Name: Katı Faz Reçine-tabanlı Metodoloji aracılığıyla Asimetrik Ferrosen Türetilmiş Bio-konjuge Sistemleri Sentetik Metodoloji (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Öğrenin katı faz sentezi ile asimetrik ferrosen-biyotin biyokonjugatları üretme yöntemini. Bu teknik, altın yüzeylere immobilizasyon için basit saflaştırma ve yüksek verim sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

KG RA Welch Vakfı hibe P-1760 tarafından desteklenen, Matematik &amp; (KG) Fen Eğitimi TCU Andrews Enstitüsü, TCU Araştırma ve Yaratıcılık Faaliyet Hibe (KG) ve (EHS için) TCU SERC Grant.

Biyotin-Fc-sistein 1. N- (1) <ol><li> Katı faz yöntemleri 1 reçineye bağlı üretmek. <ol><li> Bir fritli şırınga içine biyotin yüklenmiş reçine (250 mg, 0.145 mmol), koyun ve dimetilformamid (5 mi) içine çekilmesi ve 20 dakika süre ile bir laboratuar karıştırıcısı üzerinde şırınga çalkalayarak, reçineyi kabartmak. Çözüm sınırdışı ve bir kez daha şişme dimetilformamid tekrarlayın. </li><li> Çalkalama 10-15 dakika süre ile bir şırınga dimetilformamid içinde% 20 piperidin içinde 6/4 ml ilave etmek suretiyle Fmoc koruyucu grubu kaldırmak. Piperidin başka 4-6 ml korumanın kaldırılması işlemi tekrarlayın. ~, 3x diklorometan 5 ml her biri metanol (1: 1), 3x metanol: diklorometan (1: 1) 3x dimetilformamid sekansı 3x dimetilformamid reçinenin yıkayın. Isıtma üzerine mavi varlığı başarılı korumasının kaldırılması onaylamak için boncuk küçük bir örnekleme (~ 10) üzerinde bir ninhidrin testi (+) yapın. </li><li> 1&#39;-Fmoc-amino-ferrosen-1-karboksilik asit ihtiva eden bir çözelti karıştırın(203,3 mg, 0,4350 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrat (58.8 mg, 0.413 mmol), diisopropil karbodiimid (0,0673 mi, 0.435 mmol), diizopropil etil amin (0,0757 mi, 0.435 mmol) ve 4: diklorometan 1 karışımı Dimetilformamit içine yerleştirilir. Sırlı şırınganın içine bu çizin ve 6 saat süreyle bir laboratuar çalkalayıcı üzerinde yavaşça çalkalayın. Daha sonra şırınga çözüm çıkarmak ve daha önce tarif edildiği gibi yıkama yapılır. </li><li> Kaplin doğrulamak için, yukarıda anlatıldığı gibi (-) ninhidrin testi gerçekleştirir. Ninhidrin testi hala parçasını içeren demir eki elde edilen boncuk portakal rengi rağmen kaplin teyit de yararlı olabilir. </li><li> Sonra dimetilformamid içinde% 20 piperidin ile eklenmesi ile Fmoc grubunun çıkarılması ve yukarıda tarif edildiği gibi yıkanmıştır. Ninhidrin testi (+) Fmoc kaldırma teyit etmek için kullanılmalıdır. </li><li> (0,0673 ml Fmoc-Cys (Trt) oluşan bir çözelti -OH (254,8 mg, 0,4350 mmol), 1-hidroksibenzotriazol hidrat (58.8 mg, 0,4125 mmol), diisopropil karbodiimid hazırlanması, 0,4350mmol), diizopropil etil amin (0,0757 mi, 0,4350 mmol) ve 4: diklorometan ve dimetilformamid 1 karışımı ile gerçekleştirilmektedir. Bu