Name: Bir Ex vivo Model İnsan Meme Hormon Eylem Eğitim için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 31 s
Description: Öğrenin, insan meme dokusunda hormon etkisini incelemek için doku mimarisini koruyan yeni bir ex vivo model geliştirmeyi. Bu yöntem, meme kanseri ve hormonla ilgili biyolojik süreçlerin araştırılmasına olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar mamoplasti fotoğrafı sağlamak için Lozan Üniversitesi Hastanesi M. Fişini teşekkür, M. Wirth ve Deneysel Kanser Araştırma Enstitüsü İsviçre, Araştırma Moleküler Onkoloji Yeterlilik Ulusal Merkezi, Yaşam Bilimleri Okulu, Ecole Polytechnique Fédérale de A. Ayyanan eleştirel yorumlar için Manchester Üniversitesi teknik yardım için Lozan ve R. Clarke. Bu sonuçlara önde gelen araştırma herhangi bir hibe anlaşması kapsamında SNF3100A0-112090, Oncosuisse 531.817 ve Yenilikçi İlaçlar Girişimi Ortak Taahhüt destek aldı. Avrupa Birliği&#39;nin Yedinci Çerçeve Programı (FP7 / 2007-2013) ve tür katkı İlaç Sanayi ve Dernekleri şirketlerin &#39;Avrupa Federasyonu mali katkısı oluşan kaynaklar olan 115.188. Yenilikçi İlaçlar Girişimi Web adresi <a href="http://www.imi.europa.eu/" target="_blank">http://www.imi.europa.eu/</a> . &lt;/ P&gt;

