Name: Akış adlı lökositlerin üzerine Stromal hücreler Etkilerinin İncelenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 30 s
Description: Keşfedin, mezenkimal stromal hücrelerin inflamasyon sırasında endotelyal hücrelerden lökosit çekilimini nasıl baskıladığını. Bu akış tabanlı yöntem, vasküler biyoloji ve hücre etkileşimlerini incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Göbek kordonları, Birmingham Kadın Sağlığı Hizmetleri NHS Vakfı'nın yardımıyla toplandı. HMM, Artrit Araştırma İngiltere Kariyer Geliştirme Bursu (19899) ve Birmingham Üniversitesi Sağlık için Sistem Bilimi (5212) tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traffic+signals+on+endothelium+for+lymphocyte+recirculation+and+leukocyte+emigration%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Traffic signals on endothelium for lymphocyte recirculation and leukocyte emigration.</a> Ann. Rev. Physiol. 57, 827-872 (1995).</li>
<li>Ley, K., Laudanna, C., Cybulsky, M. I., Nourshargh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Getting+to+the+site+of+inflammation%3A+the+leukocyte+adhesion+cascade+updated%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Immunology%22%5BJournal%5D)">Getting to the site of inflammation: the leukocyte adhesion cascade updated.</a> Nature reviews. Immunology. 7 (9), 678-689 (2007).</li>
<li>McGettrick, H. M., Butler, L. M., Buckley, C. D., Rainger, G. E., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+stroma+as+a+regulator+of+leukocyte+recruitment+in+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+leukocyte+biology%22%5BJournal%5D)">Tissue stroma as a regulator of leukocyte recruitment in inflammation.</a> Journal of leukocyte biology. 91 (3), 385-400 (2012).</li>
<li>Serhan, C. N., Savill, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+of+inflammation%3A+the+beginning+programs+the+end%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+immunology%22%5BJournal%5D)">Resolution of inflammation: the beginning programs the end.</a> Nature immunology. 6 (12), 1191-1197 (2005).</li>
<li>Schmidt, S., Moser, M., Sperandio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+of+leukocyte+recruitment+and+its+deficiencies%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+immunology%22%5BJournal%5D)">The molecular basis of leukocyte recruitment and its deficiencies.</a> Molecular immunology. 55, 49-58 (2013).</li>
<li>Luu, N. T., Rainger, G. E., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Ability+of+Exogenous+Chemotactic+Agents+to+Disrupt+Transendothelial+Migration+of+Flowing+Neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Differential Ability of Exogenous Chemotactic Agents to Disrupt Transendothelial Migration of Flowing Neutrophils.</a> The Journal of Immunology. 164 (11), 5961-5969 (2000).</li>
<li>Smith, C. W., Rothlein, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+an+endothelial+determinant+for+CD+18-dependent+human+neutrophil+adherence+and+transendothelial+migration%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Recognition of an endothelial determinant for CD 18-dependent human neutrophil adherence and transendothelial migration.</a> The Journal of clinical investigation. 82 (5), 1745-1756 (1988).</li>
<li>Luscinskas, F. W., Brock, A. F., Arnaout, M. A., Gimbrone, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-leukocyte+adhesion+molecule-1-dependent+and+leukocyte+%28CD11%2FCD18%29-dependent+mechanisms+contribute+to+polymorphonuclear+leukocyte+adhesion+to+cytokine-activated+human+vascular+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Endothelial-leukocyte adhesion molecule-1-dependent and leukocyte (CD11/CD18)-dependent mechanisms contribute to polymorphonuclear leukocyte adhesion to cytokine-activated human vascular endothelium.</a> J. Immunol. 142 (7), (1989).</li>
<li>Bahra, P., Rainger, G. E., Wautier, J. L., Nguyet-Thin, L., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Each+step+during+transendothelial+migration+of+flowing+neutrophils+is+regulated+by+the+stimulatory+concentration+of+tumour+necrosis+factor-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+adhesion+and+communication%22%5BJournal%5D)">Each step during transendothelial migration of flowing neutrophils is regulated by the stimulatory concentration of tumour necrosis factor-alpha.</a> Cell adhesion and communication. 6 (6), 491-501 (1998).</li>
<li>Piali, L., Weber, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemokine+receptor+CXCR3+mediates+rapid+and+shear-resistant+adhesion-induction+of+effector+T+lymphocytes+by+the+chemokines+IP10+and+Mig%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">The chemokine receptor CXCR3 mediates rapid and shear-resistant adhesion-induction of effector T lymphocytes by the chemokines IP10 and Mig.</a> European journal of immunology. 28 (3), 961-972 (1998).</li>
<li>McGettrick, H. M., Smith, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblasts+from+different+sites+may+promote+or+inhibit+recruitment+of+flowing+lymphocytes+by+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Fibroblasts from different sites may promote or inhibit recruitment of flowing lymphocytes by endothelial cells.</a> European journal of immunology. 39 (1), 113-125 (2009).</li>
<li>McGettrick, H. M., Hunter, K., Moss, P. a, Buckley, C. D., Rainger, G. E., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+observations+of+the+kinetics+of+migrating+T+cells+suggest+active+retention+by+endothelial+cells+with+continual+bidirectional+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+leukocyte+biology%22%5BJournal%5D)">Direct observations of the kinetics of migrating T cells suggest active retention by endothelial cells with continual bidirectional migration.</a> Journal of leukocyte biology. 85 (1), 98-107 (2009).</li>
<li>McGettrick, H. M., Buckley, C. D., Filer, A., Rainger, G. E., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+cells+differentially+regulate+neutrophil+and+lymphocyte+recruitment+through+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Stromal cells differentially regulate neutrophil and lymphocyte recruitment through the endothelium.</a> Immunology. 131 (3), 357-370 (2010).</li>
<li>Tull, S. P., Yates, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Omega-3+Fatty+acids+and+inflammation%3A+novel+interactions+reveal+a+new+step+in+neutrophil+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+biology%22%5BJournal%5D)">Omega-3 Fatty acids and inflammation: novel interactions reveal a new step in neutrophil recruitment.</a> PLoS biology. 7 (8), e1000177(2009).</li>
<li>Ahmed, S. R., McGettrick, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+D2+regulates+CD4%2B+memory+T+cell+trafficking+across+blood+vascular+endothelium+and+primes+these+cells+for+clearance+across+lymphatic+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin D2 regulates CD4+ memory T cell trafficking across blood vascular endothelium and primes these cells for clearance across lymphatic endothelium.</a> Journal of immunology. 187 (3), 1432-1439 (2011).</li>
