Africanized ve Avrupa Bal Arısı Made by beebread besin tuzu karşılaştırılması yöntemleri ve Hemolenf Protein Titrelerin Etkileri

Aşağıdaki deneyin genel amacı, iki bal arısı alt türü tarafından yapılan polen ve arı ekmeğindeki besin maddelerini ölçmek ve protein titrelerinin tüketimini ölçmektir. Bu, Avrupa ve Afrika arılarının aynı polen kaynağına kapalı bir alanda sunulması ve arıların polenleri kolonilerinde arı ekmeği olarak depolamalarına izin verilmesiyle elde edilir. Daha sonra arı ekmeği kafeslerde yeni çıkan Avrupa ve Afrika arılarına verilir.

Daha sonra kafeslerdeki arılar dört, yedi ve 11 günlük beslenmeden sonra örneklenir ve tüketimi tahmin etmek için her kafeste kalan arı ekmeği miktarı ölçülür. Son olarak, Avrupa ve Afrikalı arılar tarafından yapılan polen ve arı ekmeğindeki protein ve amino asitler de dahil olmak üzere besin maddelerinin konsantrasyonu ölçülür ve arı ırkları arasında karşılaştırılır. Sonuçlar, arı ekmeğinin protein ve bazı amino asit konsantrasyonlarının yanı sıra hemolenf protein titreleri bakımından polenden farklı olduğunu göstermektedir.

Bu yöntem, bal arısı beslenmesi çalışmalarında, polen kaynağının arı ekmeğindeki besinler üzerindeki rolü ve bu besinlerin farklı alt türlerden, diş tellerinden ve genotiplerden arılar tarafından nasıl elde edildiği gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Teknikleri gösteren, laboratuvarımda öğrenci teknisyen olan Emily Watkins de Young'dır Bal arısı kolonilerine polen tuzakları yerleştirdikten sonra başlamak için, polenleri toplayın, poleni ince bir toz haline getirmek için bir kahve değirmeni kullanın, her biri Afrika bal arıları veya bir HB ve Avrupa bal arıları veya kapalı bir uçuş alanında veya EFA'da EHB olmak üzere beş koloni oluşturun, böylece arılar sadece işçilerin EHB ve A HB kolonileri arasında sürüklenmesini önlemek için sağlanan polenle beslenirler. EFA'yı ayrı bölümlere ayırın, böylece arılar EFA'nın her bir bölümüne geçemezler, 3.500 ila 4.000 işçi arı ile ayrı ayrı EHB veya bir HB kolonisi yerleştirin, nektar ballı balmumu peteği, olgunlaşmamış kuluçka ve boş petek, EFA'nın her bölümüne bir tepsi yerleştirerek ve tepsilere yaklaşık 60 gram polen yayarak kolonilere öğütülmüş polen

Bu şekilde, dövme yapan arılar polenleri müfredat yükleri olarak toplayabilir ve arıları kafeslerde beslemek için arı ekmeği olarak kolonilerinde depolayabilirler. Bir HB ve EHB kolonilerinden mühürlenmiş işçi kuluçkalarının çerçevelerini, 32 ila 24 santigrat derece ve %40 bağıl neme ayarlanmış bir çevre odasında ayrı çıkış kafeslerine yerleştirin. İşçiler yaklaşık 24 saat içinde ortaya çıktıklarında, 12 pleksiglas biyotahlil kafesi kurdu ve her kafese 100 yeni çıkmış EHB veya bir HB işçi arı ekledi, her kafese bilinen sayıda Avrupa bbr veya EBB veya Afrikalı B ekmeği veya A, B, B hücreleri içeren bir tarak bölümü yerleştirdi ve aşağıdaki tedavi koşullarını oluşturdu.

A H-B-B-E-H-B, AB ile beslenen A-B, BAHB Fed EBB ve EHB Fed EBB, her kafese su şişeleri ve hacimce formüle edilmiş% 30'luk bir sükroz çözeltisi ekler. 11 günlük çalışma süresi boyunca şeker şurubu ve su şişelerini günlük olarak değiştirin.