Genel değerlendirmeler: Zaman Ahead, bir etik protokolü kurmak, hastalar için anketler hazırlar, ve klinik personelinin eğitim görmek. Indirgeme mamoplasti cerrahi malzeme kullanmadan önce, yetkileri tedarik ve hasta rıza sağlamak. Doku bulaşıcı olması ve buna göre ele alınması gerekiyor olabilir. Deneysel Kanser Araştırma Enstitüsü İsviçre - Bu protokol ISREC etik komitesi tarafından onaylandı. 1. Doku Kurtarma, İşleme ve Biyo-bankacılık Biyo-bankacılık için en uygun örnek kalitesini sağlamak için, birkaç adım laboratuarına taşımak için önce hastanede yapılır. Hastanede: <ol><li> Gerekirse, indirgeme mamoplasti cerrahi ve kan örneklerinden, steril koşullar altında insan göğüs dokuları elde edilir. Doku malign lezyonların varlığını ekarte etmek için örnek olacak patolog tarafından incelenmesi gerekir. </li><li> Meme t yerleştirinsteril bir gemide başlık altında vermek ve makas, cerrahi neşter ve zaten buhar sterilizatör sterilize edilir forseps hazırlamak. Bunu açmak için bir neşter kullanılarak meme dokusunun farklı sitelerde derin kesim olun. Insan meme dokusunda sarı yağ dokusunda gömülü kanalları ve lobülleri, oluşan beyaz teller için bakmak. NOT: Sarı yağ dokusu beyaz parankimal oranı kadınlarda farklılık; tipik genç kadınlar daha epitel doku var. </li><li> Daha sonra makas ile adipoz dokudan hafifçe onları ayırmak, beyaz malzeme parçaları seçin ve forseps ile onları tutun. Kan damarlarını almaktan kaçının. </li><li> Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS), pH 7.2 doku durulayın adet kanı çıkarmak için kullanılır. Ve% 1 An (5000 birim / ml penisilin ve 5000 ug / ml streptomisin içeren)% 2 penisilin / streptomisin ile fenol kırmızısı olmaksızın F12 ortamı (Dulbecco Değiştirilmiş Kartal Ortamı F12) ihtiva eden 250 ml&#39;lik bir plastik şişe doku aktarıntibiotic / amfoterisin B (10,000 birim / mL penisilin, streptomisin 10,000 ug / ml amfoterisin B ve 25 ug / ml olmak üzere). Laboratuara taşınması için ortamda depolanmalıdır dokular. </li><li> Soğuk (kuru buz) izopentanın ile cryovials bunları dondurmak RNA ve protein çıkarma ve flaş için 5 mm çaplı - 3 adet hazırlayın. Laboratuara taşınması için kuru buz kutusuna aktarabilirsiniz. </li><li> Kalıba 5 mm ve optimum kesme Sıcaklığı (Ekim), bir tabaka ile örtün ve daha sonra soğuk izopentan ile dolu kutunun düz bir alt kalıp yer - 3 parçalarını koyun. Tam donma sonra kuru buz kutusuna kalıp aktarmak. </li><li> Formaldehit içinde paraformaldehid 5 mm çapında (PFA)% 4 ve 5 parça (FA), daha sonra RT histolojik analiz PBS içinde% 4 - 3 5 adet düzeltin. Bazı antikorlar, daha bir ya da iki diğer çalışmak üzere iki farklı sabitleyici tavsiye edilir. </li></ol> Laboratuvarda: <ol start="8"><li> Yapmakindirgeme mammoplasty ilgili tüm bilgileri cument, cerrahi ve örnekler olup olmadığını tarih sağ meme karşı soldan türetilmiştir. </li><li> -80 ° C&#39;de dondurulmuş numuneler ve tespitin 2 saat sonra histolojik kasetlerine sabit dokuları aktarın. Daha sonra 4 ° C&#39;de O / N depolama için, etanol, PBS içinde veya% 70 ya da koyun. Ertesi gün, parafin gömme için histoloji tesislerine histoloji kasetleri aktarmak. </li></ol> 2. Doku sindirimi ve Hormon Uyarım <ol><li> P2 hücre kültürü odasında bir laminer akış kabine doku örnekleri içeren şişeleri aktarın. Steril doğrama tahtası (29 x 19 cm) doku parçaları yerleştirin. Forseps ile malzemeyi tutun ve neşter ile meme parankimi (beyaz kısmı) kalan yağ ve damarları kazımak. 