Farelerde Yüz Sinir Aksotomi: Sakatlık Motonöron Yanıtı Eğitim için Bir Model

Bu prosedürün genel amacı, periferik sinir hasarını incelemek için fasiyal siniri eksternalize etmektir. Fasiyal sinir, beyin sapının pons bölgesinden köken alır ve kafatasından stylo-mastoid foramen aracılığıyla çıkar; ardından sinir ana bileşenlerine ayrılır.

Açığa çıkarıldıktan sonra sinir, stylo mastoid foramen çıkış noktasından ekstomize edilir. Fasiyal sinirin yerini belirlemede iki ana referans noktası yardımcı olur. Birincisi, ince bir membranla birbirine bağlanan inci beyazı kıkırdak plakalardan oluşan kulak kanalıdır.

Diğeri ise, sinirin üzerinde yer alan ve stylo mastoid foramen çıkışında bulunan digastrik kasın anterior karnıdır. Fasiyal sinir hasarlandırıldıktan sonra araştırmacı, motor nöron ölümü veya gen ekspresyonu gibi birden fazla faktörü inceleyebilir. Fasiyal sinir yaralanma modeli, en iyi karakterize edilmiş periferik sinir yaralanma modellerinden biridir.

Bu tekniğin avantajları; basitliği, yüksek tekrarlanabilirliği ve sonrasında gelişen fasiyal paralizinin hayati fonksiyonlar üzerinde bir etki yaratmamasıdır. Ayrıca, sinir sisteminin yüksek derecede simetrik doğası nedeniyle, yaralanmamış taraf deneyleriniz için eşleşmiş bir dahili kontrol olarak hizmet edebilir. Bu prosedür boyunca aseptik tekniklerin kullanımını sürdürmek için tüm araçların otoklavlandığından emin olun ve işlemler arasında araçları sterilize etmek için bir cam boncuk sterilizatörü hazırlayın.

Isıtıcı pedin üzerine emici bir ped yerleştirerek, mikroskobu kurarak ve burun konisini görüş alanının kenarıyla hizalayacak şekilde bantlayarak cerrahi tezgahı hazırlayın. Fareyi anesteziye aldıktan sonra, ayak parmağı sıkıştırma dahil olmak üzere manipülasyonlara karşı herhangi bir fiziksel yanıt vermediğinden emin olun. Ardından gaz akışını anestezi haznesinden burun konisine aktarın ve off thalamic merhem uygulayın.

Fareyi, altında ısıtıcı bir ped olacak şekilde cerrahi pedlerin üzerine sol yanının üzerine gelecek şekilde yerleştirin. Hayvanın solunumunu sürekli izleyin ve anesteziyi sürdürmek için ISO florin akışını gerektiği gibi ayarlayın. Daha sonra cerrahi alanı açığa çıkarmak için sağ kulağı burun konisine bantlayın.

Posterior auriküler venin kulağın üzerinden geçtiği görülmelidir. Ardından, tüyleri %70 ethanol ile ıslatın ve bölgeyi tıraş edin. Tüyler temizlendikten sonra, cilt; iyot ve %70 ethanol ile sırasıyla üç kez fırçalanarak bölge tamamen temizlenene kadar arındırılmalıdır.

Cerrahi işleme geçin. Ağız kısmının yan tarafa gelecek şekilde, kulak veni yatay olarak uzanacak biçimde konumlandırıldığından emin olun. Bu, fasiyal sinirin bulunmasını çok daha kolaylaştıracaktır.

İlk kesinin yerini belirlemek için, posterior auriküler veni kulaktan kulak çıkıntısının posterior bölgesine doğru takip edin. Ardından, eğitim amaçlı olarak, çıkıntının 2-3 mm posteriorundan yaylı makas kullanarak 4 mm'lik bir kesi yapın. Bu kesi, alttaki anatomiyi açığa çıkarmak için genişletilecektir.

Şimdi deri altı yağ dokusunun ve fasyanın küt diseksiyonunu yapın. Kan damarları ve kaslar makasla kolayca zarar görebilir. Kanama meydana gelirse.

Steril bir pamuklu çubukla en az 30 saniye boyunca baskı uygulayın. Önemli miktarda sıvı kaybı meydana gelmişse, 25 veya 27 gauge bir iğne ile intraperitonal olarak yarım mililitreye kadar salin enjekte edin. Şimdi, temel referans noktalarını kullanarak fasiyal siniri bulun.

Spinal aksesuar sinir, fasiyal sinirin yüzeysel kısmında yer alır ve kafatasının kondil bölgesinden geçtiği görülebilir. Trapezius kasını inerve etmek için kıkırdak kulak kanalını belirleyin. Bu kanal inci beyazı rengindedir ve fasiyal sinirin rostralinde görülebilir.

Fasiyal sinir, kulak kanalının kaudal kısmının etrafından dolanır. Ardından, fasiyal sinirin üzerinde ve kaudalinde yer alan anterior digastrik kasın kas karnını belirleyin. Fasiyal siniri açığa çıkarmak için bu yapının altından diseksiyon yapın.

Altta yatan fasyaya yapışık, beyaz renkli katı bir yapıdır. Fasiyal sinirin ana dallarını tanımlayın. Bu dalları dorsal yönde izleyerek stylo mastoid foramen'deki başlangıç noktalarına ulaşın.

