Fotokimyasal Bağlı Posterior İskemik Optik Nöropati Rat Modeli

Bu videonun amacı, 50 yaşın üzerindeki hastalarda posterior iskemik optik nöropatinin fotokimyasal ile indüklenen bir modelini göstermek ve retrograd retinal ganglion hücreleri ile etkilerini değerlendirmektir. İskemik optik nöropati, akut optik nöropatinin en sık görülen tipidir. Bu durum, etkilenen spesifik kan akımının kaynağına ve klinik prezentasyona göre, anterior iskemik optik nöropati veya posterior iskemik optik nöropati olmak üzere iki alt tipten biri olarak ortaya çıkabilir.

Anterior iskemik optik nöropatinin patogenezi kapsamlı bir şekilde çalışılmış olmasına rağmen, posterior iskemik optik nöropati düşük prevalansı, değişken prezentasyonu ve kötü tanımlanmış tanı kriterleri nedeniyle tam olarak anlaşılamamıştır. Ayrıca, anterior veya posterior iskemik optik nöropatiden kaynaklanan görme kaybını etkili bir şekilde önlemek veya tersine çevirmek için hiçbir tedavi kanıtlanmamıştır. Bu nedenle, posterior iskemik optik nöropatinin tekrarlanabilir ve güvenilir bir hayvan modeli, hastalık sürecini in vivo olarak incelemek ve nöroproteksiyon ve akson Rejenerasyonu için yeni terapötik rejimleri test etmek için büyük değer taşır Vazojenik ödem ve tromboz ile sonuçlanan mikrovasküler sisteme kimyasal olarak indüklenen iskemik yaralanma etkili bir şekilde bölgesel doku iskemisi oluşturur.

İskemik hasar komşu bölgelere yayılır ve eşlik eden vazojenik ödem nedeniyle mikrovasküler kompresyon ile daha da şiddetlenir. Posterior iskemik optik nöropatinin neden olduğu hasarı yansıtmak için bu iskemi formunu Bbar optik sinirin direktörü aracılığıyla seçici olarak indükledik. Burada y Wang ve Dale Brown, prosedürün adım adım bir gösterimini sunuyor.

Bildiğimiz kadarıyla, posterior optik sinirde iskemik yaralanma modeli, bu model fiziksel travmadan kaçınırken iskemi ürettiği için geliştirilmiştir. Bu nedenle posterior iskemik optik nöropatinin fizyolojik süreçleri daha iyi taklit edilebilir. Bu videoda, posterior optik sinir eryri arısının cerrahi maruziyetini takiben posterior iskemik optik nöropati rep modelimizin tüm prosedürünü göstereceğiz.

Foto hassaslaştırıcı bir boya intravenöz olarak enjekte edilir ve bir lazer ışını optik sinir yüzeyine odaklanır. I radyasyonu sırasında eryri B ve lazer arasındaki fotokimyasal etkileşim, vasküler endotelyuma zarar verir ve trombosit trombozu ve aous kompresyonunun aracılık ettiği mikrovasküler oklüzyona neden olur. Ortaya çıkan iskemik hasar, aksonal girdi kaybı, uzak yaralanmanın neden olduğu ve klinik olarak anlamlı sonuç nedeniyle kademeli fakat belirgin bir retinal ganglion hücresi ölümüne neden olur.

532 nanometre ve 300 miliwatt maksimum güçte çalışan YA lazer. Sırada, ortalama gücü tepe gücünün% 7,5'ine düşürmek için kullanılan 250 hertz'de çalışan bir ışın kıyıcı var. Kapatıldığında zayıf bir hedefleme ışını üretmek için içine 100 mikron çapında küçük bir delik açılmış normalde ENC kapalı huzmeli bir panjurumuz var.

Sırada, 25 santimetre odak uzaklığına sahip bir plano dışbükey lens ve son olarak, ışını optik sinire aşağı doğru yönlendirmek için kırmızı açılı bir prizma var. Kaynağından çıktıktan sonra, lazer ışını kıyıcıdan geçer ve ortalama gücü tepe noktasının %7,5'ine düşürür. Doğrama ışını daha sonra deklanşör tarafından yakalanır, bu da kapatıldığında ışını 100 mikron çapındaki delikten uzamsal olarak filtreleyerek çok zayıf bir hedefleme ışını üretir.

Bu zayıf ışın daha sonra lens tarafından odaklanır ve doğru açıyla aşağı doğru yeniden yönlendirilir. Açıkta kalan posterior optik sinir I üzerine prizma Radyasyon, bir güvenlik filtresinin bir ameliyat mikroskobunun optik yoluna geçirilmesiyle başlatılır ve ardından bir saniyelik gecikmeden sonra ışın deklanşörü açılır. Bu noktada, tam güç doğrama ışını, açıkta kalan optik sinire odaklanır ve aşağı doğru yönlendirilir.