10 cm kültür çanak PBS beyaz malzemeyi yerleştirin. </li><li> Tüm parçalar yağlı malzemenin çıkartılması ve atılması sonra onları güvenlik kuralına görelaboratuvar s, arka doğrama tahtası üzerinde epitel doku içeren beyaz parçalar yerleştirin. Karşıt neşter kullanılarak doku kesmek ve en fazla 2 mm çaplı parçalara doğrayın. </li><li> Yeterli büyüklükte tüplerin içine kıyılmış malzemeyi yerleştirin: 1, 2.5 ve 10 ml kadar 5, 15 ya da 50 ml&#39;lik tüplere, sırasıyla. Tipik olarak 5 ml&#39;lik bir tüp verimi yeterli parafin gömülmesi ve hormon uyarımlar için malzeme ve flöresanla aktive edilen hücre bir 15 ml tüp verimi yeterli malzemenin sıralama (FACS). Daha büyük tüp alikotları dondurulması için kullanılır. </li><li> % 1 penisilin / streptomisin / amfoterisin B (fenol kırmızısı olmadan DMEM / F12) ortama aşağıdakilerden oluşan sindirim ana karışımı hazırlamak ve (Clostridium histolyticum&#39;dan Clostridiopeptidase A) bir kolajenaz. Sindirim saatlerine göre kollajenaz doz. <ol><li> 12, 24, ve kuluçkalama 36 saat için, 1.5 mg / ml, 1.0 mg / ml ve 0.5 mg nihai kolajenaz konsantrasyonu, kullanımı / ml olarak tespit edildi. 4 kez sindirim ana karışımı ekleyinsindirilmiş malzemenin hacmi yeterli ajitasyon ve havalandırma sağlamak için. NOT: deneysel tasarım ve hormon stimülasyon süresine bağlı olarak, sırasında veya enzimatik sindirim adım ve mikro kurtarma sonra ya hormonlar ekleyin. </li></ol></li><li> Numune ve kontrol aracı test etmek için, istenen konsantrasyonda hormon (lar) ekleyin. 17 β-estradiyol ve promegeston (R5020) ile stimülasyonu için 20 nM nihai konsantrasyon kullanılır. Not: R5020 ortamda doğal progesteron daha kararlı olan bir sentetik progesteron reseptör agonistidir. <ol><li> 37 ° C ve 40 rpm O / N bir inkübatör içinde silindir mikser yerleştirin tüpleri. Mikserde örnekleri yerleştirmeden önce, tüm maddi santrifüj tüplerine boyunca dağıtır sağlamak için onları çok iyi tekrar süspansiyon. </li></ol></li><li> Sindirim az 12 saat hormon stimülasyon kez en az 12 saat (O / N), alır gibi, (mikroyapıların kurtarma sonra hormonları eklemek deAdım 3 altında kuyruklu). Eğer mikro tekrar süspansiyon ve ultra-düşük bağlanma plakaları üzerinde süspansiyon yer olarak hormonları ekleyin. Doku mikro yaklaşık% 70, canlılığını muhafaza büyüme faktörü içermeyen ortam içinde 7 gün boyunca ultra-düşük bağlanma plakaları üzerinde tutulabilir. </li><li> RNA ve protein analizi için, santrifüj tüplerine 5 dakika ve flaş dondurma için 400 xg&#39;de santrifüj doku mikro toplamak. </li></ol> Doku Microstructures 3. Kurtarma <ol><li> 5 dakika boyunca 400 xg&#39;de tüp (ler) santrifüj. Santrifüj tüpünün üst yağ aspire ve 5 dakika süreyle 1,250 x g de yeni bir santrifüj tüpüne ve santrifüj, fibroblastlar içinde zenginleştirilmiş olan geri kalan sulu süpernatan, süpernatanlarının aktarın. NOT: Meme dokusu mikroyapıları sonraki tüm adımlar için, çok yapışkan olduğundan tüp hafifçe çalkalayarak pelletini. Pipetleme nedeniyle malzeme kaybetme riski tavsiye edilmez. </li&gt; <li> Mikro ve PBS,% 2 Fetal Buzağı Serumu (FCS), sulu süpernatan elde edilen fibroblastlar zenginleştirilmiş pelet yeniden süspanse. Daha sonra 5 dakika boyunca 1.250 xg&#39;de hem tüpleri dönmeye ve daha sonra süpernatantlar atın. </li><li> 3 pelet tekrar süspansiyon - 5 ml kırmızı hücre kan parçalama tamponu ve temiz tüplere aktarabilirsiniz. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca inkübe. </li><li> PBS,% 2 FCS 2x hacmi ilave edin ve 5 dakika boyunca 1250 x g&#39;de santrifüj. 