sistein bağlama KOKTEYLİ sırlı şırınga ekleyin ve hafifçe 6 saat çalkalanır. Daha önce tarif edilen protokol kullanılarak yıkanır. </li><li> % 20 piperidin ile yıkama ile, Fmoc bileşeni uzaklaştırılarak elde edilmiş, (-) ninhidrin testi ile bağlanması kontrol edin. Ninhidrin testi (+) kullanarak amin ücretsiz terminali doğrulayın. </li></ol></li><li> Reçineden 1 yarılması. <ol><li> Bir TFA çözeltisi (9.45 mi), su (0.25 mi), 1,2-etanditiol (0.25 mi) ve triizopropil silan (0.1 mi) yapmak şırınga ekleyin ve 4 saat için hafifçe çalkalanır. </li><li> Bir Eppendorf tüpü içinde elde edilen kırmızı-kahverengi bir çözelti toplayın ve yavaş yavaş bir hava akımı kullanılarak TFA buharlaşır. </li><li> Soğuk dietil eter ekleyin (~ 15 mi) Eppendorf tüpüne narin ajitasyon oluşturacak olan, 1 çökeltildi. Santrifüj ile ürünü (1 g, 5 dakika) izole edin. Tdietil eter yıkama (~ 60 ml toplam) ve santrifüj tavuk tekrar çevrimi, kırmızı / kahverengi bir katı olarak 1 elde edildi. </li></ol></li></ol> 2. Karakterizasyonu ve 1 Analizi <ol><li> Kimlik 1 H (16 tarama) ve dötere metanol (300 ul) ve ESI-MS analizi 13 ° C NMR (512 tarama) ile, Şekil 2&#39;de gösterilen bağlantı ve bileşim ile uyumlu olduğunu kontrol edin. Aşağıdaki sonuçlar bekliyoruz: 1H-NMR spektrumu (CD3OD) δ / ppm: 1,407-1,684 (m, 6H), 2.245 (t, 2H), 2,665-3,150 (m, 12H), 4.015 (t, 1 H), 4.104 (d, 2H ), 4,274 (k, 1 H), 4.426 (d, 2H), 4,479 (k, 1 H), 4,595 (t, 1 H) ve 13 ° C NMR spektrum (CD3OD) δ / ppm: 24,644 (CH2), 25,472 (CH2), 28,051 (CH2), 28,300 (CH2), 35,474 (CH2), 38,698 (CH2), 39,241 (CH2), 39,717 (CH2), 55,340 / 55,538 (Co-halka), 60,286 (CıLH), 61,964 (CH), 62,521 / 62,821 (Co-bağ), 66,038 / 66,170 (Co-bağ), 69,153 / 69,328 (Cp-bağ), 71,468 / 71,593 (Co-bağ), 76,466 (CH), 171,770 (C = O), 175,361 (C = O). ESI-MS (m / z): Bulunan: 639.00 [1 + Na] +, teorik: 639,1 [1 + Na] + HR-MS (m / z): Bulunan: 617,2049 [1 + H] +, teorik: 617.1622 [1 + H] +. </li><li> HPLC, izole 1 bileşimini onaylamak için element analizi yapın. Bir C8 ile yürütmek HPLC kromatogramları, 0.5 ml / dk&#39;lık bir akış hızında% 100 MeOH ile ters fazlı kolon. Not: HPLC alıkoyma süreleri: 3,198-4,674 dak. </li></ol> Gold Yüzey üzerinde 1 3. İmmobilizasyonu <ol><li> Kesme polimer 2&#39;de ~ 0.25 kareler halinde altın slaytlar destekli. </li><li> 1 (~ 1 mm) bir DI su çözeltisi ile bir 50 ml beher doldurun. </li><li> Beher altın slayt ekleyin ve bir saat camı ile kaplayın. Tümakış cam slayt, herhangi bir çalkalama ile oda sıcaklığında O / N inkübe edilmesi. </li><li> Çözelti altın slayt çıkarın ve havada kuru izin. </li><li> 1 hareketsiz gözlemlemek için bir tarama elektron mikroskopu (ya da eşdeğeri) kullanılarak, elektron mikroskobu görüntülerini taramak elde edilir. </li></ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