Kan dolaşımında çözünen ışın ve etin arısı arasındaki bir etkileşim üzerine, 5 32 nanometre yeşil lazer ışığı, dolaşımdaki ery tarafından verimli bir şekilde emilir ve B boyası ve floresan, üçlü hal boya molekülü ile çarpışan sarı moleküler oksijendir, uyarılma enerjisinin singlet hal oksijeni haline geldiğini kabul eder, bu oldukça reaktiftir. BT oksijeni daha sonra doğrudan vasküler endotelyumu okside eder ve özellikle trombositleri çeken ve ayrıca plazmanın parankime sızmasını kolaylaştıran bariyerde noktasal hasara neden olur. Bu nedenle bu hasar süreci tromboz ile damar tıkanıklığına ve mikrovasküler basıya bağlı vazojenik ödemlere yol açar, merdiven lezyonun lazer ışığının penetrasyon derinliğinin ötesine genişlemesine neden olur.

Teknik doğru yapılırsa, trombosit trombini lif içermeyecektir. Böylece, bu yöntemi çok daha az verimli ısıya bağlı ayak pıhtılaşma işleminde ayırt eder. Yüksek tepe gücünün çalışması, yanardöner optik sinire etkili penetrasyon derinliğini artırırken, ışın yoluyla ortalama gücü %7,5'e düşürür.

Doğrama, kokteyl içinde ketamin Diaz'ın intraperitoneal enjeksiyonu ile Anestezi uygulanmış sıçanlarımızda termal değil, bir ayak kimyasal işleminin Doku yaralanmasına neden olmasını sağlamaya yardımcı olur. Anestezi uygulandıktan sonra, asfiksiyi önlemek için bir dili nazikçe öne koyun, cerrahi bölgeleri tıraş edin ve ameliyat sırasında korneanın çekilmesini önlemek için her iki göze de çoğaltma, büyütme uygulayın. Hayvanın ameliyat sırasında ağrı hissetmeyeceğinden emin olmak için anestezi adımlarını değerlendirin.

Femoral venin kateterizasyonu ile başlayın. Cerrahi prosedürlerden önce, önceden ölçülmüş% 2 eryri B çözeltisi içeren bir ML şırıngaya sterilize edilmiş ve tuzlu suyla yıkanmış bir boru uzunluğu takın. Vücut ağırlığının kilogramı başına 20 miligramlık bir dozda, şırıngayı dakikada 600 mikrolitre hıza ayarlanmış bir infüzyon pompasına monte edin.

Alanı %10 povidon iyot ve ardından %70 etanol ile silerek ameliyat bölgesini temizleyin. 15 numara bıçak kullanarak sağ uyluğun tabanında bir kesi yapın. Zarı makasla kesin ve yayın ve femoral venin dalı görünene kadar kası forseps ile ayırın.

Damarı gerektiği gibi çevre dokulardan ayırmak için gerektiği kadar makas ve forseps ile aşağı doğru diseksiyona devam edin. Damarın görüntülenmesini kolaylaştırmak için cerrahi alanı soğuk steril BSS ile temizleyin. Damarı, arteri ve siniri çevreleyen kılıfı alttaki dokudan dikkatlice ayırın.

Daha sonra damarı yanları boyunca künt diseksiyon ile izole edin. Damarı dikkatlice yükselterek, altına ince uçlu forsepsler yerleştirerek ve onları tutup çekerek damar altına iki iğne listesi naylon dikiş geçirin. Distal veni sıkıca bağlayın ve proksimal venin etrafında gevşek bir düğüm atın.

Distal ligasyonun yakınında damarın kısmi bir kesimini yapın ve gerektiği gibi genişletin Forseps damar duvarını kesikte tutarken, salin yıkama hortumunu dikkatlice damara yerleştirin. Ardından borunun etrafındaki gevşek proksimal düğümü sıkın. Boruyu distal dikişe bağlayarak yerine sabitleyin.

Kateterizasyonun kalitesini kontrol ettikten ve tıkanıklık veya sızıntı olmadığından emin olduktan sonra, kateterizasyonu ve dokuyu korumak için kesiyi dikişlerle geçici olarak kapatın. Ameliyat bölgesini %10 Poon iyot deterjan solüsyonu ve %70 etanol ile hazırlayın. 15 numara bıçakla gözün arkasındaki cilt boyunca bir kesi yapın, ardından Venedik burkulma makası kullanarak bağ dokusunu kesin.

Optik kemiğin üst raybası boyunca bağ dokusu boyunca diseksiyona devam edin. Yerel kan damarlarını bozmamaya dikkat edin. Diseksiyon Üst rektus kası görüntülenene kadar optik dokudan geçirin.

Optik sinir aşağıda yer alır. Deri flebini ve bağ dokusunu yanal ve aşağı doğru geri çeker. Göz öne ve dışa doğru dönecektir.

Dikkatlice bir çift keskin forseps yerleştirin ve açığa çıkarmak için sinire paralel olarak genişletin. Lazer ışınlaması sırasında onu besleyen mikro damar ağı hedef alınacaktır. Kendinizi lazer ışığından korumak için lazer ışınlama cihazını çalıştırırken her zaman turuncu renkli koruyucu gözlük taktığınızdan emin olun.

