Name: Bir Balık-besleme Laboratuvar biyodeneyinde Deniz Organizmaların Dokular Sekonder Metabolitlerin Antipredatory Aktivite değerlendirmek için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 3 s
Description: Öğrenin, deniz organizmalarının dokularından sekonder metabolitlerin antipredatory aktivitesini değerlendirmek için balık-besleme biyodeneyi yöntemini. Bu yaklaşım, kimyasal savunmaların ekolojik rollerini deneysel kanıtlarla ortaya koyar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu videonun çekimi ve kurgusundaki yardımları için James Maeda ve Aaron Cooke'a teşekkür ederiz. Finansman, Ulusal Bilim Vakfı (OCE-0550468, 1029515) tarafından sağlandı.

NOT: Bu protokolün 3. Adım omurgalı hayvan denekleri içerir. Prosedür hayvanlar mümkün olan en insancıl tedavi böylece dizayn edilmiştir ve Kuzey Carolina Wilmington Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 1) Doku Ekstraksiyon <ol><li> Bu ikincil metabolitlerin hacimsel konsantrasyonunu değiştirecek gibi hidrasyon ve sıkılmış, kurutulmuş-out veya aşırı ıslak doğal haliyle olduğu doku kullanın. Kesilmiş veya 50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpü içine sokulabilir parçaları veya dilimleri için doku kıyılır. Not: Taze doku bazı durumlarda kullanılabilir, ancak, cut sıkma tabi değildir dondurulmuş doku, kesme veya kesmek için, genellikle daha iyidir. </li><li> Bir 1 30 ml doku parçaları ekleyin: 40 ml&#39;lik bir son hacme kadar dereceli bir santrifüj tüpüne 1 diklorometan (DKM) ve metanol (MeOH) ulaşılır. Transfer ile ilgili tüm adımları doğru yaptığınızdan emin olunYeterli havalandırma ile bir davlumbaz içinde solvent. </li><li> Tüp kap ve bunu birkaç kez ters, sonra 4 saat çıkarma döneminde art arda çalkalayın. Not: Bu süre içinde, su, MeOH ile birleştirilir ve elde edilen MeOH: su fazı DCM fazı ayrılır. doku alternatif olarak DCM ile MeOH maruz: su bir emülsiyon halinde tüpleri çalkalanır gibidir. </li><li> Yuvarlak tabanlı bir şişeye DCM özü aktarın ve düşük bir ısı kullanılarak bir döner buharlaştırıcı üzerinde kuruluğa kadar buharlaşmasına (&lt;40 ° C). En az bir çözücü kullanılarak, bir 20 mL sintilasyon şişesine kurutularak özü aktarın. Bir döner buharlaştırıcı adaptörü ile şişe yerleştirin ve daha düşük bir ısı kullanılarak bir döner buharlaştırıcı üzerinde kuruluğa kadar buharlaşmasına (&lt;40 ° C). Not: (1) somun (2) yıkayıcı ve (3) palamut somun: Bir sonraki adım, bir dişli çubuğun ucuna sırayla aşağıdaki öğeleri vidalanarak monte edilebilir bir ev yapımı sıkıştırma aracının kullanılmasını gerektirmektedir. yıkayıcı ya delikli olmalı veyabir 50 ml santrifüj tüpüne iç çapından daha küçük olacak şekilde donatılmış olabilir. </li><li> Doku ve MeOH içeren mezun santrifüj tüpüne dönersek: Su özü, sıkıştırma yoluyla doku dışarı çıkarma orta sıkmak. MeOH transfer: Aynı yuvarlak dipli bir şişeye su ekstraktı ve soğutulmuş depolamak (&lt;10 ° C). </li><li> Su ekstraktı: daha sonra, yeni MeOH MeOH ihtiva eden soğutulmuş yuvarlak dipli bir şişeye özü transferi, hemen susuz doku 2-6 saat bir süre için bir ikinci çıkarma için batık kadar dereceli santrifüj tüpüne MeOH ekleyin. Doku tam ekstre edilmediğini herhangi bir endişe varsa, 2 saat 6 MeOH çıkarma tekrarlayın. </li><li> Düşük bir ısı kullanılarak bir döner buharlaştırıcı üzerinde MeOH kurutun (&lt;40 ° C). Yuvarlak tabanlı bir şişeye yıkamak için MeOH, minimal hacim ile yıkandı, kurutuldu polar olmayan özü ihtiva eden sintilasyon şişesine yuvarlak dipli bir şişede kalan Sulu ekstraktı aktarın. </li><li> Ebir vakum yoğunlaştırıcısı düşük ısı (&lt;40 ° C) kullanılarak kuruyana dek Sulu ekstraktı Vaporate. sintilasyon şişesi hemen doku içinde 10 ml toplam kuru ham organik özü içerir. , Oksidasyonunu önlemek için N2 gazı ile şişenin üst boşluğunu tahliye sıkı bir şekilde yapışması ve depolamak dondurulmuş (-20 ° C). </li></ol> 2) Gıda Hazırlama <ol><li> Dondurularak kurutulmuş kalamar manto tozu hazırlayın. Not: Squid manto diğer bentik omurgasız ile karşılaştırılabilir, ve 2.2 aşağıdaki alt-etapları bir terkip maddesi olarak kullanılacak olan bir beslenme kaynağı içerir. <ol><li> Sıcak deiyonize (DI) su kalamar mantonun çözülme dondurulmuş halkaları, daha sonra yüksek hızlı karıştırıcı onları püresi. </li><li> Sığ çerez levha ve dondurularak (-20 ° C) üzerine püre kalamar manto ince bir tabaka dökün, daha sonra küçük parçalar halinde liyofilize edilecek dondurulmuş kalamar püresi sayfasını kırmak. </li><li> Fr işletim prosedürleri takip dondurulmuş kalamar manto püresi lyophilizeeeze-kurutucu. </li><li> Bir toz oluşturmak üzere yüksek hızlı bir karıştırıcı içinde kalamar manto püresi liyofilize parçaları toz haline. </li><li> Bir çeker ocak içinde, bir döner un elek toz halinde kalamar manto dökün ve ince ebatlı tozun bir doku büyük boyutta ayrı eleyin. </li><li> Bir yapışmalı kaba ince toz kalamar manto aktarın. Oksitlenmesini önlemek ve dondurulmuş depolama N2 gazı ile kap üst boşluğunu tahliye (-20 ° C). </li></ol></li><li> Gıda karışımı hazırlayın. Not: Gerekirse birden fazla ardışık deneyleri çalıştırırken, o ~ gıda karışımı 100 ml hazırlamak için pratik, ancak bu tarifi daha küçük birimlere ölçekli olabilir. <ol><li> 150 ml&#39;lik bir cam kap içinde, 3 g alginik asit ve Dİ su, 100 ml 5 g dondurulup kurutulmuş kalamar manto bir toz karışımını bir araya getirin. Toz tamamen hidratlanmış ve karışım homojen olana kadar bir kaç dakika için bir microspatula ile kuvvetli bir şekilde karıştırın. Arzu edildiği takdirde, gıda boyası bu st ilave edilebilir: Notep: daha ziyade ekleyerek özü ile tedavi edilen karışımın rengi maç çalışırken daha (özü ile tedavi edilen karışımda özü doğal pigment maskeleme) hem tedavi ve kontrol karışımları üretecek gıda karışıma boya eklemek için kolay Kontrol karışımına boya. Yeşilimtırak veya kahverengimsi gıda boyası ham ekstre herhangi bir pigment maskelemek için genellikle arzu edilir. </li><li> Bir dereceli enjektöre gıda karışımı tam 10 ml yükleyin. Bu işlem sırasında hava kabarcıklarının oluşumunu önlemek için dikkat edin. </li><li> Dondurucu kuru ham organik ekstre 20 ml sintilasyon flakonu çıkarın. Bir damla ekleme veya MeOH iki, daha sonra bir microspatula homojen bir karışım halinde özü karıştırın. </li><li> 20 mi sintilasyon şişesine içine gıda matris yüklenen 10 ml şırınga çıkarma ve ekstre ile muamele edilmiş gıda karışımı homojenleştirmek için bir microspatula ile karıştırın. R, sonra bu küçük artışlarla (yani şırıngayı çıkarmak için yardımcı olabilir 2 ml çıkarmak ve homojenize:. Not10 ml kadar EPEAT) homojenize edilmiştir. </li></ol></li><li> Tahlil pelet hazırlayın. <ol><li> Bir şırınga içine ekstre karışımı (~ 1 mi) içindeki bir çok küçük bir hacim yük ve 0.25 M CaCI2 çözeltisi içinde bir şırınga ucunu daldırın. Uzun, spagetti benzeri lifi oluşturmak üzere şırınga içeriğini çıkarın. </li><li> Birkaç dakika sonra, daha sonra, bir jilet ile bir cam kesme tahtası üzerinde 4 mm uzunluğunda pelet içine doğrayın, sertleştirilmiş iplikçik kaldırmak deniz suyu ile durulayın. </li><li> Tekrar kontrol pelet yapma doku özü dahil edilmeden 2.3.1 ve 2.3.2 adımları. Çözücü, eşdeğer hacimde kontrol pelet tedavisi için emin olun çözücü ilave kontrol etmek için (adım 2.2.3 tedavi karışımına MeOH ilave bakınız). Negatif kontrol, bu deney, balık besleme vazgeçirtecek teyid 2 mg ml bir konsantrasyonda denatonyum benzoat ilave -1 işlenmemiş gıda karışımına 27 isteniyorsa. </li></ol></li></ol> 3) LezzetBiyoanalizler <ol><li> Vahşi yakalanmış sarı-fazlı bluehead wrasse, Thalassoma bifasciatum ile beslenme deneyleri gerçekleştirmek, laboratuvar akvaryumlarda opak taraflı bölümlerinde üçlü gruplar halinde tutulur. </li><li> Bir lastik ampul ile bir cam pipet kullanarak deniz suyu bir bardağa gıda pelet sunun. Not: Bu şekilde yiyecek almak için balık yetiştirmek için birkaç gün sürebilir. Gıda teslim önündeki bir klima uyaran (akvaryum camına pipet gibi birkaç musluklar) gıda pelet eklenmesini beklemek balık yetiştirmek için yararlı olabilir. </li><li> Pelet Puanlama. Kolayca balık tarafından tüketilen eğer bir pelet kabul düşünün. Onların ağız boşluğuna almak için bir veya daha fazla balık üç girişimleri en az sonra yenen değilse bir pelet reddetti düşünün, pelet yaklaştı ve böyle bir denemeden sonra göz ardı edilir ya da eğer. </li><li> Skor örnekleri. Not: Tahlil prosedürü Şekil 1&#39;de bir akış şeması olarak tasvir edilir yemek reddediyorum balık Grupları.protokolünde herhangi bir aşamada kontrol pelet daha kabul edilmez. Tahlil tek bir vadede iki potansiyel sonuçları vardır: Örnek kabul veya red edilir ya. <ol><li> Balık grubu kooperatif olduğunu doğrulamak için bir kontrol pelet ile başlayın. Tedavi edilen bir pelet teklif. Balık tedavi pelet kabul ederseniz kabul edilen, örnek puan. Balık tedavi pelet reddederseniz, balık besleme durdurdu olup olmadığını belirlemek için bir sonraki kontrol pelet sunuyoruz. Balık sonraki kontrol pelet kabul ederseniz reddedilmiş gibi, örnek puan. </li></ol></li><li> Çoğaltma. Her ekstresi için balık on bağımsız gruplar ile tahlil işlemi tekrarlayın. </li></ol> 4) değerlendirilmesi Önemi <ol><li> Fisher testi 26 değiştirilmiş bir versiyonu ile tedavi pelet vs kontrol tüketimi farklılıkların önemini değerlendirir. Kontrolü için marjinal toplamları ve tedavi pelet sabit böylece testi değiştirinOnlara hem de rastgele örnekler tedavi. Not: Bu p = 0.057 sağlar 7 pelet yemiş zaman; 7 veya daha fazla pelet yenir eğer dolayısıyla, herhangi bir özü 6 veya daha az pelet yenir eğer caydırıcı kabul ve lezzetli olduğunu. </li><li> Ekstrelerinin gruplar arasında nispi lezzetini karşılaştırmak için, her grup içinde yenen pelet ortalama sayısını hesaplamak. Pelet ortalama sayısı + yenirse o kadar çoğaltmak özler bir grup caydırıcı olarak kabul edilir 6 pelet eşiği tutun standart hata (SE) ≤6. Not: temsilcisi sonuçları, grup atama türdür, yani çoğaltmak özler farklı bireylerden gelen ve göreli lezzet türler arasında karşılaştırılabilir. </li></ol>