asimetrik ferosen türevlerinin sentezi çözeltisi içinde zordur. Örneğin, çözelti, arzu edilen ürün (% 20 den az) olarak düşük miktarlarda ürün olarak sonuçlanmıştır 1 üretmek için çalışır. Benzer şekilde, 1&#39;-amino-ferrosen karboksilik asit (sans Fmoc) ve reçine bağlı biotini kullanan reaksiyonlar Baristic ark polimerize ürünle tutarlı çözünmeyen bir ürün ile sonuçlanmıştır. ve en az bir ürün. 47 Bu da Ferrocenenin ile komplike ve türevleri ışığa duyarlı olmak ve amino ko...

Biyosensörler seçici analiz için platform olarak biyomoleküler tanıma teknolojisini kullanır ve kendi özgüllüğü, hız ve düşük maliyetli için kullanılan küçük cihazlardır. Biyomoleküllerin tespiti için elektrokimyasal biyosensörler nedeniyle basitlik, maliyet etkinliği ve yüksek hassasiyet bu alanın ön planda bulunmaktadır. Bu sensörlerin 1,3 genel anatomisi ilgi biyolojik marker için spesifik bir tanıma molekülü ile donatılmış bir elektrod olup . Tanıma molekülü tarafından bir biyolojik bağlanması, basit bir ölçümü ile tespit edilebilir potansiyel ya da mevcut yerel bir değişim ile sonuçlanır. Enzimler 4-8 antikorları, 9-12 tüm hücreleri, 13-16 reseptörleri, 17-20 peptidler 21-23 ve DNA 24 ve büyük ölçüde daha büyük, biyolojik moleküller odaklanmıştır değişebilir tanıma parçasını Bugüne kadar. 25-28 Araştırma Bu alanda çalışmalar İmmunosensörler whe üzerinde yoğunlaşmış olmasıbir immünoglobulin bir redoks aktif çekirdeği ile hareketsiz hale getirilmiştir (örneğin ferrosen gibi) ve ilgilenilen bir antikoru belirlemek için kullanılan yeniden. Bu çalışmalar antijen / antikor kullanımından kaynaklanan komplikasyonlar kaynaklanan nedeniyle zayıf hassasiyet ve zaman tüketimi, klinik uygulamalar dışında tutulmuştur. 1,3 Büyüyen dikkat biyomedikal küçük moleküllerin tespit (az 1 kg / mol) odaklanmıştır , gıda ve ulusal güvenliğin yanı sıra çevre faiz. 29 biyosensör cihazların en iyi bilinen örnekleri cep boyutunda amperometik metre bağlanmış ekran baskılı enzim elektrotları sahip self-test glukoz monitörleri vardır. Bu sistemler, tipik haliyle glukoz oksidasyon reaksiyonu tarafından üretilen yükün toplam miktarı, belirli bir süre boyunca ölçülür bir kulometrik bir yöntem kullanmaktadır. Menkul cihazlar, taşınabilir, sağlam ve olmalıdır büyük nüfus için uyduruk faydalanmak için el. Ferroken gibi redoks etiketleri necessa vardırEn biyomarkırlar özünde elektrokimyasal olarak aktif değil gibi ry çözeltide biyomarkerların veya küçük moleküllerin elektrokimyasal algılanmasını sağlamak için. 30-38 Ferrosen elektrokimyasal biyosensörler entegrasyon için mükemmel bir seçimdir elektrokimya için altın standart, bir organometalik moleküldür. Ferrosen-tabanlı redoks aktif türler zaten nedeniyle küçük boyutu, iyi bir istikrar, uygun sentetik erişimi kolay kimyasal modifikasyonu, göreceli Lipofillik ve redoks ayar kolaylığı büyük ilgi topladı. 