Embriyone Tavuk Yumurta Grip Virüsü Yayılım

Bu prosedürün genel amacı, uygun maliyetli bir sistemde büyük miktarlarda yüksek titreli bir influenza virüsü üretmektir. Bu, önce serum patojen içermeyen, taze döllenmiş tavuk yumurtası elde edilerek gerçekleştirilir. İkinci adımda, yumurtalar Alan Toic kökü yoluyla influenza virüsü ile enfekte edilir.

48 saat boyunca, virüsü içeren Alan Toic sıvısı daha sonra toplanır ve virüs sıvı nitrojen içinde dondurulur. Sonuç olarak, toplanan Alan Toic'in virüs titresinin etkisini belirlemek için plak ve hemaglutinin testleri yapılabilir. Bu yöntemin Akışkan Görsel gösterimi, hasat aşamaları çok hassas olduğundan ve yumurtaların dikkatli bir şekilde ele alınmasını ve anatomilerinin iyi bir şekilde bilinmesini gerektirdiğinden kritik

Prosedüre başlamadan önce uygun bir satıcıdan serum patojen içermeyen, taze döllenmiş davian yumurtaları elde edildi. Varıştan hemen sonra, yumurtaları 10 ila 11 gün boyunca 37 santigrat derecede ve %55 ila 60 nemde düzenli olarak döndürmek için otomatik yumurta çevirici ile nemlendirilmiş bir yumurta kuluçka makinesine koyun. Yedi ila sekiz günlük inkübasyondan sonra,% 70 etanol dezenfekte edilmiş eldiven giyin.

Bir yumurta mumunu etanol ile silin ve yumurtaları kuluçka makinesinden boş yumurta kartonlarına aktarın. Ardından ışıkları kapatın ve yumurtaların büyük ucunu birer birer Candler'a karşı tutun. Bir yumurta verimliyse, fasulye şeklindeki bir embriyoya yol açan ince kan damarları açıkça görülebilmelidir.

Yumurta döllenmemişse, görünür bir yumurta sarısı olan küçük bir kan lekesi gözlenecektir. Daha sonra döllenmemiş yumurtaları atın ve canlı olanı kuluçka makinesine geri koyun. Bir yumurtanın durumu doğrulanamazsa, döllenmeden sonraki 10. veya 11. günde daha sonraki gözlem için işaretleyin ve kullanımdan hemen önce, bir influenza A virüsü stoğunu hippilerle takviye edilmiş steril PBS'de mililitre başına 10 ila üçüncü ila 10 ila dördüncü PFU'ya seyreltin ve buzun üzerine yerleştirin.

Daha sonra her yumurtayı tekrar mumlayın ve ölü hareketsiz embriyoları ortadan kaldırın. Ardından, kuluçka makinesinden üç yumurtayı çıkarın ve ayrı bir tutucuya yerleştirin. Hava torbaları yukarıdayken, yumurtaların hava sahasını kalıcı bir işaretleyici ile işaretleyin.

Daha sonra hava sahasının üzerindeki alanı %70 etanol ile yıkayın ve yumurta hava sahasını A BSL iki biyogüvenlik başlığı içindeki bir yumurta kartonuna aktarın. Şimdi her bir yumurtanın hava torbası üzerindeki kabukta küçük bir delik açmak için steril bir 18 gauge iğne kullanın. Embriyoyu veya yumurta sarısını bıçaklamaktan kaçınmak için iğneyi çok derine sokmamaya dikkat edin.

Daha sonra seyreltilmiş influenza virüsünü steril bir mililitrelik şırıngaya çekin. 22 gauge bir iğne takın ve iğneyi 45 derecelik bir açıyla ilk yumurtanın Alan Toic boşluğuna dikkatlice ilerletin. Seyreltilmiş virüsün 0.2 mililitresini yumurtaya enjekte edin ve ardından diğer iki yumurtayı enjekte ettikten sonra, şırıngayı atın ve her deliği bir tutkal tabancasından bir damla tutkalla iğne ile kapatın.

Tutkalın bakımı yumurtanın içine sızmaz ve ardından yumurtaları tekrar kuluçka makinesine yerleştirin. Tüm yumurtalar aşılandıktan sonra, enfekte yumurtaları en uygun kuluçka süresi için çevirmeden 37 santigrat derecede ve% 60 nemde kuluçkaya yatırın. İnfluenza virüsü tipine bağlı olarak.

Kuluçka süresinin sonunda, embriyoyu öldürmek ve kan damarlarını daraltmak için yumurtaları dört santigrat derecede en az dört saat soğutun. Yumurtalar yeterince soğuduğunda. Bunları bir biyogüvenlik başlığına ve sağlam bir tutucuya aktarın ve yumurta yüzeylerini %70 etanol ile temizleyin.

Ardından, ilk yumurtanın hava torbasının üzerindeki yumurta kabuğunu açmak için steril makas kullanın. Hava torbasının etrafındaki kabuğu çıkarın. Chorio Alan Toic zarına zarar vermemeye dikkat edin.

Daha sonra chorio Alan Toic zarını açmak için steril künt forseps kullanın ve yumurta sarısını yırtmamaya dikkat ederek embriyoyu ve yumurta sarısı torbasını küçük bir spatula veya kaşıkla nazikçe kenara çekin. Daha sonra, bir mililitrelik bir einor pipeti kullanarak, Alan Toic sıvısını dikkatlice toplayın ve gerektiği kadar fazla sıvı toplamak için yumurtayı yana doğru eğin. Her yumurta hasat edilirken her yumurta beş ila 10 mililitre hafif sarımsı sıvı vermelidir.

Alan Toic sıvısını 50 mililitrelik plastik konik tüplerde buz üzerinde toplayın. Tüm sıvı toplandığında, virüsü aşağı doğru döndürün ve berrak sıvıyı buz üzerinde 50 mililitrelik yeni bir tüpe aktarın. Son olarak, yumurtaları bir BSL iki atık kabına atın ve hemen arıtılmış LAN toik sıvısına Eloqua'ya atın.

Daha sonra çırpın, virüsü sıvı nitrojen içinde dondurun ve donmuş sapları eksi 80 santigrat derece dondurucuya koyun. Uzun süreli depolama için, influenza virüsü enfeksiyonu, tek bir hücre tabakası üzerinde oluşan dairesel bağcıklı hücre bölgeleri veya plaklarla sonuçlanan sitopatik bir etkiye neden olur. Bu deneyde, hücreler kristal viyole ile boyanarak plaklar görüntülenmiş ve hücreler üzerinde 500 mikrolitre seyreltilmiş viral stok olduğu için virüsün bir kere 10 üzeri negatif 12 seyreltilmesi ile kuyuda 65 plak sayılmıştır.

Bu deneyde, son titre mililitre başına 1.3 kez 10 ila 14. PFU idi. Hemaglutinin ulus testi, virüsün kırmızı kan hücrelerinin yüzeyine yapışma yeteneğine dayanan influenza virüsünü titre etmek için bir yöntemdir. Gözlendiği gibi, viral süspansiyon kırmızı kan hücrelerini aglütine eder ve kırmızı kan hücrelerinin süspansiyondan çıkmasını önler.

50 mikrolitrede iki ila eksi 10'uncu virüs seyreltmesi ile açıkça negatif bir sonuç gözlendi. Bu nedenle, son titre mililitre başına 2,1 kez 10 ila dördüncü HAU'dur. Bu videoyu izledikten sonra, tavuk yumurtalarını aşılayarak ve virüsü içeren Atlantik sıvısını toplayarak grip virüsünün nasıl yayılacağını iyi anlamış olmalısınız.