5 dakika boyunca 1,250 x g hızında PBS,% 2 FCS ve santrifüj ile pelet yıkayın. Iki kez bu adımı tekrarlayın. </li></ol> Akım Sitometrisi 4. Örnekler <ol><li> Pelet% 0.25 oranında tripsin 2 ml ve hücreleri ayırmak için 1.000 ul Pipetman ile 2 dakika süreyle çok hafifçe aşağı yukarı pipetleme karıştırın ve - 1 ekleyin. </li><li> 9 ml PBS,% 2 FCS eklenerek tripsin aktivitesi inhibe. 5 dakika boyunca 450 x g&#39;de santrifüj ve 10 ml PBS,% 2 FCS içinde pelletini. </li><li> T yerleştirilen 40 mikron hücre süzgecinden üzerine hücre süspansiyonu aktarın50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpünün op tek hücrelerin hazırlanması için. Hücre süspansiyonu bir kaç mikrolitre filtrenin üstünde kalırsa, bir pipet ile süzgeçten diğer taraftan onları aspire onları filtreden geçerek yardım ve filtre mikroyapılarının ekleyebilirsiniz. </li><li> Daha sonra, ayrı bir bağışıklık hücreleri, anti-CD45, bir kokteyl ile mikro gelen fibroblastlar ve endotel hücreleri, anti-FAP ve anti-CD31 antikorları ve sırasıyla 10 lümen ve bazal hücrelerin ayrılması için bir pan-epitel işaretleyici EpCAM ve CD10 göre, FACS ile sıralamak . </li></ol> Histoloji 5. Örnekler <ol><li> Yukarıda tarif edildiği gibi, mekanik olarak ve enzimatik olarak sindirilen materyali yıkandıktan sonra, 30 dakika boyunca oda sıcaklığında PBS içinde% 4 PFA içinde 1 ml 1.5 mi, başlangıç ​​maddesi granül düzeltin. </li><li> 5 dakika boyunca 1.250 xg&#39;de Santrifüj ve 1 ile yıkayın - iki kez 2 ml PBS. </li><li> 10 dakika için 16,000 x g&#39;de santrifüjleyin. Bu süre boyunca, (Tris-Asetat-EDTA agaroz% 1 çok amaçlı hazırlanmasıTAE) tampon ve solüsyon kaynama noktasına gelene kadar mikrodalga fırında ısıtın çözüm. <ol><li> Mikrodalga fırından çözüm çıkarın ve çözüm karıştırın ve kalan agaroz parçacıkları tekrar süspansiyon yavaşça şişeyi girdap. 50 ° C&#39;ye soğutun, agaroz çözeltisi ve bir parafin baz kalıp içinde 1 ml akış 31 x 23 x 13.5 mm çapında. </li></ol></li><li> Süpernatant atılır ve katılaşan bir tabakanın üstünde yer pelet - düz bir uca sahip olan bir spatula kullanılarak agaroz (1 ila 3 mm) kadardı. Agaroz ek bir katman (40 ° C) ile hepsini kapsayacak. </li><li> Agaroz katılaşır sonra, genellikle 5 dakika içinde, parafin gömme için histoloji kasetleri içine agaroz blokları koydu. Agaroz örnekleri kalem küçük harflerle yazılmış azalma mamoplasti numarası, deneysel koşul ve tarihi hakkında tüm bilgiler kaset beyaz ofis kağıdı yerleştirin birlikte; Bu yazı sonraki tüm tedavi adımlarını dayanıklıdır. </li><li> Kasetler koyPBS O / N ya da 4 ° C&#39;de hafta sonu boyunca depolama için% 70 etanol içinde. Biz iki depolama çözümleri arasında herhangi bir fark fark değil. Sonra parafin gömme için histoloji tesislerine histoloji kasetleri aktarmak. </li></ol> 6. Dondurma Mikroyapılar (Gelecek Kültürleme) <ol><li> % 10 dimetil sülfoksit (DMSO) ile FCS içeren orta ve cryovials 1 ml&#39;lik numuneler dondurulması yeniden süspanse doku mikro. Elde edilen cryovials sayısı azaltma mammoplasty elde edilen birincil malzeme miktarına bağlıdır. </li><li> -12 ° C sıcaklık ile azalan, 6 ° C / dakika oranı ile C ila -7 sıcaklığının düşürülmesi, 5 dakika 4 ° C &#39;de yaşayan aşağıdaki program ile bir kontrollü hız dondurucu kullanılarak doku mikro içeren cryovials Freeze 6 ° C / dk, 10 dk konut hızı, 6 ° C / dakika oranı ile -40 ° C sıcaklık azaldıkça -80 ° C sıcaklıkta azalmaktadır6 ° C / dakika hızı. Sonra ° C derin dondurucuda -80 kadar cryovials aktarmak. </li><li> Ertesi gün, uzun depolama için sıvı azot tankına ° C -80 cryovials aktarın. </li></ol>