<ol><li>Paul, V. J., ed, <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaul%2C+VJ+%22Ecological+roles+of+marine+natural+products%22">Ecological roles of marine natural products</a>. , Comstock Publishing. Associates: Ithaca, N.Y. (1992).</li>
<li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marine+invertebrate+chemical+defenses%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Marine invertebrate chemical defenses.</a> Chemical Reviews. 93 (5), 1911(1993).</li>
<li>Hay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marine+chemical+ecology%3A+what%27s+known+and+what%27s+next%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Marine+Biology+and+Ecology%22%5BJournal%5D)">Marine chemical ecology: what's known and what's next.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 44 (5), 476-476 (1996).</li>
<li>McClintock, J. B., Baker, B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcClintock%2C+JB+%22Marine+Chemical+Ecology%22">Marine Chemical Ecology</a>. , CRC Press. Boca Raton, Fla. (2001).</li>
<li>Amsler, C. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAmsler%2C+CD+%22Algal+Chemical+Ecology%22">Algal Chemical Ecology</a>. , Springer. New York. (2008).</li>
<li>Hay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marine+chemical+ecology%3A+Chemical+signals+and+cues+structure+marine+populations%2C+communities%2C+and+ecosystems%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Marine+Science%22%5BJournal%5D)">Marine chemical ecology: Chemical signals and cues structure marine populations, communities, and ecosystems.</a> Annual Review of Marine Science. 1, 193-212 (2009).</li>
<li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemical+ecology+of+sponges+on+Caribbean+reefs%3A+Natural+products+shape+natural+systems%5BTitle%5D)+AND+%22BioScience%22%5BJournal%5D)">The chemical ecology of sponges on Caribbean reefs: Natural products shape natural systems.</a> BioScience. 61 (11), 888(2011).</li>
<li>Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antipredatory+Defensive+Roles+of+Natural+Products+from+Marine+Invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Handbook+of+Marine+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Antipredatory Defensive Roles of Natural Products from Marine Invertebrates.</a> Handbook of Marine Natural Products. , 677-710 (2012).</li>
<li>Pawlik, J. R., Amsler, C. D., Ritson-Williams, R., McClintock, J. B., Baker, B. J., Paul, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marine+Chemical+Ecology%3A+A+Science+Born+of+Scuba.+%5BTitle%5D)+AND+%22Research+and+Discoveries%3A+The+Revolution+of+Science+through+Scuba%22%5BJournal%5D)">Marine Chemical Ecology: A Science Born of Scuba. </a> Research and Discoveries: The Revolution of Science through Scuba. 39, 53-69 (2013).</li>
<li>Randall, J. E., Hartman, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sponge-feeding+fishes+of+the+West+Indies%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Biology%22%5BJournal%5D)">Sponge-feeding fishes of the West Indies.</a> Marine Biology. 1, 216-225 (1968).</li>
<li>Bakus, G. J., Green, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+in+sponges+and+holothurians+%E2%80%94+geographic+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Toxicity in sponges and holothurians — geographic pattern.</a> Science. 185, 951-953 (1974).</li>
<li>Pawlik, J. R., Chanas, B., Toonen, R. J., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defenses+of+Caribbean+sponges+against+predatory+reef+fish.+1.+Chemical+deterrency%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish. 1. Chemical deterrency.</a> Marine Ecology Progress Series. 127, 183-194 (1995).</li>
<li>Schulte, B. A., Bakus, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predation+deterrence+in+marine+sponges+%E2%80%94+laboratory+versus+field+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Marine+Science%22%5BJournal%5D)">Predation deterrence in marine sponges — laboratory versus field studies.</a> Bulletin of Marine Science. 50, 205-211 (1992).</li>
<li>Jackson, J. B. C., Buss, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allelopathy+and+spatial+competition+among+coral+reef+invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Allelopathy and spatial competition among coral reef invertebrates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 72, 5160-5163 (1975).</li>
<li>Bakus, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+defense+mechanisms+on+the+great+barrier+reef%5BTitle%5D)+AND+%22Australia.+Science%22%5BJournal%5D)">Chemical defense mechanisms on the great barrier reef.</a> Australia. Science. 211, 497-499 (1981).</li>
<li>Gemballa, S., Schermutzki, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+haplosclerid+sponges+preferred%3A+a+field+study+on+the+diet+of+the+dotted+sea+slug+Peltodoris+atromaculata+%28doridoidea%3A+nudibranchia%29%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Biology%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic haplosclerid sponges preferred: a field study on the diet of the dotted sea slug Peltodoris atromaculata (doridoidea: nudibranchia).</a> Marine Biology. 144, 1213-1222 (2004).</li>
<li>Voogd, N. J., Cleary, D. F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relating+species+traits+to+environmental+variables+in+Indonesian+coral+reef+sponge+assemblages%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+and+Freshwater+Research%22%5BJournal%5D)">Relating species traits to environmental variables in Indonesian coral reef sponge assemblages.</a> Marine and Freshwater Research. 58, 240-249 (2007).</li>
<li>Mollo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+promoting+marine+invasions%3A+a+chemolecological+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Factors promoting marine invasions: a chemolecological approach.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 4582-4586 (2008).</li>
<li>Randall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Food+habits+of+reef+fishes+of+the+West+Indies%5BTitle%5D)+AND+%22Studies+in+Tropical+Oceanography%22%5BJournal%5D)">Food habits of reef fishes of the West Indies.</a> Studies in Tropical Oceanography. 5, 665-847 (1967).</li>
<li>O'Neal, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reappraisal+of+the+chemical+and+physical+defenses+of+Caribbean+gorgonian+corals+against+predatory+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">A reappraisal of the chemical and physical defenses of Caribbean gorgonian corals against predatory fishes.</a> Marine Ecology Progress Series. 240, 117-126 (2002).</li>
<li>Hines, D. E., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+antipredatory+defensive+strategies+of+Caribbean+non-scleractinian+zoantharians+%28Cnidaria%29%3A+is+the+sting+the+only+thing%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Biology%22%5BJournal%5D)">Assessing the antipredatory defensive strategies of Caribbean non-scleractinian zoantharians (Cnidaria): is the sting the only thing.</a> Marine Biology. 159 (2), 389-398 (2012).</li>
<li>Walters, K. D., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+there+a+trade-off+between+wound-healing+and+chemical+defenses+among+Caribbean+reef+sponges%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+and+Comparative+Biology%22%5BJournal%5D)">Is there a trade-off between wound-healing and chemical defenses among Caribbean reef sponges.</a> Integrative and Comparative Biology. 45 (2), 352-358 (2005).</li>
<li>Leong, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+a+resource+trade-off+between+growth+and+chemical+defenses+among+Caribbean+coral+reef+sponges%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Evidence of a resource trade-off between growth and chemical defenses among Caribbean coral reef sponges.</a> Marine Ecology Progress Series. 406, 71-78 (2010).</li>
<li>Leong, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+reproductive+patterns+among+7+Caribbean+sponge+species+does+not+reveal+a+resource+trade-off+with+chemical+defenses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Marine+Biology+and+Ecology%22%5BJournal%5D)">Comparison of reproductive patterns among 7 Caribbean sponge species does not reveal a resource trade-off with chemical defenses.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 401 (1-2), 80-84 (2011).</li>
<li>Pawlik, J. R., Loh, T. -L., McMurray, S. E., Finelli, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sponge+Communities+on+Caribbean+Coral+Reefs+Are+Structured+by+Factors+That+Are+Top-Down%2C+Not+Bottom-Up%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Sponge Communities on Caribbean Coral Reefs Are Structured by Factors That Are Top-Down, Not Bottom-Up.</a> PLoS ONE. 8 (5), e62573(2013).</li>
<li>Loh, T. -L., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+defenses+and+resource+trade-offs+structure+sponge+communities+on+Caribbean+coral+reefs%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science%22%5BJournal%5D)">Chemical defenses and resource trade-offs structure sponge communities on Caribbean coral reefs.</a> Proceedings of the National Academy of Science. 111, 4151-4156 (2014).</li>
<li>Miller, A. M., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+coral+reef+fish+learn+to+avoid+unpalatable+prey+using+visual+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Do coral reef fish learn to avoid unpalatable prey using visual cues.</a> Animal Behaviour. 85, 339-347 (2013).</li>
<li>Pawlik, J. R., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+re-evaluation+of+the+ichthyodeterrent+role+of+prostaglandins+in+the+Caribbean+gorgonian+coral%2C+Plexaura+homomalla%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">A re-evaluation of the ichthyodeterrent role of prostaglandins in the Caribbean gorgonian coral, Plexaura homomalla.</a> Marine Ecology Progress Series. 52, 95-98 (1989).</li>
<li>Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defensive+properties+of+secondary+metabolites+from+the+Caribbean+gorgonian+coral+Erythropodium+caribaeorum%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Defensive properties of secondary metabolites from the Caribbean gorgonian coral Erythropodium caribaeorum.</a> Marine Ecology Progress Series. 75, 1-8 (1991).</li>
<li>Pawlik, J. R., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+defense+of+Pterogorgia+anceps%2C+a+Caribbean+gorgonian+coral%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Chemical defense of Pterogorgia anceps, a Caribbean gorgonian coral.</a> Marine Ecology Progress Series. 87, 183-188 (1992).</li>
<li>Chanas, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+skeleton+of+a+sponge+provide+a+defense+against+predatory+reef+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Does the skeleton of a sponge provide a defense against predatory reef fish.</a> Oecologia. 107 (2), 225-231 (1996).</li>
<li>Chanas, B., Pawlik, J. R., Lindel, T., Fenical, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+defense+of+the+Caribbean+sponge+Agelas+clathrodes+%28Schmidt%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Marine+Biology+and+Ecology%22%5BJournal%5D)">Chemical defense of the Caribbean sponge Agelas clathrodes (Schmidt).</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 208 (1-2), 185-196 (1997).</li>
<li>Wilson, D. M., Puyana, M., Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+defense+of+the+Caribbean+reef+sponge+Axinella+corrugata+against+predatory+fishes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Chemical defense of the Caribbean reef sponge Axinella corrugata against predatory fishes.</a> Journal of Chemical Ecology. 25 (12), 2811-2823 (1999).</li>
<li>Chanas, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defenses+of+Caribbean+sponges+against+predatory+reef+fish+II.+Spicules%2C+tissue+toughness%2C+and+nutritional+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish II. Spicules, tissue toughness, and nutritional quality.</a> Marine Ecology Progress Series. 127 (1), 195-211 (1995).</li>
<li>Albrizio, S., Ciminiello, P., Fattorusso, E., Magno, S., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphitoxin%2C+a+new+high+molecular+weight+antifeedant+pyridinium+salt+from+the+Caribbean+sponge+Amphimedon+compressa%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Amphitoxin, a new high molecular weight antifeedant pyridinium salt from the Caribbean sponge Amphimedon compressa.</a> Journal of Natural Products. 58 (5), 647-652 (1995).</li>
<li>Assmann, M., Lichte, E., Pawlik, J. R., Köck, M. Chemical defenses of the Caribbean sponges Agelas wiedenmayeri and Agelas conifera. Marine Ecology Progress Series. 207, 255-262 (2000).</li>
<li>Kubanek, J., Fenical, W., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+antifeedant+triterpene+glycosides+from+the+Caribbean+sponge+Erylus+Formosus%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Letters%22%5BJournal%5D)">New antifeedant triterpene glycosides from the Caribbean sponge Erylus Formosus.</a> Natural Product Letters. 15 (4), 275-285 (2001).</li>
<li>Pawlik, J. R., McFall, G., Zea, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+odor+from+sponges+of+the+genus+Ircinia+protect+them+from+fish+predators%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Does the odor from sponges of the genus Ircinia protect them from fish predators.</a> Journal of Chemical Ecology. 28 (6), 1103-1115 (2002).</li>
<li>Waddell, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defenses+of+Caribbean+sponges+against+invertebrate+predators.+I.+Assays+with+hermit+crabs%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Defenses of Caribbean sponges against invertebrate predators. I. Assays with hermit crabs.</a> Marine Ecology Progress Series. 195, 125-132 (2000).</li>
<li>Waddell, B., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defense+of+Caribbean+sponges+against+invertebrate+predators.+II.+Assays+with+sea+stars%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Defense of Caribbean sponges against invertebrate predators. II. Assays with sea stars.</a> Marine Ecology Progress Series. 195, 133-144 (2000).</li>
<li>Burns, E., Ifrach, I., Carmeli, S., Pawlik, J. R., Ilan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+anti-predatory+defenses+of+Red+Sea+and+Caribbean+sponges.+I.+Chemical+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Comparison of anti-predatory defenses of Red Sea and Caribbean sponges. I. Chemical defense.</a> Marine Ecology Progress Series. 252, 105-114 (2003).</li>
<li>Jones, A. C., Blum, J. E., Pawlik, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+for+defensive+synergy+in+Caribbean+sponges%3A+Bad+taste+or+glass+spicules%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Marine+Biology+and+Ecology%22%5BJournal%5D)">Testing for defensive synergy in Caribbean sponges: Bad taste or glass spicules.</a> Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 322 (1), 67(2005).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Burada tarif edilen prosedür, deniz organizmalarında antipredatory kimyasal savunma değerlendirmek için nispeten basit ve ekolojik olarak uygun laboratuar protokolü sağlar. Burada yöntemler bu set ile memnun olan önemli kriterleri gözden: (1) Uygun yırtıcı. Bu beslenme deneyi bluehead akya, Thalassoma bifasciatum, Karayipler genelinde mercan resifleri üzerinde en bol balıklar birini kullanır. bluehead bentik omurgasızlar 19 geniş bir ürün yelpazesine örnek biline...

