Name: Fare Organlar Uygulanan Yüksek Hassasiyetli Çinko İzotopik Ölçümler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Keşfedin fare organlarında yüksek hassasiyetli çinko izotop ölçümleri için iyon değişim kromatografisi ve kütle spektrometrisi yöntemlerini. Bu teknik çinko dağılımı ve taşınma mekanizmalarını anlamak için değerli veriler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

FM Chaire d&#39;Excellence IDEX Sorbonne Paris Cité aracılığıyla ANR fon kabul, INSU PNP hibe yoluyla, Institut Universitaire de France yanı sıra Sorbonne Paris Cité (ANR-10-LabX-0023 ve ANR at LABEX UniverEarth programı -11-IDEX-0005-02). Biz de Avrupa Topluluğu&#39;nun H2020 çerçeve programı / ERC hibe anlaşması # 637503 (Bozulmamış) kapsamında Avrupa Araştırma Konseyi fon teşekkür ederim.

NOT: hayvanlarla ilgili Prosedürler Université Paris Diderot Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 1. Malzemenin Hazırlanması <ol><li> Alt kaynatma kirlilikten arındırmak için asit 1 L (HNO 3, HBr) distile olur. </li><li> Sıcak (~ 100 ° C) &#39;de beher ve ucu adaptörü temizleyin en az iki gün HNO 3 asidi banyosu yoğunlaştı. </li><li> Birkaç gün boyunca soğuk 3 N HNO 3 banyosu içinde pipet uçları yıkayın ve de-iyonize su ile tek tek üç kez yıkayın. </li></ol> 2. Numune Hazırlama <ol><li> Ketamin ve ksilazin intraperitoneal enjeksiyonu ile farelere anestezi. Ayak tutam yöntemi ile anestezi değerlendirin. </li><li> 1.5 ml tüpler içinde heparin mevcudiyetinde bir kardiyak delme ile kan toplanır. </li><li> Santrifüjleme (10 dakika, 1500 x g) kan hücrelerinden plazma ayrılır ve polipropilen c plazma aktarmakPolipropilen ipuçlarını kullanarak ryogenic şişeler. </li><li> Kalbinden DPBS hepatik ven kesme ve enjekte ederek organlara kalan kanı çıkarın. Servikal dislokasyon ile fare ölümü değerlendirin. </li><li> Steril paslanmaz çelik aletlerle organlarını varsa yağ çevreleyen onları serbest ve polipropilen kriyojenik şişeleri onları-dondurma ani olarak. </li></ol> 3. Kimyasal saflaştırma <ol><li> İlk olarak, konsantre (% 30) ~ 1 ml H2O 2 ve konsantre edilerek (~ 15 M) HNO 3 ~ 1 ml &#39;lik bir karışımı içinde örnekleri çözülür. Davlumbaz içindeki tüm adımları yapın. <ol><li> 15 ml teflon beher içerisine ilgi bütün organı yerleştirin. Daha sonra, beher 5 H2O 2 / HNO 3 ekleyin. Organik maddenin oksidasyon reaksiyonu ve CO 2 salınımı nedeniyle sıçramalarını önlemek için bir kaç dakika için açık bir beher tutun. </li><li> Son olarak, Abo sıcak bir plaka üzerinde beheri koydusolüsyon saat kadar veya bir kaç ut 100 ° C çok açıktır. </li></ol></li><li> Beher açın ve yaklaşık 100 ° C&#39;de bir sıcak plaka üzerinde çözeltisi kurutun. </li><li> Örnek kuruduktan sonra, numunelere 1.5 N HBr 1 ml ekleyin; beher kapatın ve birkaç saat boyunca 100 ° C&#39;de sıcak bir plaka üzerinde çözülür edelim. </li><li> Bu arada 500 ul sütunları hazırlar. <ol><li> Sütun AG1X8 200-400 meş reçine 500 ul ekleyin ve altında bir çöp beher sütun rafa koydu. 