Name: Immünyetmezligi Farelerde Orofaringeal kandidiyazis ve Th17 İltihabı Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Öğrenin, immünyetmez farelerde Th17 hücreleri enjekte ederek orofaringeal kandidiyazis ve iltihap modeli oluşturmayı. Bu yöntem, ağız immünoterapisi için T hücre aracılıklı immünopatolojiyi incelemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. Helene Bernstein'a akış sitometresine erişim sağladığı için teşekkür ederiz. Akış sitometrisi hizmetleri için CFAR akış sitometrisi tesisine de teşekkür ederiz. Bu proje kısmen CTSC çekirdek kullanım fonu ve STERIS şirketi/Üniversite Hastaneleri-Bulaşıcı Hastalıklar Bölümü'nün PP'ye verdiği hibe ile desteklenmiştir.

NOT: fareler kullanarak deneyler kurumsal hayvan refahı komitesi (IACUC) yönergeleri uygun olarak yapıldı. (Enfeksiyon Üç gün önce) I n Vitro kültürlü Th17 hücreleri ile Fare - / - 1. Rag-1 yeniden kurgulamak <ol><li> Çözünür mevcudiyetinde tek başına U dipli, 96 gözlü levhalar, ya da 3 x 104 CD4 + CD25 + Foxp3 + Tregs ile birlikte ko-kültür bunları Th17 hücreleri, kültür, CD4 + CD44low CD62Lhigh CD25 naiv T hücreleri (x 104 3) oluşturulması için α-CD3 (1 ug / ml), α-CD28 (2 ug / ml), Th17 koşulları altında antikorlar ve antijen sunan hücreler (IL-6 (25 ng / ml), TGF-β kullanılarak polarize (2 ng / ml) , α-IFN-γ (2 ug / ml) ve α -IL-4 (2 ug / ml)) 3-4 gün karıştırılmıştır. Not: Saf hücreleri ve T STüz THP kullanılarak dizildi (FACS) birManyetik hücre izolasyon prosedürleri, d ve kültüre daha önce 19-22 açıklandığı gibi. </li><li> 4. günde, pipet kullanarak Th17 hücrelerin tekrar asılı tutulmasından sonra, kültürler bunları toplamak ve steril koşullar altında santrifüj. <ol><li> Bunların canlılığı ve fenotipleme incelemek için, bu hücrelerin küçük bir kısım al. Propidyum iyodür (200 ng / ml) ekleyin ve akış sitometrisi ile hemen uygulanabilirliğini değerlendirmek, RPMI ortamında 500 ul bunları yeniden süspanse edin. Yeniden uyarıldıktan sonra IL-17A üretiminin değerlendirilmesi flow sitometri ile fenotiplendirilmesini gerçekleştirin (bakınız bölüm 6.3). </li></ol></li><li> Aksi belirtilmediği sürece, santrifüj ve tüm adımlar 4 ° C&#39;de 6 dakika boyunca 480 xg&#39;de steril PBS içerisinde hücrelerin büyük bir kısmını yıkayın. </li><li> 6-8 haftalık CD45.2 Rag1 içine evlatlık transferi için bu hücreleri kullanın - / - immünyetmezligi fareler. <ol><li> Soğuk steril PBS kullanılarak 1 x 10 7 hücre / ml hücre yoğunluğunda tekrar süspansiyon hücreleri. </li><li> Intrap hücrelere 100 ul enjekteeritoneal enjeksiyon, bir fare 1 x 10 6 hücre aldığı şekilde, 1 ml tüberkülin şırınga 25 G iğne kullanarak. Bazı fareler sadece PBS veya Th17 hücreleri alır ve diğer fareler, regülatör T hücreleri ile birlikte kültürlendiğinde, Th17 hücreleri alır. NOT: aseptik tüm adımları uygulayın. </li></ol></li></ol> 2. C Büyüyen enfeksiyon için albicans (bir gün Enfeksiyon önce) <ol><li> Aşılamadan önce, CAF2-1 C&#39;de beş koloni dağıtmak albicans laboratuvar steril PBS süspansiyon 100 ul zorlanma, ve steril suyu için süspansiyon ekleyin. </li><li> C. 5 koloni inoküle maya azot baz, 50 ml albicans (amino asit içermeyen YNB) / Pepton / dekstroz et suyu, orta ve 130 rpm&#39;de 15-18 saat süre ile 30 ° C&#39;de çalkalamalı bir inkübatör içinde inkübe edilir. </li><li> Bu mantar büyümesi için bir gösterge olarak, bulutluluk için suyu izleyin. </li></ol> 3. CandidaHasat ve (Enfeksiyon gününde) Sayım İşlemi <ol><li> 15 ml tüpler Candida suyu 10 ml toplayın. Daha büyük miktarlar için, 50 ml tüpler içinde Candida toplamak. </li><li> Aksi belirtilmediği sürece, tüm adımlarda oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 1900 x g&#39;de blastosporlar santrifüjleyin. Üstte kalan sıvı kısmın çıkarılması ve ardından santrifüjle blastosporlar, pelet. </li><li> Birden fazla tüp olması durumunda, topaklar, steril PBS ilave, çok sayıda boruların Candida blastosporlar havuz ve sayım için, 10 ml PBS içinde tekrar süspansiyon haline bunları. </li><li> 1.5 ml mikrosantrifüj tüplerine blastosporlar 20 ul al 2X paraformaldehit 20 ul ve 15-20 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edilir. Mikroskop altında hemasitometre kullanarak sabit blastosporlar sayın. NOT: Paraformaldehyde kanserojen. Sadece davlumbaz sulandırılmamış çözüm açın. </li><li> Bu arada, t santrifüjle, en az iki kez blastosporlar yıkama tekrarPBS hem, ve blastosporlar peletleme. Enfeksiyonu için hazır ABSL1 başlığı içinde, oda sıcaklığında 15 ml tüpler peletlerin tutun. </li><li> Enfeksiyon için blastosporlar resuspending RT&#39;de bazı steril PBS bırakın. </li><li> Sayımının ardından, maya hücre / ml&#39;lik 2 x10 8 maya blastospor hücre sayısını ayarlamak için blastospor pelet steril PBS ilave edin. Bu fareleri enfekte etmek için kullanılacak blastospor süspansiyonudur. NOT: aseptik tüm adımları uygulayın. </li></ol> 4. Fare Enfeksiyon (Hücre Transferi sonrası 3-5 gün) NOT: Daha önce açıklandığı gibi 19,23-25 ​​temel enfeksiyon prosedürü yapılır. <ol><li> / - - PBS veya üç gün önce hücreleri alınan fareler Rag-1 tartılır. </li><li> Kendi vücut ağırlığını kullanarak anestezik ajanların dozu hesaplayın. Intr göre, 1 mi tüberkülin şırınga 25 G iğne kullanılarak, ketamin / ksilazin karışımı (16.1 mg / ml ve 1.6 mg / ml) uygulanması ile fareler anesteziaperitoneal