<li>Bradfield, P. F., Amft, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rheumatoid+fibroblast-like+synoviocytes+overexpress+the+chemokine+stromal+cell-derived+factor+1+%28CXCL12%29%2C+which+supports+distinct+patterns+and+rates+of+CD4%2B+and+CD8%2B+T+cell+migration+within+synovial+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+rheumatism%22%5BJournal%5D)">Rheumatoid fibroblast-like synoviocytes overexpress the chemokine stromal cell-derived factor 1 (CXCL12), which supports distinct patterns and rates of CD4+ and CD8+ T cell migration within synovial tissue.</a> Arthritis and rheumatism. 48 (9), 2472-2482 (2003).</li>
<li>Filer, A., Parsonage, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+survival+of+leukocyte+subsets+mediated+by+synovial%2C+bone+marrow%2C+and+skin+fibroblasts%3A+site-specific+versus+activation-dependent+survival+of+T+cells+and+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+rheumatism%22%5BJournal%5D)">Differential survival of leukocyte subsets mediated by synovial, bone marrow, and skin fibroblasts: site-specific versus activation-dependent survival of T cells and neutrophils.</a> Arthritis and rheumatism. 54 (7), 2096-2108 (2006).</li>
<li>Lally, F., Smith, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mechanism+of+neutrophil+recruitment+in+a+coculture+model+of+the+rheumatoid+synovium%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+rheumatism%22%5BJournal%5D)">A novel mechanism of neutrophil recruitment in a coculture model of the rheumatoid synovium.</a> Arthritis and rheumatism. 52 (11), 3460-3490 (2005).</li>
<li>Chakravorty, S. J., McGettrick, H. M., Butler, L. M., Buckley, C. D., Rainger, G. E., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro.+model+for+analysing+neutrophil+migration+into+and+away+from+the+sub-endothelial+space%3A+Roles+of+flow+and+CD31%5BTitle%5D)+AND+%22Biorheology%22%5BJournal%5D)">An in vitro. model for analysing neutrophil migration into and away from the sub-endothelial space: Roles of flow and CD31.</a> Biorheology. 43 (1), 71-82 (2006).</li>
<li>Rainger, G. E., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+Pathology+of+Atherosclerosis+Smooth+Muscle+Cells+Prime+Cocultured+Endothelial+Cells+for+Enhanced+Leukocyte+Adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular Pathology of Atherosclerosis Smooth Muscle Cells Prime Cocultured Endothelial Cells for Enhanced Leukocyte Adhesion.</a> Circulation Research. 88 (6), 615-622 (2001).</li>
<li>Kuravi, S. J., McGettrick, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Podocytes+regulate+neutrophil+recruitment+by+glomerular+endothelial+cells+via+IL-6-mediated+crosstalk%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Podocytes regulate neutrophil recruitment by glomerular endothelial cells via IL-6-mediated crosstalk.</a> Journal of immunology. 193 (1), 234-243 (2004).</li>
<li>Parsonage, G., Filer, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stromal+address+code+defined+by+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+immunology%22%5BJournal%5D)">A stromal address code defined by fibroblasts.</a> Trends in immunology. 26 (3), 150-156 (2005).</li>
<li>Luu, N. T., McGettrick, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+mesenchymal+stem+cells+and+endothelial+cells+leads+to+downregulation+of+cytokine-induced+leukocyte+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cells%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between mesenchymal stem cells and endothelial cells leads to downregulation of cytokine-induced leukocyte recruitment.</a> Stem cells. 31 (12), 2690-2702 (2013).</li>
<li>Bevilacqua, M. P., Nelson, R. M., Mannori, G., Cecconi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-leukocyte+adhesion+molecules+in+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Endothelial-leukocyte adhesion molecules in human disease.</a> Annual review of medicine. 45, 361-378 (1994).</li>
<li>Stanness, K. A., Beatty, P. G., Ochs, H. D., Harlan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+endothelial+cell+surface+factor%28s%29+induced+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">An endothelial cell surface factor(s) induced in vitro.</a> 136 (12), 4548-4553 (1986).</li>
<li>Burton, V. J., Butler, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delay+of+migrating+leukocytes+by+the+basement+membrane+deposited+by+endothelial+cells+in+long-term+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">Delay of migrating leukocytes by the basement membrane deposited by endothelial cells in long-term culture.</a> Experimental cell research. 317 (3), 276-292 (2011).</li>
<li>Luu, N. T., Rainger, G. E., Buckley, C. D., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD31+Regulates+Direction+and+Rate+of+Neutrophil+Migration+over+and+under+Endothelial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">CD31 Regulates Direction and Rate of Neutrophil Migration over and under Endothelial Cells.</a> Journal of Vascular Research. 40 (5), 467-479 (2003).</li>
<li>McGettrick, H. M., Buckley, C. D., Ed Rainger, G., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+stromal+cells+on+lymphocyte+adhesion+and+migration+on+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Influence of stromal cells on lymphocyte adhesion and migration on endothelial cells.</a> Methods in molecular biology. 616, 49-68 (2010).</li>
<li>Butler, L. M., McGettrick, H. M., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Static+and+dynamic+assays+of+cell+adhesion+relevant+to+the+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Static and dynamic assays of cell adhesion relevant to the vasculature.</a> Methods in molecular biology. 467, 211-228 (2009).</li>
<li>Jeffery, H. C., Buckley, C. D., Moss, P., Rainger, G. E., Nash, G. B., McGettrick, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+effects+of+stromal+cells+on+the+migration+of+lymphocytes+into+and+through+inflamed+tissue+using+3-D+culture+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunological+methods%22%5BJournal%5D)">Analysis of the effects of stromal cells on the migration of lymphocytes into and through inflamed tissue using 3-D culture models.</a> Journal of immunological methods. 400-401, 45-57 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Burada iltihaplı endoteli tarafından nötrofillerin dolaşımdaki işe okuyan iki in vitro &quot;vasküler&quot; modelleri açıklar. Bu modellerin önemli bir avantajı, in vivo olarak meydana gelen gibi, sırayla lökosit yapışma kademeli olarak her adımda analiz yeteneğidir. Daha önce TNFa ile uyarılan EC 9,29 ile doza bağlı, nötrofil adhezyonunun artış ve transmigrasyonun gözlemledik. Biz de hem modeller lökosit işe üzerindeki stromal hücrelerin etkilerini incelemek için adapte edilebilir açıklanmı...

