Name: Primer Tümör ve Akciğer Metastazı Eğitim için MEF Hücre İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Keşfedin meme tümörlerinden primer hücre izolasyonu, akciğer metastazı görüntüleme ve fare embriyonik fibroblast hazırlama yöntemlerini. Bu teknikler kanser biyolojisi araştırmalarında uygulanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Mali destek için NIH, LACaTS ve Ochsner klinik vakfına teşekkür ederiz.

Tüm farenin deneyleri Tıp LSU Okulu Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı komite (IACUC) tarafından onaylanan protokollere uygun olarak yapıldı. Tüm cihazlar diseksiyon öncesinde otoklavlanmalıdır gerekir. Fare göğüs tümörlerinden gelen primer hücre hazırlanması 1. <ol><li> Genetik olarak, daha önce tarif edildiği gibi 6 spontan tümörler geliştirmektedir fare meme tümörü virüs Polyoma Orta T-antijen (MMTV PyMT transgenik fare) ile tasarlanmış olan bir fare modeli kullanarak. </li><li> İzofluran (% 99.9) ile fareler kurban ve steril bir ortamı (Şekil 1A) sağlamak için% 75 etanol püskürtün. </li><li> Makasla boyun üretral orifis alanı cildi açın. Organların (Şekil 1B) kolay erişim sağlamak için cilt aşağı pin. </li><li> Meme, meme tümörü izole ve soğuk, steril fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) (pH 7.4) (Şekil 1C) ile yıkayın. </li><li> Tümörün aktarınsteril 10cm doku kültürü plakası yaklaşık 1 mm 3 adet steril jilet ve makas ile doğrayın ve. Daha sonraki aşamalar, steril bir laminer akış başlığı içinde yapılmalıdır. </li><li> 37 ° C &#39;de 2 saat süre ile bir rocker 1 mg / ml lik bir nihai konsantrasyonda serumsuz DMEM ortamı içinde çözülmüş kollajenaz ile kesilmiş tümör dokusu inkübe edin. X gr 200&#39;de 3 dakika boyunca tümör dokusu süspansiyon santrifüjleyin. Not: Kolajenaz inkübasyon doku enzimatik ayrışması için gereklidir. </li><li> Süpernatant atılır ve 200 x g&#39;de 3 dakika boyunca santrifüj ile, PBS (pH 7.4) ile Çökelti 3 kez yıkayın. Son yıkamadan sonra, süpernatant süzün. </li><li> Nutating ise 37 ° C &#39;de 5 dakika boyunca tripsin EDTA, 2 ml ile doku yeniden süspanse edin. 200 x g&#39;de 3 dakika boyunca bir süspansiyon santrifüj ve yıkama tekrarlayın. </li><li> 10 cm plaka, normal büyüme ortamında (DMEM,% 10 FBS, 2X pen / strep) doku pelletini. DeğişiklikOrtam Sonraki 3 gün boyunca her gün. İstediğiniz hücre sayısı kadar Kültür hücreleri elde edilir. NOT: Yaklaşık 1x10 7 hücreleri bu prosedür izole edilecektir. MMTV PyMT karşılaştırıldığında örneğin MMTV-Neu gibi diğer fare meme tümör oluşumu modelleri, hücrelerin daha düşük verim verir. Bir düşük değerli ürününü oluşturmak modeller kullanılarak, bu artık bir daha büyük bir tümör ve Kültür hücreleri ile başlamak için faydalıdır. </li></ol> 2. Fare Akciğer Ekstraksiyon Akciğer Metastazı gözünüzde canlandırın için <ol><li> Akciğer çıkarma öncesinde, karaciğer ve diyaframı çıkarın. Akciğerleri rahatsız etmeden kaburga yerinden. </li><li> Makas ince çift, şah damarından daha yakın olan trakea üst kısmını açın. </li><li> Bir kateter kullanılarak, akciğer (Şekil 2A) doldurmak için trakea yoluyla Z-fix ya da Hindistan, mürekkep gibi 1 ml bir madde enjekte edilir. Göm parafin Akciğerler Z-düzeltin. </li><li> Fekete çözümü Hindistan mürekkep enjekte akciğerleri De-leke(100 mi% 70 alkol,% 10 tamponlu formalin 10 ml buzlu asetik asit 5 mi) 5 dakika boyunca. Çapında bir ≥ 0.5 mm ile ikincil bölgelerde tümör nodülleri tanımlayın metastaz olarak nodüller belirler. NOT: tümör tarafından bronşlar ve bronşiyol tıkanmaya, tümör nodülleri% 15 Hindistan mürekkebi absorbe edemez ve bu nedenle normal akciğer dokusu siyah olacak ve tümör nodülleri beyaz renk 7 olacak dolayı. Bu tek tek tümör nodülleri (Şekil 2B) görselleştirme sağlayacaktır. </li></ol> Fare Embriyolar gelen fare embriyonik fibroblastlar (MEFS) hazırlanması 3. <ol><li> İzofluran (% 99.9) ile birlikte hamile fareler kurban ve steril bir ortam sağlamak için% 75 etanol püskürtün. </li><li> Makasla boyun üretral orifis alanı cildi açın ve rahim embriyolar izole. </li><li> Cildi açarken embriyolar rahatsız etmemek için dikkatli olun. </li><li> Rahim boynuzları çıkarın ve soğuk ste onları yıkayınPBS (pH 7.4) içinde çözündürülür. </li><li> Buz soğukluğunda PBS (pH 7.4) içeren 10 cm&#39;lik tabak içinde olan çok dikkatli bir şekilde plasenta ve yer embriyolar embriyo ayırın. </li><li> Embriyo kafa, karaciğer ve gut çıkarın ve PBS (pH 7.4) ihtiva eden bir 12 gözlü doku kültür plakalarında kalan kısmı yerleştirin. </li><li> Başka bir 12 kuyu plaka içeren tripsin EDTA embriyo gövdesini aktarın ve steril bir jilet ve makas kullanarak küçük parçalara (~ 1 mm 3) oyulmuş. 37 ° C&#39;de 5 dakika boyunca tripsin EDTA, 5 ml kıyılmış malzeme inkübe edin. </li><li> Doğranmış embriyolar 1 ml cenin sığır serumu (FBS) eklenerek tripsin inaktive. Santrifüj, 10 dakika boyunca 200 x g hızında süspansiyonu, dikkatli bir şekilde, süpernatant kaldırmak sıcak DMEM ortamı, 1 ml ile pelet tekrar süspansiyon ve 10 mi DMEM (% 20 FBS ve 2X penisilin / streptomisin içeren 10 cm&#39;lik tabak bütün içeriğini aktarmak ). </li><li> İki gün için orta her gün değiştirin. Kültür, istenen hücre kadar hücrelernumara elde edilir. </li></ol>