5 mi M? ⋅ cm su, 0.5 N HNO 3 5 ml, 5 ml su, 0.5 N HNO 3 5 ml 18.2 ve su daha sonra 5 mi: sırayla değişen reçineyi yıkayın. 1.5 N HBr 5 ml reçine hale getirin. </li></ol></li><li> Bardak oda sıcaklığına soğumasını bekleyin, sonra sıcak plaka beher çıkarın ve yaklaşık 30 dakika boyunca bir ultrason banyosunda koydu ve. </li><li> Beher soğutulur ve reçine yıkandı sonra, beher açın. T ucu adaptörü koyO, şırınga, bir pipet ekleyin; numune 1 ml pipet ve (reçine tahrik etmemek için çok yavaş) reçine üzerine yük. </li><li> Tüm sıvı sütunu içinden geçtikten sonra, 1.5 N HBr 5 ml ekleyin. </li><li> 1.5 N HBr 5 mi kolonu boyunca geçtikten sonra, temiz bir 15 ml&#39;lik bir cam kaba olan çöp kabı değiştirin. </li><li> Aynı anda, 0.5 N HNO 3 2.5 ml 5 ml. Bu aşamada çinko reçineden elüe edilir. </li><li> HNO 3 5 ml sütunu içinden geçtikten sonra, beher çıkarın ve kuruyana kadar 100 ° C&#39;de bir sıcak plaka üzerine yerleştirin. </li><li> Sütun tutucudan sütun çıkarın; reçine çöp (her bir örnek için, yeni bir reçine kullanmak). </li><li> Örnek kuruduktan sonra, daha küçük bir sütun üzerinde asidi (100 ul), aynı hacimde protokolü tekrar ve daha sonra kuruyana kadar bir sıcak plaka üzerine yerleştirin. Örnek kitle spektrometresi için hazırdır. </li></ol> 4. Kütle-spektrometresi Ölçümü <ol><li> Zn izotop alçı AnalizÇok toplayıcı-indüktif eşleşmiş plazma-kütle spektrometresi (MC-ICP-MS) lan de. <ol><li> Tablo 1&#39;de özetlenmiştir makine parametrelerini kullanın. </li></ol></li><li> 62 Ni, 63 Cu, Zn 64, 65 Cu, Zn 66, 67 Zn ve 68 Zn KÜTLE (m / z) toplamak için Faraday bardak yerleştirin. </li><li> Izotop analizi için 0.1 M HNO 3 500 ppb Zn içeren bir solüsyon hazırlayın. </li><li> 100 ul / dakika teflon nebulizer ile birlikte bir püskürtme odası kullanarak Zn 500 ppb çözeltisi analiz eder. Her bir örnek için, her bir tarama entegrasyon süresi 8,389 sn olduğu 30 taramalar (30 döngü, 1 blok) ölçer. </li><li> Boş solüsyonu (örnekleri yeniden çözünmesi için kullanılan 0.1 M HNO 3 çözeltisi) on-tepe sıfır yoğunlukları çıkarılarak arka plan düzeltin. </li><li> Kontrol ve 62 Ni doruk şiddeti ölçülerek doğru mümkün olan 64 Ni izobarik girişim.Doğru, 64 Ni / 62 Ni oranı doğal olduğunu enstrümantal kitle önyargı bu değeri (0,2548) varsayalım, ve daha sonra kütle 64 64 Ni kaldırın: Ölçülen 64 Zn gerçek = 64 Zn - ölçülen 64 Ni = 64 Zn - (64 Ni / 62 Ni) 62 x doğal Ni ölçüldü. </li><li> JMC Lyon Zn standardının 500 ppb, standart solüsyonu (ya da IRMM-3702 gibi başka mevcut standart) numunelerin her bracketing ile enstrümantal kitle önyargı düzeltin. Önce ve örnek eksi 1 sonra ölçüldü ve 1.000 ile çarpılması iki standart 66 Zn / 64 Zn oranının ortalama numunenin 66 Zn / 64 Zn oranı bölünmesi standart braketi gerçekleştir (Denklem 1 e bakınız). JMC Lyon Zn standart Tipik dış hassasiyet 0,05 permil / amu (2 standart sapma, 2 sd) &#39;dir. </li></ol>