Enflamasyon çözünürlüğü 1,2 izin vermek için, iltihaplı doku sıkı lökosit girişi düzenleme ve çıkış gerektiren mikrobik enfeksiyon veya doku yaralanmasına karşı koruyucu bir cevaptır. Endotel hücreleri (EC), bu hat, kan damarları, dolaşımdaki lökositlerin doku yerleşik stromal hücreler arasındaki çapraz konuşma Bu işlemi 3 koordine için gereklidir. Ancak, lökositlerin kontrolsüz alımı ve etkisiz boşluk kronik inflamatuar hastalıkların 4 gelişimini destekleyen. Sağlıkta ve hastalıkta lökosit işe Mevcut anlayış eksik ve daha sağlam modeller bu süreci analiz etmek gereklidir. sonrası kılcal venüllerin vasküler EC kanın lökosit işe destek mekanizmaları iyi 1,2,5 tarif edilmiştir. Dolaşım halindeki lökositler, özel bir reseptör (örneğin, VCAM-1, E-selektin, P-selektin) tarafından çekildiğiiltihaplı endotel üzerinde yukarı-regüle edilir. Bu geçici etkileşimler lökosit yüzey bağlı kemokin ve lökositler 6- 11 tarafından ifade integrinler aktive lipit kaynaklı mediatörler (kökenli endotel veya stromal ya) ile etkileşim sağlar. Bu da endotel genelinde ve doku 12- 15 içine yapışma ve sürücüler göç dengeler. Doku içinde, lökositler kendi motilite, fonksiyon ve yaşam 16,17 etkileyen stroma türevli ajanlara maruz işe. Büyüyen kanıtlar güçlü sinyaller gelecek için işe alım süreci şartları lökositlerin her aşamasında alınan düşündürmektedir. Ancak, lökosit işe anlayışımız eksik kalır ve çok az doku içindeki bileşenler şekillendirme lökosit hareketi hakkında bilinmektedir. Birmingham biz lökositlerin işe incelemek için in vitro &quot;vasküler&quot; modelleri birkaç geliştirdik9,18,19 akar. Biz şimdi lökosit işe vasküler AK hareket olarak acil regülatörleri kendi yerel mikroçevresinin değişikliklere yanıt anlıyoruz. Özellikle, doku yerleşik stromal hücreler aktif işe 3 rollerini etkilemek için komşu vasküler AT ile söyleşmek kısmen, inflamatuvar yanıtı düzenler. Daha önce çeşitli stromal hücreler, bir doku-spesifik bir şekilde yapışmasını ve lökositlerin geçişini desteklemek için AT yeteneğini modüle göstermiştir, ve bu etkiler, kronik hastalıkların 13,16,20,21 değişmiş da yol açabilir. Böylece, stromal hücreler her inflamatuar yanıt 22 bağlamı tanımlamanızı doku &#39;adres kodları&#39; kurmak. Daha yakın bir zamanda, kemik iliği türevli MSC (BMMSC) potansiyel olarak her iki nötrofillerin alımına bir azalmaya yol açan, sitokinlere EC tepkisini aşağı regüle ve 23 lenfosit olduğunu göstermiştir. mekanizmalar governing işe aydınlatmıştır in vitro ölçüde izole bir tek hücre tipi (örn, AK) veya protein içeren deneyleri kullandık. Ancak bu çalışmalar dikkate almayın lokal doku çevrenin etkileri (örneğin, stromal hücrelerin varlığı) lökositlerin ve doku içine onların sonraki göç. Burada, stromal hücreleri, spesifik olarak mezenkimal kök hücreler içinde iki akış tabanlı yöntemler (MSC) tarif EC 23 ile birlikte kültürlenmiştir. Bu modeller bize akışından lökosit işe desteklemek için özellikle kendi yeteneği endotel tepkiler üzerine stromal hücre etkisini incelemek için izin verir.