Örnek 10, yeni çıkan EHB ve A HB çalışanlarını kafeslere yerleştirmeden önce. Bunlara sıfırıncı gün B'leri olarak atıfta bulunun ve hemolenf protein konsantrasyonları için bir temel olarak hizmet etmelerini sağlayın. Dört, yedi ve 11 gün boyunca EBB veya A, B ile beslendikten sonra her kafesten 10 arı çıkarın.

Canlı arıları ayrı şahin tüplerine yerleştirin ve buz paketlerinin üzerine koyun. Hemolenf protein konsantrasyonunun analizi için dört arının alt örneğini seçin 11. günde arılardan numune aldıktan sonra, hala arı ekmeği içeren petek hücrelerinin sayısını sayın. Kalan arı ekmeğini her kafesteki hücrelerden çıkarın ve kafes ayrı mikro santrifüj tüplerinde saklayın.

pH'da çözünür protein konsantrasyonu ve amino asit içeriği analiz edilene kadar BBR numunelerini eksi 80 santigrat derecede tutun. Protein analizi yapmak için, her kafesten altı polen örneği ve bir EBB ve A BB örneği alın. 20 miligram polen veya bbr'yi bir mililitre 0.1 molar PBS girdabı ile 10 saniye karıştırın ve bir dakika boyunca 571.2 G'de santrifüjleyin.

S süpernatantının 25 mikrolitrelik bir örneğini çıkarın ve 96 kuyulu düz tabanlı, E-I-A-R-I-A polistiren plakalı bir kuyuya yerleştirin. Her numuneyi üç kuyucukta çoğaltın. 20 mikrolitrelik bir kılcal borunun ucunu ısıtın ve ısıtılmış bölümü iğne benzeri bir nokta oluşana kadar çekin.

Daha sonra, kılcal boruyu göğüs kafesinin sağ yan kısmına, kanat bağlantı noktasına yakın bir yere yerleştirerek her kafesten toplanan arılardan hemolenf çekin. Gerekirse aynı tüpü karın tur kılavuzları arasındaki zara yerleştirerek ek lenf toplayın. Dokuz mikrolitre 0.1 molar PBS'ye bir mikrolitre hemolenf ekleyin.

Bir Bradford protein tahlil kiti kullanın ve toplam çözünür proteini belirlemek için üreticinin talimatlarını izleyin. Konsantrasyonlar, bu grafiklerde gösterildiği gibi metin protokolüne göre amino asit analizi gerçekleştirir, hem pH değeri hem de protein konsantrasyonu bbr'de polenden daha düşüktü. Hem EHB hem de A HB, burada gösterildiği gibi EBB'den daha fazla A BB tüketti.

A HB'nin hemolenfindeki çözünür protein seviyeleri, tükettikleri bbr türünden bağımsız olarak EHP'den anlamlı derecede yüksekti. Hemolenf protein seviyelerindeki bu farklılıklar, EHB ve A HB'nin her bir bbr tipinden benzer miktarlarda tüketmesine rağmen meydana geldi. Bal arıları için gerekli olan 10 amino asitten histamin hariç hepsi polende tespit edildi.

Çoğu durumda, arı ekmeğinde ölçülen amino asit konsantrasyonları polenden daha yüksekti. Örneğin, lösin ve tionin konsantrasyonları bbr'de polen ile karşılaştırıldığında yaklaşık% 60 daha yüksekti ve valin konsantrasyonları yaklaşık% 25 daha yüksekti. Alanin aspartik asit glutamin seviyeleri de bbr'de polenden daha yüksekti.

Amino asit konsantrasyonları, fenilalanin ve sistin hariç, A, B, B ve EBB arasında büyük ölçüde sapmadı. Fenilalanin seviyeleri, EBB veya polen ile karşılaştırıldığında A BB'de yaklaşık iki kat daha yüksekti. Sistin konsantrasyonları EBB'de A, B, B veya polene göre daha düşüktü.

Bu videoyu izledikten sonra, arı ekmeği, polen ve bal arısı hemolenfindeki protein konsantrasyonlarını nasıl değerlendireceğinizi iyi anlamış olmalısınız. Bu tekniklerle, gıda depolama ve tüketimi ile hemolenf protein konsantrasyonlarının genetik veya çevresel faktörlerden etkilenip etkilenmediğini belirleyebilirsiniz.