<ol><li>Marechal, C. N., Telouk, P., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+analysis+of+copper+and+zinc+isotopic+compositions+by+plasma-source+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Precise analysis of copper and zinc isotopic compositions by plasma-source mass spectrometry.</a> Chemical Geology. 156 (1), 251-273 (1999).</li>
<li>Marechal, C. N., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-exchange+fractionation+of+copper+and+zinc+isotopes%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Ion-exchange fractionation of copper and zinc isotopes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 66 (9), 1499-1509 (2001).</li>
<li>Weiss, D. J., Mason, T. F. D., Zhao, F. J., Kirk, G. J. D., Coles, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+discrimination+of+zinc+in+higher+plants%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytologist%22%5BJournal%5D)">Isotopic discrimination of zinc in higher plants.</a> New Phytologist. 165 (3), 703-710 (2005).</li>
<li>Jouvin, D., Louvat, P., N, M. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotopic+fractionation%3A+why+organic+matters%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Zinc isotopic fractionation: why organic matters.</a> Environ Sci Technol. 43 (15), 5747-5754 (2009).</li>
<li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+fractionation+and+transport+mechanisms+of+Zn+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Isotopic fractionation and transport mechanisms of Zn in plants.</a> Chemical Geology. 267 (3-4), 125-130 (2009).</li>
<li>Moynier, F., Herzog, G., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+composition+of+zinc%2C+copper%2C+and+iron+in+lunar+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Isotopic composition of zinc, copper, and iron in lunar samples.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 70 (24), 6103-6117 (2006).</li>
<li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+fractionation+of+zinc+in+tektites%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+Planet.+Sci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Isotopic fractionation of zinc in tektites.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 277 (3-4), 482-489 (2009).</li>
<li>Chen, H., Savage, P., Teng, F. Z., Helz, R., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+fractionation+during+magmatic+differentiation+and+the+isotopic+composition+of+the+bulk+Earth%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+Planet.+Sci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope fractionation during magmatic differentiation and the isotopic composition of the bulk Earth.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 369-370, 34-42 (2013).</li>
<li>Moeller, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calibration+of+the+new+certified+materials+ERM-AE633+and+ERM-AE6447+for+copper+and+IRMM+3702+for+zinc+isotope+amount+ratio+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Geostd.+Geoan.+Res%22%5BJournal%5D)">Calibration of the new certified materials ERM-AE633 and ERM-AE6447 for copper and IRMM 3702 for zinc isotope amount ratio determination.</a> Geostd. Geoan. Res. 36 (2), 177-199 (2012).</li>
<li>Bigeleisen, J., Mayer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calculation+of+equilibrium+constants+for+isotopic+exchange+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Calculation of equilibrium constants for isotopic exchange reactions.</a> J. Chem. Phys. 15, 261-267 (1947).</li>
<li>Luck, J. M., Ben Othman, D., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zn+and+Cu+isotopic+variations+in+chondrites+and+iron+meteorites%3A+Early+solar+nebula+reservoirs+and+parent-body+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Zn and Cu isotopic variations in chondrites and iron meteorites: Early solar nebula reservoirs and parent-body processes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 69 (22), 5351-5363 (2005).</li>
<li>Moynier, F., Dauphas, N., Podosek, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Search+for+70Zn+Anomalies+in+Meteorites%5BTitle%5D)+AND+%22Astrophys.+J%22%5BJournal%5D)">A Search for 70Zn Anomalies in Meteorites.</a> Astrophys. J. 700 (2), L92-L95 (2009).</li>
<li>Paniello, R., Day, J., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zn+isotope+evidence+for+the+origin+of+the+Moon%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Zn isotope evidence for the origin of the Moon.</a> Nature. 490 (7420), 376-380 (2012).</li>
<li>Pichat, S., Douchet, C., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+variations+in+deep-sea+carbonates+from+the+eastern+equatorial+Pacific+over+the+last+175+ka%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+and+Planetary+Science+Letters%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope variations in deep-sea carbonates from the eastern equatorial Pacific over the last 175 ka.</a> Earth and Planetary Science Letters. 210 (1-2), 167-178 (2003).</li>
<li>Moynier, F., Fujii, T., Shaw, A., Le Borgne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+of+natural+Zn+isotopes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous of natural Zn isotopes in mice.</a> Metallomics. 5 (6), 693-699 (2013).</li>
<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bodily+variability+of+zinc+natural+isotope+abundance+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Com.+Mass.+Spec%22%5BJournal%5D)">Bodily variability of zinc natural isotope abundance in sheep.</a> Rapid Com. Mass. Spec. 24, 605-612 (2010).</li>
<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+Cu%2C+Fe%2C+and+Zn+isotopic+patterns+in+organs+and+body+fluids+of+mice+and+sheep%2C+with+emphasis+on+cellular+fractionation%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Contrasting Cu, Fe, and Zn isotopic patterns in organs and body fluids of mice and sheep, with emphasis on cellular fractionation.</a> Metallomics. 5 (11), 1470-1482 (2010).</li>
<li>Urgast, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+ratio+imaging+of+rat+brain+thin+sections+from+stable+isotope+tracer+by+LA-MC-ICP-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope ratio imaging of rat brain thin sections from stable isotope tracer by LA-MC-ICP-MS.</a> Metallomics. 4, 1057-1063 (2012).</li>
<li>Marin-Carbonne, J., Rollion-Bard, C., Luais, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-situ+measurements+of+iron+isotopes+by+SIMS%3A+MC-ICP-MS+intercalibration+and+application+to+a+magnetite+crystal+from+the+Gunflint+chert%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Geol%22%5BJournal%5D)">In-situ measurements of iron isotopes by SIMS: MC-ICP-MS intercalibration and application to a magnetite crystal from the Gunflint chert.</a> Chem. Geol. 285 (1-4), 50-61 (2011).</li>
<li>Fietzke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boron+isotope+ratio+determination+in+carbonates+via+LA-MC-ICP-MS+using+soda-lime+glass+standards+as+reference+material%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anal.+Atom.+Spec%22%5BJournal%5D)">Boron isotope ratio determination in carbonates via LA-MC-ICP-MS using soda-lime glass standards as reference material.</a> J. Anal. Atom. Spec. 25, 1953-1957 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