Kimyasal ekoloji kimyagerler ve ekolojist işbirliği ile geliştirdi. Karasal kimyasal ekoloji subdiscipline bir süre için yaklaşık edilmiş olsa da, deniz kimyasal ekoloji sadece bir kaç yıl eski ama deniz organizmalarının 1-8 evrimsel ekoloji ve toplum yapısına önemli bilgiler sağlamıştır. Aletli dalış ve NMR spektroskopisi acil teknolojileri yararlanan, organik kimyacılar hızla 1970&#39;lerde ve 1980&#39;lerde 9 bentik omurgasız deniz ve yosun gelen yeni metabolitleri anlatan yayınların çok sayıda üretti. Sekonder metabolitler ampirik kanıt olmadan yeni bileşikler ekolojik önemli özellikleri atfedilen bu yayınların çoğu bazı amaca hizmet etmelidir varsayarsak. Hakkında aynı zamanda, ekolojistler de dağılımları ve daha önce sağa sola bilinen bentik hayvanların ve bitkilerin zengindi SCUBA dalış gelişiyle yararlanarak ve açıklayan edildiBöyle tarama gibi nispeten etkisiz örnekleme yöntemleri m. Bu araştırmacıların varsayım sesil şey ve yumuşak gövdeli kimyasal avcılardan 10 tarafından tüketimini önlemek için savunulması gerektiğini oldu. Türler bolluk aksi açıklayıcı bir işti ne ampirizmi tanıtmak için bir çaba, bazı ekolojistler toksisite deneyleri 11 kimyasal savunma extrapolating başladı. Çoğu toksisite deneyleri yarım tahlil organizmaları öldürmekten sorumlu özleri kuru kütle konsantrasyonlarının sonraki kararlılıkla, bütün balık veya omurgasız dokuların ham organik özler sulu süspansiyonlar diğer organizmaların poz çıkıyor. Ancak, toksisite deneyleri, potansiyel saldırganları doğal şartlar altında av algıladıkları hangi şekilde taklit değil, ve daha sonraki çalışmalar toksisite ve lezzet 12-13 arasında hiçbir ilişki bulduk. Bu prestijli dergilerde yayınlar çok az ya da hiç Ecologica olan teknikleri kullanılan şaşırtıcıdırl alaka 14-15 ve bu çalışmalar hala yaygın atıf bugün. Bu toksisite verilerine dayalı çalışmalar 16-18 yayınlanmaya devam unutmayın daha da endişe verici olduğunu. Burada açıklanan biyodeney yöntemi antipredatory kimyasal savunma değerlendirmek için deniz kimyasal ekolojistler için bir ekolojik ilgili yaklaşım sağlamak için 1980&#39;lerin sonlarında geliştirilmiştir. yöntem daha ekolojik anlamlı toksisite verilerine göre olan lezzet veri sağlayan, bir beslenme karşılaştırılabilir gıda matrisi içinde doğal bir konsantrasyonda hedef organizmadan bir ham organik özü örnek bir modeli yırtıcı gerektirir. (1) uygun bir kültürlü yırtıcı besleme deneylerinde kullanılabilir olmalıdır, (2) her polarizasyona organik metabolitleri etraflıca dokusundan ekstre edilmelidir: deniz organizmalarının dokuların antipredatory aktivitesinin değerlendirilmesi için genel bir yaklaşım, dört önemli kriterler içerir organizmayı hedef, (3) metabolitleri b gerekirAynı hacimsel konsantrasyonda bir beslenme uygun deneysel gıda içine karışık bir e onlar çıkarıldı, ve (4) deneysel tasarım ve istatistiksel bir yaklaşım anlamlı bir metrik göreceli distastefulness göstermek için sağlaması gerekir hangi organizmada bulunduğu gibi. Aşağıda belirtilen prosedür Karayip deniz omurgasız antipredatory kimyasal savunma değerlendirmek için tasarlanmıştır. Bu tür Karayip mercan resifleri üzerinde yaygındır ve bentik omurgasızlar 19 geniş bir ürün yelpazesine örnek bilinmektedir çünkü bir örnek yırtıcı balık gibi bluehead akya, Thalassoma bifasciatum, istihdam. Hedef organizmadan alınan dokular, ilk önce, ekstre bir gıda karışımı ile bir araya getirilmiş ve son olarak T. gruplarına sunulmaktadır bifasciatum onlar özü ile tedavi edilen gıdalar reddetmek olmadığını gözlemlemek için. Bu yöntemi kullanarak tahlil verileri deniz organizmalarının 12,20-21, l savunma kimya önemli bilgiler sağladıife geçmişi ticaret-off 22-24, ve toplum ekolojisi 25-26.