3,30-42 Küçük moleküller var ferrosen çekirdek dayalı metal iyonları ve küçük moleküller detektör olarak yaygın şekilde kullanılmıştır. Biyomoleküller gibi daha büyük türlerin hedef 32-38,43 sistemleri elektrokimyasal yüzeyine gömülü olan ferrosen türevleri, büyük antikorlara veya immünoglobülin eki kullanmışlardır. 1,3,39 Her durumda, 44, potansiyel ve akım intensiFe III / Fe II redoks çiftinin Ty Böylece analit molekül mevcudiyetine işaret eden, yeni bir spektroskopik sap üretmeden, molekül birleştirme üzerine değiştirilmiştir. Bu değişiklik siklopentadienil halkaları pi-sistem ve demir D-orbitalleri arasında meydana kapsamlı örtüşme kaynaklanmaktadır. Pi-sistem değiştirilirse, yani, derive ya, ardından yörünge etkileşimi olacak, sırayla, değişim tepki gösterdi. Bu, Fe çekirdek etkiler ve demir III / Fe II çift potansiyel bir kayma olarak gözlenebilir. 40,45,46 Bu özellikler, bir elektrokimyasal bağışıklık ya da biyo-sensörün niceleme madde olarak kullanım için bu tür bir sistem cazip hale getirmektedir. Biyosensör kapasiteleri için özel ferrosen ihtiva eden sistemlerin üretilmesi amacıyla, bir hedef molekül için spesifik biyo-reseptörü ile bir Cp halkasının değiştirme ve elektrokimyasal okuma veya elektroda bir molekül halata gibi Cp halkasının kullanılması en uygunudurTrode (Şekil 1). Bu asimetrik ferrosen türevlerinin sentezi yan reaksiyonların ve moleküller arası çapraz bağlanma üzerine oluşan dimerik ve polimerik türlerinin oluşumu sebebi ile zorlanır. 47 Bununla birlikte, bir amid bağı üreten birleştirme kimyası biyolojik bileşenleri gibi ilgili ferrosen basit türevler sağlamak için en kısa yol olduğu peptidler ve bunların metabolitleri gibi. Bu nedenle, ilk olarak peptid sentezi için Merrifield tarafından 1950&#39;li yıllarda geliştirilen bir katı faz teknikleri ferrosen içeren organometalik bileşikler için uygulanabilir. Yer alır dik ikame 1&#39;-Fmoc-amino-ferrosen-1-karboksilik asit molekülünün, bir alıcı parçasını (biyotin), elektrokimyasal okuma (ferrosen) ve hareketsiz kılma-bağlayıcı bileşen (sistein) içeren bir ferrosen sistemi kullanılmasıyla inşa ve burada ayrıntılı olarak. Bu biyo-konjugat sentezi altın yüzeyinde immobilizasyon için kanıtların yanı sıra ele alınmaktadır. Bu çalışma Temsilci VekiliBiotin, ferrosen ve bir altın yüzeye immobilizasyon için bir amino asitten oluşan bir sistemin birinci sunum ts.