ölçümlerin tekrarlanabilirliği farklı analitik oturumları sırasında yürütülen aynı numunelerin çoğaltılmış analizlerle değerlendirilir. Örnek 6 için, aynı karasal kullanıcıların rock 7 defa tekrarlanır olan ve Tablo 2&#39;de rapor edilen sonuçları elde edilmiştir. Izotop fraksiyon 10 teorisinin beklenen ve bugüne kadar herhangi bir güneş sistemi malzeme ölçüldüğü gibi (örneğin, göktaşı 11-13, 3-5, derin deniz çökelleri 14,...

yüksek hassasiyetli ölçümü (daha iyi 100 ppm / atomik kütle birimi) çinko izotop bileşimi sadece çoklu-toplayıcı plazma kaynak kitle spektrometresi gelişimine yaklaşık 15 yıl sayesinde mümkün olmuştur ve o zamandan beri çoğunlukla Earth uygulanmış ve gezegen bilimleri. Tıp alanında uygulamaları yenidir ve çinko metabolizmasını (örneğin, Alzheimer hastalığı) modifiye hastalıklar için biyobelirteçler gibi güçlü bir potansiyele sahiptir. Bu makale çeşitli fare organlarda yüksek hassasiyetle çinkonun doğal izotop oranları ölçmek için bir yöntem bildirir. Aynı insan örnekleri için geçerli olacaktır. yöntem, organ, atomunu kalan çinkonun kimyasal saflaştırma ve daha sonra bir kitle spektrometresi üzerinde izotop oranı analiz çözünme meydana gelir. Zn izotop ölçümlerin kaliteli kimyasal arıtma kalitesi (Zn saflığı, düşük boş abone ol bağlıdırörnek Zn miktarına ared, yüksek kimyasal usul verim) ve enstrümantal önyargı kontrolü. Nihai Zn fraksiyonunun yüksek saflıkta bir matris efekti oluşturmak İzobarik müdahaleler ve non-izobarik girişim hem kaldırmak için gereklidir. Isobaric nuclides doğrudan müdahaleler (örneğin, 64 Ni) oluşturun. Sigara izobarik müdahaleler olarak adlandırılan &quot;matris&quot; etkisi oluşturabilir ve numuneler 1 göre olan saf çinko standardına göre iyonizasyon durumunu değiştirerek ölçümleri analitik hassasiyet değiştirebilir. Düşük boş (&lt;10 ng) dış Zn ile numunelerin kontaminasyon olduğunu gösterir önyargı ölçülen izotop bileşimini olur o. Zn izotopları, iyon-değiştirme kromatografisi 2 boyunca kısımlara gibi, bütün Zn atomları toplanması herhangi bir izotopik fraksiyonasyon kimyasal işlemi tam verim sahip olması gerektiği anlamına gelen oluşmasını temin eder. Son olarak, kütle spektrometresi ölçümü sırasında enstrümantal izotop fraksiyon düzeltilmesi &quot;standart dizeleme&quot; yöntemi ile yapılır. Bu nedenle, ana zorluklar elde etmek için hassas ölçümler başka atomlar veya moleküller temiz tam verim kimyasal arıtmaya üreten, (boş, yani düşük) dış kirlenmeyi kontrol ve kütle spektrometresi-enstrümantal izotop fraksiyonasyon düzeltiyorsanız. Bu yazıda, fare organları yanı sıra kitle spektrometresi ölçümlerinden Zn ayırmak için analitik protokol anlatacağız. ekstraksiyon, anyon-değişim reçine mikro sütununa (0.5 ul ve 0.1 ul) ile seyreltildi asitlerin düşük miktarda (HBr / HNO 3 ortam) kullanılarak yapılır. Bu tam bir verim vardır ve ölçümler harici tekrarlanabilirlik 66 Zn / 64 Zn oranı daha iyi 50 ppm var. Meth diğer bir avantajıod çok hızlı olmasıdır. Bu yüzden, yöntem, çok iyi bir bu analitik yöntemler geliştirilmiştir bilimleri ile karşılaştırıldığında numune çok sayıda analiz etmek için ihtiyacı olan, tıp şekilde uyarlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>Çoklu koleksiyon endüktif olarak bağlanmış plazma kütle spektrometresi</td><td>Thermo-Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anyon değiştirici reçine AG1 X8 200-400</td><td>Bio-Rad</td><td>140-1443-MSDS</td><td></td></tr><tr><td>Teflon beherler</td><td>Savillex&nbsp;</td><td>200-015-12</td><td></td></tr><tr><td>Daralan teflon ile yapılmış ev yapımı teflon</td><td></td><td></td><td></td> colunms</tr></tbody></table>