<table><tbody><tr><td>Diklorometan</td><td>Fisher Scientific</td><td>D37-20</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A41220</td><td></td></tr><tr><td>Susuz Kalsiyum Klorür</td><td>Fisher Scientific</td><td>C614-500</td><td></td></tr><tr><td>Cryocool Isı Transferi</td><td>Sıvısı Fisher Scientific</td><td>20-548-146</td><td>Vakum yoğunlaştırıcı için</td></tr><tr><td>Aljinik Asit Sodyum Tuzu Yüksek Viskoziteli</td><td>MP Biyomedikal</td><td></td><td></td>154723</tr><tr><td>Kalamar manto halkaları</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Marketten satın alınabilir</td></tr><tr><td>Denatonium benzoate</td><td>Aldrich</td><td>D5765</td><td></td></tr><tr><td>50 ml dereceli santrifüj tüpü</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>20 ml sintilasyon şişesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-337-7</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Pasteur pipetleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20D</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipetleri için kauçuk ampuller</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-24</td><td></td></tr><tr><td>Pelet dağıtımı için kırmızı ampuller</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-27</td><td></td></tr><tr><td>250 ml yuvarlak tabanlı şişe</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-067E</td><td></td></tr><tr>rotavap <td>Fisher Scientific</td><td>K747130-1324</td><td></td>Ağırlık Tekneleri<td>için Sintilasyon flakon adaptörü</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>02-202B</td><td></td></tr><tr><td>Microspatula</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-401-10</td><td></td></tr><tr><td>5 ml dereceli şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-53</td><td></td></tr><tr><td>10 ml dereceli şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-54</td><td></td></tr><tr><td>Tıraş bıçağı</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17302</td><td></td></tr></tbody></table>