<ol><li>Beral, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer+and+hormone-replacement+therapy+in+the+Million+Women+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Breast cancer and hormone-replacement therapy in the Million Women Study.</a> Lancet. 362 (9382), 419-427 (2003).</li>
<li>MacMahon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+at+first+birth+and+breast+cancer+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+World+Health+Organ%22%5BJournal%5D)">Age at first birth and breast cancer risk.</a> Bull World Health Organ. 43 (2), 209-221 (1970).</li>
<li>Pike, M. C., Krailo, M. D., Henderson, B. E., Casagrande, J. T., Hoel, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Hormonal%27+risk+factors%2C+%27breast+tissue+age%27+and+the+age-incidence+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">'Hormonal' risk factors, 'breast tissue age' and the age-incidence of breast cancer.</a> Nature. 303 (5920), 767-770 (1983).</li>
<li>Brisken, C., O'Malley, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormone+action+in+the+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Hormone action in the mammary gland.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 2 (12), a003178(2011).</li>
<li>Levenson, A. S., Jordan, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MCF-7%3A+the+first+hormone-responsive+breast+cancer+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">MCF-7: the first hormone-responsive breast cancer cell line.</a> Cancer Res. 57 (15), 3071-3078 (1997).</li>
<li>Tanos, T., Rojo, L. J., Echeverria, P., Brisken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ER+and+PR+signaling+nodes+during+mammary+gland+development%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">ER and PR signaling nodes during mammary gland development.</a> Breast Cancer Res. 14 (4), 210(2012).</li>
<li>Roskelley, C., Desprez, P., Bissell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-dependent+tissue-specific+gene+expression+in+mammary+epithelial+cells+requires+both+physical+and+biochemical+signal+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-dependent tissue-specific gene expression in mammary epithelial cells requires both physical and biochemical signal transduction.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 91 (26), 12378-12382 (1994).</li>
<li>Kass, L., Erler, J. T., Dembo, M., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+epithelial+cell%3A+influence+of+extracellular+matrix+composition+and+organization+during+development+and+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mammary epithelial cell: influence of extracellular matrix composition and organization during development and tumorigenesis.</a> Int J Biochem Cell Biol. 39 (11), 1987-1994 (2007).</li>
<li>Graham, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+replication+licensing+and+progenitor+numbers+are+increased+by+progesterone+in+normal+human+breast%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">DNA replication licensing and progenitor numbers are increased by progesterone in normal human breast.</a> Endocrinology. 150 (7), 3318-3326 (2009).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comment+on+%22Progesterone%2FRANKL+is+a+major+regulatory+axis+in+the+human+breast%22%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Comment on "Progesterone/RANKL is a major regulatory axis in the human breast".</a> Sci Transl Med. 5 (215), 215le214(2013).</li>
<li>Brisken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progesterone+signalling+in+breast+cancer%3A+a+neglected+hormone+coming+into+the+limelight%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Progesterone signalling in breast cancer: a neglected hormone coming into the limelight.</a> Nat Rev Cancer. 13 (6), 385-396 (2013).</li>
<li>Xu, R., Boudreau, A., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+architecture+and+function%3A+dynamic+reciprocity+via+extra-+and+intra-cellular+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Tissue architecture and function: dynamic reciprocity via extra- and intra-cellular matrices.</a> Cancer Metastasis Rev. 28 (1-2), 167-176 (2009).</li>
<li>Tanos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progesterone%2FRANKL+is+a+major+regulatory+axis+in+the+human+breast%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Progesterone/RANKL is a major regulatory axis in the human breast.</a> Sci Transl Med. 5 (182), 182ra155(2013).</li>
<li>Yalcin-Ozuysal, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonistic+roles+of+Notch+and+p63+in+controlling+mammary+epithelial+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Antagonistic roles of Notch and p63 in controlling mammary epithelial cell fate.</a> Cell Death Differ. 17 (10), 1600-1610 (2010).</li>
<li>Hines, W. C., Su, Y., Kuhn, I., Polyak, K., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorting+out+the+FACS%3A+a+devil+in+the+details%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Sorting out the FACS: a devil in the details.</a> Cell Rep. 6 (5), 779-781 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada anlatılan ex vivo kültür normalde insan kadın meme bulunan diğer hücre tipleri ile birlikte sağlam kanalları ve lobülleri içeren meme dokusu mikro sağlar. Genellikle azaltma tekniği mevcut ameliyat teknikleri elde edilen insan göğüs dokusunun işlenmesi sırasında, yağ dokusu, stromal matrisin mekanik ve enzimatik sindirme ve kırmızı kan hücrelerinin lizizine çıkarılması süt kanalı parçaları ve terminal duktal lobüler birimleri zenginleştirir. Sağ süresince doğru konsantrasyonda yumuşak enzimatik sindirimi...