Lazere güç verin ve tepe ve ortalama güçleri birkaç dakika ayarlayın. Tüm ışınlama işlemlerinden önce. Hayvanı nazikçe cihazın üzerine yerleştirin ve nişan alma ışını optik sinirin maruz kaldığı yerin yakınında parlayacak şekilde konumlandırın.

Daha sonra optik sinirin uzunluğunu ince uçlu forseps ile dikkatlice yeniden ortaya çıkarın. Konumlandırmada küçük ayarlamalar yapın, böylece hedefleme ışını, optik sinir başının üç ila dört milimetre arkasındaki optik sinire çarpar. İnfüzyon pompasının aktivasyonu yoluyla% 2 reçine B çözeltisini enjekte edin ve bu süre zarfında optik sinirin yüzeyini nemlendirmek için küçük bir BSS damlasında birkaç saniye dolaşmasına izin verin.

Hedefleme ışınının konumunu doğruladıktan sonra, ayak pedalı kontrollü güvenlik filtresini başlatın ve ardından lazer ışınlaması yapın ve 90 saniye boyunca ışınlayın. Filtreden turuncu olarak görünen sarı floresans, sinirin üst yüzeyinden gözlenmeli ve floresans, optik sinir boyunca üniform hale getirilmelidir. Sıçanın hafif konum ayarlamalarıyla, güvenlik filtresi ışınlamanın ardından otomatik olarak açılacaktır.

Bazı durumlarda, mikro kanama görülebilir, ekstra oküler kaslar üzerindeki çekişi hafifletir, gözü nötral pozisyona getirir ve kesiyi kesintili dikişlerle kapatır. Femoral ven kateterizasyonunu tutan dikişleri kesin ve tüpü dikkatlice geri çekin. Sızıntıyı önlemek için proksimal femoral veni sıkıca bağlayın ve kesiyi kesintili dikişlerle kapatın.

Her iki insizyona da antibiyotik merhem sürün ve fundusu merkezi retinal ven ve arterin vasküler bütünlüğü açısından kontrol edin. Hayvanı iyileşme için temiz, ısıtılmış bir kafese geri koyun, cerrahi sonrası analjezikler uygulayın ve hayvana bakın. Kurumsal hayvan bakımı yönergelerine uymak.

Kesi yerinin temiz ve enfeksiyonsuz olduğundan emin olmak için ameliyat sonrası hayvanı sık sık inceleyin, ağrıyı değerlendirin ve yeterli ağrı kesici ilaç sağlayın ve uygun beslenme ve diğer davranışları izleyin. Retinal düz ayların konfokal görüntülemesi, kontrol hayvanlarına kıyasla retro lipin alevlenme kullanılarak posterior iskemik optik nöropati indüksiyonundan sonra retinal oyun hücrelerinin sağkalımını ölçmek için kullanılabilir. PI bir indüksiyonundan iki hafta sonra hayvanlarda önemli ölçüde daha az çiçek keçisi hücresi bulunur.

Sahte hayvanların kontrolünde retinal ganglion hücrelerinin sayısı arasında anlamlı bir fark gözlenmemiştir. Bu, retinal çete hücre kaybının, tek başına Lazerden gelen termal enerjiden ziyade bir B ve lazer ışınlaması kombinasyonu ile ortaya çıktığını gösterir. İşlemin en kritik kısmı, optik sinirin açığa çıkması ve ışınlanmasıdır.

Köpekbalığı ince uçlu forseps veya germe ile sinirin zarar görmesini önlemek için dikkatli diseksiyon gereklidir Oftalmik arterde. Optik sinir başından yaklaşık bir milimetre uzakta optik sinire girin. Optik sinir başından üç ila dört milimetre uzakta radyasyon, iskemiyi arterler ve iç retinayı besleyen dallarından herhangi biri yerine siniri besleyen kılcal damar desteğiyle sınırlamak için önemliyse, prosedürü takiben merkezi retinal arter ve venin vasküler bütünlüğünü sağlamak için endoskopik inceleme gereklidir: Lazer radyasyonu için önceden ayarlanmış parametrelerle.

Bu model, pik yoğunluk ve ışınlama süresi iskemik hasarın iki belirleyicisi olduğundan, tekrarlanabilir bir hücre ölümü zaman seyrine sahiptir. Bu parametrelerin şiddet modifikasyonu, farklı çalışma amaçları için retinal ganglio hücre hasarının sonucunun şiddetini ayarlamak için yapılabilir Daha fazla optimizasyon ile. Bu model, posterior iskemik optik nöropatinin patogenezi ve moleküler değişiklikleri üzerine araştırmalar için yeni bir platform sağlar ve bu ve diğer merkezi sinir sistemi iskemik hastalıkları için tedavi ilaçlarını taramak için kullanılabilir.