enjeksiyonu. <ol><li> Vücut ağırlığının her 10 gramı başına 50 ul uygulayın. (Örneğin, ketamin, 0.8 mg ve vücut ağırlığının ksilazin 10 g / 0.08 mg ya da ketamin 80 mg ve vücut ağırlığındaki her bir kg başına ksilazin 8 mg) mevcuttur. Ayak tutam yanıt anestezi sonrası her 15 dakika gözlemleyin. NOT: Bu dozaj enfeksiyon prosedürü için yeterli anestezi 60-90 dakika, neden olacaktır. </li><li> Kurumasını önlemek için kornealar farelerin gözünde oftalmik yağ merhemi sürün. Göz yağlayıcı kurumasına gibi, oftalmik yağlama her 45 dakikada bir tekrarlayın. </li></ol></li><li> Anestezi sırasında farelerin rehidrasyon yardımcı, ön ayakları ile deri altından geri bitişik tuzlu su (% 0.9 NaCl) ile 1 ml enjekte edilir. </li><li> Yeni, temiz bir kafes edinin. Bir kez enfekte yeni kafesin içine fare her yerleştirerek, bir defada enfeksiyon prosedürü bir fare izleyin. İlk PBS / sahte enfeksiyonu gerçekleştirin ve sonra Candida enfeksiyonu Gro devamgüç kaynağı. </li><li> Anestezi fare Pick up ve dil tabanı ortaya çıkarmak için geniş ağzını açın. <ol><li> Dil altından, 90 dakika için ağız boşluğu içinde, PBS veya blastospor süspansiyonu, 50 ul ile doyurulmuş 3 mm çapında pamuk yerleştirin. Pamuk topları hareket etmiyor sağlanması, akciğer tıkanıklığı önlemek için geri farelere her 15 dk ön çevirin ve. </li></ol></li><li> Ağız boşluğu Sham veya Candida aşılamadan 90 dakika sağlamak için her fare için bir zamanlayıcı ayarlayın. </li><li> Isı lambası (4 metre uzaklıkta) altında bir kafes ve ısı jel yastıkları her fare tutun. </li><li> Dil dil laserasyon yaralanmasıdır diş önlemek için, diş içinde ve uzak çekilir emin olun. </li><li> 90 dakika sonunda, fare ağızdan pamuk çıkarın. 75 dakikadan daha kısa sürede anestezi kurtarmak herhangi fare izleyin. Böyle bir durumda, sadece, ketamin (40 mg / kg) ile yeniden anestetize. </li></ol> 5. Mesaj prosedüründee (90 dk Anestezi sırasında) İzleme <ol><li> 90 dakika anestezi sırasında ısı jel pedleri kullanın. <ol><li> Vücut ısısını korumak için ve boğulma önlemek için, fareler normal mısır koçanı fare yatak üzerinde kurtarmak için izin vermez. </li></ol></li><li> Anesteziden çıktıktan sonra, arka iki konumda steril% 0.9 NaCl, deri altından ilave 1 ml yönetmek. </li><li> Beş PBS (plasebo) kafes başına aşılanmış farelerde kadar tutun. Kafes başına Evi sadece 1-2 enfekte fareler. </li><li> Alışkanlıkları ve genel sağlık bakım, vücut ağırlığı değişiklikleri not etmek işlem sonrası her gün baş harfleri ile prosedür kartını doldurun. </li></ol> 6. Enflamasyon değerlendirilmesi 6.1) Kilo kaybı <ol><li> Enfeksiyon prosedür öncesi gün ile başlayarak, enfeksiyon sırasında, her gün fareler tartılır. Not: Genellikle, Th17 hücreleri olmadan ve T gruplar gruplar enjekte bağışıklık yetersizliği olan farelere 20 yenikNedeniyle -30% kilo kaybı mantar yükünü 19 artmış ve inflamasyon şiddetlenir. </li></ol> Dil 6.2) Histoloji puanlama <ol><li> Servikal dislokasyon CO2 asfiksiyasyonu ile fareler kurban. </li><li> Çeneleri açın ve makas ve forseps ile dilini incelemek. Dilini tutmayı künt forseps kullanın ve makas ağız arkasına ulaşmak kullanarak dilin arka uç kesilirken. </li><li> Imüno hematoksilin ve eosin dil dokuların (H &amp; E) boyama için, buz gibi soğuk PBS ile dil dokuları yıkayın. 15 ml&#39;lik tüplerde / N 2-3 dil için% 10 formalin 5 ml ekleyin ve O bunları düzeltmek. <ol><li> Sonraki gün, formalin çıkarın ve hiper tespit önlemek için% 70 etanol içinde 5 ml doku bırakın. Kesit ve parafin kesitlerin boyanması, parafin gömme devam etmek ticari hizmet için bunları gönderin. NOT: Ticari histoloji hizmeti adımları gerçekleştirmek için kullanılır. </li&gt; </ol></li><li> Slaytlar geri ticari histoloji hizmetinden kez, sınıf bir ışık mikroskobu altında doku bölümleri gözlemleyerek iltihabı. <ol><li> 0 hiçbir iltihap olan, ve 5 en şiddetli inflamasyon olmak, 0-5 puan. Tablo 1 kullanılarak iltihabı Puan. </li></ol></li></ol> Th17 hücreleri tarafından 6.3) sitokin üretimi Not: Aşırı TNF-α üretimindeki azalma, aşırı immunopatolojilerinde için okumalar biridir. Farenin adoptif Th17 hücreleri ile transfer edildiğinde, sadece, bunun Th17 hücrelerinde aşırı TNF-α üretimi ile ilişkilidir Immunopathology neden olur. <ol><li> Daha önce açıklanan yöntemleri kullanarak 19.26 dalak, servikal lenf nodları, aksiller lymphnodes ve dil tek bir hücre süspansiyonu, toplayın. </li><li> Brefeldin A (10 ug / mi) ile 4 saat için forbol miristat asetat (PMA) (50 ng / ml) ve iyonomisin (500 ng / ml) ile hücrelerin yeniden uyarmak l eklendiast 2 saat. PBS ile hücreleri yıkayın ve üreticinin talimatlarına göre ticari Tespit / permeabilizasyon kiti kullanılarak onları düzeltmek. </li><li> Daha önce tarif edildiği gibi 19 florokrom konjuge anti-TNF-α, anti-IL-17A ve ROR-γt antikorları kullanılarak hücre içi sitokin boyama yapın. </li><li> / Ml nihai konsantrasyon 3 ug - Kısaca anlatmak gerekirse anti-TNF-α, anti-IL-17A ve ROR-γt antikorlar, 2 de her bir antikorun bir kokteyli ile 1X permeabilizasyon tampon maddesi içinde tekrar süspansiyon hücreleri. </li><li> Oda sıcaklığında 1 saat süre ile inkübe hücreleri. </li><li> İnkübasyondan sonra, 1X permeabilizasyon tampon maddesi ile hücreleri yıkayın. </li><li> Akışkan sitometri analizi için% 0.5 sığır serum albümini ile PBS içinde 500 ul hücre pelletini. </li></ol>