fare organlar uygulanan yüksek hassasiyetli Çinko İzotopik Ölçümler

High Precision Zinc Isotopic Measurements Applied to Mouse Organs

Biz fare organlarda yüksek hassasiyetli çinko izotop oranları ile ölçmek için bir prosedür mevcut. Çinko doğal fare organları arasında parçalandı olan 5 duraylı izotop (64 Zn, 66 Zn, 67 Zn, 68 Zn ve 70 Zn) oluşmaktadır. Biz ilk Zn atomları boşaltmak için farklı organlara çözmek için nasıl gösterir; Bu adım, HNO 3 ve H2O 2 bir karışımı ile gerçekleştirilir. Daha sonra, bir seyreltik HBr / HNO 3 ortam içinde anyon değişim kromatografisi ile izobarik etkileşimler (örneğin, Ni), özellikle de, diğer elemanları çinko atomu saflaştırılması. Bu, ilk iki adım yüksek saflıkta kimyasallar kullanılarak temiz bir laboratuarda gerçekleştirilmiştir. Son olarak, izotop oranları düşük çözünürlükte, çoklu toplayıcı indüktif çiftli-plazma kütle spektrometre kullanılarak-ölçülür. Numuneler düzeltmesi olan bir püskürtme odası ve kütle-spektrometresi ile indüklenen izotopik parçalaması kullanılarak enjekte edilirBir standart (standart dizeleme tekniği) oranına örneklerin oranının karşılaştırarak ted. Bu, tam tipik prosedür 50 ppm (2 sd) tekrarlanabilirlik ile bir izotop oranı üretir.

1.5 N HBr, ana çinko türleri (ZnBr3-) anyon değiştirme reçinesi ile form güçlü kompleksleri, çoğu diğer elemanlar reçine ile etkileşime yok iken. Çinko, daha sonra seyreltilmiş HNO 3 orta değiştirme reçinesi 6,7 salınır Zn Zn 2+ türleşmesini değiştirerek elde edilir. Izotop oranı tipik olarak, standart göre 1000 sapmalar başına kısımlar olarak ifade edilir: <img alt="Denklem 1" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52479/...

Fare organlarında yüksek hassasiyetli çinko izotop oranları ile ölçüm yapma tekniğini sunuyoruz.