A correction was made to <a href="/video/52436">An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast</a>. There was an error with the author, Marie Shamsheddin&#39;s, name. The author&#39;s name has been corrected to:
Marie Shamseddin
instead of:
Marie Shamsheddin

A correction to the author list has been made for the article <a href="/video/52436">An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast</a>.

Erratum: An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Meme kanserinde mutasyon manzara hakkında bilgiler hızla artmaktadır. Daha az dikkat meme kanseri gelişimini etkileyen sistemik faktörler ödenmiştir. Üreme hormonları maruz kalma hastalığın ilerlemesine 1-3 üzerinde büyük bir etkisi vardır. Ancak, üreme hormonları, insan meme çarpmadan hangi mekanizmalar tam olarak anlaşılamamıştır. Genetiği fare modelleri ile çalışmak onlar birkaç mansap efektörlerinin 4 ile hücre içsel ve parakrin sinyal içerdiğini ortaya koymuştur. İnsan meme hormon eylem hakkında sınırlı bilgi yeterli modellerin eksikliği büyük ölçüde kaynaklanmaktadır. Östrojen reseptörü (ER), progesteron reseptörü (PR), sinyal mekanizmaları ilişkin pek çok çalışma, MCF-7 ve T47D hormon reseptör pozitif göğüs kanseri hücre çizgileri ile gerçekleştirilmiştir. Bunlar alrea vardı ilerlemiş meme kanserli hastaların plevral efüzyon elde edildidy birden tedavileri 5 aldı. İnsan meme gibi basit laboratuar çalışmalarındaki modellerde bulgular biyolojik önemi, bu in vitro modellerde tespit şüpheli ve hedef genleridir olan hayvan modellerinde 6&#39;da tanımlanan hedef genlerin farklıdır. Birincil insan meme epitel hücreleri, in vitro olarak kültürlenir onlar hormon reseptör ekspresyonu ve bu nedenle hormon yanıt 7,8 kaybetmek eğilimindedir. Bu sorun, Matrigel kullanarak karmaşık 3D yaklaşımlarla circumventd edilebilir. Bu şekilde, C. Clarke ve arkadaşları, hormon reseptörü ifade muhafaza ve projesteron uyarması 9 bir çoğalma tepkisi gösterdi göğüs epitelyal hücrelerinin kurulma başarmıştır. Bununla birlikte, in vivo progesteron reseptörü hedef genlerin önemli iki Wnt-4 ve RANKL bu sistem 9 progesteron stimülasyonu üzerine azalmadı. Bu yaklaşım, son olarak nitro ile daha fazla alınmıştır </em&gt; hormon öncesi ve RANKL&#39;ın indüksiyon 10 sağlandı. Bir uyarı, matrigel toplu bağımlı faaliyetleri vardır kalır pahalı ve sadece küçük hücre sayıları için apt bir deneysel tasarım gerektirir. In vivo ER ve PR sinyalizasyon büyük ölçüde parakrin etkileşimleri 11 aracılık bulgusuna dayanarak, biz hücrelerarası etkileşimleri muhafaza edilmesi gerektiğini savundu. Dokular olarak kaybolur bir başka önemli faktör, in vitro kültür için tek bir hücre için hücre dışı matriks ile epitelyal hücrelerinin etkileşimlerdir ayrışmış edilir; ancak bu epitel farklılaşması için çok önemli olan ve bozulma tümör oluşumu 12 önemlidir. Bu düşünceyle, biz taze cerrahi ıskarta malzeme 13 meme dokusu mikro izole etmek için bir yöntem kurdu. İç luminal ve dış myoepitheli sahip bir iki tabakalı epitelyum oluşan meme parankimi,ark hücreleri, adipoz dokudan kesilmiş, mekanik ve enzimatik ayrışma tabi tutulur. Yıkama ve santrifüj sonra, süt kanallarının parçaları birçok stromal hücreler ile yakın ilişkileri korumak olduğunu elde edilir. Bu doku mikro duyarlı hormon kalır. Model klinik örneklerden 13 valide edildi. Bu haliyle, bu işlem, bir biyolojik ve klinik olarak anlamlı bir bağlamda meme hormon etkisini incelemek için yardımcı olabilir.

<table><tbody><tr><td>Mikrolitre Santrifüj</td><td>Heraeus Biofuge Fresk</td><td>75005521</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj 5810R</td><td>Eppendorf</td><td>5810 000.327</td><td></td></tr><tr><td>Cryobox</td><td>Nalgene&nbsp; &nbsp;</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>Kontrollü Hız Dondurucu EF600 Hibe</td><td>Asimptote&nbsp;</td><td>EF600</td><td></td></tr><tr><td>CO2 inkübatörü</td><td>Hera Cell Heraeus</td><td>51022391</td><td></td></tr><tr><td>Silindirli Mikser SRT9D</td><td>Sturt</td><td>SRT9D</td><td></td></tr><tr><td>Histoloji Kasetleri</td><td>Medizintechnik</td><td>81-0021-00</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Strile Cerrahi Bıçak&nbsp;</td><td>Aesculap</td><td>BB536&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Neşter</td><td>Aesculap</td><td>BB084R</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Aesculap</td><td>BD047R</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Aesculap</td><td>BC374R</td><td></td></tr><tr><td>Parafin taban kalıbı</td><td>SAKURA</td><td>4166</td><td></td></tr><tr><td>Optimal Kesme Sıcaklığı (OCT) Kriyomatris</td><td>Termobilimsel</td><td>6769006</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin ve nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik/Antimikotik</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>DMEM F/12</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>11039-021</td><td>Ön Isıtma (37 &deg; C)</td></tr> <tr><td>Kollajenaz</td><td>Roche</td><td>11 088 793 001</td><td>Ön ısıtma (37 > C)</td></tr> <tr><td>Fetal Sığır Serumu Yaşam</td><td>Teknolojileri</td><td>10270</td>, <td>Fetal Buzağı Serumu</td></tr><tr><td>Hücre Kan Lizis Tamponu</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Agaroz</td><td>Invitrogen</td><td>16500-500</td><td></td></tr> <tr><td>ile değiştirilebilirFormaldehit</td><td>Sigma</td><td>F1635</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Roth</td><td>335</td><td></td></tr><tr><td>İzopentan</td><td>Sigma</td><td>M32631</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Merck</td><td>1009831000</td><td></td></tr><tr><td>Kriyojenik şişeler (5.0 ml)</td><td>VWR, Uluslararası</td><td>479-0820</td><td></td></tr><tr><td>Ultra düşük ataşman kültür kabı</td><td>Corning, NY 14831</td><td>3471</td><td></td></tr></tbody></table>