<ol><li>Allam, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-23-producing+CD68%28%2B%29+macrophage-like+cells+predominate+within+an+IL-17-polarized+infiltrate+in+chronic+periodontitis+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Periodontology%22%5BJournal%5D)">IL-23-producing CD68(+) macrophage-like cells predominate within an IL-17-polarized infiltrate in chronic periodontitis lesions.</a> Journal of Clinical Periodontology. 38 (10), 879-886 (2011).</li>
<li>Loesche, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periodontal+disease%3A+link+to+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Compendium+Of+Continuing+Education+In+Dentistry%22%5BJournal%5D)">Periodontal disease: link to cardiovascular disease.</a> Compendium Of Continuing Education In Dentistry. 21 (6), 463-466 (2000).</li>
<li>Sfyroeras, G. S., Roussas, N., Saleptsis, V. G., Argyriou, C., Giannoukas, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+periodontal+disease+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Association between periodontal disease and stroke.</a> Journal Of Vascular Surgery. 55 (4), 1178-1184 (2012).</li>
<li>Huppler, A. R., Bishu, S., Gaffen, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucocutaneous+candidiasis%3A+the+IL-17+pathway+and+implications+for+targeted+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Mucocutaneous candidiasis: the IL-17 pathway and implications for targeted immunotherapy.</a> Arthritis Research & Therapy. 14 (4), 217(2012).</li>
<li>Sitheeque, M. A., Samaranayake, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+hyperplastic+candidosis%2Fcandidiasis+%28candidal+leukoplakia%29.+Critical+Reviews+In%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Biology+And+Medicine+%3A+An+Official+Publication+Of+The+American+Association+Of+Oral+Biologists%22%5BJournal%5D)">Chronic hyperplastic candidosis/candidiasis (candidal leukoplakia). Critical Reviews In.</a> Oral Biology And Medicine : An Official Publication Of The American Association Of Oral Biologists. 14 (4), 253-267 (2003).</li>
<li>Canabarro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+subgingival+colonization+of+Candida+albicans+and+other+yeasts+with+severity+of+chronic+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Periodontal+Research%22%5BJournal%5D)">Association of subgingival colonization of Candida albicans and other yeasts with severity of chronic periodontitis.</a> Journal Of Periodontal Research. 48 (4), 428-432 (2013).</li>
<li>Urzua, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yeast+diversity+in+the+oral+microbiota+of+subjects+with+periodontitis%3A+Candida+albicans+and+Candida+dubliniensis+colonize+the+periodontal+pockets%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Mycology%22%5BJournal%5D)">Yeast diversity in the oral microbiota of subjects with periodontitis: Candida albicans and Candida dubliniensis colonize the periodontal pockets.</a> Medical Mycology. 46 (8), 783-793 (2008).</li>
<li>Ergun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+status+and+Candida+colonization+in+patients+with+Sjogren%27s+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina+Oral%2C+Patologia+Oral+Y+Cirugia+Bucal%22%5BJournal%5D)">Oral status and Candida colonization in patients with Sjogren's Syndrome.</a> Medicina Oral, Patologia Oral Y Cirugia Bucal. 15 (2), e310-e315 (2010).</li>
<li>Hernandez, Y. L., Daniels, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+candidiasis+in+Sjogren%27s+syndrome%3A+prevalence%2C+clinical+correlations%2C+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Surgery%2C+Oral+Medicine%2C+And+Oral+Pathology%22%5BJournal%5D)">Oral candidiasis in Sjogren's syndrome: prevalence, clinical correlations, and treatment.</a> Oral Surgery, Oral Medicine, And Oral Pathology. 68 (3), 324-329 (1989).</li>
<li>Gall, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+spp.+in+oral+cancer+and+oral+precancerous+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+Microbiologica%22%5BJournal%5D)">Candida spp. in oral cancer and oral precancerous lesions.</a> The New Microbiologica. 36 (3), 283-288 (2013).</li>
<li>Grady, J. F., Reade, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+as+a+promoter+of+oral+mucosal+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Candida albicans as a promoter of oral mucosal neoplasia.</a> Carcinogenesis. 13 (5), 783-786 (1992).</li>
<li>Dwivedi, P. P., Mallya, S., Dongari-Bagtzoglou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+immunocompetent+murine+model+for+Candida+albicans-promoted+oral+epithelial+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Mycology%22%5BJournal%5D)">A novel immunocompetent murine model for Candida albicans-promoted oral epithelial dysplasia.</a> Medical Mycology. 47 (2), 157-167 (2009).</li>
<li>Cheng, S. C., Joosten, L. A., Kullberg, B. J., Netea, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+Candida+albicans+and+the+mammalian+innate+host+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Interplay between Candida albicans and the mammalian innate host defense.</a> Infection and Immunity. 80 (4), 1304-1313 (2012).</li>
<li>Marodi, L., Johnston, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+Candida+species+disease+in+infants+and+children%3A+occurrence%2C+risk+factors%2C+management%2C+and+innate+host+defense+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+In+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Invasive Candida species disease in infants and children: occurrence, risk factors, management, and innate host defense mechanisms.</a> Current Opinion In Pediatrics. 19 (6), 693-697 (2007).</li>
<li>Kumamoto, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+gastrointestinal+Candida+colonization.+Current+Opinion+In%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Inflammation and gastrointestinal Candida colonization. Current Opinion In.</a> Microbiology. 14 (4), 386-391 (2011).</li>
<li>Kraneveld, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relation+between+oral+Candida+load+and+bacterial+microbiome+profiles+in+Dutch+older+adults%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">The relation between oral Candida load and bacterial microbiome profiles in Dutch older adults.</a> PloS One. 7 (8), e42770(2012).</li>
<li>Hernandez-Santos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th17+cells+confer+long-term+adaptive+immunity+to+oral+mucosal+Candida+albicans+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Th17 cells confer long-term adaptive immunity to oral mucosal Candida albicans infections.</a> Mucosal Immunology. 6 (5), 900-910 (2013).</li>
<li>Hasina, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ABT-510+is+an+effective+chemopreventive+agent+in+the+mouse+4-nitroquinoline+1-oxide+model+of+oral+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Prevention+Research%22%5BJournal%5D)">ABT-510 is an effective chemopreventive agent in the mouse 4-nitroquinoline 1-oxide model of oral carcinogenesis.</a> Cancer Prevention Research. 2 (4), 385-393 (2009).</li>
<li>Pandiyan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%28%2B%29CD25%28%2B%29Foxp3%28%2B%29+regulatory+T+cells+promote+Th17+cells+in+vitro+and+enhance+host+resistance+in+mouse+Candida+albicans+Th17+cell+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) regulatory T cells promote Th17 cells in vitro and enhance host resistance in mouse Candida albicans Th17 cell infection model.</a> Immunity. 34 (3), 422-434 (2011).</li>
<li>Pandiyan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+IL-15+in+activating+STAT5+and+fine-tuning+IL-17A+production+in+CD4+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of IL-15 in activating STAT5 and fine-tuning IL-17A production in CD4 T lymphocytes.</a> J Immunol. 189 (9), 4237-4246 (2012).</li>
<li>Pandiyan, P., Lenardo, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+control+of+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+regulatory+T+cell+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Direct%22%5BJournal%5D)">The control of CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cell survival.</a> Biology Direct. 3 (6), (2008).</li>
<li>Pandiyan, P., Zheng, L., Ishihara, S., Reed, J., Lenardo, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%28%2B%29CD25%28%2B%29Foxp3%28%2B%29+regulatory+T+cells+induce+cytokine+deprivation-mediated+apoptosis+of+effector+CD4%28%2B%29+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) regulatory T cells induce cytokine deprivation-mediated apoptosis of effector CD4(+) T cells.</a> Nat Immunol. 8 (12), 1353-1362 (2007).</li>
<li>Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+In+Immunology%22%5BJournal%5D)">Animal models for candidiasis.</a> Current Protocols In Immunology. Coligan, J. E., et al. 105, 11-19 (2014).</li>
<li>Conti, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th17+cells+and+IL-17+receptor+signaling+are+essential+for+mucosal+host+defense+against+oral+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Th17 cells and IL-17 receptor signaling are essential for mucosal host defense against oral candidiasis.</a> J Exp Med. 206 (2), 299-311 (2009).</li>
<li>Kamai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+model+of+oropharyngeal+candidiasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+And+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">New model of oropharyngeal candidiasis in mice.</a> Antimicrobial Agents And Chemotherapy. 45 (11), 3195-3197 (2001).</li>
<li>Pandiyan, P., Bhaskaran, N., Zhang, Y., Weinberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+T+cells+from+mouse+oral+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Procedures+Online%22%5BJournal%5D)">Isolation of T cells from mouse oral tissues.</a> Biological Procedures Online. 16 (1), 4(2014).</li>
<li>Gladiator, A., Wangler, N., Trautwein-Weidner, K., LeibundGut-Landmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+IL-17-secreting+innate+lymphoid+cells+are+essential+for+host+defense+against+fungal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: IL-17-secreting innate lymphoid cells are essential for host defense against fungal infection.</a> J Immunol. 190 (2), 521-525 (2013).</li>
<li>Leppkes, M., Roulis, M., Neurath, M. F., Kollias, G., Becker, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pleiotropic+functions+of+TNF-alpha+in+the+regulation+of+the+intestinal+epithelial+response+to+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunology%22%5BJournal%5D)">Pleiotropic functions of TNF-alpha in the regulation of the intestinal epithelial response to inflammation.</a> International Immunology. 26 (9), 509-515 (2014).</li>
<li>Bishu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adaptor+CARD9+is+required+for+adaptive+but+not+innate+immunity+to+oral+mucosal+Candida+albicans+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">The adaptor CARD9 is required for adaptive but not innate immunity to oral mucosal Candida albicans infections.</a> Infection and Immunity. 82 (3), 1173-1180 (2014).</li>
<li>Quintin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+role+of+NK+cells+against+Candida+albicans+infection+in+immunocompetent+or+immunocompromised+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Differential role of NK cells against Candida albicans infection in immunocompetent or immunocompromised mice.</a> Eur J Immunol. 44 (8), 2405-2414 (2014).</li>
<li>Ramirez-Garcia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+and+cancer%3A+Can+this+yeast+induce+cancer+development+or+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+In+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Candida albicans and cancer: Can this yeast induce cancer development or progression.</a> Critical Reviews In Microbiology. , 1-13 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Bu model, oral C uyarıcı dayanmaktadır albicans enfeksiyonu bağımlı Th17 iltihabı. Çünkü T regs yokluğu, Th17 hücre kaynaklı inflamasyon sınırsız ve zayıf çözülmesi İmmünopatolojiye yol açar. In vitro Th17 hücreleri evlatlık transferi için kullanılan olarak polarize naif CD4 hücreleri elde edilen. 40 - kültürlenmiş CD4 + hücrelerinin% 50 3. günde yaklaşık keşfedilebilir IL-17A ifade (Th17 hücreleri) gösterir ve bu nedenle, fareler enjeksiyon için kullanıldı. modelin önemli bir avant...

