Name: Kelvin Probe Kuvvet Mikroskobu kullanılarak Bakterilerin Yüzey Potansiyel Ölçümü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: Keşfedin bakteri yüzey potansiyel ölçümü için Kelvin Probe Kuvvet Mikroskobu kullanımını. Bu yöntem, mikroorganizmaların farklı substratlara yapışma kapasitesini nanometre ölçeğinde incelemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bu çalışmayı finanse ettikleri için Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi'ne, Ontario Araştırma ve Yenilik Bakanlığı'na ve Kanada Yenilik Vakfı'na içtenlikle teşekkür eder.

Züccaciye ve Kültürler 1. Hazırlık <ol><li> Bu deneyde geçmeden önce,% 5 koyun kanlı agar (SBA) MRSA yetiştirmek için plakaları hazırlamak. 37 ° C&#39;de 24 saat süre ile SBA inkübe edin. Bu süreden sonra, tek bir iyi izole edilmiş koloni sıvı ortam içine eden aşılamalar için kullanılmak üzere mevcut olması gerekmektedir. 2 ay - Mağaza 1 4 ° C&#39;de tek koloniler ile SBA plakaları çizgili. Not: koyun kanı agar plakaları 20 arasında ihtiva eden önceden hazırlanmış paketlerde gelir - üretici göre 25 plakaları ve tipik olarak hac koyun kanı% 5 w / ilavesi ile bir triptik soya agar baz oluşur. </li><li> % 1 glukoz ve% 0.1 NaCI ile takviye edilmiş triptik soya suyu (TSB) içinde, 500 ml olun. Bundan sonra, toplamak ve 2 cam test tüpleri temizleyin. Otoklavlanabilir kapaklar Test tüpleri için kullanılamaz iseniz, bir kap olarak alüminyum folyo kullanın. Otoklav TSB ve 1 ml pipet uçları bir kutu ile birlikte deney tüpleri. </li><li> Bir biyogüvenlik kabini altında veya bir Buns yakınındakibrülör tr, pipet önce 5 ml otoklava deney tüpleri içine TSB otoklava. Yeterli zamanı sağlamak için dikkatli olun TSB izin verilen ve test tüpleri oda sıcaklığında soğumaya olmuştur. Önceden çizgili% 5 SBA plaka, 6 ml TSB suyu içine tek bir koloni aşılamak. Bir MRSA içerecektir ve ikinci bir test tüpü sterilizasyonu sağlamak için bir negatif kontrol olarak kullanılır. </li><li> İnoküle edilmiş TSB test tüpleri alın ve 37 ° C&#39;de 24 saat süre ile 200 rpm&#39;de bir karşılıklı inkübatör içine yerleştirilir. Herhangi bir büyüme kontrol test tüpü içinde meydana gelmiş olmalıdır Bu süre sonra, mikrobiyal büyüme MRSA test tüpünde açık olmalıdır. </li><li> Taze TSB 6 ml 24 saat kültür ve pipetle 1 ml alın. 200 rpm&#39;de 6 saat boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> Pipet 1.5 ml mikrofüj tüpüne 6 saat alt kültürün 1 ml olmuştur. 850 x g&#39;de 3 dakika boyunca santrifüj. Süpernatantı ve deiyonize H2O, 1 ml pelet yeniden askıya Santrifüj, tekrar, ve tekrar askıya. </li></ol><ol><li> Paslanmaz çelik ve altın AFM örnek diskleri (20 mm ve 10 mm çapları) alın ve deiyonize H 2 O 5 ml her tarafını temizlemek Forseps ile dominant elin örnek diskleri tutun ve örnek diskin her iki tarafında 5 ml pipetle için subdominant elinizi kullanın. 1 dakika süreyle sese tabi tutularak ve ardından deiyonize H2O 20 ml ihtiva eden bir çanak içinde her iki tarafında yer örnek diskleri yıkandıktan sonra. </li><li> Sonication kullanım forseps sonra beher örnek diskleri kaldırmak için. Bir kağıt havlu üzerine açık bir Petri plaka kenarına karşı 60 ° açıyla eğilmek böylece diskleri yerleştirin. Kurutma diskleri kapsayacak Petri plaka kapağını kullanın. Diskler devam etmeden önce tamamen kurumasını bekleyin. 8 saat - Kurutma süresi 4 arasında değişebilir. </li><li> Kuruduktan sonra, bir Petri plaka içine örnek diskleri yerleştirmek için forseps kullanabilir. <ol><li> İsteğe bağlı olarak, (herhangi bir malzeme ile örnek disklerin yüzeyleri işlevselleştirilmesiörneğin, kolajen, hiyalüronan, gümüş nano-parçacıklar, vs.). </li><li> Bu deney için, kaplamak için poli-L-lisin alt-tabaka yüzeyi kullanır. Için poli-L-lisin işlevselleştirme, pipet 200 - örnek disklere (lH 2 O),% 0.1 poli-L-lisin, 400 ul, ve bir Petri tabağına ve oda sıcaklığında 1 saat süreyle inkübe edin. </li><li> 1 saat sonra, numune diski tutun ve deiyonize H2O 1 ml yıkama için forseps kullanabilir Adım 2.2 açıklandığı gibi kağıt havlu üzerinde kurumaya bırakın. </li></ol></li><li> 2x yıkanmış yeniden askıya hücreleri alın ve 200 plaka - bir biyogüvenlik kabini içinde örnek disklere 400 ul. Örnek diskler ve poli-L-lizin ile kaplanmış ise, oda sıcaklığında, 0.5 saat süre ile inkübe edilir. </li><li> Örnek diskler üzerinde hücrelerin inkübe edildikten sonra, deiyonize H2O, 1 ml ile hafifçe örnek diskleri yıkama Diskler görüntüleme önce gecede kurumasını bekleyin. </li></ol> 3. KPFM Görüntüleme NOT: Bu deney için,bir Agilent 5500 serisi ILM-AFM kullanın. <ol><li> AFM başlatmak için, AFM HEB ve MAC III kontrolörü ile birlikte bilgisayar ünitesi açın. Açık AFM görüntüleme yazılımı (örneğin, Agilent&#39;in PicoView). Başlangıçta ACAFM veya hangisi doğru tanımlama aralıklı temas modunda görüntüleme için AFM üzerinde seçtiğinizden emin olun. </li><li> Dominant elin AFM forseps kullanarak ve subdominant el açık yaylı klips tutucu tutarak, baş-parça içine KPFM konsol yerleştirin. Taşıma ve (en az 5500 ILM-AFM üzerine) Bu birim olarak AFM AFM baş parça aktarılması X, Y ve Z tarama directionalities kontrol kırılgan piezo kristal birimi içerir dikkatli olun. NOT: Bu durumda kullanılan KPFM konsollar Mikromasch iletken DPE 2.7 N / m 80 kHz ve yay sabitleri ortalama rezonans frekansları ile (düşük-gürültü) konsollar vardı. Bu rezonans frekansları ve yay sabitleri ile konsollar nedeniyle kullanım kolaylığı için seçildi.Daha büyük bir yay sabitleri ve daha yüksek rezonant frekanslarına sahip konsol aynı zamanda görüntüleme için kullanılabilir. </li><li> Dikkatle AFM içine baş parça yüklemek ve (iki tel takılı olması gerekir bu durumda: lazer ışığı ve sahne asansör motorunun) uygun kabloları bağlayın. </li><li> Konsolun ucuna lazer hizalama. Bazı birimler kolay uyum sağlayan bir kamera işlevselliği içerir. Kamera işlevi AFM mevcut değilse sonraki açıklandığı gibi, konsol ucuna align: <ol><li> Konsol çip üstünlük lazer taşımak için ön-arka düğmesini saat yönünde çevirin. Lazer çip ulaştığında bloke edilecek ve artık görünür olacaktır. Sadece düğmenin bir kaç kez çevirin. </li><li> Lazer nokta tekrar gelene kadar saat yönünün tersine ön-arka düğmesini çevirin. Lazer çipin kenarında şimdi. </li><li> Konsol üzerindeki lazer konumlandırmak için sol-sağ düğmeyi çevirin. Lazer konsol üzerinde geçerken kaybolur ve i yeniden görünürn hızlı arkaya. lazer nokta fotodiyot ünitesi daha sonra oturup buzlu cam kapak görünür olmalıdır. </li><li> Buzlu cam spot kaybolana kadar uca doğru konsol aşağı noktaya taşımak için saat yönünün tersine önden arkaya düğmesini çevirin. </li><li> Sadece konsol ucunda oturur, böylece lazer konumlandırmak için sadece biraz ön-arka düğmesini saat yönünde çevirin. lazer nokta buzlu cam üzerinde yeniden görünür. NOT: Bu dalış kartı konsollar için lazer konumlandırma yöntemidir. Üçgen konsol için, hizalama işlemi biraz farklıdır. </li></ol></li><li> Lazer hizalanmış sonra, AFM için örnek takarken konsol ve örnek arasında yeterli boşluk sağlamak için 10 saniye için &quot;açık&quot; konumuna sahne asansör motoru tutun. </li><li> KPFM örnek sahnede örnek yerleştirin. Bir bakır tel kullanılarak örnek topraklayın. Örnek aşamasına AFM uygun teller bağlayın. S bağlayınAFM için tage. Çoğu durumda sahne mıknatıslar kullanılarak yerinde tutulur. </li><li> AFM yazılımında, melodi konsol ve daha sonra örnek konsol ucu yaklaşımını başlar. Zaman yerleşme fazla 10 msn olarak ayarlanmış olduğundan emin olun, ve bu yaklaşım hızları ucu hasarı önlemek için 2.0 mm / sn aşmamaktadır. </li><li> Konsol ucu numune yüzeyinde sonra, bir görüntüleme penceresi boyutu ve ideal görüntüleme alanını seçin. Topografik görüntüleme optimize böylece konsol ayar noktası ile birlikte I ve P kazançlar optimize. <ol><li> Topografik görüntüleme optimize sonra, KPFM modülü açın (FM ya da AM modu, burada, FM modunu kullanın). Bu KPFM görüntüleme 5 mm x 5 mm görüntüleme penceresinin dışında çok zor olduğu unutulmamalıdır. (- 0.05 hatları / sn 0.02) Ayrıca, optimum KPFM görüntüleme için, yavaş tarama hızları ile 512 x 512 çözünürlüğü kullanın. </li></ol></li><li> 10% - FM-KPFM ayarları için (ayarları ACAFM değil), 5 ila sürücü yüzde ayarlayın. Konsol fr ayarlayın2 kHz bant genişliği ile 5 kHz - 1 arası equency. 0.3% FM-KPFM ayarları için I ve P kazançlar ayarlayın. <ol><li> Sinyal bant genişliği ve I ve örnek yüzeyleri arasında P kazançlar Vary. SP görüntüleme optimize etmek için, daha fazla sinyal bant genişliği ayarlamak ve I ve P kazançlar optimum görüntü elde etmek. 0.35% - I ve P kazanımların tavsiye aralığı 0.22 vardır. </li></ol></li><li> Süreç ve SP verilerini toplamak için post-görüntü işleme yazılımı kullanarak KPFM görüntüleri toplanan analiz eder. </li></ol>