Fare Organlar Uygulanan Yüksek Hassasiyetli Çinko İzotopik Ölçümler

We present a procedure to measure with high precision zinc isotope ratios in mouse organs. Zinc is composed of 5 stable isotopes (64Zn, 66Zn, 67Zn, 68Zn ...

Bu prosedürün genel amacı, fare organlarındaki çinko izotop oranlarını yüksek hassasiyetle ölçmektir. Bu işlem, öncelikle farklı organların çözülerek ve asitler kullanılarak tüm atomların çözeltiye serbest bırakılmasıyla gerçekleştirilir; ardından sapma çözeltisi uygulanır ve kurutulmuş materyal hidrojen bromür içinde yeniden süspanse edilir. Daha sonra, numunelerdeki çinkoyu diğer tüm elementlerden saflaştırmak için koşullandırılmış bir yer çekimi kolonu kullanılarak iyon değişim kromatografisi uygulanır. Çinko, nitrik asit kullanılarak reçineden elüe edilir.Son adım, çok kolektörlü indüktif eşleşmiş plazma kütle spektrometresi kullanarak çinko izotop oranlarının ölçülmesidir. Nihayetinde, izotopik kompozisyon, farklı organlardaki çinko izotoplarının denge dağılımı ölçülerek vücudun çinko dengesini değiştiren hastalıkların teşhisinde kullanılır. Bu nedenle, bu yöntem fare organları arasındaki çinkonun doğal dağılımı ve taşıma mekanizmaları hakkında bilgi sağlamak amacıyla geliştirilmiştir.Herhangi bir hayvana uygulanabilir ve nihayetinde Alzheimer hastalığı gibi organlar arasındaki çinko dengesini bozan hastalıkların teşhisinde kullanılabilir. Bu prosedüre, materyallerin ve numunenin hazırlanmasıyla başlayın; yaklaşık 1 ml %30'luk hidrojen peroksit ve yaklaşık 1 ml derişik nitrik asitten oluşan bir karışım hazırlamak için kimyasal saflaştırma işlemlerini bir çeker ocak içerisinde gerçekleştirin. İlgili organın tamamını 15 ml'lik bir Teflon bekere yerleştirin.Ardından karışımı behere ekleyin. Organik maddenin oksidasyon reaksiyonu ve karbondioksit çıkışına bağlı sıçramaları önlemek için beheri birkaç dakika açık tutun. Son olarak, çözelti tamamen berraklaşana kadar veya birkaç saat boyunca beheri yaklaşık 100 °C sıcaklıktaki bir ısıtıcı tabla üzerine yerleştirin.Ardından, beherin kapağını açın ve çözeltiyi bir ısıtıcı tabla üzerinde yaklaşık 100 °C'de kurutun. Numune kuruduğunda, numuneye bir mililitre hidrojen bromür ekleyin. Beheri kapatın ve 100 °C'deki ısıtıcı tabla üzerinde birkaç saat boyunca çözünmeye bırakın.Bu sırada, 500 mikrolitrelik kolonları hazırlayın. Kolona 500 mikrolitre Ag one x 8 200 400 mesh reçine ekleyin ve kolonu, altında bir atık beheri bulunan kolon rafına yerleştirin. Reçineyi, beş mililitre 18,2 mega ohm cm su ve beş mililitre 0,5 normal nitrik asit kullanarak sırayla iki kez yıkayın, ardından beş mililitre su ile yıkayın.Son olarak reçineyi beş mililitre hidrojen bromür ile koşullandırın. Ardından, beheri ısıtıcı plakadan alın ve bir ultrasonik banyoya yerleştirin. Beherin oda sıcaklığına soğuması için yaklaşık 30 dakika bekleyin. Beher soğuduğunda ve reçine yıkandığında, beheri açın.Uç adaptörünü şırıngaya takın ve bir pipet ucu ekleyin. Ardından, numuneden bir mililitre pipetleyin ve reçineyi sarsmamak için numuneyi reçine üzerine çok yavaş bir şekilde yükleyin. Sıvının tamamı kolondan geçtikten sonra, beş mililitre hidrojen bromür ekleyin.Hidrojen bromürün kolondan geçmesine izin verin ve ardından atık beheri temiz bir 15 mililitrelik beherle değiştirin. Sonra, her seferinde 2,5 mililitre olacak şekilde toplam beş mililitre nitrik asit ekleyin. Bu aşamada, çinko reçineden ayrılır.Nitrik asit kolondan geçtikten sonra beheri çıkarın ve kuruyana kadar 100 °C sıcaklıktaki bir ısıtıcı tabla üzerine yerleştirin. Kolonu kolon tutucudan çıkarın ve reçineyi atın. Numune kuruduğunda, aynı hacimdeki asitlerle işlemi daha küçük bir 100 µL kolon üzerinde tekrarlayın ve ardından kuruyana kadar bir ısıtıcı tabla üzerine yerleştirin.Numune artık kütle spektrometrisi için hazırdır. Çinko izotopik bileşimini çok toplayıcılı indüktif eşleşmiş plazma kütle spektrometresinde analiz edin. Cihazı, metin protokolünde özetlenen parametreleri kullanarak kurun.Faraday kaplarını nikel 62, bakır 63, çinko 64, bakır 65, çinko 66, çinko 67 ve çinko 68'in kütle/yük oranlarını toplamak için konumlandırın. Ardından, 100 µL/dk'lık Teflon nebulizör ile kombine edilmiş bir püskürtme odası kullanarak, 0,1 molar nitrik asit içerisindeki 500 ppb'lık çinko çözeltisini analiz edin. Her numune için, her bir taramanın entegrasyon süresi 8,389 saniye olacak şekilde 30 tarama gerçekleştirin.Boş çözelti kontrolünden elde edilen pik üstü sıfır yoğunluklarını çıkararak arka planı düzeltin ve olası nikel 64 izobarik girişimi giderin. Nikel 62 piki yoğunluğunu ölçerek, nikel 64'ün nikel 62'ye oranının doğal olduğunu varsayın. Bu değeri cihaz kaynaklı kütle sapmasına göre düzeltin ve ardından metin protokolünde açıklandığı şekilde kütle 64 üzerindeki nikel 64'ü çıkarın; her bir örneği JMC Leon Çinko standardının 500 parts per billion'lık standart çözeltisi ile çevreleyerek cihaz kaynaklı kütle sapmasını düzeltin. Gösterilmiştir.Bu yöntemle elde edilen tipik sonuçlar, Delta Zinc 68'e karşı Delta Zinc 66'nın üç izotop grafiği olarak sunulmuştur. Farklı organlar için tüm organlar, eğimi iki olan bir doğru üzerinde yer almaktadır. Bu durum, izotopik fraksiyonlaşmanın kütleye bağlı olduğunu ve fare organlarının izotopik olarak belirgin farklılıklar gösterdiğini kanıtlamaktadır.İlginç bir şekilde, kırmızı kan hücreleri ve kemikler; serum, beyin ve karaciğere kıyasla delta Zinc 66 açısından daha zengindir. Bu fraksiyonlama, farklı organlardaki çinkonun farklı bağlanma ortamları arasındaki izotopların denge dağılımı ile iyi bir şekilde açıklanmaktadır. Videoyu izledikten sonra, fare organlarının yüksek hassasiyetli çinko izotopik ölçümlerinin nasıl elde edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Temel zorluğun, örneğinizin dışarıdan gelen çinko ile kontamine olmasını önlemek olduğunu unutmayın; bu nedenle temiz bir laboratuvar ortamında çalışmak ve yüksek saflıkta kimyasal reaktifler kullanmak esastır.