Ağız içi enfeksiyonlar ve iltihaplanma, kanser ve kardiyovasküler hastalıklarla ilişkilidir ve genel insan sağlığı üzerinde dramatik bir etkiye sahiptir2,3. C. albicans'ın neden olduğu fırsatçı enfeksiyonlar ve iltihaplanma, primer immün yetmezlikler (PID)4,5, periodontitis 6,7, Sjögren sendromu ve tükürük bezi hastalığı8,9 gibi inflamatuar bozuklukların yanı sıra oral skuamöz hücreli karsinom 10-12 ile ilişkilidir. C. albicans, sağlıklı insanların %60'ının ağzını asemptomatik olarak kolonize eden dimorfik kommensal bir mantar olmasına rağmen, konak savunması zayıfladığında enfeksiyonlara neden olan en yaygın mantar patojenidir13-15. AIDS ve PID'li hastalarda ve ayrıca diğer bağışıklığı baskılanmış bireylerde tekrarlayan ve kronik enfeksiyonlara ve iltihaplanmaya neden olur. Bir kommensal olarak, kolonizasyon yükü, genel oral mikrobiyomun çeşitliliğindeki değişiklikle ilişkilidir16. Bir patojen olarak akut psödomembranöz, akut atrofik, kronik atrofik, kronik hipertrofik / hiperplastik ve açısal keilit gibi çeşitli orofaringeal kandidiyazis formlarına neden olur. 
C. albicans'a karşı koruma, sadece konak immün direnci ile değil, aynı zamanda Candida'nın neden olduğu immünopatolojiyi uygun şekilde kontrol etme yeteneği ile de belirlenir. Her ne kadar C. albicans gibi kommensaller diğer oral enflamatuar durumların modülasyonuna ve alevlenmesine katkıda bulunsa da, fırsatçı enfeksiyonlar sırasında disbiyozun ortaya çıktığı mekanizmalar belirsizdir. Adaptif Th17 hücrelerinin C. albicans17'ye karşı hafıza yanıtında bilinen rolünün yanı sıra, kronik enfeksiyonlar sırasında inflamasyon patolojisinin başlatılması ve sürdürülmesindeki rolleri belirsizliğini korumaktadır. Ayrıca, Sjögren sendromu ve periodontitis gibi oral inflamatuar hastalıklar Th17 aracılı patoloji ile ilişkilidir. İlginç bir şekilde, bu hastalıklar aynı zamanda sık OPC ile de güçlü bir şekilde ilişkilidir. Bununla birlikte, Th17 hücreleri, OPC'nin oral immünopatolojisi ve diğer oral inflamatuar hastalıklar arasındaki etkileşimler araştırılmamıştır. 
Oral kandidiyazisin primer ve sekonder enfeksiyonunun fare modelleri mevcut olmasına rağmen, özellikle immün yetmezlik bağlamında Candida enfeksiyonu ile ilişkili Th17 inflamasyonunu incelemek için bir fare modeli mevcut değildir. Bu çalışma, farelerde oral Candida enfeksiyonu ile ilişkili oral Th17 inflamasyonunu oluşturmak için bir yöntem sunmaktadır. Farelerde kandida enfeksiyonu, mantar lezyonları, dilde iltihaplanma, gıda alımında azalma, kilo kaybı ve sonunda can çekişen bir durum ile karakterizedir. Oral patoloji, kronik kandidal enfeksiyon lezyonlarına ve ayrıca fare ağız kanseri modellerinde epitelyal displaziye benzer12,18.