<ol><li>Seth, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+modeling+of+biofilm-infected+wounds%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Research%22%5BJournal%5D)">In vivo modeling of biofilm-infected wounds: a review.</a> J. Surg. Research. 178 (1), 330-338 (2012).</li>
<li>Wolcott, R. D., Ehrlich, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms+and+chronic+infections%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Biofilms and chronic infections.</a> JAMA. 299 (22), 2682-2684 (2008).</li>
<li>Hoiby, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+impact+of+bacterial+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Micro.+Infect%22%5BJournal%5D)">The clinical impact of bacterial biofilms.</a> Micro. Infect. 3 (2), 55-65 (2011).</li>
<li>Zhang, W., Hughes, J., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impacts+of+hematite+nanoparticle+exposure+on+biomechanical%2C+adhesive%2C+and+surface+electrical+properties+of+E.+coli+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Impacts of hematite nanoparticle exposure on biomechanical, adhesive, and surface electrical properties of E. coli cells.</a> Appl. Environ. Microbiol. 78 (11), 3905-3915 (2012).</li>
<li>Lorite, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+physicochemical+properties+at+the+micro+and+nano+length+scales%3A+role+on+bacterial+adhesion+and+Xylella+fastidiosa+biofilm+development%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Surface physicochemical properties at the micro and nano length scales: role on bacterial adhesion and Xylella fastidiosa biofilm development.</a> PLoS One. 8 (9), (2013).</li>
<li>Lee, I., Chung, E., Kweon, H., Yiacoumi, S., Tsouris, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+surface+potential+microscopy+of+spore+adhesion+on+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Coll.+Surf.+Biointer%22%5BJournal%5D)">Scanning surface potential microscopy of spore adhesion on surfaces.</a> Coll. Surf. Biointer. 92, 271-276 (2012).</li>
<li>Tsai, C., Hung, H., Liu, C., Chen, Y., Pan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+plasma+membrane+surface+potential+of+PC12+cells+as+measured+by+Kelvin+probe+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Changes in plasma membrane surface potential of PC12 cells as measured by Kelvin probe force microscopy.</a> PLoS One. 7 (4), (2012).</li>
<li>Jucker, B. A., Harms, H., Zehnder, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesion+of+the+positively+charged+bacterium+Strenotrophomonas+%28Xanthomonas%29+maltophilia+70401+to+glass+and+Teflon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">Adhesion of the positively charged bacterium Strenotrophomonas (Xanthomonas) maltophilia 70401 to glass and Teflon.</a> J. Bacteriology. 178 (18), 5472-5479 (1996).</li>
<li>Soon, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+surface+charge+of+colistin-susceptible+and+-resistant+Acinetobacter+baumannii+cells+measured+with+zeta+potential+as+a+function+of+growth+phase+and+colistin+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anti.+Chemo%22%5BJournal%5D)">Different surface charge of colistin-susceptible and -resistant Acinetobacter baumannii cells measured with zeta potential as a function of growth phase and colistin treatment.</a> J. Anti. Chemo. 66, 126-133 (2011).</li>
<li>Tariq, M., Bruijs, C., Kok, J., Krom, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Link+between+culture+zeta+potential+homogeneity+and+Ebp+in+Enterococcus+faecalis%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Link between culture zeta potential homogeneity and Ebp in Enterococcus faecalis.</a> Appl. Environ. Microbiol. 78 (7), 2282-2288 (2012).</li>
<li>Ayala-Torres, C., Hernandez, N., Galeano, A., Novoa-Aponte, L., Soto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zeta+potential+as+a+measure+of+the+surface+charge+of+mycobacterial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Zeta potential as a measure of the surface charge of mycobacterial cells.</a> Ann Microbiol. , (2013).</li>
<li>Allison, D. P., Mortensen, N. P., Sullivan, C. J., Doktycz, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atomic+force+microscopy+of+biological+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomed.+Nanobiotech%22%5BJournal%5D)">Atomic force microscopy of biological samples.</a> Nanomed. Nanobiotech. 2 (6), 613-634 (2010).</li>
<li>Lindsay, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+tunneling+microscopy+and+atomic+force+microscopy+studies+of+biomaterials+at+a+liquid-solid+interface%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vac.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Scanning tunneling microscopy and atomic force microscopy studies of biomaterials at a liquid-solid interface.</a> J. Vac. Sci. Technol. 11 (4), 808-815 (1993).</li>
<li>Moores, B., Hane, F., Eng, L., Leonenko, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kelvin+probe+force+microscopy+in+application+to+biomolecular+films%3A+frequency+modulation%2C+amplitude+modulation%2C+and+lift+mode%5BTitle%5D)+AND+%22Ultramicroscopy%22%5BJournal%5D)">Kelvin probe force microscopy in application to biomolecular films: frequency modulation, amplitude modulation, and lift mode.</a> Ultramicroscopy. 110 (6), 708-711 (2010).</li>
<li>Melitz, W., Shen, J., Kummel, A. C., Kelvin Lee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((probe+force+microscopy+and+its+application%5BTitle%5D)+AND+%22Surf.+Sci.+Reports%22%5BJournal%5D)">probe force microscopy and its application.</a> Surf. Sci. Reports. 66 (1), 1-27 (2011).</li>
<li>Loppacher, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FM+demodulated+Kelvin+probe+force+microscopy+for+surface+photovoltage+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">FM demodulated Kelvin probe force microscopy for surface photovoltage tracking.</a> Nanotechnology. 16 (3), (2005).</li>
<li>Domanski, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kelvin+probe+force+microscopy+in+nonpolar+liquids%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Kelvin probe force microscopy in nonpolar liquids.</a> Langmuir. 28 (39), 13892-13899 (2012).</li>
<li>Collins, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+harmonic+Kelvin+probe+force+microscopy+at+the+graphene-liquid+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Phys.+Letters%22%5BJournal%5D)">Dual harmonic Kelvin probe force microscopy at the graphene-liquid interface.</a> Appl. Phys. Letters. 104 (13), 133103(2014).</li>
<li>Kobayashi, N., Asakawa, H., Fukuma, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+potential+measurements+in+liquid+by+frequency+modulation+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Sci.+Instru%22%5BJournal%5D)">Nanoscale potential measurements in liquid by frequency modulation atomic force microscopy.</a> Rev. Sci. Instru. 81, (2010).</li>
<li>Collins, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+charge+screening+dynamics+and+electrochemical+processes+at+the+solid-liquid+interface+with+electrochemical+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Comm%22%5BJournal%5D)">Probing charge screening dynamics and electrochemical processes at the solid-liquid interface with electrochemical force microscopy.</a> Nature Comm. 5, 2871(2014).</li>
<li>Pastar, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+methicillin+resistant+Staphylococcus+aureus+USA300+and+Pseudomonas+aeruginosa+in+polymicrobial+wound+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Interactions of methicillin resistant Staphylococcus aureus USA300 and Pseudomonas aeruginosa in polymicrobial wound infection.</a> PLoS One. 8 (2), (2013).</li>
<li>Brien, D. J., Gould, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+vancomycin+have+a+future+in+the+treatment+of+skin+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Cur.+Opin.+Infec.+Diseas%22%5BJournal%5D)">Does vancomycin have a future in the treatment of skin infections.</a> Cur. Opin. Infec. Diseas. 27 (2), 146-154 (2014).</li>
<li>Wang, P., Kinraide, T. B., Zhou, D., Kopittke, P. M., Peijnenburg, W. J. G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+membrane+surface+potential%3A+dual+effects+upon+ion+uptake+and%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Plasma membrane surface potential: dual effects upon ion uptake and.</a> 155 (2), 808-820 (2011).</li>
<li>Gross, M., Cramton, S. E., Gotz, F., Peschel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+role+of+teichoic+acid+net+charge+in+Staphylococcus+aureus+colonization+of+artificial+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Key role of teichoic acid net charge in Staphylococcus aureus colonization of artificial surfaces.</a> Infect. Immun. 69 (5), 3423-3426 (2001).</li>
<li>Sinensky, A. M., Belcher, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+and+high-resolution+protein%2FDNA+nanoarray+analysis+using+Kelvin+probe+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Nanotechnol%22%5BJournal%5D)">Label-free and high-resolution protein/DNA nanoarray analysis using Kelvin probe force microscopy.</a> Nat. Nanotechnol. 2, 653-659 (2007).</li>
<li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-molecule+recognition+of+biomolecular+interaction+via+kelvin+probe+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Single-molecule recognition of biomolecular interaction via kelvin probe force microscopy.</a> ACS Nano. 5 (9), 6981-6990 (2011).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