<table><tbody><tr><td>Biotin Novatag Reçine</td><td>NovaBiochem</td><td>8550510001</td><td></td></tr><tr><td>TORVIQ 10 ml Luer Lock Fritli Şırınga</td><td>Fisher</td><td>NC9299151</td><td></td></tr><tr><td>piperidin</td><td>Acros</td><td>P/3520/PB05</td><td></td></tr><tr><td>ninhidrin testi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60017-1ea</td><td></td></tr><tr><td>1'-Fmoc-amino-ferrosen-1-karboksilik asit</td><td>Omm Bilimsel</td><td>Özel Sipariş</td><td></td></tr><tr><td>N, N & asal; -Diizopropilkarbodiimid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D125407-5G</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Cys(Trt)-OH</td><td>Novabiochem</td><td>8520080025</td><td></td></tr><tr><td>trifloroasetik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5408</td><td></td></tr><tr><td>1,2-ethanedithiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>2930</td><td></td></tr><tr><td>triizopropil silan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>233781</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf tüpleri (20 ml)</td><td>Herhangi bir kaynak</td><td></td><td></td></tr><tr><td>metanol</td><td>kullanmadan</td><td>önce moleküler eleklerle kurutulan herhangi bir kaynak ve kolay kullanım için 100 ml'lik ortam şişesinde saklayın</td>Diklorometan Kullanmadan önce moleküler eleklerle kurutulan herhangi bir kaynak ve kolay kullanım için 100 ml'lik ortam şişesinde saklayın Dimetilformamid Herhangi Bir Kaynak <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>kullanmadan önce moleküler eleklerle kurutun & Kolay kullanım için 100 ml'lik Ortam Şişesinde saklayın</td></tr><tr>, <td>herhangi bir kaynağı</td><td></td><td></td> <td>santrifüjleyin</td></tr></tbody></table>

katı faz reçine-tabanlı metodoloji aracılığıyla asimetrik ferrosen türetilmiş bio-konjuge sistemleri sentetik metodoloji

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

Erken teşhis çoğu hastalıkların başarılı tedavisi için bir anahtardır, ve birçok kanser türlerinin tanı ve tedavisi için özellikle zorunludur. kullanılan en yaygın teknikler Manyetik Rezonans Görüntüleme (MRG), Pozitron Emisyon Topografi (PET) ve Bilgisayarlı Topografya (BT) gibi görüntüleme yöntemleri ve hastalığın fiziksel yapısını anlamak için en uygun ama sadece bir kez yapılan her dört edilebilir olan görüntüleme ajanları ve genel maliyet kullanımı nedeniyle altı hafta. Zihin, bu tür tedavi protokolleri devrim olur, hastalık ve / veya klinisyenin ofisinde tedavinin etkinliği aşamasına değerlendirmek ve zamanında bunu biyosensörlere gibi teknikler, &quot;bakım noktası&quot; geliştirilmesi. 1. As ile bu biyolojik ilgili moleküllerin 2 tespiti için ferosen tabanlı biyosensörler keşfetmek için bir araç, yöntemler burada tarif edilen ferrosen-biyotin biyo-konjugatlarını üretmek için geliştirilmiştir. Bu rapor, altın yüzey üzerinde immobilize edilebilir bir biyotin-ferrosen-sisteyin sistemi üzerinde durulacaktır.

1 reçineye bağlı bir şekilde, Şekil 2 &#39;de gösterilmiştir. ferrosen bileşeni kovalent bağlanması ile demir emilimini karşı sürekli yıkama ile kalıcı ve kompleks ihtiva eden bir hareketsiz demir göstergesidir reçine boncukları turuncu bir renk tonu meydana getirir bir reçine tanesi PEG bileşeni. 1 reçineden serbest form reçine boncukları renk aynıdır. Reçineden boncuklardan bileşiği çıkarılmasının ardından, yöntem elde edilen saflık ve verimle (% 68), tipik bir çözüm ...

Asimetrik ferrosen türlerinin sentezi, çözüm teknikleri kullanılarak zordur. Bu rapor, katı faz sentezi yoluyla gerçekleştirilen kolay ve temiz reaksiyonlar kullanılarak bir ferrosen-biyotin biyokonjugatı üretmek için gerçekleştirilen yöntemlere odaklanmaktadır. Bir tiolat parçasının dahil edilmesinin, altın yüzeyler üzerinde hareketsizleştirme yeteneği kazandırdığı gösterilmiştir.