<table><tbody><tr><td>CAF-2</td><td>Pittsburgh Üniversitesi (Sarah Gaffen)</td><td>-</td><td>Candida kültürü</td></tr><tr><td>U-dip 96 kuyulu plakalar&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>055588</td><td>Hücre kültürü için kullanılır</td></tr><tr><td>a-CD3&nbsp;</td><td>eBiosciences</td><td>16-0031-85</td><td>Hücrelerin Th17 koşullarına polarizasyonu</td></tr><tr><td>a-CD28&nbsp;</td><td>eBiosciences</td><td>16-0281-85</td><td>Hücrelerin Th17 koşullarına polarizasyonu</td></tr><tr><td>m-IL-6</td><td>Bio Basic</td><td>RC232</td><td>Hücrelerin Th17 koşullarına polarizasyonu</td></tr><tr><td>h-TGF-b&nbsp;</td><td>Ar-Ge D</td><td>240-B</td><td>Hücrelerin Th17 koşullarına göre polarizasyonu</td></tr><tr><td>a-IFN-g&nbsp;</td><td>eBiosciences</td><td>16-7311-85</td><td>Hücrelerin Th17 koşullarına polarizasyonu</td></tr><tr><td>a-IL-4&nbsp;</td><td>eBiosciences</td><td>16-7041-85</td><td>Hücrelerin Th17 koşullarına polarizasyonu</td></tr>&<tr><td>alfa;-IL17A ef660</td><td>eBiosciences</td><td>50-7177-82</td><td>Hücre kültürü için kullanılır - 1:50</td></tr><tr><td>&alpha;-TNFa-PE-Cy7</td><td>eBiosciences</td><td>25-7423-41</td><td>Hücre kültürü için kullanılır - 1:100</td></tr><tr><td>&alpha;-RORgt; PE&nbsp;</td><td>eBiosciences</td><td>12-6981-82</td><td>Hücre kültürü için kullanılır - 1:50</td></tr><tr><td>YNB amino asitler olmadan) / Pepton / Dekstroz suyu ortamı&nbsp;</td><td>Biyo Temel</td><td>S507. BOYUT:</td><td>Kandida büyümesi için Mediium</td></tr><tr><td>Shaker kuluçka makinesi&nbsp;</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>Innova 4300</td><td>Candida</td></tr><tr><td>15 ml tüpler</td> için inkübasyon büyümesi <td>Bio Basic</td><td>BT888-SY</td><td>Hücre kültürü ve kandida büyümesi için kullanılır</td></tr><tr><td>50 ml tüpler</td><td>Bio Basic</td><td>CT 788-YS</td><td>Hücre kültürü ve kandida büyümesi için kullanılır</td></tr><tr><td>Masa üstü Santrifüj</td><td>VWR International LLC</td><td>82017-654</td><td>Candida -900 g</td></tr><tr><td>Allegra Santrifüj</td> <td>peletleme içinBeckman Coulter</td><td>392302</td><td>Hücre kültürü - 480 g</td></tr><tr><td>1.5 ml eppendorf tüpleri</td><td>Bio Basic</td><td>BT620-NS</td><td>Kandida 2x</td></tr><tr><td>paraformaldehit</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimlerinin</td> nihai konsantrasyonunun hazırlanması <td>15710</td><td>Sayım için kandida sabitleme</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>VWR International LLC</td><td>15170-172</td><td>Hücre sayma</td></tr><tr><td>PBS - Fosfat Tamponlu Salin</td><td>Bio Basic</td><td>PD8117</td><td>Tamponların hazırlanması</td></tr><tr><td>Ketamin / ksilazin ve nbsp;</td><td>Case Western Reserve Üniversitesi - Hayvan Kaynak</td> <td>Merkezi-Anestezi</td> <td>için ARC onaylı protokolden elde edildi</td></tr><tr><td>Oftalmik kayganlaştırıcı merhem&nbsp;</td><td>Kuruluğu önlemek için hayvanlar için</td> <td>alergan-Göz</td><td></td> merhemi</tr><tr><td>Tuzlu (% 0.9 NaCl)</td> <td>G Biosciences</td><td>786-561</td><td>Dehidrasyonu önlemek için hayvanlara uygulanır</td></tr><tr><td>3 mm çapında pamuk yünü top&nbsp;</td><td>VWR International LLC</td><td>BP7603</td><td>kandida enfeksiyonu için 3 mm toplar</td></tr><tr><td>Isı jeli pedleri</td><td>Case Western Reserve University - Hayvan Kaynak Merkezi</td> <td>-</td> <td>vücut sıcaklığını korumak ve hızlı iyileşme için</td></tr><tr><td>Hematoksilen ve Eozin boyama</td><td>Histoserv - MD-Doku</td><td></td> <td>histolojisi</td></tr><tr><td>% 10 formalin&nbsp;</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>JC1111 / MC</td><td>Doku histolojisi</td></tr><tr><td>% 70 etanol ve nbsp;</td><td>VWR International LLC</td><td>97064-490</td><td>Sterilizasyon amaçlı</td></tr><tr><td>PMA - Phorbol 12-miristat 13-asetat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1585-1MG</td><td>Hücrelerin yeniden uyarılması</td></tr><tr><td>İyonomisin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>124222 1mg</td><td>Hücrelerin yeniden uyarılması</td></tr><tr><td>Fiksasyon geçirgenlik kiti</td><td>eBiosciences</td><td>E16913-106</td><td>Akış sitometrisi için sabitleme hücreleri</td></tr><tr><td>Tüberkülin şırıngaları</td><td>BD Biosciences</td><td>309659</td><td>Fare enjeksiyonu</td></tr><tr><td>25 G x 3/8 iğne</td><td>BD Biosciences</td><td>309626</td><td>Fare enjeksiyonu</td></tr><tr><td>Rag1 -/- fareler</td><td>Jackson laboratuvarları</td><td>Stok no: 002216</td><td>Alıcı fareler</td></tr><tr><td>CD45.1 konjenik fareler</td><td>Jackson laboratuvarları</td><td>Stok no:002014&nbsp;</td><td>Donör Th17 hücreleri</td></tr><tr><td>CB17-SCID fareler</td><td>Jackson laboratuvarları</td><td>Stok no: 001303</td><td>Alıcı fareler</td></tr><tr><td>Balb/c fareler</td><td>Jackson laboratuvarları</td><td>Stok no: 000651</td><td>Donör Th17 hücreleri</td></tr></tbody></table>