KPFM elektriksel yüzey verilerinin elde edilmesi için yeni bir yöntem olarak kullanılmıştır. Genellikle kimyada yük dağılımının incelenmesi için bir yöntem olarak kullanılmaktadır ve sadece yakın zamanda mikro ve nano ölçeklerde biyolojik sistemlerin çalışma için uygulanacak başlamıştır. Toplanan veriler biz mikropların kolayca bile statik inkübasyon 3 saat sonra, paslanmaz çelik ve altın yüzeyleri temizlemek eklemek için görünmedi bulundu. Poli-L-lisin işlevselleştirilmiş yüzeyler 30 dakika sonra hızlı bir mikrobiyal e...

Biyofilm kaldırılması için inatçı ve hastalık bulaşma ve antimikrobiyal direnç oranlarının artışı yol gibi ekipman yüzeylerinde ve deri yaraları üretilen Biyofilmler medikal sektörü için bir sorun mevcut. Ek biyofilm oluşumunda ilk adım olduğunu ve onun tersinirliği 1-3 dolayı en kritik adımdır. Yüzey yüzey özellikleri mikrobiyal eki çok önemli bir rol oynamaktadır. Bu tür yüzey sertliği, gözeneklilik, pürüzlülük ve hidrofobiklik gibi faktörler mikrobiyal ek gerçekleştirilmesi gösterilmiştir; Ancak, mikrobiyal yapışma üzerinde yüzey yüzey potansiyeli (SP) rolünü inceleyen çok az araştırma 4,5 yapılmıştır. Negatif yüklü yüzeyleri mika, silikon, ve altın 6 Bacillus thuringiensis sporlarının bağlanmasını önledikleri varsayılır. Hücre zarı potansiyelinde değişiklikler hücre bağlanması ve hareket kabiliyeti 5,7 değişim göstergesidir. Bu elektrik Hom gözlemlenmiştirogeneous yüzeyler daha kolay bir şekilde mikrobiyal yapışma 5 destekler. Nano bakteri yüzey potansiyelini karakterize, anti-biyolojik kirlilik stratejilerin geliştirilmesine yardımcı olabilir böylece çeşitli yüzeylere bakteri yapışma kinetiği anlamak için yeni bir yol sağlar, ve olabilir. Böyle elektroforetik ışık saçılması, zeta potansiyeli ve izoelektrik nokta belirleme gibi bakteri, elektro kinetik tanımlamak için kullanılan diğer yöntemlerin aksine, Kelvin prob kuvvet mikroskobu (KPFM) tek tek hücrelerin yerine tüm kültürlerin 8-11 incelenmesi için izin verir. Hücre-hücre karşılaştırmak veya yüksek doğruluk ve hassasiyet ile elektriksel özelliklerini biyofilm isteyen bu faydalıdır. KPFM atomik kuvvet mikroskobu (AFM) bir modül. AFM tarama tünelleme mikroskobu (TTM) 12 doğrudan bir sonucu olarak geliştirilmiştir. STM kullanarak ilk yayınlanan görüntüleri 1982 12 Gerd Binnig ve Heinrich Rorhrer tarafından yapılmıştır </sus&gt;. Onların buluş havada bir iletken yüzey üzerinde keskin bir iletken ucu tarayarak raster tarafından atom yapılarını çözmek başardı. hızlı görüntü kurutulmuş DNA, protein örneklerinin ve virüslere 12 STM kullanmayı denedi biyologları heyecanlı yüksek çözünürlüklü görüntüler elde etkileri. STM ayrıca özel prob ipuçları 13 kullanılarak sıvı yapılabilir. Bu Lindsay ve ark., Altın elektrotlar 13, 10 mM HClO4 ve su içinde görüntü DNA molekülleri STM ve AFM kullanılan ile gösterilmiştir. KPFM ligandları 26, DNA ve protein analizi 25 ve biyomoleküllerin etkileşim yüzey potansiyellerinin belirlenmesinde gösterilmiştir. KPFM AFM iletken konsol ucu ve bir ideal olarak iletken numune arasındaki temas potansiyeli farkı (CPD) ölçerek 14,15 (i Şekil 1) çalışır. Numuneler mutlaka iletken (yani, biyolojik sampl olmak zorunda değilsinizes). Görüntüleme mika, cam ve uzun iletken olmayan yüzey incedir ve bir alt iletken malzeme 6,7 olduğu gibi silikon yüzeyler (iletken olmayan) ile gerçekleştirilebilir. SMG yüzeyi potansiyel gerilimi eşdeğerdir ve negatif elektron yükünün bölü ucu (φ ucu) ve örnek (numune φ) arasındaki iş fonksiyonları farkı olarak tarif edilebilir (- e). İletken bir AFM ucu bir örnek, yüzeye yakın getirildiğinde bağlı Fermi enerjileri arasındaki fark (Şekil 1, II, a) 15 ile bir elektrostatik kuvvet (F lar) oluşturulur, (d mesafesinde ayrılmış). Bu noktada, uç ve örnek (E v) vakum enerjileri denge ve hizalanmış bulunmaktadır. Yakın örnek yüzeyine ucu getirerek üzerine, uç ve örnek yüzeyi paralel plakalı kapasitörler (Şekil 1, ii b gibi elektrik kontağı ve hareket girer </strong&gt;) 14,15. Noktada uç ve numune yüzeyinden Fermi enerjileri bir kalıcı-hal dengeye ulaşması aynı hizaya gelirler ve (Şekil 1, ü, b). ucu ve örnek yüzeyi nedeniyle E v &#39;nin ve iş fonksiyonları bir fark tahsil edilecektir ve V SMG oluşturacaktır. Nedeniyle oluşan V CPD elektrik temas alanı üzerinde bir F es görür. Bu kuvvet daha sonra (Şekil 1, II, c) oluşan V CPD ile aynı büyüklüğe sahip ucuna bir dış V DC uygulaması ile etkisiz kılınır. Bu DC gerilim elektrik temas alanında yüzey yükü ortadan kaldırır uygulanan ve V CPD F es ortadan kaldırmak için gerekli V DC miktarı sa arasındaki iş fonksiyonları farka eşittirmple yüzey ve uç 15. Bu ucu iş fonksiyonu bilinen ve üretici tarafından sağlanan not edilmelidir. Tüm KPFM yöntemlerinde, bir AC voltajı (V AC, yaklaşık 100-500 mV) de uç ve örnek 14 arasındaki salınım elektrik kuvvetlerinin üretilmesi için, uç