<ol><li>Minn, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Genes that mediate breast cancer metastasis to lung.</a> Natur. 436 (7050), 518-524 (2005).</li>
<li>Poste, G., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathogenesis+of+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">The pathogenesis of cancer metastasis.</a> Natur. 283 (5743), 139-146 (1980).</li>
<li>Wan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Metastasis+Moving+New+Biological+Insights+into+the+Clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor Metastasis Moving New Biological Insights into the Clinic.</a> Nat Med. 19 (11), 1450-1464 (2013).</li>
<li>Bergers, G., Benjamin, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenesis+and+the+angiogenic+switch%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumorigenesis and the angiogenic switch.</a> Nat Rev Cancer. 3 (6), 401-410 (2003).</li>
<li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximizing+mouse+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Maximizing mouse cancer models.</a> Nat Rev Cancer. 7 (9), 654-658 (2007).</li>
<li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene%3A+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Mol Cell Biol. 12 (3), 954-961 (1992).</li>
<li>Wexler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+Identification+of+Experimental+Pulmonary+Metastases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Accurate Identification of Experimental Pulmonary Metastases.</a> J Natl Cancer Inst. 36 (4), 641-645 (1966).</li>
<li>Boczkowski, D., Nair, S. K., Nam, J. H., Lyerly, H. K., Gilboa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tumor+immunity+and+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+using+dendritic+cells+transfected+with+messenger+RNA+amplified+from+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Induction of tumor immunity and cytotoxic T lymphocyte responses using dendritic cells transfected with messenger RNA amplified from tumor cells.</a> Cancer Res. 60 (4), 1028-1034 (2000).</li>
<li>Vargo-Gogola, T., Rosen, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+breast+cancer%3A+one+size+does+not+fit+all%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Modelling breast cancer: one size does not fit all.</a> Nat Rev Cancer. 7 (9), 659-672 (2007).</li>
<li>Watts, A. M., Kennedy, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+Tumor+Foci+in+an+Experimental+Murine+Tumor+Model+Using+Computer-Assisted+Video+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Bioche%22%5BJournal%5D)">Quantitation of Tumor Foci in an Experimental Murine Tumor Model Using Computer-Assisted Video Imaging.</a> Anal Bioche. 256 (2), 217-219 (1998).</li>
<li>Rosenberg, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+Established+Pulmonary+Metastases+and+Subcutaneous+Tumor+Mediated+by+the+Systemic+Administration+of+High-Dose+Recombinant+Interleukin+2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Me%22%5BJournal%5D)">Regression of Established Pulmonary Metastases and Subcutaneous Tumor Mediated by the Systemic Administration of High-Dose Recombinant Interleukin 2.</a> J Exp Me. 161 (5), 1169-1188 (1985).</li>
<li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Re%22%5BJournal%5D)">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Re. 8 (4), 212(2006).</li>
<li>Veer, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiling+predicts+clinical+outcome+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiling predicts clinical outcome of breast cancer.</a> Nature. 415 (6871), 530-536 (2002).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir açıklama yok.