<table><tbody><tr><td>Kollajenaz Tip Ia Sigma</td><td></td><td>C2674</td><td>10 mg / ml'lik bir nihai konsantrasyon elde etmek için 10 ml PBS'de seyreltin. -20 ° C'de saklayın; 1 ml alikotlarda C.</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun PBS</td><td>Sigma</td><td>D8662'si</td><td>kalsiyum ve magnezyum klorür ile. Steril tutun ve RT'de saklayın.</td></tr><tr><td>1X Orta M199</td><td>Gibco</td><td>31150-022</td><td>37 ° C'de sıcak; Kullanmadan önce C su banyosu.</td></tr><tr><td>Gentamisin sülfat</td><td>Sigma</td><td>G1397</td><td>4 ° C'de saklayın M199 500 ml şişeye ekleyin.</td></tr><tr><td>İnsan epidermal büyüme faktörü</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td>-20 °C'de saklayın; 10'da C ve mikro; l aliquots.</td></tr><tr><td>Fetal buzağı serumu (FCS)</td><td>Sigma</td><td>F9665</td><td>FCS, izole edilmiş EC'nin büyümesini ve canlılığını sağlamak için toplu olarak test edilmelidir. 56 ° C'de ısı inaktive edilir. -20 ° C'de 10 ml'lik alikotlarda saklayın.</td></tr><tr><td>Amfoterisin B</td><td>Gibco</td><td>15290-026</td><td>Güçlüdür ve bir hafta içinde toksik hale gelir, bu nedenle her hafta taze tam HUVEC besiyeri hazırlanmalıdır. -20 ° C'de saklayın; 1 ml alikotlarda C.</td></tr><tr><td>Hidrokortizon</td><td>Sigma</td><td>H0135</td><td>Stok etanol içindedir. -20 ° C'de saklayın; 10'da C ve mikro; l aliquots.</td></tr><tr><td>Kollajenaz Tip II</td><td>Sigma</td><td>C6885</td><td>PBS'deki stoğu 100 mg / ml'lik bir nihai konsantrasyona seyreltin. -20 ° C'de saklayın; 100'de C ve mikro; l aliquots.</td></tr><tr><td>Hyaluronidaz</td><td>Sigma</td><td>H3631</td><td>PBS'deki stoğu 20.000 U / ml'lik nihai konsantrasyona seyreltin. -20 ° C'de saklayın; 100'de C ve mikro; l aliquots.</td></tr><tr><td>100 ve mikro; 50 ml santrifüj tüp için m hücreli süzgeç</td><td>Bilimsel Laboratuvar Malzemeleri (SLS)</td><td>352360</td><td>Piyasada bulunan diğer hücre süzgeçleri de (örneğin Greiner bio-one) kullanılabilir.</td></tr><tr><td>DMEM düşük glikoz</td><td>Biosera</td><td>LM-D1102 / 500</td><td>37 ° C'de sıcak; Kullanmadan önce C su banyosu.</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin karışımı</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td>-20 ° C'de saklayın; 1 ml alikotlarda C.</td></tr><tr><td>25 cc doku kültürü şişesi</td><td>SLS</td><td>353109</td><td></td></tr><tr><td>75 cc doku kültürü şişesi</td><td>SLS</td><td>353136</td><td></td></tr><tr><td>Kemik iliği mezenkimal kök hücre şişesi</td><td>Lonza</td><td>PT-2501</td><td>Varışta sıvı nitrojen içinde saklayın. Hücreler varışta 2. geçittedir, ancak 0 numaralı geçit olarak belirlenmiştir. Geçiş 3'e çıkarın ve daha sonra kullanmak üzere sıvı nitrojen içinde saklayın.</td></tr><tr><td>Mezenkimal kök hücre büyüme ortamı (MSCGM)</td><td>Lonza</td><td>PT-3001</td><td>37 °C sıcak; Kullanmadan önce C su banyosu. Cell Tracker Green boyama için FCS'siz ortam kullanın.</td></tr><tr><td>EDTA (%0,02) çözümü</td><td>Sigma</td><td>E8008</td><td>4 ° C'de saklayın. 37 ° C'de ısıtın; Kullanmadan önce C su banyosu.</td></tr><tr><td>Tripsin çözeltisi</td><td>Sigma</td><td>T4424</td><td>-20 ° C'de saklayın; 2 ml alikotlarda C. RT'de çözün ve hemen kullanın.</td></tr><tr><td>Cryovials</td><td>Greiner bio-one</td><td>2019-02</td><td>Hücre süspansiyonu eklemeden önce eklemeden önce buz üzerinde tutun.</td></tr><tr><td>Bay Frosty Dondurma Kabı</td><td>Nalgene</td><td>5100-0001</td><td>RT'de Mağaza. Hücreli kriyoviyaller eklerken -80 ° C'de saklayın; Hücreleri sıvı nitrojene aktarmadan önce 24 saat C.</td></tr><tr><td>Ibidi u-Slide VI (0.4), T/C ile işlenmiş, steril</td><td>Ibidi</td><td>IB-80606</td><td>Alternatif modeller arasında cam kılcal damarlar, Cellix Biochips (www.cellixltd.com), BioFlux Plakaları (www.fluxionbio.com/bioflux/) ve GlycoTech paralel plaka akış odaları (http://www.glycotech.com/apparatus/parallel.html) bulunur.</td></tr><tr><td>Hücre izleyici yeşil boya</td><td>Yaşam teknolojileri</td><td>C2925</td><td>5 & mikro'da mağaza; l alikotlar -20 ° C'de 5 ml önceden ısıtılmış olarak seyreltin (37 ° C'de; C) MSCGM.