uygulanır. V CPD ve / veya F es değişiklikleri ölçerken daha iyi çözünürlük sağlar. Bu bağlamda, frekans veya elektrik salınım amplitüdünün değişiklikler V DC ile düzeltilir ve potansiyel harita oluşturulabilir yüzey olabilir. Bu haritaların belirli alanlarda elde edilen veriler daha spesifik topografik özellikler hakkında bilgi sağlamak için elektrik analiz edilebilir. (1) kaldırma modu, (2) genlik modülasyonu (AM) modu, ve (3) frekans modülasyonu (FM) modu 14,16: KPFM üç modda çalıştırılabilir. Asansör modu ilk inc olduKPFM ve arnation. Asansör modu sallanmaktadır ucu topografik görüntü elde etmek yüzey boyunca sürüklenen olduğu bir iki-geçişli yöntemine dayanır. İkinci geçişte için ucu numune üzerinde önceden belirlenmiş bir mesafeyi yükseltildiğinde (10-100 nm) ve tekrar aynı alan boyunca taradı. Nedeniyle AM- ve FM-KPFM göre bu iki taramalı yöntemiyle, asansör moduna, görüntü alımı için uzun zaman alır. Yüzeyden ucu Raising sadece uzun menzilli F es ölçülür sağlar. Ayrıca, topografya ve yüzey potansiyel ölçümleri arasındaki çapraz konuşma artan yanal çözünürlük ve hassasiyet pahasına decoupled. AM-KPFM aynı anda numune topografya ve yüzey potansiyeli (tek-geçişli tarama) 14 ölçmek için çift frekansları kullanılarak yanal çözünürlük ve hassasiyeti artırır. AM modunda ise, konsol mekanik genel olarak% 5, ilk rezonans frekansı altında salınım (f 0), ve elektrik olarak salınım (tikinci rezonans frekansı (f 1) bir V AC) hrough. Nedeniyle F es ve V CPD değişikliklere f 1 genlik değişiklikleri, yüzey potansiyel ölçüm verileri verirken topoğrafik verilerin nesil f 0 kurşun genlik değişiklikler. fnin 0 ve konsol f 1 çapraz konuşma 14 en aza indirilir sinyal önemli frekansları ve enerji ile ayrılır. AFM başkanı elektroniği kutusu (HEB) hem topografik vermek ve bir tarama aynı anda potansiyel verileri yüzey iki sinyalleri ayırır. FM-KPFM biyolojik yüzeyler 14 çözünürlük daha fazla AM-KPFM geliştirir. FM-KPFM elektrostatik kuvvet geçişlerini yerine elektrostatik kuvvet (F es) 15 değişiklikleri ölçen AM-KPFM daha farklı çalışır. AM modunda gibi, FM modu çift frekansları ve SINGL kullanırE-pass tarama mekanizması topografik elde etmek ve aynı anda 14 potansiyel verileri yüzey. FM modunda, konsol mekanik f 0 sallanmaktadır ve elektriksel düşük modifiye frekansta salınımlandırılan (mod f, tipik 1-5 kHz). Elektrostatik etkileşimler üzerine, 0 ve f mod karışımı f 0 ± f mod f yan bantları üretimi için. Bu yan bantlar elektrostatik kuvvet değişikliklere çok hassastırlar ve AFM HEB yoluyla f 0 ayrılabilir. FM-KPFM elektrostatik kuvvet geçişlerini değişiklikleri ölçen bu yana, ipuçları apeks şekil ve bakım / bütünlük. Genel yüzeye potansiyel çözünürlük 14, 15 kritik rol oynamaktadır AM kullanarak potansiyel çözünürlük Yüzey ve FM modları yanal 1 nm aralığında 14 olan -16. Bu KPFM görüntüleme içinde (polar olmayan sıvılar içinde yapılabilir, ve en son olarak, düşük iyonik (&lt;10 mM), polar sıvılar içinde yapılabilir gösterilmiştir unutulmamalıdırBöyle MilliQ su gibi bir DC önyargı uygulama kalmayabilir, bir önyargı geribildirim gerekmez açık döngü KPFM modları); Ancak, KPFM görüntüleme henüz kutup çözümleri 17-20 canlı hücrelerde yapılması gerekir. Sıvı SP görüntüleme ile ilgili daha başka sorunlar çözümler genel olarak muhafaza hücreleri için kullanılan (yani, fosfat tamponlu tuzlu su) Faradaysal reaksiyonları, önyargı kaynaklı yük dinamikleri ve iyon difüzyon / yeniden dağıtma 20 yol açacak mobil iyonlar, yüksek konsantrasyonlarda bulunur. Bu durumda, bu deney için, ölçümler ortam koşullarında poli-L-lisin işlevselleştirilmiş paslanmaz çelik, altın yüzeyleri üzerinde kurutuldu ve ölü MRSA hücrelerden alındı. Görüntüleme önceden kurutulmuş ya da yüzey 20 üzerine immobilize edilmiş biyolojik örnekler üzerinde hava veya vakum koşullarında gerçekleştirilebilir. Nemli koşullar da yüzeyleri 6 KPFM görüntüleme etkilediği gösterilmiştir. Bu çalışmada, biz FM-KPFM istihdamve AFM poli-L-lizin fonksiyonlandırılmış paslanmaz çelik ve altın yüzeylere metisilin dirençli Staphylococcus aureus USA100 (MRSA) eki SP rolünü incelemek için. MRSA son zamanlarda nedeniyle birçok β-laktam antibiyotikler ve sefalosporinlere 21 olan doğal seçilen direnci bir çok ilaç dirençli (MDR) &quot;Superbug&quot; olarak statüsünü topladı. MRSA enfeksiyonları gibi vankomisin ya da uzun süreli tedavilerde 22 olarak kullanılamaz, bu nedenle, insanlarda daha yüksek toksisite düzeyine sahip ve oksazolidinonların gibi daha sert antimikrobik kullanımına yol açan, hemen tedavi etmek için daha zorlu zordur ve çok büyüktür. Paslanmaz çelik tıbbi alaka ve Altın karşılaştırmalı metal olarak kullanılan vb derialtı iğneler, bedpans, kapı kolları, lavabo, bir malzeme olarak yaygın kullanımı nedeniyle seçildi. FM-KPFM mikrobiyal zar SP yüzeylere eki üzerine değişirse incelemek için kullanılmıştır.