high-precision-zinc-isotopic-measurements-applied-to-mouse-organs

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Over kanseri metastazı, tümör yükünün doğru görsel kantitasyonunun zor olduğu çok sayıda yaygın intraperitoneal lezyon ile karakterizedir.  Burada, kırmızı floresan protein (RFP) etiketli tümör hücreleri ve optik görüntüleme kullanarak metastatik tümör yükünün in situ ve ex vivo kantitasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır.

İçi periton Yumurtalık Kanseri Metastaz kantitasyonu

Burada, ön hedefleme ve biyoortogonal kimya için tridentat 99mTc(I) şelat-tetrazin türevlerinin radyoetiketleme ve in vivo testi için bir protokol açıklıyoruz.

Hazırlama ve Değerlendirilmesi<sup&gt; 99m</sup&gt; Bioorthogonal Kimya Kullanarak Öncesi hedeflemek için üç dişli Şelatlar Tc-etiketli

Bu iletişim kuralı bir vücut kompozisyon analiz ve metabolik hayvan izleme sistemi vücut kompozisyonu ve farelerde metabolik parametreleri tanımlamak için kullanımını açıklar. Yüksek yağlı beslenme tarafından indüklenen bir obezite modeli örnek olarak bu tekniklerin uygulanması için kullanılır.