immünyetmezligi farelerde orofaringeal kandidiyazis ve th17 İltihabı modeli

Th17 Inflammation Model of Oropharyngeal Candidiasis in Immunodeficient Mice

Orofaringeal Kandidiyazis (OPC) hastalığı sadece konak immün direncinin olmamasından değil, aynı zamanda enfeksiyonun neden olduğu immünopatolojinin uygun regülasyonunun olmamasından da kaynaklanır. Th17 hücreleri antifungal savunmada rol oynamasına rağmen, immünopatolojideki rolleri belirsizdir. Bu çalışma, immün yetmezliği olan farelerde oral kandidal enfeksiyon ile ilişkili oral Th17 immünopatolojisinin kurulması için bir yöntem sunmaktadır. Yöntem, lenfopenik farelerin in vitro kültürlenmiş Th17 hücreleri ile sulandırılmasına ve ardından Candida albicans (C. albicans) ile oral enfeksiyona dayanmaktadır. Sonuçlar, dizginlenmemiş Th17 hücrelerinin inflamasyon ve patolojiye yol açtığını ve kilo kaybı, proinflamatuar sitokin üretimi, dil histopatolojisi ve mortalite dahil olmak üzere çeşitli ölçülebilir okumalarla ilişkili olduğunu göstermektedir ve bu modelin OPC immünopatolojisinin incelenmesinde değerli olabileceğini göstermektedir. Düzenleyici hücrelerin (Tregs) evlat edinici transferi, inflamatuar yanıtı kontrol eder ve azaltır, bu da bu modelin oral inflamasyona karşı koymak için yeni stratejileri test etmek için kullanılabileceğini göstermektedir. Bu model, diğer ağız hastalıkları bağlamında genel olarak oral Th17 immünopatolojisinin incelenmesinde de uygulanabilir.

Bu modelde, Rag-1 de, Candida ile enfekte olan fareler ve enfekte edilmemiş fareler, her iki - / - bağışıklık yetersizliği olan arka plan adoptif enfeksiyona 3-5 gün önce, Th17 hücreleri ile transfer edilmiştir. 10-12 farelerin toplam 2, her bir Sahte enfekte edilmiş gruptaki farelerin ve Candida enfekte gruplarının her biri 4-5 ile, deneyler için kullanılmıştır. Enjekte Th17 hücreleri, sırasıyla (Şekil 1A) Thy1.1 veya CD45.1 boyaması kullanılarak in vivo olarak tak...

Candida enfeksiyon modelleri, konak immün direncini incelemek için mevcut olsa da, Candida enfeksiyonu bağlamında T hücresi aracılı immünopatolojiyi incelemek için bir model yoktur. Burada, immün yetmezliği olan farelerde oral Candida enfeksiyonu ile ilişkili Th17 immünopatolojisini oluşturmak için bir yöntem tarif ediyoruz.

Immünyetmezligi Farelerde Orofaringeal kandidiyazis ve Th17 İltihabı Modeli

Oropharyngeal Candidiasis (OPC) disease is caused not only due to the lack of host immune resistance, but also the absence of appropriate regulation of ...