bir<em&gt; ex vivo</em&gt; model İnsan meme hormon eylem eğitim için

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

İnsan meme hormon eylem çalışması yeterli model sistemler eksikliği engel olmuştur. İn vitro kültüre, primer meme epitelyum hücreleri hormon reseptörü ifade kaybetme eğilimindedir. Yaygın olarak kullanılan hormon reseptörü pozitif meme kanseri hücre kuşakları in vivo duruma uygunluğu sınırlıdır. Burada, insan meme hormon etkisini incelemek için bir eks vivo modeli açıklar. Böyle azaltma tekniği mevcut ameliyat teknikleri veya mammectomies gibi cerrahi ıskarta malzeme Taze insan meme doku örnekleri mekanik ve enzimatik kanalları ve lobülleri ve çoklu stromal hücre tipleri içeren doku parçaları elde etmek için sindirilir. Büyüme faktörleri olmaksızın bazal ortamda tutulur Bu doku mikro bunların hücreler arası temas doku normal yapı, ve birkaç gün boyunca duyarlı hormon kalır. Bu maddeler hali hazırda, RNA ve protein çıkarma, histolojik analiz için işleme veya orta dondurma saklanır. Floresanaktif hücre ayrıştırma (FACS) belirli bir hücre popülasyonlarının zenginleştirilmesi için de kullanılabilir. Bu protokol son derece karmaşık, çeşitli insan örnekleri ile öteleme çalışmalar için basit, standart bir yaklaşım sağlar.

Östrojen ve progesteron rolünü incelemek ve daha iyi insan meme moleküler işlevlerini anlamak için, onların bilgilendirilmiş onam alındıktan sonra azalma tekniği mevcut ameliyat teknikleri (Şekil 1) uygulanan hastalarda taze insan meme doku örneklerinin toplamak. Biz de hastaların tıbbi ve üreme geçmişi, hem de ameliyat sırasında serum progesteron seviyelerini belirlemek için kan örneği almak. Taze azaltma tekniği mevcut ameliyat teknikleri doku mekanik ve enzimatik ayrışmış. Elde edilen doku, mikro kök...

Biz insan meme hormon eylem incelemek için yeni bir ex vivo modeli geliştirdik. Bu doku mimarisi, hücreler arası etkileşimleri ve parakrin sinyal korumak cerrahi göğüs doku numunesinin izole doku mikro dayanmaktadır.

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Model İnsan Meme Hormon Eylem Eğitim için

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Bu prosedürün genel amacı, hormon etkilerini incelemek için doku mimarisini, hücreler arası etkileşimleri ve hormon yanıt verme özelliğini koruyan bir ex vivo insan memesi modeli sağlamaktır. Model, öncelikle kanallar ve lobüllerden oluşan meme parenkiminin yağlı meme stromasından diseke edilmesiyle hazırlanan insan dokusu mikro yapılarına dayanmaktadır. Stroma, adipositlerin yanı sıra fibroblastlar, bağışıklık hücreleri ve endotel hücreleri içerir.Parankimal doku yağdan arındırıldıktan sonra, karşılıklı skalpeller kullanılarak toplu iğne başı boyutunda parçalara ayrılır. Ardından, doku kütlesi kollajenaz ile enzimatik sindirime tabi tutulur; istenirse bu adıma hormon stimülasyonu da eklenebilir. Daha sonra doku mikro yapıları santrifüj yoluyla geri kazanılır ve ardından geriye kalan yağ dokusu, fibroblastça zengin fraksiyon ve kırmızı kan hücreleri uzaklaştırılır.Bir geri kazanım prosedürünün ardından, kalan sindirilmiş meme dokusunun süspansiyonu; lüminal ve miyoepitelyal hücreler ile çevredeki bazal lamina, fibroblast endotelyal hücreler ve bağışıklık hücrelerini içeren doku mikro yapıları açısından zenginleştirilir. Son olarak, mikro yapı morfolojisini değerlendirmek için ex vi