Katı Faz Reçine-tabanlı Metodoloji aracılığıyla Asimetrik Ferrosen Türetilmiş Bio-konjuge Sistemleri Sentetik Metodoloji

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, altın yüzeye immobilize edilebilen asimetrik ferne-biotin biyokonjugatları üretmektir. Bu işlem, katı faz reçine üzerinde ferne-biotin biyokonjugatı sentezlenerek gerçekleştirilir. İkinci adım olarak, biyokonjugat reçineden uzaklaştırılır; bu da bileşiğin izolasyonuna ve karakterizasyonuna olanak tanır.Ardından, tiyolatların altınla yapışmasını sağlamak amacıyla biyokonjugat, altın bir yüzey ile inkübe edilir. Sonuçlar, yüksek verim ve saflıkta bir feren biyokonjugatının üretilebileceğini ve ardından altın bir yüzeye immobilize edilebileceğini göstermektedir. Bu tekniğin solüsyon tabanlı yöntemler gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, saflaştırma işleminin basit ve kolay olmasıdır.Çözelti tabanlı yöntemlerle üretilen yan ürünlerden kaçınmanın yanı sıra, bu yöntemin fikri ilk olarak diyabet hastalarını izlemek için kullanılan glikoz sensörlerinin verimliliği ve pratikliği üzerine düşünürken ortaya çıktı. Bu prosedürü, laboratuvarımdan Sean Rodich ve laboratuvarımdaki lisans ve lisansüstü öğrenciler Paulina Gonzalez sırasıyla gerçekleştirecektir. İlk olarak, 250 mg biotin yüklü reçineyi fritli bir şırıngaya yerleştirin.Beş mililitre dimetilformamid çekip şırıngayı laboratuvar sallayıcısında 20 dakika boyunca sallayarak reçineyi şişirin. İşlem bittiğinde çözeltiyi boşaltın ve dimetilformamid ile şişirme işlemini tekrarlayın. Ardından, şırıngaya dört ila altı mililitre dimetilformamid içinde %20 papine ekleyip 10 ila 15 dakika sallayarak FOC koruyucu grubunu kaldırın. Derin koruma sürecini tekrarladıktan sonra; reçineyi sırasıyla dimetilformamid, bire bir dimetilformamid ve metanol, bire bir metanol ve diklorometan ve diklorometan ile üçer kez yıkayın.Çözeltiyi boşalttıktan sonra, ısıtıldığında mavi renk oluşup oluşmadığına bakarak derin korumanın başarılı olduğunu doğrulamak için boncukların küçük bir örneğine hyn testi uygulayın. Ardından; bir primer FM amino farin, bir karboksilik asit, HOBT hidrat, DIC di, izopropil etil amin ve dört bir oranında diklorometan ve dimetilformamid karışımı içeren bir çözelti hazırlayıp karıştırın. Bu çözeltiyi fritli şırıngaya çekin ve bir laboratuvar çalkalayıcıda altı saat boyunca nazikçe çalkalayın.Reçineyi yıkadıktan sonra, kenetlenmenin gerçekleştiğini doğrulamak için daha önce açıklanan şekilde hyran testini gerçekleştirin. Bunu takiben, şırıngadaki reçineye %20'lik dimetilformamid içinde ine ekleyerek FM o grubunu uzaklaştırın ve daha önce yapıldığı şekilde çalkalayarak yıkayın. fmm cyst trit till O-H-O-B-T hidrat, DIC