Bu prosedürün genel amacı, patolojik TH 17 hücreleri tarafından aracılık edilen, enfeksiyona bağlı oral inflamasyon modeli geliştirmektir. Bu işlem, öncelikle immun yetmez farelere th 17 hücreleri enjekte edilerek gerçekleştirilir. Bir sonraki adım, candida albicans fungusunun büyütülmesi, blastospordan toplanması ve bunların PBS içerisinde hazırlanmasıdır.Son adım, enjekte edilen Th17 hücrelerinin proliferasyonunu teşvik etmek ve oral inflamasyonu indüklemek için farelere blasto sporlarının oral yolla enjekte edilmesidir. Sonuçlar, akış sitometrisi ve dilin immünohistokimyasal analizine dayanarak, Th17 enjekte edilen farelerin kilo kaybı ve dil inflamasyonuna uğradığını göstermektedir. Dolayısıyla, bu tekniğin etkileri, bu fare modeli üzerinden oral immünoterapiye kadar uzanmaktadır.TH 17 inflamasyon modeli, diğer ağız hastalıkları bağlamındaki TH 17 inflamasyonunu incelemek için de kullanılabilir; prosedür, laboratuvarımdaki bir azot vasküler ve post-yapısal uzman tarafından gerçekleştirilecektir. Bu prosedür, TH 17 hücre kültürü oluşturmak için faktörle ayrıştırılmış naif T hücrelerini ve isteğe bağlı olarak treg hücrelerini gerektirir. CD4 pozitif, CD44 düşük, CD62L yüksek ve CD25 negatif naif T hücreleri, UBO 96 kuyucuklu plaklarda, kuyucuk başına 30.000 hücre olacak şekilde, TH 17 koşullarında üç ila dört gün boyunca kültüre edilir. Kontrol olarak naif T hücreleri, TH 17 hücreleri üretmek için aynı kültür koşullarında 30.000 CD4 pozitif, CD25 pozitif ve FOX P3 pozitif treg hücresi ile birlikte kültüre edilebilir. Dört günlük kültürleme süresinden sonra TH 17 hücrelerini bir pipet kullanarak toplayın.Canlılıklarını incelemek için küçük bir alikot ayırın. Bu hücreleri yarım mililitre RPMI içinde süspande edin ve içlerine 100 nanogram propidium iodide ekleyin. FACS analizi için, hücrelerin ana kütlesi hasat edilir ve hücre enjeksiyonu için hazırlanır.Hücrelerin ana kütlesi PBS ile yıkanmalı, santrifüj edilmeli ve ardından farelere enjekte edilmek üzere hazırlanmalıdır. Soğuk PBS içerisinde mililitre başına 10 milyon hücre olacak şekilde, 25 gauge iğne kullanarak farelerin intraperitonal bölgesine 100 µL hücre süspansiyonu enjekte edin. Diğer farelere PBS veya kontrol TH 17 treg ko-kültür hücreleri enjekte edilmelidir; fareleri üç ila beş gün sonra C. albicans ile enfekte etmeyi planlayın, bir gün öncesinde hazırlık yapın.Fareleri C albicans ile enfekte etmek için, CAF 2-1 laboratuvar suşunun beş kolonisini 100 µL steril PBS içinde dağıtın ve süspansiyonu 20 mL steril besiyerine ekleyin. İnoküle edilen besiyerinin 30 °C'de, 130 RPM çalkalamada gece boyunca büyümesine izin verin. Ertesi gün, kültürden 10 mL'yi 15 mL'lik bir tüpe toplayın, ardından Eloqua'yı 1900 ×g'de beş dakika boyunca santrifüj edin.Oda sıcaklığında, pellet blastosporları içerir ve süpernatan atılmalıdır. Toplanan tüm blastosporları 10 mililitre steril PBS içerisinde birleştirin ve 20 mikrolitre Eloqua'yı bir mikro santrifüj tüpüne aktarın. Eloqua'ya 20 mikrolitre 2X PFA ekleyin ve 15 ila 20 dakikalık fiksasyonun ardından, fiksasyon süresi boyunca blastosporları bir hemositometre kullanarak sayın.Blasto sporlarının büyük kısmını en az iki kez daha PBS ile yıkayın. Sayım sonucu bilinene kadar blasto spor peletlerini AB SL one davlumbazda oda sıcaklığında saklayın. Ardından blasto sporlarını oda sıcaklığındaki PBS ile mililitre başına 200 milyon hücre olacak şekilde yeniden süspanse edin.Hücreleri farelere enfekte etmeye hazır halde tutun. Bu yöntem daha önce gözden geçirilmişti, ancak bu bölümde kısaca yeniden ele alınacaktır. Öncelikle fareleri anesteziye alın, anestezi durumlarını teyit edin ve oftalmik pomad uygulayın.Uygulama 45 dakika sonra tekrarlanmalıdır. Ardından deri altına, her seferinde bir fare üzerinde çalışarak, hidrasyon için bir mililitre salin enjekte edin.Önce sham grubunu, ardından candida grubunu enfekte edin. 50 µL PBS veya blasto spor süspansiyonu ile doyurarak üç milimetre çapında bir pamuk yumağı hazırlayın. Daha sonra dilin tabanına erişin ve pamuk yumağını oraya yerleştirin.Dilin, dişler tarafından parçalanmaması için içeriye doğru, dişlerden uzağa çekildiğinden emin olun. Ardından fareyi, sıcak bir ped üzerine yerleştirilmiş kendi iyileşme kafesine aktarın. Kafeste mısır koçanı altlığı kullanılmamalıdır, aksi takdirde ısıtma pedi yeterli ısıyı iletmeyecektir; iyileşme kafesinin konumunun dört fit üzerine bir ısı lambası yerleştirin.Pamuk topu 90 dakika boyunca yerinde kalmalıdır. Her fare için ayrı bir 90 dakikalık geri sayım sayacı tutulmalıdır. Bu süre zarfında, akciğer konjesyonunu önlemek için her fare 15 dakikada bir yan tarafa çevrilmelidir.Dolayısıyla, tüm prosedürdeki en kritik adım, pamuk topunun tüm inokülasyon süresi boyunca yerinde kaldığından emin olmaktır. Eğer bir fare anestezi etkisinden erken uyanmaya başlarsa, yalnızca ketamin kullanarak yeniden anestezi uygulayın. 90 dakika sonra pamuğu çıkarın ve hayvanın uyanmasını gözlemleyin.Fareler kendilerine geldikten sonra, ek hidrasyon sağlamak için sırtın iki farklı bölgesinden toplam bir mililitre daha salin uygulayın. İşlemden sonra, uyluk 1.1 veya CD 45.1 farelerinden türetilen saf T hücreleri kullanan beş adede kadar sham inoküle edilmiş fare aynı kafeste tutulabilir. Tarif edilen prosedür takip edilmiş ve enjekte edilen T hücreleri ilgili belirteçleri kullanılarak izlenmiştir.Co-transfer Treg'leri CD 45.2 farelerinden türetilmiş ve sadece bu marker ile takip edilmiştir. Candida enfeksiyonu geçiren farelerde, enjekte edilen TH 17 hücrelerinin katılımı ve ekspansiyonu gözlemlenmiştir. Enfeksiyon sonrası kilo kaybı takip edilmiştir.Sadece TH 17 hücreleri enjekte edilen fareler kademeli olarak kilo kaybetti ve bazılarının ötenazi yapılması gerekti. Diğer gruplardaki kilo kaybı ise zamanla durdu. Treg ko-kültürü enjekte edilen fareler, enfeksiyondan dört gün sonra çok daha az TNF alfa üreten hücre gösterdi.TNF Alpha üreten hücrelerin uzun süreli varlığı, yalnızca TH 17 enjekte edilen farelerin çözülmemiş enfeksiyonlara ve inflamasyona sahip olduğunu göstermektedir. Treg enjekte edilen farelerin dillerinde ise çok daha az inflamatuar infiltrat ve daha az fungal büyüme görülmüştür. Aynı zaman noktasında, inflamatuar infiltratların uzun süreli varlığı, yalnızca TH 17 enjekte edilen farelerin çözülmemiş enfeksiyonlara ve inflamasyona sahip olduğunu göstermektedir. Bu enfeksiyon tekniği, uzmanlaşıldığında, dört fare için üç saatte ve enfekte edilecek her ek fare için 15 dakika ek süreyle gerçekleştirilebilir.