</td></tr><tr><td>Hücre sayma odaları</td><td>Nexcelom</td><td>SD-100</td><td>Alternatif olarak, bir hemositometre kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Cellometer otomatik T4 hücre sayacı</td><td>Nexcelom</td><td>Auto T4-203-0238</td><td></td></tr><tr><td>Tümör nekroz faktörü ve alfa; (TNF&alfa;)</td><td>Ar-Ge D Systems</td><td>210-TA-100</td><td>PBS'deki stoğu 100.000 U/ml'lik nihai konsantrasyona seyreltin. -80 °C'de saklayın; 10'da C ve mikro; l aliquots.</td></tr><tr><td>6 kuyulu, 0.4 ve mikro; m PET Transwell filtreleri</td><td>SLS</td><td>353090</td><td></td></tr><tr><td>K2-EDTA 10 ml'lik tüplerde</td><td>RT'de Sarstedt</td><td></td><td>Mağazası.</td></tr><tr><td>Histopaque 1119</td><td>Sigma</td><td>11191</td><td>4 ° C'de saklayın Kullanmadan önce RT'ye ısıtın.</td></tr><tr><td>Histopaque 1077</td><td>Sigma</td><td>10771</td><td>4 ° C'de saklayın Kullanmadan önce RT'ye ısıtın.</td></tr><tr><td>10 ml yuvarlak tabanlı tüp</td><td>Appleton Woods</td><td>SC211 142 AS</td><td></td></tr><tr><td>%7,5 BSA Fraksiyon V çözeltisi</td><td>Yaşam teknolojileri</td><td>15260-037</td><td>4 ° C'de saklayın.</td></tr><tr><td>20 ml Plastipak şırıngalar</td><td>BD falcon</td><td>300613</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Plastipak şırıngalar</td><td>BD falcon</td><td>302187</td><td></td></tr><tr><td>2 ml Plastipak şırıngalar</td><td>BD falcon</td><td>300185</td><td></td></tr><tr><td>3M hipoalerjenik cerrahi bant 9 m x 2,5 cm</td><td>Micropore</td><td>1530-1</td><td>Şırınga musluğunu perspeks odasının duvarına sabitlemek için kullanın.</td></tr><tr><td>Silikon kauçuk boru, iç çap/dış çap (ID/OD) 1/3 mm (ince boru)</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB68854</td><td>Silikon boruyu uygun boyutta kesin. Doğrudan elektronik mikrovalfe giden tüm borular ince olmalıdır.</td></tr><tr><td>2/4 mm silikon kauçuk boru ID / OD (kalın boru)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>FB68855</td><td></td></tr><tr><td>Portex Blue Line Manometre borusu</td><td>Smiths</td><td>200/495/200</td><td>Şırınga pompasına giden boru.</td></tr><tr><td>3 musluk</td><td>BOC Ohmeda AB</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cam 50 ml pompa için şırınga</td><td>Popper Micromate</td><td>550962</td><td>Kullanmadan önce hava kabarcıkları giderilerek astarlanmalıdır.</td></tr><tr><td>Cam lamel</td><td>Raymond A Lamb</td><td></td><td>26 x 76 mm lameller sipariş üzerine yapılır. Lot numarası 2440980.</td></tr><tr><td>Parafilm contası</td><td>American National Can Company</td><td></td><td>Alüminyum bir şablon kullanarak 26 x 76 mm'lik bir parafilm parçası kesin ve bir neşter 10a kullanarak içine 20 x 4 mm'lik bir yuva kesin. Conta kalınlığı yaklaşık 133 &mikro;m'dir.</td></tr><tr><td>İki perspeks paralel plaka</td><td>Wolfson Uygulamalı Teknoloji Laboratuvarı</td><td></td><td>8 vida ile bir arada tutulan paralel plakalardan oluşan özel olarak tasarlanmış hazne. Alt plaka, ortada kesilmiş bir görüntüleme yuvasına ve lamel için yer açmak üzere frezelenmiş sığ bir girintiye sahiptir. Üst perspeks plakası, akış kanalı üzerine yerleştirilmiş bir giriş ve çıkış deliğine sahiptir.</td></tr><tr><td>Min. ölü alana sahip elektronik 3 mikro valf</td><td>Lee Products Ltd.</td><td>LFYA1226032H</td><td>Elektronik olarak 12 volt DC güç kaynağına bağlanır.</td></tr><tr><td>İnfüzyon / çekme için şırınga pompası (PHD2000)</td><td>Harvard Apparatus</td><td>70-2001</td><td>Çapı 29 mm'ye ve yeniden doldurma (akış) hızına ayarlayın.</td></tr><tr><td>L şeklindeki konektör</td><td>Labhut</td><td>LE876</td><td>Ibidi microslide kanalına giriş ve çıkış portlarına takmak için.</td></tr><tr><td>Video kamera</td><td>Qimaging</td><td>01-QIC-F-M-12-C</td><td>Dijital tüm videoların kaydedilmesini sağlayan bir bilgisayara bağlı.</td></tr><tr><td>Image-Pro Plus 7.0</td><td>Medya Sibernetik</td><td>41N70000-61592</td><td>Veri analizi için. Farklı davranışları görüntüleyen hücreleri manuel olarak etiketleyin. Yuvarlanma ve göç hızlarının analizi için hücreleri izleyin.</td></tr><tr><td colspan="4">Burada açıklanan reaktifleri kullanmanın tehlikeleri hakkında ayrıntılar için ürün veri sayfalarına bakın.</td></tr></tbody></table>