di, izopropil etilamin ve diklorometan ile dimetilformamidin dörtte bir oranındaki karışımından oluşan bir çözelti hazırlayın.Bu sistin kenetlenme kokteylini fritli şırıngaya ekleyin ve altı saat boyunca nazikçe çalkalayın. HYN testi ile kenetlenmeyi doğruladıktan sonra, F MOC bileşenini %20'lik çözelti ile uzaklaştırın. Yıkama işlemi tamamlandığında, serbest terminal amini hidrat testi kullanarak doğrulayın.Bu noktada, trikloroasetik asit, su ve etanol içeren bir çözelti hazırlayın ve ardından izopropil sitrat ekleyin. Daha sonra çözeltiyi şırıngaya aktarın. Dört saat boyunca çalkaladıktan sonra, oluşan kırmızı kahverengi çözeltiyi bir Eppendorf tüpüne toplayın ve hava akımı kullanarak trikloroasetik asidi yavaşça uçurun.Ardından, ürünü çöktürmek için eppendorf tüpüne yaklaşık 15 mililitre soğuk dietil eter ekleyin; ürün, hafifçe çalkalama ile oluşacaktır. Ürünü santrifüj yoluyla izole edin. Daha sonra dietil eterle yıkama ve santrifüjleme döngülerini tekrarlayın.Ferne biotin biyokonjugatı kırmızı kahverengi bir katı olarak elde edilir. Ferne biotin biyokonjugatının kimliği, proton ve karbon NMR spektroskopisi ve E-S-I-M-S analizi kullanılarak doğrulanır. İzole edilen bileşiğin kompozisyonunu doğrulamak için HPLC ve elementel analiz gerçekleştirilir.Ürün tam olarak karakterize edildikten sonra, polimer destekli altın dilimleri yaklaşık 0,25 kare inçlik kareler halinde kesin. Ardından, 50 mililitrelik bir beheri, ferne biotin biyokonjugatının 1 milimolar deiyonize su çözeltisiyle doldurun. Behere altın lamlardan birini ekleyin ve bir saat camı ile kapatın.Slaytın, oda sıcaklığında, karıştırılmadan gece boyunca inkübe edilmesine izin verin. İnkübasyon sonrası, altın slaytı çözeltiden çıkarın ve deiyonize su ile yıkayın. Slayt kuruduktan sonra, immobilize edilmiş ferne biotin biyokonjugatını gözlemlemek için bir taramalı elektron mikroskobu kullanarak taramalı elektron mikroskopisi görüntüleri elde edin.Ferne biotin biyo-konjugat 1'in reçineye bağlı formu burada gösterilmiştir. Ferne bileşeninin kovalent bağlanması, reçine boncuklarına turuncu bir renk verir; bu durum, reçine boncuğunun PEG bileşeni tarafından demir absorbsiyonunun aksine, immobilize edilmiş demir içeren bir komplekse işaret eder. Bileşiğin reçine boncuklarından uzaklaştırılmasının ardından elde edilen saflık ve verim, tipik çözelti metodolojisinden çok daha üstündür.Bu yöntem ustalıkla kavrandığında, doğru şekilde uygulandığı takdirde üç gün içinde tamamlanabilir. Kloroasetik asit ve HF ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın; bu prosedürü gerçekleştirirken kişisel koruyucu ekipman kullanmak ve işlemi çeker ocak içerisinde yapmak gibi önlemler her zaman alınmalıdır.