Bu protokol, taze fare tümör primer hücrelerin izole edilmesi içindir. Bu yöntemle hazırlanan lizatlar protein, DNA ve RNA analizleri için de yararlıdır. Primer meme tümörün kanserli hücreleri genellikle beyin, akciğer ve kemik 1 metastaz. Dahil metastaz saptanması için akciğer çıkarmak için kullanılan bir tekniktir. Şekil 2B&#39;de görüldüğü gibi, bir mürekkep lekesi ile akciğer boyama tümör nodülleri görünüm için izin verir. Z-fix çözeltisi içinde akciğerlere Tespit bize akciğer bölümleri y...

Metastazı, meme kanserinin ilerlemesindeki son adımdır 1. Kötü huylu hücrelerin birincil tümörden salındığı ve diğer organlara yayıldığı bir dizi adımı içerir 2. Hücreler intravaze olabilmeli, dolaşımda hayatta kalabilmeli, uzak organlara ekstravaze olabilmeli ve bu yeni organ sisteminde hayatta kalabilmelidir 3. Tümör oluşumundaki her adım, çeşitli genetik ve epigenetik değişiklikler yoluyla hücreler tarafından sıkı bir şekilde kontrol edilir 4. Meme kanseri tümör oluşumunun mekanizmalarını incelemek için, kısa ömürleri, küçük boyutları ve hızlı üreme süreleri nedeniyle fare model sistemleri kullanılmıştır. Kanser araştırmalarında fare modellerini kullanmanın bazı önemli avantajları, insanlarla paylaştıkları moleküler ve fizyolojik benzerliklerdir 5. 
Yerleşik fare ve insan hücre hatları meme kanseri araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Her ne kadar bu hücreleri kullanarak metastaz aşamaları hakkında bazı bilgiler elde edebilsek de, tümör baskılayıcılar/onkogenler ile genetik olarak manipüle edilmiş hayvan modelleri, embriyonik dönemden başlayarak tümör gelişimi ve metastaz hakkında çok daha fazla bilgi verecektir. Böylece, bu fare modelleri ile tümör büyümesinin genetik ve gelişimsel düzenlemesini elde edebiliriz. Ayrıca, tümör mikroçevresi de tümör hücresi gen ekspresyonunda önemli bir rol oynar ve yerleşik hücre dizileri kullanılarak yapılan çalışmalarla aynı senaryoyu taklit etmek zor olabilir. Birincil insan meme tümörleri, fare meme tümörigenezini incelemek için de kullanılabilir. İzole meme tümörlerinin kullanılmasının ana dezavantajı, bu yeni implante edilen tümörün farenin damar sistemine ve lenfatik dokusuna sahip olmamasıdır. Meme tümörijenezini incelemek için genetik fare model sistemleri, metastaz adımlarını izlememize, tümör mikroçevresini analiz etmemize ve tüm vücuda erişmemize izin verecektir 5.
Bu protokolün genel amacı, farelerde meme tümörijenezini incelemektir. Meme kanserlerinin tipik olarak beyin, akciğer ve kemiğe metastaz yaptığı bilinmektedir. Bu protokol, primer meme tümör hücrelerinin izolasyonunun yanı sıra meme kanserinin akciğere metastazı üzerinde çalışılmasına izin verir. Ayrıca, fare embriyosundan fare embriyonik fibroblastlarını (MEF'ler) analiz etmek için başka bir protokol dahil edilmiştir. Birlikte, bu teknikler fare meme tümörigenezini incelemede faydalıdır.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>HyClone</td><td>SH30243.01</td><td>4 > C</td></tr><tr><td>%0,05 Tripsin-EDTA</td><td>Hayat&nbsp; teknolojileri</td><td>25300-062</td><td>&ndash; 20 &°C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>Kollajenaz Tip IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td>&ndash; 20 &°C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>Hyaluronidaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>&ndash; 20 &°C adresinde saklayın; C</td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Life&nbsp; teknolojileri</td><td>15140-122</td><td>4 > C</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>Gemini Bio-Products</td><td>100-106</td><td>&ndash; 80 &°C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>Z-fix</td><td>ANATECH#</td><td>174</td><td>RT Hindistan'da</td></tr><tr><td>Mağaza Ink</td><td>Yasutomo</td><td></td><td>RT</td></tr><tr><td>AERRANE'de Mağaza (Isoflurane)</td><td>Baxter</td><td>NDC 10019-773-60</td><td>RT'de</td></tr><tr><td>Mağaza Etanol</td><td>EMD</td><td>AX0441-3</td><td>RT'de Mağaza</td></tr></tbody></table>