akış adlı lökositlerin üzerine stromal hücreler etkilerinin İncelenmesi

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

Stromal hücreler, komşu endotel hücreleri ile çapraz konuşma ile inflamasyon sırasında, dolaşımdaki lökositlerin işe düzenler. Burada iltihaplı endotel hücreleri tarafından akışından nötrofillerin dolaşımdaki işe okuyan iki in vitro &quot;vasküler&quot; modelleri açıklar. Bu modellerin önemli bir avantajı, in vivo olarak meydana gelen gibi, sırayla lökosit yapışma kademeli olarak her adımda analiz yeteneğidir. Biz de hem modeller lökosit düzenleyen, bu durumda mezenkimal kök hücrelerin (MSC) stromal hücrelerin rolü, çalışma adapte edilebilir açıklanmıştır. Primer endotelyal hücreleri, Ibidi lamlara veya 24 saat süre ile bir Transwell filtrenin ters tarafta doğrudan temas eden insan MSC ile tek başına veya birlikte kültürlenmiştir. Kültürler, 4 saat süre ile, tümör nekroz faktörü alfa (TNFa) ile uyarılır ve bir akım bazlı yapışma deneyinde dahil edilmiştir. Nötrofil bolus serpildi4 dakika için endotel üzerinde. nötrofil ve endotel ile etkileşimlerini akan yakalama faz-kontrast mikroskobu ile görüntülendi. Her iki modelde de, sitokin uyarım, doza bağımlı bir şekilde akan nötrofil endotel işe artmıştır. Işe nötrofillerin davranış analizi haddeleme doza bağımlı azalma, endotelyum içinden geçişe doza bağımlı bir artış göstermiştir. Ko-kültür olarak, MSC TNFa-uyarılmış endotele nötrofil yapışma bastırdı. Bizim akış tabanlı-yapışma modelleri dolaşımdan lökosit işe başlangıç ​​aşamalarını taklit. Lökosit ek olarak, bu tür terapötik olarak uygulandığı, MSC veya dolaşımdaki tümör hücreleri gibi diğer hücre türleri, işe incelemek için kullanılabilir. Çok katmanlı ko-kültür modelleri MSC pro-enflamatuar sitokinlerin tepkilerini değiştirmek için endotel ile iletişim göstermiştir, alterinötrofil işe ng. Bu tür modeller kullanılarak daha fazla araştırma tamamen farklı doku ve koşullar (inflamatuar bozukluklar veya kanser) için nasıl stromal hücreler anlamak enflamasyon sırasında lökositlerin etkilemek için gereklidir.