<table><tbody><tr><td>5500ILM Atomik Kuvvet Mikroskobu</td><td>Agilent Technologies</td><td>#N9435S</td><td></td></tr><tr><td>AFM/STM Metal Numune Diskleri</td><td>TED PELLA, INC.</td><td>#16219</td><td>Paslanmaz çelik numune diskleri</td></tr><tr><td>DPE (Düşük Gürültülü) İletken SPM Probları</td><td>Mikromasch</td><td>#HQ:DPE-XSC11</td><td>Çip başına 4 Pt kaplı konsol vardır. Deneyler için konsol B'yi kullandık.</td></tr><tr><td>PELCO Altın Kaplamalı AFM/STM Metal Numune Diskleri</td><td>TED PELLA, INC.</td><td>#16218-G</td><td>Altın numune diskleri</td></tr><tr><td>PicoView Yazılımı</td><td>Agilent Teknolojileri</td><td>#N9797B</td><td>5500ILM Atomik Kuvvet Mikroskobu görüntüleme yazılımı</td></tr><tr><td>Pico Image Yazılımı (Pico Image Basic)</td><td>Agilent Technologies</td><td>#N9797AU-1FP</td><td>5500 ILM Atomik Kuvvet Mikroskobu sonrası görüntü işleme yazılımı</td></tr><tr><td>Scilogex D3024 Yüksek Hızlı Mikro Santrifüj</td><td>Thomas Scientific</td><td>#91201513</td><td>Hücreleri (pelet) ortamdan ayırmak için hücre yıkama adımlarında kullanılan santrifüj</td></tr><tr><td>%5 Koyun Kanı içeren Triptikaz Soya Agar</td><td>BD</td> <td># 221261</td><td>Önceden hazırlanmış plakalar</td></tr><tr><td>Triptik Soya Suyu</td><td>BD</td> <td># 257107</td><td>Kuru toz olarak gelir. Kabın üzerine nasıl gelineceğine dair talimat.</td></tr></tbody></table>