primer tümör ve akciğer metastazı eğitim için mef hücre İzolasyonu

Primary Tumor and MEF Cell Isolation to Study Lung Metastasis

Meme tümör oluşumunda, hastalığın metastatik evresi, etkilenen birey için en büyük tehdidi oluşturur. Değişmiş genotiplere sahip normal meme hücreleri artık diğer dokuları istila etme ve hayatta kalma yeteneğine sahiptir. Bu protokolde, fare meme tümörleri çıkarılır ve tümörlerden birincil hücreler hazırlanır. Bu prosedürden izole edilen hücreler daha sonra gen profili oluşturma deneyleri için kullanılabilir. Başarılı bir metastaz için, bu hücrelerin intravazasyon yapabilmesi, dolaşımda hayatta kalabilmesi, uzak organlara ekstravazasyon yapabilmesi ve bu yeni organ sisteminde hayatta kalabilmesi gerekir. Akciğerler meme kanseri metastazının tipik hedefidir. Akciğere metastaz seçiciliğine aracılık eden bir dizi gen keşfedilmiştir. Burada, genetik olarak tasarlanmış bir fare modelinden akciğer metastazı incelemek için bir yöntem açıklıyoruz. Ayrıca, fare embriyosundan fare embriyonik fibroblastlarını (MEF'ler) analiz etmek için başka bir protokol dahil edilmiştir. Aynı hayvan türünden MEF hücreleri, kanser olmayan hücre gen ekspresyonu hakkında bir ipucu sağlar. Birlikte, bu teknikler fare meme tümörigenezi, ilişkili sinyal mekanizmaları ve embriyolardaki anormalliklerin yolaklarının incelenmesinde yararlıdır.

hayvan kurban etmek tümör ilerleme aşaması, belirli çalışma ve IACUC kurallarına bağlıdır. Şekil 1A, fare meme tümörü virüs Polyoma Orta T-antijen (MMTV PyMT) ile 100 günlük bir C57BL / 6 farede üç ayda kurban edilmiştir. cilt makas ile boyun üretral orifis alanı açılmış ve cilt Şekil 1B gösterildiği gibi organlara kolay erişim sağlamak için aşağı tuş oldu. Bu durum, Şekil 1C&#39;de elde edildi tümör kolay ulaşılmasına izin vermektedir. tümörlerden elde edilen birincil ...

Bu protokolün amacı meme tümörigenezini incelemektir. Bu teknikle, fare meme tümörleri çıkarılır ve tümörlerden birincil hücreler hazırlanır. Akciğer metastazını incelemek için bir akciğer ekstraksiyon protokolü dahildir. Ayrıca, fare embriyosundan fare embriyonik fibroblastlarını analiz etmek için başka bir protokol dahil edilmiştir.