Vücut kompozisyonu ve metabolik Caging Analizi yüksek yağ Fed farelerde

Kültürlü primer veya kurulan hücre hatları yaygın hayvan modelleri kullanmadan önce bir ilk yaklaşım olarak temel biyolojik ve mekanik soruları ele almak için kullanılır. Bu protokol, çinko (Zn) ve Atom emici spektroskopisi ile diğer iz elemanlarının çalışmaları için tüm hücre özler ve hücre altı fraksiyonları hazırlamak açıklamaktadır.

Mammalin hücrelerinde hücre Içi çinko havuzlarını ölçmek için atomik absorbance spektroskopisi

Protokolün amacı, enfeksiyon sonrasında faredeki birden fazla organdan Zika virüsünü izole ederek ve ölçerek viral hastalıkları araştırmak için kullanılan teknikleri göstermektir.

Farede Birden Fazla Organdan Zika Virüsünün İzolasyon ve Nicelikselleştirilmesi

Akış sitometrisi gerektirmeyen sabit/kriyokorunmuş doku örneklerinde hepatosit numarası ve nükleer ploidideki değişiklikleri ölçmek için sağlam, uygun maliyetli ve esnek bir yöntem saseril. Yaklaşımımız karaciğer hasarı ve hastalığın ilerlemesini izlemek için ideal karaciğer sitolojisi güçlü bir örnek çapında imza sağlar.

Farelerde Hepatosit Nükleer Ploidi Tahmini için Yerinde Yüksek Throughput Yöntemi

Çift reçine döküm mikro hesaplamalı tomografi veya DUCT, organ mimarisinin 3D analizini kolaylaştırmak için aynı anda iki borulu sistemin görselleştirilmesini, dijitalleşmesini ve segmentasyonunu sağlar. DUCT, iki radyopak reçinenin ex vivo enjeksiyonunu ve ardından tomografik verilerin mikro bilgisayarlı tomografi taramasını ve segmentasyonunu birleştirir.

DUCT: Çift Reçine Dökümü ve ardından 3D Karaciğer Analizi için Mikro Bilgisayarlı Tomografi

Bu makalede, fare gebeliğinde demir taşıma çalışmaları için transferrine bağlı radyoaktif olmayan izotopik demirin nasıl hazırlanacağı ve uygulanacağı gösterilmektedir. Fetoplasental bölmelerde izotopik demirin miktarının belirlenmesi yaklaşımı da açıklanmaktadır.

Radyoaktif Olmayan Demir İzotopları Kullanarak Fare Plasentası In Vivo Boyunca Demir Taşımacılığının Ölçülmesi

Bu makale, insana özgü bir anti-CD19 monoklonal antikorun radyo-etiketlenmesi için metodolojiyi ve bunun in vivo PET görüntüleme, ex vivo gama sayımı ve otoradyografi yaklaşımlarını kullanarak bir fare multipl skleroz modelinin periferik dokularındaki B hücrelerini ölçmek için nasıl kullanılacağını detaylandırmaktadır.

Pozitron Emisyon Tomografisi Kullanılarak Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Fare Modelinde CD19+ B Hücrelerinin Görüntülenmesi

Bu makale, yeni bir radyoaktif işaretli probun (yani, 68Ga etiketli nanobody NM-02) radyosentezini, formülasyonunu, kalite kontrolünü ve bir ksenogreft modelinde küçük hayvan PET/BT görüntülemesi için kullanımını açıklamaktadır.

68Ga Etiketli Nano Molekülün Radyosentezi, Kalite Kontrolü ve Küçük Hayvan Pozitron Emisyon Tomografisi Görüntülemesi

Keşfedin fare organlarında yüksek hassasiyetli çinko izotop ölçümleri için iyon değişim kromatografisi ve kütle spektrometrisi yöntemlerini. Bu teknik çinko dağılımı ve taşınma mekanizmalarını anlamak için değerli veriler sunar.

Fare Organlar Uygulanan Yüksek Hassasiyetli Çinko İzotopik Ölçümler

Daha fazla video keşfet