kelvin probe kuvvet mikroskobu kullanılarak bakterilerin yüzey potansiyel Ölçümü

Surface Potential Measurement of Bacteria Using Kelvin Probe Force Microscopy

Yüzey potansiyel yüzeyleri alt tabakaya mikroorganizmaların yapışmasında bir rol oynayan bir yaygın olarak gözardı edilen fiziksel özelliğidir. Kelvin prob kuvvet mikroskobu (KPFM) nano-ölçekte yüzeyler arasındaki temas potansiyeli farkı ölçen atomik kuvvet mikroskobu (AFM) bir modül. AFM ile KPFM kombinasyonu yüzey potansiyeli ve örneğin bakteriyel hücreler gibi biyolojik örneklerin topografik haritaları aynı anda oluşturulmasına izin verir. Burada, biz böyle paslanmaz çelik ve altın gibi tıbben ilgili yüzeylere yapışma mikrobiyal yüzey potansiyelinin etkilerini incelemek için KPFM istihdam. Yüzey potansiyel haritalar farklı malzeme yüzeylere mikrobiyal membranların yüzey potansiyeli ortaya çıkmıştır. Bir adım yükseklik grafiği substrat yüzeyi ve mikroorganizmalar arasındaki sınır bölgede yüzey potansiyeli farkı göstermek için üretildi. Hücre zarı yüzeyi potansiyelindeki değişim değişim ile bağlantılı olmuşturhücre metabolizması ve hareketlilik s. Bu nedenle, KPFM çeşitli alt-tabaka yüzeyine yapışmasından sonra mikrobiyal zar yüzeyi potansiyeli değişiklikleri incelemek için kullanılabilir güçlü bir araç oluşturmaktadır. Bu çalışmada, KPFM kullanılması ile paslanmaz çelikten ve altın bireysel metisilin dirençli Staphylococcus aureus USA100 hücre yüzey potansiyelini karakterize etmek için prosedürü gösterir.

KPFM kullanarak SP ölçmek yeteneği örnek yüzeyi ve konsol ucu hem bir ölçüde iletken olduğu ilkesine dayanmaktadır. Paslanmaz çelik ve altın MRSA tutunduğu gibi iletken yüzeylere harekete geçti. KPFM görüntüleri 512 x 512 çözünürlükte her iki yüzeylerde 15 MRSA hücreleri alındı ​​ve 5 x 5 um den 10 x 10 mm arasında değişen tarama alanları ile yapılmıştır. Tarama 0.02 satır / sn 0.05 satır / sn arasında değişen hat hızı ile gerçekleştirilmiştir. 512 veri noktaları tarama hattı ve 512 hatları başına toplanan ile nedenle, ...

Burada, yüksek çözünürlüklü nano ölçekli yüzey potansiyeli haritaları oluşturmak için bir araç olarak Kelvin prob kuvveti mikroskobunun kullanımını açıklayan bir protokol sunuyoruz. Bu araç, mikroorganizmaların substrat yüzeylerine bağlanma kapasitesi üzerindeki yüzey potansiyelinin rolünü değerlendirmek için uygulandı.