Başlangıçta, biz Ibidi mikroslayd modeli (- 9 Bölüm 7) kullanılarak akışından nötrofillerin istihdamı TNFa ile AK uyarıcı etkisi analiz. TNFa, herhangi bir nötrofiller endotel tek tabaka yapıştırılır eğer biraz (Şekil 2A) yokluğunda. Bu 25,26 bağlayıcı desteklemek için gerekli yapışma molekülleri (selektinler) veya kemokinleri ifade etmeyen AK dinlenme / işlenmemiş olarak, bekleniyordu. Bunun aksine, sitokin uyarım önemli bir doza bağlı bir şekilde (Şekil 2A)...

akışından lökositleri için iltihaplı endotel kabiliyeti mezenkimal stromal hücreler tarafından düzenlenir. Biz akışından nötrofil işe değerlendirmek ve mezenkimal stromal hücreler bu süreci düzenleyen oynadığı rolü incelemek için kullanılabilir birincil insan hücreleri içeren iki in vitro model tarif.

Akış adlı lökositlerin üzerine Stromal hücreler Etkilerinin İncelenmesi

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

Bu prosedürün genel amacı, dokya yerleşik hücrelerin, vasküler endotel hücrelerinin inflamasyon sırasında lökositlerin toplanmasını destekleme yeteneğini nasıl etkilediğini incelemektir. Bu, öncelikle iki in vitro vasküler modelden biri olan mikro slayt modeli veya filtre modeli kullanılarak endotel hücrelerin mezenkimal kök hücrelerle ko-kültürlerinin oluşturulmasıyla gerçekleştirilir. Bu kültürler, akış analizinden önce sitokin ile işleme tabi tutulur.Akış tabanlı yapay sistem, kullanılan model sisteme göre yapılan modifikasyonlarla adım adım kurulur. Son adım, lökositlerin endotel hücreleri üzerine perfüze edilmesi ve akıştan hücre göçlerinin yanı sıra sonraki davranışlarının gözlemlenmesidir. Nihayetinde, bu çok hücreli akış tabanlı adezyon deneyleri, mezenkimal kök hücreler ile endotel hücreler arasındaki etkileşimin inflamasyon sırasında nötrofil göçünü baskıladığını göstermiştir.Bu yöntem, lökosit trafiği alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir; örneğin, mezenkimal kök hücreler gibi doku yerleşik hücreler bu süreci nasıl modifiye eder? Kronik inflamasyon veya kanser gibi hastalıklarda bu durum değişir mi? Bu bilgileri yeni terapötik stratejiler geliştirme

analyzing-effects-stromal-cells-on-recruitment-leukocytes-from

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, lökositlerin ve endotel hücreleri gibi hücresel ortakların etkileşimini karakterize etmek için laminer akış tabanlı bir testi göstermektedir. Bu yöntem, sağlam ve birleşik bir vasküler hücre tabakası üzerine perfüze edildiğinde lökositlerin yapışması, adezyonu ve transmigrasyonu hakkında dinamik bilgiler sağlar.

Lökositler ve endotel hücreleri arasındaki etkileşimleri incelemek için laminer akış tabanlı bir test

Video, stromal hücrelerin lökosit alımı üzerindeki etkisini araştırmak için bir yöntem göstermektedir. Paralel bir plaka akış odası modelinde, pro-inflamatuar sitokinler, endotel hücreleri tarafından adezyon reseptörlerinin ekspresyonunu indükleyerek nötrofil alımını ve göçünü kolaylaştırır. Stromal hücreler ve endotel hücreleri arasındaki çapraz konuşma, endotel hücrelerine nötrofil alımını azaltır.