th17-inflammation-model-oropharyngeal-candidiasis-immunodeficient

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Değerlendirilmesinde kullanılacak kilit...

Deneysel Fare Modeli Vajinal Aşılama ve Örnek Toplama Protokolleri Candida Vajinit

Diğer T hücresi alt kümelerinin farklı efektör işlevleri ile, Th17 hücreleri merkezi inflamatuar otoimmün implike edilmiştir. Bu in vitro Th17 farklılaşma protokolü naif CD4 + T lenfositleri Th17 hücrelerine ayırt edebilir, ve daha fazla otoimmün ve konak cevabı rollerini incelemek belirlemek için bir araç sağlar.

İzolasyon ve naif CD4 T Lenfositler Th17 Farklılaşma

Patojen enfeksiyonuna karşı konak bağışıklık tepkisi sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir süreçtir. Farelerde bir lipopolisakarit akciğer maruz modeli kullanarak, bu hastalığın patojenezi ile ilgili kompleks mekanizmalar yüksek çözünürlüklü değerlendirme yapmak mümkündür.

Farelerde Host immün yanıtı değerlendirmek için Orofarengeal intratrakeal PAMP İdaresi ve Bronchoalveolar Lavage Kullanımı

Galleria mellonella Dissemine kandidiyazis için omurgasız bir model olarak hizmet vermektedir. Burada, enfeksiyon ayrıntılı protokol ve modelin etkinliği için destek veri sağlar.

Galleria mellonella Waxworm enfeksiyon modeli Dissemine kandidiyazis için

Burada, benzersiz bir şekilde tasarlanmış bir ısıtma / kısıtlama cihazı kullanarak kemirgen kuyruk damarı enjeksiyonları için etkili ve verimli bir yöntem sunuyoruz. Vazodilasyon ve kısıtlama süreçlerinin başlatılmasını kolaylaştırarak, bu protokol, en az sıkıntıya sahip büyük hayvan gruplarının doğru ve zamanında intravenöz enjeksiyonlarına izin verir.

Murine Mantar Sepsis Modelinde Verimli Kuyruk Damarı Enjeksiyonları için Çağdaş Isınma/Kısıtlama Cihazı

Tehlikeli patojenlerin neden olduğu periprostetik eklem enfeksiyonu (PEE) klinik ortopedide yaygındır. Mevcut hayvan modelleri, PJI'nin gerçek durumunu doğru bir şekilde simüle edemez. Burada, PJI için yeni terapötikler araştırmak ve geliştirmek için Candida albicans biyofilm ile ilişkili bir PJI fare modeli kurduk.

Farede Periprostetik Eklem Candida albicans Enfeksiyon Modeli

Kateter üzerinde biyofilmin oluştuğu ve C.albicans ile konakçı arasındaki etkileşimin klinik CRI ile iyi korelasyon gösterdiği C.albicans ile ilişkili kateterle ilişkili enfeksiyonun (CRI) bir fare modelini oluşturduk. Bu model, C.albicans biyofilmle ilişkili CRI için tarama tedavilerine yardımcı olarak klinik dönüşüm için bir temel oluşturur.

Farede Kateterle İlişkili Candida albicans Enfeksiyon Modeli

Bu protokol, oral kandidiyazisin bir fare modelinde antimikrobiyal Fotodinamik Terapinin (aPDT) uygulanmasını açıklar. aPDT, suda çözünür bir kurkuminoid ve mavi LED ışık karışımı kullanılarak gerçekleştirildi.

Oral Kandidiyazisin Murin Modelinde Kurkuminoid Aracılı Antimikrobiyal Fotodinamik Tedavi

Bu protokol, naif CD4+ T hücrelerinin in vitro olarak patojenik Th17 hücrelerine farklılaşmasını tanımlar. Spesifik olarak, çok parametreli akış sitometrisi tabanlı bir yaklaşımla birleştirildiğinde, bu farklılaşma yöntemi kullanılarak saf CD4+ T hücrelerinden %90 saflıkta patojenik Th4 hücreleri elde edilebilir.

Farede Naif CD4+ T Hücrelerinin Patojenik Th17 Hücrelerine İn Vitro Farklılaşması

Mevcut protokol, in vitro olarak konak-patojen etkileşimlerini araştırmak için organotipik doku modellerinin uygulanmasını özetlemektedir. Spesifik olarak, açıklanan model sistemi, ağız sağlığına karşı hastalık bağlamında biyofilmlerle (diş plağı) ilişkili mikroorganizmalara maruz kalan çok katmanlı bir ağız epiteli kullanır.

Konak-Patojen Etkileşimlerinin İn Vitro Araştırılması için Organotipik Doku Model Sistemleri

Öğrenin, immünyetmez farelerde Th17 hücreleri enjekte ederek orofaringeal kandidiyazis ve iltihap modeli oluşturmayı. Bu yöntem, ağız immünoterapisi için T hücre aracılıklı immünopatolojiyi incelemeye yardımcı olur.

Immünyetmezligi Farelerde Orofaringeal kandidiyazis ve Th17 İltihabı Modeli

Daha fazla video keşfet