Kelvin Probe Kuvvet Mikroskobu kullanılarak Bakterilerin Yüzey Potansiyel Ölçümü

Surface potential is a commonly overlooked physical characteristic that plays a dominant role in the adhesion of microorganisms to substrate surfaces. ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, farklı materyal substratlara tutunma sonrası hücre zarı yükündeki değişimleri gözlemlemektir. Bu, mikroorganizma sayılarını artırmak için besin açısından zengin bir ortamda kültürleme yapılarak gerçekleştirilir. Ardından, mikroorganizmaların tutunacağı materyal yüzeyleri temizlenir ve optimal mikrobiyal tutunma oranları için fonksiyonelleştirilir.Ardından, Kelvin prob kuvvet mikroskobisi veya KPFM görüntülemesine olanak sağlamak amacıyla mikroorganizmalar çeşitli malzeme altlıklarına ekilir. Sonuçlar, malzeme altlığı tipinin ve onun doğal yükünün, hücre membran yükündeki ve hücre tutunmasındaki değişimlerle görüldüğü üzere hücre aktivitesi üzerinde etkili olduğunu göstermektedir. Bu tekniğin elektroforetik, ışık saçılımı ve izoelektrik nokta belirleme gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, KPFM'nin tüm kültürler veya koloniler yerine tekil hücrelerin ve biyofilmlerin yükünün incelenmesine olanak tanımasıdır.Bu yöntem, hücreden hücreye ve biyofilm elektriksel özelliklerini yüksek doğruluk ve hassasiyetle karşılaştırmak istendiğinde faydalıdır. Başlamak için, %5 koyun kanlı agar plakları hazırlayın, MRSA bakterilerini hazırlanan plakalara ekin ve tekil, iyi izole edilmiş koloniler elde etmek için 37 derece Celsius'da 24 saat inkübe edin. %1 glukoz ve %0,1 sodyum klorür ile takviye edilmiş 500 mililitre triptik soy bulyonu hazırlayıp otoklavlayın; beraberinde iki temiz cam test tüpü ve bir kutu bir mililitrelik pipet ucu bulundurun.Besiyerinin ve deney tüplerinin bir biyogüvenlik kabininde veya bek alevi yanında soğumasına izin verdikten sonra, her bir deney tüpüne altı mililitre TSB pipetleyin. Daha önce hazırlanmış koyun kanlı agar plaklarından birini kullanarak, tüplerden birine tek bir MRSA kolonisi inoküle edin. Sterilliği sağlamak için ikinci tüpü negatif kontrol olarak kullanın; tüpleri bir orbital çalkalayıcı inkübatörde 24 saat boyunca 37 °C'de ve 200 RPM'de inkübe edin.MRSA tüpünde üreme görülmeli veya kontrol test tüpünde hiçbir üreme olmamalıdır. Ardından, 24 saatlik kültürden bir mililitre kullanarak altı mililitre taze triptik soya broyunu inoküle ederek bir alt kültür oluşturun ve 37 °C'de, 200 RPM'de altı saat daha inkübe edin. Daha sonra kültürden bir mililitreyi bir santrifüj tüpüne pipetleyin ve 850 ×g'de üç dakika boyunca santrifüjleyin.Süpinatörle çıkarın ve baskın eldeki pensle peleti iki kez deiyonize su ile yıkayın. 20 milimetrelik paslanmaz çelik bir FM örnek diskini tutun ve her iki tarafını temizlemek için beş mililitre deiyonize su kullanın. Temizlenen diskleri deiyonize su dolu bir behere yerleştirin ve sonikasyon işleminden sonra bir dakika boyunca sonike edin.Örnek diskleri penset yardımıyla beherden çıkarın ve açık bir Petri kutusunun kenarına, kağıt havlu üzerine yaklaşık 60 derecelik bir açıyla yaslayın. Tamamen kurumaları için kutunun kapağını kullanarak kuruyan disklerin üzerini kapatın. Kuruma işlemi tamamlandığında, disk yüzeyini fonksiyonelleştirmek için diski bir Petri kutusuna aktarın. Biyogüvenlik kabini içerisinde, diskleri tutmak için penset kullanarak, disklerin üzerine 200 ila 400 µL %0,1 polyol lysine pipetleyin ve oda sıcaklığında bir saat boyunca inkübe edin.Bu videonun önceki bölümlerinde gösterildiği gibi, bunları yıkamak için deiyonize su kullanın. Ardından, iki kez yıkanmış olan resüspande hücrelerden 200 ila 400 µL'yi kaplanmış örnek disklerinin üzerine ekleyin. Oda sıcaklığında 30 dakika inkübe ettikten sonra, diskleri yıkamak için nazikçe 1 mL deiyonize su kullanın.Kelvin Prob Kuvvet mikroskopisi görüntülemesi yapmadan önce disklerin gece boyunca kurumasına izin verin. Bilgisayarı, atom kuvvet mikroskobu veya AFM'ler, HEB ve MAC üç kontrolörü ile birlikte açın. Ulence P ovu overview gibi bir AFM görüntüleme yazılımı açın.Aralıklı temas modunda görüntüleme için A-C-A-F-M veya doğru tanımı seçin. Baskın elinizde bir FM penseti kullanarak ve diğer elinizle yaylı klips tutucuyu açık tutarak, A-K-P-F-M konsolunu dikkatlice başlığa yerleştirin. Başlığı dikkatlice A FM'ye yükleyin; lazer ışığı ve sahne kaldırma motoru kablolarını bağlayın.Ardından lazeri konsolun ucuna hizalayın. Lazeri konsolun ucuna hizalamak için, lazeri konsol çipinin üzerine getirmek amacıyla ön-arka düğmesini birkaç kez saat yönünde çevirin.Lazer çipe ulaştığında, engellenecek ve artık görünmeyecektir. Ardından, lazer noktası tekrar görünene kadar ön-arka ayar düğmesini saat yönünün tersine döndürün. Lazer şu anda çipin kenarındadır.Lazeri konsol üzerine konumlandırmak için sağa sola döndürme düğmesini çevirin. Lazer konsolun üzerinden geçerken, hızlı bir şekilde kaybolup yeniden belirecektir. Lazer noktası, fotodiyot ünitesinin daha sonra yerleşeceği buzlu cam kapakta görünür olmalıdır.Buzlu cam üzerindeki nokta kaybolana kadar, ön-arka ayar düğmesini saat yönünün tersine çevirerek noktayı konsol boyunca uca doğru aşağı hareket ettirin. Şimdi, lazeri tam konsol ucuna yerleştirmek için ön-arka ayar düğmesini saat yönünde çok hafifçe çevirin; lazer noktası buzlu cam üzerinde yeniden belirecektir. Lazer hizalandıktan sonra, konsol ile numune arasında yeterli alan olduğundan emin olmak için sahne kaldırma motorunu 10 saniye boyunca açık konumda tutun.Numuneyi AFM'ye yerleştirirken, numuneyi KPFM tablasının üzerine koyun. Numuneyi topraklamak için bakır tel kullanın ve AFM'den numune tablasına uygun kabloları bağlayın. Ardından, AFM yazılımı üzerinden tablayı AFM'ye bağlayın.Yerleşme süresinin 10 milisaniyenin altında olduğundan ve yaklaşma hızlarının saniyede iki mikronu aşmadığından emin olun. Uç hasarını önlemek için ardından konsolu ayarlayın ve konsol ucunu numuneye doğru hareket ettirmeye başlayın. Konsol ucu numune yüzeyine ulaştığında, bir görüntüleme penceresi boyutu ve ideal görüntüleme alanı seçin; topografik görüntülemenin optimize edilmesi için integral ve proporsiyonel kazançları konsol set noktasıyla birlikte optimize edin.Topografik görüntüleme optimize edildiğinde, KPFM modülünü FM modunda açın. Görüntüleme penceresini beş mikron çarpı beş mikron olarak, çözünürlüğü 512 x 512 olacak şekilde veya yavaş tarama hızlarında ayarlayın. FM KPFM ayarları için drive değerini %5 ile %10 arasına ayarlayın. Drive frekansını, 2 kHz bant genişliğinde, 1 ile 5 kHz arasına ayarlayın.F-M-K-P-F-M için demir NP kazançlarını %0,3 olarak ayarlayın. KPFM görüntülerini elde ettikten sonra, görüntüleri analiz etmek ve bu video gösteriminde belirtilen ayarları kullanarak SP verilerini toplamak için görüntüleme sonrası işlem yazılımını kullanın. KPFM görüntüleri, hem paslanmaz çelik hem de altın yüzeyler üzerindeki 15 MRSA hücresinden alınmıştır. Burada toplanan görüntü türleri gösterilmektedir.KPFM çift frekans kullanarak çalıştığı için, hücre yüzeyinin topografik görüntüleri ve elektriksel verileri eş zamanlı olarak toplanmıştır. Yüzey potansiyelindeki küçük değişimleri daha kolay ayırt edebilmek için yüzey potansiyeli haritalarına termal filtreler uygulanmıştır. Bu grafikte, mikrobiyal membran yüzey potansiyelini belirlemek için görüntüler analiz edilmiş ve ardından farklı substratlardaki büyümeleri karşılaştırmak için kullanılmıştır.Çıplak paslanmaz çelik ve çıplak altın alt tabakaların yüzey potansiyeli taramaları, genel olarak negatif yüzey potansiyelleri göstermiştir. Polyol lizin kaplı paslanmaz çelik ve altın disklerin her ikisi de pozitif yüzey potansiyellerine doğru bir kayma sergilemiştir. MRSA hücre membran potansiyelleri, paslanmaz çelik ve altın yüzeyler arasında farklılık göstermiştir.Paslanmaz çeliğin, negatif yüzey potansiyelleri gösteren altın alt katmandaki MRSA hücrelerine kıyasla, hücreler için önemli ölçüde daha büyük pozitif bir membran yüzey potansiyeli sergilediği görülmüştür. KPFM'nin tüm yeteneklerini göstermek amacıyla, paslanmaz çelik üzerindeki MRSA'nın basamak yüksekliği grafiğine bir örnek burada sunulmuştur. Bu grafik, alt katman yüzeyi ile mikrobiyal membran arasındaki yüzey potansiyeli farkını göstermektedir.Bu videoyu izledikten sonra, farklı malzeme substrat yüzeylerinde elektrik yükünün mikrobiyal hücre tutunması ve aktivitesi üzerindeki etkilerini incelemek için Kelvin prob kuvvet mikroskopisinin nasıl kullanılacağına dair iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

surface-potential-measurement-bacteria-using-kelvin-probe-force

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Canlı Gram-negatif ve Gram-pozitif bakterilerin jelatin kaplı mika üzerinde hareketsiz ve Atomik Kuvvet Mikroskobu (AFM) kullanarak sıvı görüntülü olabilir.

