro Fonksiyonel Karakterizasyonu içinde

Daha fazla video keşfet