an-ex-vivo-model-to-study-hormone-action-in-the-human-breast

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kanser tümörü çevreleyen dokunun hem de yerel pro- ve anti-inflamatuar aracılar tarafından etkilenir kompleks bir hastalıktır. Bu nedenle, daha çok deri altı modellere göre ortotrop enjeksiyon modelleri, bir şekilde daha iyi taklit eden insan patoloji kanser ilerlemesinin incelemek için yararlı olabilir.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Kurulmuş kanser hücre hatları ve ksenogratflardır son birkaç yıldır kanser araştırma dayanak noktası olmuştur. Bununla birlikte, son bulgular terapötik tepki özellikle, tümör hücre mikro-ortamı tarafından etkilendiğini göstermektedir. Bu nedenle, ilaç geliştirme amaçları için primer tümör numunelerinin bir ex vivo analiz geliştirdik.

İlköğretim Tümörleri ve / veya klinik öncesi için İlişkili Metastazlarının ve Tedavi Klinik Geliştirme Ex Vivo Tedavisi Tepki

Protokoller, insan kemik doku eksplantı model sisteminde göğüs kanseri hücre hareketi, çoğalması ve kolonizasyonu çalışmak için tarif edilmiştir.

Kültürleme İnsan Femur Doku Eksplantlarından yöntemleri Metastatik Niche Meme Kanseri Hücre Kolonizasyon Eğitim için

Östrojene duyarlı meme kanseri hücreleri için kemik iliğinde in vitro bir uyku hali modeli geliştirdik. Bu protokolün amacı, uyku halinin moleküler ve hücresel biyolojisinin incelenmesi ve daha sonraki in vivo testler için hipotezlerin üretilmesi için modelin kullanımını göstermektir.

Bir<em&gt; In Vitro</em&gt; Kemik İliği östrojen duyarlı Meme Kanseri Dormansi Model: Moleküler Mekanizması Çalışmaları ve Hipotez Üretimi için A Takım

İnsan meme epitelinin hormon etkisini incelemek için uygun bir 3D kültür modelini tanımlıyoruz.

İnsan Meme Bezi Epitelinin Bir Hormon duyarlı 3D Kültür Modeli

Burada, biz meme kanseri hücrelerinin basit, daha az invaziv ve ele kolay bir şekilde meme yağ yastığı içine implant için bir protokol mevcut ve bu fare orthotopic meme kanseri model uygun meme yağ yastığı yapısına sahip çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir kanser.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Bu protokol, raf malzemeleri ile birincil insan meme dokusu kullanılarak meme kanserini incelemek için bir in vitro mikrofizyolojik sistemin inşasını açıklar.

Mikrofizyolojik Sistem Kullanarak İnsan Meme Dokusunda Meme Kanseri Modellemesi

Meme kanseri beyin metastatik hücrelerinin gerçek zamanlı ilaç ve radyasyon yanıtını ölçmek için organotipik bir beyin dilimi modelinde bir protokol sunuyoruz. Yöntemler, çeşitli tedavilerin meme kanserinden beyin metastazları üzerindeki terapötik etkilerini, beyin mikroçevre arayüzü içinde ex vivo bir şekilde araştırmak için nicel bir test sağlar.

Meme Kanseri Beyin Metastatik Tümör Büyümesini İncelemek ve Hedeflemek için Ex Vivo Beyin Dilimi Modeli

Meme epitel hücreleri ve endotel hücreleri arasındaki çapraz konuşma, meme kanserinin ilerlemesine, tümör büyümesine ve metastaz yapmasına önemli ölçüde katkıda bulunur. Bu çalışmada meme kanseri hücrelerinden vasküler ve/veya lenfatik endotel hücreleri ile birlikte sferoidler yapılmış ve meme kanseri araştırmaları için in vitro sistem olarak uygulanabilirliklerini ortaya koymaktadır.

Meme Kanseri Araştırmaları için Potansiyel Fonksiyonel In vitro Model Olarak Meme Epitel ve Endotel Hücre Sferoidleri

Öğrenin, insan meme dokusunda hormon etkisini incelemek için doku mimarisini koruyan yeni bir ex vivo model geliştirmeyi. Bu yöntem, meme kanseri ve hormonla ilgili biyolojik süreçlerin araştırılmasına olanak tanır.

Bir

Daha fazla video keşfet