Atomik Kuvvet Mikroskopi Görüntüleme Bakteriyel İmmobilizasyon

Kaynak: Wen, J., Pasman, vd. al., Bacillus subtilis Sporlarında Mikropların ve İç Zarın Görselleştirilmesi. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, bakteri sporu içindeki çimlenme proteinlerinin organizasyonunu ortaya çıkaran üç boyutlu floresan görüntüleri elde etmek için yapılandırılmış aydınlatma mikroskobunun kullanımını göstermektedir.

Bakteri Sporlarının İç Zarındaki Çimlenme Proteinlerinin Görselleştirilmesi

Kaynak: Scheidweiler, D. ve diğerleri. Akışkan Cihazların Mikroskopi ve Akış Sitometrisi ile Birleştirilerek Gözenekli Ortamlarda Mikrobiyal Taşınımı Mekansal Ölçeklerde İncelemek. J. Vis. Exp. (2020).Bu video, rastgele düzenlenmiş sütunlardan oluşan gözenekli bir matriks aracılığıyla bakteri hareketliliğini ölçmek için mikrofluidik bir cihazın kullanıldığını gösteriyor. Fluoresan etiketli bakteriler cihaza dahil edilir, gözenekli matriksin içinden gözlem kanalına ilerlerken mikroskopi ile...

Mikrofluidik Cihaz Kullanarak Bakteriyel Hareketliliğin Değerlendirilmesi

Kaynak: Chetrit, D. ve diğerleri.  Legionella pnömofila nokta/icm salgı sisteminin mekansal ve zamansal özelliklerini çözmek için canlı hücre görüntüleme ve kriyo-elektron tomografi uygulanıyor. J. Vis. Exp. (2020).Bu video, floresan olarak işaretlenmiş patojenik bakterilerin hazırlanmasını ve görüntülenmesini göstermektedir. Agarose pedleri önce hazırlanır ve yapıştırıcı bir çerçeve içine yerleştirilir. Hücreleri hareketsiz hale getirmek için pedde floresan protein ifade eden genetik olarak...

Flüoresans Etiketlenmiş Bakterilerin Örnek Hazırlanması ve Görüntülemesi

Bu çalışma, bir ince biyolojik bakteri tabakası ve in situ ara yüzeylerde mikro-organizmalar tarafından yapılmış karmaşık yaşam malzemenin lokal mekanik özelliklerini ölçmek için özel bir manyetik cımbız geliştirilmesi tohumlanmış manyetik parçacıkların uzaktan harekete dayalı orijinal bir yöntem göstermektedir.

Için Mikrometrik Sondalar uzaktan manyetik uyarılı<em&gt; In situ</emBakteriyel biyofilm Fiziksel Özelliklerinin&gt; 3D Mapping

Ölçme ve bitkiler, özellikle kökleri ve Brüksel lahanası, bakteriyel yapışma karakterize için kolay bir yöntem bu makalede anlatılan.

Laboratuvarda ölçmek yüzeyler bitki bakterilerin bağlılık

Burada, podosomes uyumlu bir filmde filmin topografik görüntülerin otomatik Analize hazırlanması uygulamak çıkıntı kuvvetleri değerlendirmek için kullanılan Deneysel teknikler ayrıntılı.

Çıkıntı kuvvet mikroskobu: Hücre çıkıntılar tarafından geliştirilen kuvvetleri ölçmek için bir yöntem

Bu çalışma, sentetik gen devrelerinin stokastik davranışının analizi ve nicelleştirilmesi için tek bir Escherichia coli hücresinin canlı görüntülenmesini sağlayan bir mikroskopi yöntemi sunun.

Zaman Atlamalı Mikroskopi Kullanılarak Escherichia Coli'de Biyolojik Gürültünün Sürekli Ölçümü

Bu canlı-bakteriyel hücre görüntüleme protokolü zaman içinde tek hücre düzeyinde birden fazla bakteri türü arasındaki etkileşimlerin görselleştirilmesiiçin izin verir. Hızlandırılmış görüntüleme, tek tek kültür veya ortak kültürdeki her bakteri türünün gözlemlenmesine olanak sağlar ve bireysel hücre hareketliliği ve canlılığı da dahil olmak üzere çok türler arası bakteri topluluklarındaki türler arası etkileşimleri sorgular.

Tek Hücreli Türler Arası Bakteri Etkileşimlerinin Kinetik Görselleştirilmesi

Atomik Kuvvet Mikroskopisi-Kızılötesi Spektroskopi (AFM-IR), bakteriyel çalışmalar için güçlü bir platform sağlayarak nano ölçekli çözünürlük elde etmeyi sağlar. Her ikisi de, hücre altı değişikliklerin haritalandırılması (örneğin, hücre bölünmesi üzerine) ve kimyasal bileşimin karşılaştırmalı çalışmaları (örneğin, ilaç direncinden kaynaklanan) bakterilerde tek bir hücre düzeyinde yapılabilir.

Atomik Kuvvet Mikroskopisi, Tek Bakteri Kimyasını Araştırmak için Bir Araç Olarak Kızılötesi Spektroskopi ile Birleştirildi

Kelvin probu kuvvet mikroskobu (KPFM), yüzey topografyasını ve yüzey potansiyelindeki farklılıkları ölçerken, taramalı elektron mikroskobu (SEM) ve ilişkili spektroskopiler yüzey morfolojisini, bileşimini, kristalinitesini ve kristalografik oryantasyonunu aydınlatabilir. Buna göre, SEM'in KPFM ile birlikte lokalizasyonu, nano ölçekli bileşimin ve yüzey yapısının korozyon üzerindeki etkileri hakkında fikir verebilir.

Kelvin Probu Kuvvet Mikroskobunun Diğer Mikroskoplar ve Spektroskopilerle Birlikte Lokalize Edilmesi: Alaşımların Korozyon Karakterizasyonunda Seçilmiş Uygulamalar

Keşfedin bakteri yüzey potansiyel ölçümü için Kelvin Probe Kuvvet Mikroskobu kullanımını. Bu yöntem, mikroorganizmaların farklı substratlara yapışma kapasitesini nanometre ölçeğinde incelemeyi sağlar.

Kelvin Probe Kuvvet Mikroskobu kullanılarak Bakterilerin Yüzey Potansiyel Ölçümü

Daha fazla video keşfet