Yüz sinirinin yolu boyunca diseksiyon yapmak için yaylı makasın ucunu kullanırken, bölgeyi açık tutmak için ince pensler kullanın. Mastoid çıkıntının kemikli yapısı penslerle hissedilebilir. Şimdi, siniri ezmek için yüz siniri gövdesini tanımlayın.

Hassas forsepsle 30 saniye boyunca sabit basınç uygulayarak sıkıştırın. Bu işlem tüm aksonları kesecektir. Ardından sıkıştırma işlemini dik bir açıyla 30 saniye daha tekrarlayın.

Deneyler arasında basıncı tutarlı tutun. İlgili anatomik işaretler belirlendiğine göre, şimdi daha geliştirilmiş cerrahi tekniği göstereceğim. Daha küçük bir insizyon kullanarak, posterior auriküler veni kulaktan kulak çıkıntısının posterior bölgesine kadar dikkatlice takip edin ve çıkıntının 2-3 mm posterioruna dört milimetrelik bir insizyon yapın.

Şimdi doğrudan, spinal aksesuar sinir, kulak kanalı ve digastrik kasın ön karnı şeklindeki üç referans noktasını kullanarak deri altı yağ dokusu ve fasyayı diseke edin. Fasial siniri açığa çıkarın. Fasial sinir gövdesine ulaşmak için siniri stilomastoid foramene doğru geriye doğru takip edin; siniri keseceğiniz noktada ince bir pensle nazikçe sabitleyin ve makasla kesin.

Sinir üzerine çok fazla traksiyon uygulamaktan kaçının, aksi takdirde beyin sapından kopabilir. Ardından, herhangi bir yeniden bağlantının gerçekleşemeyeceğinden emin olarak sinir uçlarını birbirinden ayırın veya sinirin bir segmentini çıkarın. Son olarak, siniri dikkatlice inceleyin ve tamamen kesildiğini onaylayın.

Ekstomi işleminden sonra, tüm yağ ve kas dokularını yaklaşık eski konumlarına getirin. Ardından yarayı 7,5 milimetrelik yara klipsi dikişlerle veya siyanoakrilat yapıştırıcı ile kapatın. Gerekirse bu aşamada analjezikler uygulayın, anesteziyi sonlandırın ve fareyi altlığı olmayan boş bir kafese geri yerleştirin.

Hayvan iyileşirken, yüz felci belirtileri açısından inceleyin; bıyıklar felç olmuş durumdadır. Eğer bıyıklar yanağa doğru geriye açılanmışsa, burun sapmış görünecek ve göz, bir hava püskürtmesine yanıt olarak kırpılmayacaktır. Şimdi, eğer hayvan dişiyse, onu başka bir dişiyle birlikte barındırın.

Ancak göz kırpma fonksiyonu geri dönene kadar erkeği yalnız tutun ve kornea komplikasyonlarını önlemek için her gün oftalmik pomad uygulayın. Bu sırada, cerrahi bölge iyileşene kadar fareyi enfeksiyon veya diğer komplikasyon belirtileri açısından izleyin. Sekiz haftalıkken fasiyal sinir transeksiyonu uygulanan vahşi tip hayvanlarda, ekzotomi sonrası motor nöron kaybında farelerin yaşına ve genetik arka planına bağlı olarak önemli farklılıklar görülmektedir.

Aksonotomi sonrası 28. günde motor nöronların yaklaşık %86'sı hayatta kalır. Amyotrofik lateral sklerozun SOD1 fare modelinin yanı sıra, immün yetmezlikli rekombinasyon aktive edici gen iki nakavt fare lazer yakalama grubunda anlamlı düzeyde daha fazla hücre kaybı gözlemlenmiştir.

Fasiyal motor nükleustan materyal izole etmek için mikrodiseksiyon kullanılmıştır. Fasiyal motor nükleusun tamamı alınabilmiştir. Alternatif olarak, alt nükleuslar ayrı ayrı toplanabilmiştir.

Teknik yüksek hassasiyete sahiptir. Motor nöronlar tek tek yakalanabilir ve analiz için geri kalan nöron kümesi de daha sonra toplanabilir. Ventral medial subnükleus (kesikli çizgi ile gösterilen) ve ventral lateral subnükleus (düz çizgi ile gösterilen) subnükleus örneklerindeki gen ekspresyonunu incelemek için kantitatif PCR kullanılmıştır; sinir rejenerasyon yanıtı ile ilişkili dört genin ekspresyonu ölçülmüştür.

Bunların alt çekirdekleri arasında bazı farklılıklar tespit edilmiştir. Gap 43 ekspresyonu, alt çekirdekler arasındaki en büyük farkı göstermiştir. Bu teknikte uzmanlaşıldığında, cerrahi işlem sadece birkaç dakika içinde tamamlanabilir.

Hayvanın doğru şekilde konumlandırılması, insizyonun doğru yere yapılması ve fasyal siniri bulmak için anatomik referans noktalarının kullanılması önemlidir. Baş ve boyun bölgesinde yönü kaybetmek kolaydır; bu nedenle yönünüzü kaybettiğinizi hissederseniz, kıkırdak kulak kanalını bulun ve fasyal siniri bulmak için onu posteriora doğru takip edin.