bir balık-besleme laboratuvar biyodeneyinde deniz organizmaların dokular sekonder metabolitlerin antipredatory aktivite değerlendirmek için

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

Deniz kimyasal ekolojisi, 1980'lerde doğal ürünler kimyagerleri ve deniz ekolojistlerinin işbirliğiyle, deniz organizmalarının dokularından ikincil metabolitlerin ekolojik işlevlerini incelemek amacıyla ortaya çıkan genç bir disiplindir. Sonuç, deneysel yaklaşımın ekolojik uygunluğunu giderek daha fazla rafine eden protokollerin ilerlemesi olmuştur. Burada, araştırmacıların deniz organizmalarının dokularından ikincil metabolitlerin antipredatör aktivitesini değerlendirmelerini sağlayan bir balık besleme laboratuvarı biyo-tahlilinin en güncel versiyonunu sunuyoruz. Tüm polaritelerin organik metabolitleri, hedef organizmanın dokusundan kapsamlı bir şekilde ekstrakte edilir ve beslenme açısından uygun bir gıda matrisinde doğal konsantrasyonlarda yeniden oluşturulur. Deneysel gıda peletleri, ekstraktın antipredatör aktivitesini değerlendirmek için laboratuvar besleme tahlillerinde genel bir avcıya sunulur. Burada açıklanan prosedür, Karayip deniz omurgasızlarının lezzetini test etmek için mavi kafa, Thalassoma bifasciatum'u kullanır; Bununla birlikte, tasarım diğer sistemlere kolayca uyarlanabilir. Bu laboratuvar tahlili kullanılarak elde edilen sonuçlar, potansiyel yırtıcıların tam bir tamamlayıcısının beslenme tepkilerine dayanan saha deneyleri için önemli bir başlangıçtır. Ek olarak, bu biyo-tahlil, biyo-tahlil kılavuzlu fraksiyonlama yoluyla beslenmeyi caydırıcı metabolitlerin izolasyonunu yönlendirmek için kullanılabilir. Bu besleme biyo-tahlili, Karayip mercan resiflerindeki deniz omurgasızlarının dağılımını ve bolluğunu kontrol eden faktörler hakkındaki anlayışımızı geliştirmiştir ve farmakoloji, biyoteknoloji ve evrimsel ekoloji dahil olmak üzere çeşitli araştırma alanlarındaki araştırmaları bilgilendirebilir.

Burada ortak Karayip sünger altı türün (Şekil 2) Bu biyoassay sonuçlarını rapor. Bu veriler başlangıçta Pawlik ark. 12 tarafından 1995 yılında yayınlanan ve ortak meydana takson arasında kimyasal savunma stratejileri farklılıkları araştırmak için bu yaklaşımın gücünü göstermek edildi. Sonuçlar standart hata (SE) her tür için + yemiş gıda pelet ortalama sayısı olarak rapor edilmiştir. Hemen hemen hiç peletler Agelas clathrodes, Amphimedon compressa ve Aplysina cauliformis...

Bu biyo-deney, bir besleyici olarak benzer gıda matris kullanılarak, doğal konsantrasyonlarda deniz organizmalarının dokuların Organik özütlerden besleme-caydırıcı metabolitlerinin varlığını değerlendirmek için bir model yırtıcı balık kullanmaktadır.

Bir Balık-besleme Laboratuvar biyodeneyinde Deniz Organizmaların Dokular Sekonder Metabolitlerin Antipredatory Aktivite değerlendirmek için