Stromal Hücrelerin Lökosit Alımı Üzerindeki Etkisinin İn Vitro Flow Araştırması

Fizyolojik Akış Koşullarında Sirkülasyon Hücre Kemokin-yönettiği Ekstravazasyon Eğitim Bir Roman Üç boyutlu Akış Odası Cihazı

Karaciğer lökosit işe özgü karaciğer sinüzoidal endotel hücreleri ile kaplı olan hepatik sinüzoidler özel kanallar içinde gerçekleşir. Fizyolojik kesme stresi koşulları altında, insan karaciğer sinüzoidal endotelyumda lökosit işe faz kontrast mikroskopisi bu işlemi altında yatan moleküler mekanizmaların açıklanması kolaylaştırabilir.

Kayma Stres İnsan Karaciğer Sinüzoidal Endoteline altında Koşullarına Lökositer İşe Alım Eğitim için Bir Akış Adezyon Deneyi

Burada, biz araştırmacı bir fare dolaşım sistemine endotel kaynaklı yapışma molekülleri ile kaplanmış bir odayı bağlayarak lökosit işe dinamikleri ex vivo değerlendirmek için izin veren bir protokol mevcut. Göreceli biyolojik şartlar altında lökosit değerlendirme sağlar, bu yöntem önemli avantajlar sunar.

Bir Flow Koşullarında lökosit-endotel Etkileşimleri değerlendirilmesi Ex vivo Autoperfused Microflow Odası Deneyi

Kemik iliğindeki histolojik verileri kantitatif olarak analiz etmek için bir strateji sunulmuştur. Doku kesitlerindeki floresan etiketli hücrelerin konfokal mikroskobu, otomatik olarak analiz edilen 2 boyutlu görüntülerle sonuçlanır. Farklı hücre tiplerinin birlikte lokalizasyon analizleri, simüle edilmiş görüntülerden elde edilen verilerle karşılaştırılarak hücresel etkileşimler hakkında nicel bilgiler verilir.

Hematopoetik Hücre Otomatik Ölçümü - undekalsifiye Kemik histolojik Görüntüler stromal hücre etkileşimleri

Lökosit heyecanla damar hücreleri ve trombositlerin damar duvar yaralanma sonra veya enflamasyon sırasında etkileşim. Burada, lökosit ve hücresel eşleri arasındaki etkileşimler altında yatan moleküler mekanizmaları karakterize etmek için basit bir laminar akış tabanlı tahlil açıklayın.

Lökosit işe kültürlü damar hücreleri ve yapışık trombositler üzerinde araştırmak için Laminar akış tabanlı deneyleri

Burada, monosit subpopulation altında akış tüp bebek belirli yüzey işaretleyicileri ve confocal floresan mikroskopi kullanımı ile ticareti ölçer entegre bir iletişim kuralı mevcut. Bu iletişim kuralı diğer belirli yüzey işaretçileri kullanarak diğer lökosit alt türlerinden profil olarak sıralı işe alma adımları de keşfetmek için kullanılabilir.

Monosit altgrupları Vitro akışında altında alımı eş zamanlı çalışma

Marjinal zon B hücreleri (MZBs) kesme akışı gücüne geçiş yollarına kadar debi yeniden yönlendirme tarafından yanıt. Bu iletişim kuralı, kayıt ve analiz akışkanlar birim, pompa, mikroskop görüntüleme sistemi ve özgür yazılım kullanarak geçiş gösterilmiştir.

Yamultma akış kaynaklı geçiş antikorundan marjinal bölge B hücrelerinin in Vitro analizine

Bu protokolde, fizyolojik olarak ilgili bir mikrovasküler ortamı yeniden üretebilen ve tüm lökosit adezyon / migrasyon kaskadını yeniden üretebilen bir biyomimetik mikroakışkan testi, inflamatuar hastalıkta lökosit-endotel hücre etkileşimlerini incelemek için kullanılmaktadır.

Enflamasyon Sırasında Lökosit-Endotelyal Hücre Etkileşimini İnceleyen Mikrofizyolojik Bir Sistem

Burada, murin kemik iliği hücrelerinin fenotip hemopoietik kök ve progenitör hücrelere izolasyonu ve boyanması ile destekleyici niş endotel ve mezenkimal kök hücrelere yönelik basit bir protokol tanımlanmıştır. Endosteal ve santral kemik iliği bölgelerinde bulunan hücreleri zenginleştirmek için bir yöntem de dahil edilmiştir.

Murin Kemik İliği Hematopoetik Kök ve Progenitör Hücrelerin ve Stromal Niş Hücrelerin Akış Sitometri Analizi

Keşfedin, mezenkimal stromal hücrelerin inflamasyon sırasında endotelyal hücrelerden lökosit çekilimini nasıl baskıladığını. Bu akış tabanlı yöntem, vasküler biyoloji ve hücre etkileşimlerini incelemek için kullanılır.

Akış adlı lökositlerin üzerine Stromal hücreler Etkilerinin İncelenmesi

Daha fazla video keşfet