synthetic-methodology-for-asymmetric-ferrocene-derived-bio-conjugate

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Bir HMBA reçineden Yarılma Prosedürü: "emniyet yakalamak" kullanılarak, bir fonksiyonlandırılmış bis-peptit trimerininkinden verimli bir katı-faz peptid sentezi açıklanmaktadır.

Bir Fonksiyonlu Bis-Peptid Katı Faz Sentezi Metodolojisi &quot;Güvenlik&quot; Catch Kullanımı

Bu protokol, reaktif saflaştırma, reaksiyon koşulları, Bioconjugate saflaştırma ve Bioconjugate karakterizasyonu dahil olmak üzere, bir maleimid proteini ihtiva eden bir sisteinin bioconjugation için gerekli olan önemli adımlar göstermektedir.

Protein Bioconjugatlar sentezi<em&gt; yoluyla</em&gt; Sistein-maleimid Kimya

Önceden belirlenmiş bir metal merkezleri dizisi içeren suda çözünür multimetalik peptit dizilerinin sentezi için potansiyel bir genel yöntem sunulmaktadır.

suda çözünür bir metal-organik kompleks dizi sentezi

Helisel peptidler sülfür hayvan zinciri fotoğraf kaynaklı thiol-KD/thiol-yne hydrothiolation kullanarak thioether/vinil inşası için bir iletişim kuralı mevcut.

Thioether/vinil sülfür-gergin helisel peptidler fotoğraf yolu ile indüklenen Thiol-KD/yne Hydrothiolation oluşturmak

Burada spirocyclic heterocycles sentezi için verimli bir yöntem göstermek için bir iletişim kuralı mevcut. Beş adımlık süreç katı fazlı sentezi ve Michael bağlayıcı stratejileri yeniden kullanır. Genellikle sentezlemek zor, biz spirocyclic moleküller diğer modern yaklaşımlar aksi ulaşılmaz sentezi için özelleştirilebilir bir yöntem mevcut.

Katı faz [4.4] Spirocyclic Oximes sentezi

Bu protokol için biz BAKLA, bir phenyoxadiazolyl metil sulfone tabanlı reaktif yükler site seçici bağlantı için biomolecules, özellikle antikorlar thiols sentezi anlatacağız. Buna ek olarak, biz malzemelerin ve BAKLA taşıyan bifonksiyonel şelatör ve onun konjugasyon bir modeli antikor için anlatacağız.

Sentez ve Site seçici olarak oluşturulması için Thiol reaktif reaktif Bioconjugation Immunoconjugates modifiye

Bir protokol bilgi kodlanmış peptoid oligomers sentezi için ve dinamik kovalent reaktan çiftleri ve Lewis asidik nadir toprak olarak aminler ve aldehitler kullanarak moleküler merdivenler içine bu peptoidlerin dizi yönelimli kendini montaj için sunulmaktadır metal çok rol reaktifler olarak triflates.

Bilgi taşıyan Peptoidlerin sentezi ve Dizi yönelimli Dinamik Kovalent Öz-montaj

Bu protokol, sistein ve metiyonin arasındaki bisalkilasyon yoluyla siklik peptitlerin sentezini ve propargil sülfonyum merkezi tarafından tetiklenen fakil tiol-yne reaksiyonunu sunar.

On-Tether Sülfonyum Merkezi Kullanarak Döngüsel Peptitlerin Oluşturulması

Bu protokol, siklik hücreye nüfuz eden peptitlerin aromatik çapraz bağlarla sentezini ve biyolojik bariyerler boyunca geçirgenliklerinin değerlendirilmesini açıklar.

Biyolojik Bariyerlerin Daha İyi Penetrasyonu için Siklik Hücre Nüfuz Eden Peptitlerin Yapımı

Yüksek basınç safir hücre aparatı baskıların geniş bir yelpazede altında örnekleme, faz davranış olmadan, incelemek için eşsiz bir araçtır. Bir cathetometer kullanarak, çok hassas hacim ölçümleri sıvı genişleme ve faz bileşimini ölçmek için kaydedilebilir. Bu nedenle, bu sentetik yöntem, çok bileşenli karışımların (1) faz denge çalışma ve basıncın bir fonksiyonu olarak, katalizör ya da model bileşiklerinin (2) bölümü davranış sağlar.

CO Faz Dengeleri Ölçümleri için yüksek basınçlı Safir Hücre<sub&gt; 2</sub&gt; / / Organik Su Sistemleri

Öğrenin katı faz sentezi ile asimetrik ferrosen-biyotin biyokonjugatları üretme yöntemini. Bu teknik, altın yüzeylere immobilizasyon için basit saflaştırma ve yüksek verim sağlar.

Katı Faz Reçine-tabanlı Metodoloji aracılığıyla Asimetrik Ferrosen Türetilmiş Bio-konjuge Sistemleri Sentetik Metodoloji

Daha fazla video keşfet