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

Bu prosedürün genel amacı, deniz canlılarının dokularından elde edilen ikincil metabolitlerin avcı karşıtı aktivitesini değerlendirmektir. Merhaba, ben North Carolina Wilmington Üniversitesi'nden Dr. Joseph Pollock; yanımda, deniz canlılarının dokularındaki kimyasal savunmaları test etmek için biyolojik analizlerin gerçekleştirilmesine yönelik bu videoyu hazırlama sürecinde ekip liderliği yapan lisansüstü öğrencisi Michael Marty var. Birazdan göreceğiniz yöntemleri geliştirmeye 1980'lerin sonlarında başladık.O dönemde, doğal ürün kimyagerleri herhangi bir deneysel kanıt olmaksızın sekonder metabolitlere ekolojik roller atıyorlardı. Bu sırada ekologlar ise ekolojik uygunluğu olmayan toksisite deneylerinden savunma rolleri çıkarıyorlardı. Burada, deniz organizmalarının dokularından elde edilen sekonder metabolitlerin avcı karşıtı aktivitesini değerlendirmek için tasarlanmış bir yaklaşım sunuyoruz.Bu yaklaşım, besleme biyolojik analizleri için dört önemli kriteri karşılamaktadır. Birincisi, uygun bir generalist predatör kullanıyoruz. İkincisi, dokulardaki tüm polaritelerdeki organik metabolitleri kapsamlı bir şekilde ekstrakte ediyoruz.Üçüncü olarak, bu metabolitleri, organizmada bulundukları hacimsel konsantrasyonla aynı oranda deneysel bir yeme ekledik. Dördüncü olarak, deneysel tasarımımız ve istatistiksel yaklaşımımız, göreceli tatsızlığı belirtmek için anlamlı bir metrik sağlamaktadır. Bu besleme deneylerinde, Karayip deniz omurgasızlarından alınan dokuları kullanan analizler için uygun bir model yırtıcı balık olan blue head thoma by fossum kullandık; çünkü bu balık türü Karayip mercan resiflerinde yaygındır ve çok çeşitli bentik omurgasızları örneklemesiyle bilinir.Şimdi Michael protokolü detaylı bir şekilde açıklayacak. İlk olarak, doku ekstrakte edilmelidir. Dereceli bir santrifüj tüpüne, nihai hacim 30 milliliters olacak şekilde diklorometan ve metanolün bire bir karışımını ekleyin.Ardından, hedef organizmanızdan doku parçaları kesin. Bu işlem taze veya dondurulmuş doku ile yapılabilir. Biz süngerlerle çalıştığımız için, bu film gösteriminde turuncu fil kulağı süngeri, alus, plet roadies yer alacaktır.Hacmi doğru ayarlamak için çok küçük doku parçaları kesmeniz gerekebilir. Volumetrik yer değiştirme yöntemini kullanarak tam olarak 10 mililitre doku alabilir, tüpün kapağını kapatıp ters çevirebilir ve ardından dört saat boyunca çalkalayabilirsiniz; bu süre zarfında su, metanol ile birleşir ve ortaya çıkan metanol-su fazı, diklorometan fazından ayrılır. Tüpler çalkalandıkça doku, sırasıyla her bir ekstraksiyon ortamına maruz kalır.Bu ekstraksiyon süresinin ardından, iki belirgin faz ortaya çıkacaktır. Metanol ve suyun oluşturduğu polar faz, diklorometanın oluşturduğu nonpolar fazın üzerinde yer alacaktır; bir pastör pipeti kullanarak transfer gerçekleştirin. Dereceli santrifüj tüpündeki diklorometan ekstraktını bir balon jojeye aktarın, dereceli santrifüj tüpü ise buzdolabında saklanmalıdır.Sonraki birkaç adımda, döner evaporatörde gerçekleştirilecek tüm işlemler için balon jojeyi döner evaporatöre bağlayın. Su banyosunun sıcaklığının 40 °C'nin altında kaldığından emin olun. Döner evaporatörün temel çalışma prosedürlerini izleyerek balon jojedeki diklorometanı kurutun ve kurutulmuş apolar özütü çok az miktarda diklorometan kullanarak yeniden süspanse edin.Yuvarlak tabanlı balonun kenarlarındaki kurumuş materyalleri temizlemek için hafifçe çalkalamak veya döndürmek faydalı olabilir. Ardından, klorometan ekstraktını yuvarlak tabanlı balondan 20 mililitrelik bir sintilasyon şişesine aktarın. Sintilasyon şişesinin kapağını kapatmak yerine, şişeye bir döner evaporatör adaptörü takın ve tekrar döner evaporatörde kuruluk gerçekleşene kadar buharlaştırın. Kurutulmuş apolar ekstrakt içeren sintilasyon şişesi, sonraki birkaç adım boyunca buzdolabında saklanabilir.Doku ve metanol su ekstraktını içeren dereceli santrifüj tüpüne geri dönersek; dokuyu sıkıştırarak ekstraksiyon ortamını dokudan dışarı çıkaran el yapımı bir cihaz kullanacağız. Ardından, metanol su ekstraktını yuvarlak tabanlı balona aktarın ve buzdolabında soğutulmuş olarak saklayın. İki ila altı saat sürecek ikinci bir ekstraksiyon için, doku tamamen örtülene kadar dereceli santrifüj tüpüne metanol ekleyin.İkinci metanol ekstraksiyonu tamamlandığında, soğutulmuş yuvarlak tabanlı balonu buzdolabından çıkarın, dereceli santrifüj tüpünün içeriğini sıkıştırın ve bu yeni metanol ekstraktını, daha önceden elde edilen metanol-su ekstraktının bulunduğu orijinal yuvarlak tabanlı balona aktarın. Bu noktada, dokunun tamamen ekstrakte edilmediğine dair bir şüphe varsa, iki ila altı saatlik metanol ekstraksiyon adımı tekrarlanabilir. Yuvarlak tabanlı balonu bir döner evaporatöre bağlayın ve metanolü daha önce olduğu gibi uçurun.Su banyosunun sıcaklığını 40 °C'nin altında tuttuğunuzdan emin olun. Balon jojede, 20 mL'lik sintilasyon şişesindeki kurutulmuş apolar ekstrakt ile birleştirilmesi gereken sulu bir ekstrakt bulunacaktır. Bu nedenle, balon jojenin içeriğini 20 mL'lik sintilasyon şişesine aktarın.Gerekirse, kalan tüm ekstraktı toplamak için balon jojeyi az miktarda metanol ile durulayın. Sintilasyon şişesi şu anda kurutulmuş apolar ekstraktı ve polar ekstraktı içermektedir. Ancak polar ekstrakt, küçük bir sıvı hacmi içinde süspansiyon halindedir.Sulu ekstraktı, düşük ısıda bir vakum konsantratörü kullanarak kuruyana kadar buharlaştırın. Sintilasyon şişesi şu anda 10 mililitre dokunun kuru, ham organik ekstraktını içermektedir; şişenin içini kuru azot gazı ile üfleyerek boşaltın ve dondurucuda -20 °C'de saklayın. Bu doku ekstraktlarının lezzetini test etmek için, öncelikle hedef organizma ile besinsel olarak karşılaştırılabilir bir gıda matrisinde yeniden çözülmeleri gerekir.Kalamar mantosu halkaları, omurgasız dokuların biyolojik analizleri için uygun bir protein kaynağıdır ve kolaylıkla liyofilize bir toz haline getirilebilir. Bu biyolojik analize başlamak için dondurulmuş kalamar mantosu halkalarını ılık deiyonize suya yerleştirin. Çözündükten sonra suyun bir kısmını süzün ve halkaları bir blendera boşaltın.Kalamar mantosu viskoz bir sıvı haline gelene kadar yüksek ayarda iyice karıştırın. Materyal karıştırmak için çok kıvamlıysa su ekleyin. Sıvılaştırılmış kalamar mantosundan ince bir tabakayı sığ bir pişirme tepsisine dökün ve eşit şekilde yayın.Fırın tepsisini -20 °C sıcaklıktaki bir dondurucuya yerleştirin. Liyofilizasyon işlemini kolaylaştırmak için dondurulmuş kalamar tabakası daha küçük parçalara bölünmelidir. Daha küçük parçalar, daha hızlı kuruyacakları için daha uygundur.Dondurarak kurutucuda. Donmuş mürekkep balığının kırılmış parçalarını hazneye yerleştirin ve dondurarak kurutucunun çalışma prosedürlerini izleyin. Liyofilizasyon işlemi tamamlandıktan sonra, mürekkep balığı parçaları toz haline getirilmelidir.Bu işlem bir blender ile gerçekleştirilebilir. Kurutulmuş mürekkep balığı parçalarını blender'a yerleştirin ve materyal homojen bir toz görünümü alana kadar yüksek hızda çalıştırın. Bir sonraki adım, partikül halindeki mürekkep balığı tozunun solunmasını azaltmak için bir çeker ocak içerisinde yürütülmelidir.Dondurularak kurutulmuş kalamar tozunu döner bir un eleğine dökün. Elekten geçen tozu toplamak için eleğin altına bir kap tutun. Dondurularak kurutulmuş kalamar materyalini elemek için kolu çevirin.Önceki adımlarda yeterince karıştırılmamış büyük bağ dokusu lifleri elekte kalacak ve böylece daha ince bir toz elde edilecektir; gerekirse bir huni kullanarak liyofilize edilmiş kalamar tozunu sızdırmaz bir kaba aktarın, kuru azot gazı ile süpürün ve -20 °C'de donmuş halde saklayın. Liyofilize kalamar manto tozu hazırlandıktan sonra, analiz yem karışımı hazırlamaya geçebiliriz. Aynı gün içinde art arda birden fazla analiz gerçekleştirileceği zaman, yem karışımını büyük bir partide hazırlamak pratiktir.Burada, 100 mililitre hacmindeki bir karışımın hazırlama sürecini gösteriyoruz; temiz bir tartım kabı kullanarak üç gram alginik asit ve beş gram dondurularak kurutulmuş kalamar manto tozu tartın. Su eklemeden önce bu kuru bileşenleri 150 mililitrelik bir behere yerleştirin. Kuru bileşenlerin birbirine karışmasına yardımcı olmak için bir mikro spatula ile nazikçe karıştırın.100 milliliters deiyonize su ekleyin ve kuvvetlice karıştırın. Tozun tamamen hidrate olması birkaç dakika sürebilir. Bu adımdan geçmeden önce homojen bir karışım elde ettiğinizden emin olun.Gıda matriksini tek bir tutarlı renge boyamayı tercih ederseniz, renklendirici boyayı bu aşamada ekleyin. Dereceli bir şırıngaya tam olarak 10 milliliters gıda karışımı doldurun. Bu aşamada hacimsel hassasiyet büyük önem taşır, bu nedenle hava kabarcığı oluşmamasına aşırı özen gösterin.Kuru ham organik özüt içeren 20 mililitrelik sintilasyon şişesini dondurucudan çıkarın ve içine bir veya iki damla metanol ekleyin. Çok fazla metanol eklemeyin. Bu işlem, gıda matrisinin katılaşmasını önleyecektir.Mikro spatula ve minimum miktarda çözücü kullanarak ekstrakta homojen bir karışım haline gelecek şekilde yeniden süspansiyon yapın. Tüm ekstraktın yeniden süspanse edildiğinden emin olmak için vialin kenarlarını kazıdığınızdan emin olun. 10 mililitre gıda matrisi içeren şırıngayı, yeniden süspanse edilmiş homojenize ekstraktın bulunduğu 20 mililitrelik sintilasyon vialine boşaltın.Bu karışımı, homojen hale gelene kadar mikro spatül ile karıştırın. Ekstrakt karışımından çok küçük bir hacim yükleyin. Bir şırınga için 1 mL yeterlidir.Şırınga ucunu 0.25 molar kalsiyum klorür çözeltisine daldırın ve uzun, spagetti benzeri bir şerit oluşturmak için şırınganın içeriğini boşaltın. Şerit bu çözelti içinde sertleşecektir. Birkaç dakika sonra, sertleşmiş şeridi çıkarın ve cam bir kesme tahtasının üzerine yayın.Strandı dört milimetrelik parçalara bölmek için bir jilet kullanın. Ekstraktla işlem görmüş pelletleri toplayın ve deniz suyu ile durulayın. Kontrol pelletlerini hazırlamak için.Herhangi bir doku ekstraktı eklemeden aynı prosedürü uygulayın. Kontrol ve işlem görmüş peletlerin renklerini eşitlemek için gıda boyası eklemek gerekebilir. Balıkların yemeyi kesinlikle reddedeceği bir negatif kontrol hazırlamak için.Miller ve Pollock (2013) tarafından açıklandığı üzere, ham yem karışımına mililitre başına iki miligram konsantrasyonda deton ve benzoat tozu ekleyin. Besleme deneyleri, doğadan yakalanmış sarı faz mavi başlı RAs thala ile yürütülür; balıklar, laboratuvar akvaryumunun opak yan yüzeyli bölmelerinde üçerli gruplar halinde tutulur. Yem peletlerinin verilmesi için uygun araç, kauçuk pompalı bir cam pipettir.Bir pelet, balıklar tarafından kolayca tüketildiyse kabul edilmiş sayılır. Bir veya daha fazla balığın peleti ağız boşluğuna almaya yönelik en az üç denemesinden sonra yenmediği durumlarda veya bu tür bir denemeden sonra pelete yaklaşılıp görmezden gelindiği durumlarda ise pelet reddedilmiş sayılır.Kontrol peletlerini yemeyi reddeden uyumsuz balık grupları analizlere dahil edilmemelidir. Bu akış şeması, balık grubunun uyumlu olduğunu doğrulamak için bir kontrol peleti ile başlayan tüm durumlar için analiz prosedürünü göstermektedir. İşlem görmüş bir pelet sunun.Balıklar işlem görmüş peleti kabul ederse, bu örnek "kabul edildi" olarak puanlanır. Balıklar işlem görmüş peleti reddederse, balıkların beslenmeyi durdurup durdurmadığını teyit etmek için ardından bir kontrol peleti sunulmalıdır. Balıklar sonraki kontrol peletini kabul ederse, örnek "reddedildi" olarak puanlanır.Her örnek, 10 bağımsız balık grubu ile çalışılmalıdır. Burada bu besleme analizinin örnek bir çalışması yer almaktadır. İlk olarak, balıklara bir kontrol peleti sunulur ve balıklar kontrol peletini kabul eder.İkinci olarak, işlem görmüş bir pelet sunulur. Bu durumda balıklar işlem görmüş peleti reddeder. Bu nedenle, ardından bir kontrol peleti sunulmalıdır.Balıklar sonraki kontrolü kabul ederse örnek reddedilmiş olarak puanlanabilir. Her örnek, 10 bağımsız balık grubu ile çalışılmalıdır. Kontrol pelletleri ile işlem görmüş pelletlerin tüketimi arasındaki farkların anlamlılığı, Low ve Pollock 2014 tarafından sunulan Fisher'in kesin testi'nin modifiye edilmiş bir versiyonu ile değerlendirilmelidir.Test, kontrol ve işlem görmüş peletlerin marjinal toplamları sabit tutularak ve her ikisi de rastgele örneklem olarak kabul edilerek modifiye edilmiştir. Bu durum, yedi pelet yendiğinde 0,057'ye eşit bir P değeri sağlar. Bu nedenle, altı veya daha az pelet yendiğinde herhangi bir ekstrakt caydırıcı, aksi takdirde lezzetli kabul edilir.Yedi veya daha fazla pelet yenildiğinde. Ekstrakt grupları arasında lezzet karşılaştırması yaparken, temsilci sonuçlarda gösterileceği üzere, yenilen ortalama pelet sayısı kullanılmalıdır. Burada, Karayipler'de yaygın olan altı sünger türü için gerçekleştirilen bu biyolojik analizinin sonuçlarını bildiriyoruz.Bu veriler ilk olarak Pollock ve arkadaşları (1995) tarafından yayınlanmış olup, birlikte yaşayan taksonlar arasındaki kimyasal savunma stratejilerindeki farklılıkları aydınlatmada bu yaklaşımın gücünü ortaya koymaktadır. Y eksenindeki her kategori, tek bir sünger türünden elde edilen ekstraktları temsil eder. Her türe ait birkaç birey örneklenmiş, ekstraksiyonu yapılmış ve test edilmiştir; bu durum tür adını takip eden parantez içindeki sayı ile belirtilmiştir.Sonuçlar, her bir tür için yenilen yiyecek peleti ortalama sayısı ve standart hata olarak rapor edilmiştir. Alus, pleth, pheon, compressor ve lycine called foris'ten elde edilen ham organik ekstraktların kullanıldığı analizlerde neredeyse hiç pelet yenmemiştir. Buna karşılık, Vais'in Cali spongy ekstraktı ile hazırlanan peletler...Geo Osa ve Michel lavis analizde hızla tüketilmiştir. İlk üç tür için altı peletten daha azı yenmiş olduğundan, bunlar anlamlı düzeyde caydırıcı olarak kabul edilebilir. Buna karşılık, sonraki üç tür kontrol gruplarından anlamlı bir farklılık göstermemiştir ve bunlar lezzetli/yenilebilir olarak kabul edilebilir.Az önce gösterilen yöntemler, manipülatif saha deneyleri ve araştırmalarla birlikte yürütüldüğünde, avcı karşıtı kimyasal savunmaları incelemek için güçlü bir yaklaşım sunar. Bu biyolojik analizlerin sonuçları, araştırma grubumun Karayip mercan resiflerindeki deniz omurgasızlarının dağılımını ve bolluğunu kontrol eden faktörleri anlamasına yardımcı olmuştur. Önemli olan şudur ki; bu yöntem, kimyasal ekolojinin ötesinde, kimyasal ekolojideki ekolojik uygunluk ihtiyacını karşılamaktadır.Bu biyolojik analizlerin sonuçları; farmakoloji, biyoteknoloji ve evrimsel ekoloji dahil olmak üzere çeşitli araştırma alanlarındaki incelemelere temel oluşturabilir.

a-fish-feeding-laboratory-bioassay-to-assess-antipredatory-activity

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

AVEXIS hücresel tanıma süreçlerinde roman dışı reseptör-ligand çiftleri için sistematik ekran için geliştirilmiş bir yüksek verimlilik protein etkileşim testtir. Bu özellikle diğer yüksek verimlilik yaklaşımları kullanarak tespit etmek zordur geçici protein etkileşimleri tespit etmek için tasarlanmıştır.

Düşük afiniteli Ekstrasellüler Reseptör-ligand Etkileşimlerinin Ölçeklenebilir Algılama için Avidite tabanlı Ekstrasellüler Etkileşim Gösterimi (AVEXIS)

Onların yırtıcı balıkçıl balık poliklorlanmış bifenil (PCB) Petkim'de net trofik transfer verimi laboratuar tahmini için bir tekniği sunulmuştur. Alanına laboratuvar sonuçlarının uygulanabilirliğini en üst düzeye çıkarmak için, balıkçıl balık tipik alanda yenir av balık beslenen edilmelidir.

Göl Alabalık PCB kongenerinin Net Trofik Transferi Etkinliklerinin Laboratuvarı Tahmini (<em&gt; Salvelinus namaycush</em&gt;) Onun Prey dan

Bu çalışma, kirleticilerin ekotoksisitesini değerlendirmek için nanomalzemeler gibi gelişmekte olan bulaşıcılar da dahil olmak üzere deniz bakterisini Vibrio anguillarum kullanarak yeni bir protokolü açıklamaktadır . Bu yöntem, LC 50'nin veya 6 saatlik maruz kaldıktan sonra bakteri kültürlenebilirliğinde% 50 azalmaya neden olan ölüm konsantrasyonunun belirlenmesine izin verir.

Deniz Bakterileri ile Ekotoksikolojik Yöntem<emVibrio anguillarum</em&gt; Çevresel Kirleticilerin Akut Zehirliliğini Değerlendirmek

Burada, larva zebra balığı ve koca kafa minnow lokomotor aktivite ve bir otomatik izleme yazılımı kullanarak photomotor yanıt (PMR) incelemek için bir protokol mevcut. Ortak toksikoloji biyoanalizler dahil, bu davranışların analizleri kimyasal bioactivity incelemek için bir tanı aracı sağlarlar. Bu iletişim kuralı kafein, modeli neurostimulant kullanılarak açıklanmıştır.

Davranışsal yanıt profilleri larva balık incelenmesi için deneysel protokol: nöro-uyarıcı kafein uygulamaya

Yabani balıklar sağlık sucul ekosistem sağlığı bir göstergesi olarak kullanılabilir. Nekropsi-esaslı balık sağlık değerlendirmeler belgeleri görünür lezyonlar veya anormallikleri, doku mikroskobik değerlendirme, gen ekspresyonu ve diğer daha ayrıntılı toplamak için fırsat yanı sıra durum endeksi hesaplamak için kullanılan veri sağlamak analizleri.

Vahşi balık Nekropsi tabanlı sağlık değerlendirmesi

Burada, ayırmak ve yapısını, koku kudret ve deniz lampreys, sözde feromon bileşiklerin davranışsal yanıt karakterize bir iletişim kuralı mevcut.

Bioassay-güdümlü ayırma kullanarak deniz taşemen Feromonlar tanımlaması

Burada, deniz anemonundan ham zehir ekstraktı elde etmek ve hemolitik ve fosfolipaz aktivitesini tespit etmek için bir protokol tarif ediyoruz.

Deniz Anemonlardan Elde Edilen Ham Ekstraktlarda Hemolitik ve Fosfolipaz Aktivitesinin Basit Biyotahlillerle Tanımlanması

Bu çalışma, tuzlu su karides öldürücülük testi olarak da tanımlanan Artemia salina öldürücülük biyotahlil prosedürünü değerlendirmeyi ve gözden geçirmeyi amaçlamaktadır. Bu basit ve ucuz yöntem, numunelerin, yani doğal ürünlerin genel toksisitesi (ön toksisite değerlendirmesi olarak kabul edilir) hakkında bilgi verir.

Artemia salina L. Kullanarak Öldürücülük Biyotahlili

Burada, kimyasalların (örneğin, metamfetamin ve glifosat) yetişkin zebra balığı üzerindeki potansiyel nörotoksik etkilerini tek bir tank kullanarak etkili bir şekilde belirlemek için yeni tank, Shoaling ve sosyal tercih testleri dahil olmak üzere kapsamlı bir davranışsal test bataryası sunuyoruz. Bu yöntem nörotoksisite ve çevresel araştırmalarla ilgilidir.

Tek Bir Tankta Davranış Testleri Bataryası Kullanılarak Yetişkin Danio rerio'da Nörotoksisite Değerlendirmesi

Zebra balığı embriyo titreşimi ürkütücü tepkisine dayalı olarak kimyasal bileşik toksisitesini değerlendirmek için bir tarama sisteminin iş akışını ve veri analizini açıklıyoruz. Sistem, zebra balığı embriyolarının bir titreşim uyaranına maruz kaldıklarında hareketlerini kaydeder ve genel toksisite/ölümcüllük ve nöromüsküler toksisitenin entegre bir değerlendirmesine izin verir.

Zebra Balığı Titreşim İrkilme Tepkisi Tarama Sistemi Kullanılarak Kimyasalların Toksisitesinin Değerlendirilmesi

Makale, Mytilus galloprovincialis hemositlerinin motilitesine dayalı olarak kirleticilerin toksisitesinin ve ekotoksisitesinin hızlı ve hassas bir şekilde değerlendirilmesi için yeni bir in vitro yöntem önermektedir. Yöntem, daha etik ve hassas toksikolojik ve ekotoksikolojik maruziyet testlerinin geliştirilmesine katkıda bulunmayı amaçlamaktadır.

Midye (Mytilus galloprovincialis) Hemosit Motilitesine Dayalı Toksikolojik ve Ekotoksikolojik Bir Test

Öğrenin, deniz organizmalarının dokularından sekonder metabolitlerin antipredatory aktivitesini değerlendirmek için balık-besleme biyodeneyi yöntemini. Bu yaklaşım, kimyasal savunmaların ekolojik rollerini deneysel kanıtlarla ortaya koyar.

Bir Balık-besleme Laboratuvar biyodeneyinde Deniz Organizmaların Dokular Sekonder Metabolitlerin Antipredatory Aktivite değerlendirmek için (Video) | JoVE Journal

Bir Balık-besleme Laboratuvar biyodeneyinde Deniz Organizmaların Dokular Sekonder Metabolitlerin Antipredatory Aktivite değerlendirmek için

Daha fazla video keşfet