Primer Tümör ve Akciğer Metastazı Eğitim için MEF Hücre İzolasyonu

In breast tumorigenesis, the metastatic stage of the disease poses the greatest threat to the affected individual. Normal breast cells with altered ...

Bu prosedürün genel amacı, farelerde meme kanseri tümör agenezini incelemektir. İlk olarak, fare meme tümörlerinden primer hücrelerin hazırlanması gösterilmektedir. Ardından, akciğer metastazını görüntülemek için fare akciğerinin nasıl çıkarılacağı sunulmaktadır.Son olarak, mouse mammary tumor virus polyoma middle T antigen için transgenik farelerin meme kanseri tümör oluşumunu araştırmak için kullanılabileceğini gösteren bu yöntemler kapsamında, fare embriyolarından fare embriyonik fibroblastlarının hazırlanması gösterilmiştir. Bu yöntem meme kanseri hakkında bilgi sağlayabilmesinin yanı sıra, diğer katı tümörlerin araştırılmasında da uygulanabilir. Tümör çıkarma adımları sırasında diğer dokular yerine sadece tümörlerin izole edilmesi önemli olduğundan, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritiktir. Bir mouse mammary tumor virus polyoma middle T antigen transgenik faresinin cildini, üretra ağzından boyun bölgesine kadar makasla açarak başlayın.Ardından deriyi sabitleyin ve meme tümörünü izole edin. Tümörü in situ olarak soğuk PBS ile yıkayın ve tümörü steril 10 santimetrelik bir doku kültürü plağına yerleştirin. Daha sonra, plağı steril bir laminar akışlı kabine transfer edin ve tümörü bir kübik milimetre boyutundaki parçalara bölmek için steril bir jilet ve makas kullanın.Parçaları kollajenaz ile 37 °C'de bir sarsıcılı inkübatörde inkübe edin. İki saat sonra, oluşan tümör dokusu süspansiyonunu santrifüjle çöktürün. Peleti üç kez daha PBS Resus ile yıkayın; son yıkamadan sonra peleti iki mililitre tripsin EDTA içinde 37 °C'de beş dakika boyunca karıştırarak süspande edin.Ardından hücreleri üç kez daha yıkayın ve normal büyüme ortamında yeniden süspande edin. Son olarak, istenen hücre sayısına ulaşana kadar sonraki üç gün boyunca ortamı her gün değiştirerek hücreleri 10 santimetrelik bir doku kültürü tabağında inkübe edin. Akciğeri çıkarmadan önce karaciğeri ve diyaframı çıkarın ve kaburgaları yerinden ayırın.Ardından, juguler vene yakın trakeanın üst kısmını açın ve akciğerleri doldurmak için trakeadan uygun ajanı enjekte etmek üzere bir kateter kullanın, akciğerleri çıkarın ve eğer Z fix kullanılıyorsa dokuyu parafine gömün. Çin mürekkebi kullanılıyorsa dokuyu beş dakika boyunca inec solüsyonunda bekletin; normal akciğer dokusu siyah renkte görünürken tümör nodülleri beyaz görünecektir. Sekonder bölgelerde gözlemlenen çapı 0,5 mm veya daha büyük olan tümör nodüllerini, fare embriyonik fibroblastları oluşturmak için metastaz olarak sınıflandırın.İlk olarak, embriyoları rahatsız etmemeye dikkat ederek, gösterildiği gibi hamile bir farenin derisini üretra açıklığından boyna kadar açın. Ardından, uterus boynuzlarını çıkarın ve bunları steril PBS ile durulayın. Daha sonra embriyoları plasentadan dikkatlice ve teker teker ayırın.Her bir embriyoyu, buz soğukluğunda PBS içeren 10 santimetrelik bir kültür kabına yerleştirin. Baş, karaciğer ve bağırsak çıkarıldıktan sonra, embriyonun kalan kısmını PBS içeren 12 kuyucuklu bir doku kültürü plağının bir kuyucuğunda durulayın ve gövdeyi bir kübik milimetrelik parçalara bölün. Dokuları beş mililitre tripsin EDTA içeren başka bir kuyucuğa aktarın ve dokuyu 37 derece Celsius'ta inkübe edin.Beş dakika sonra, sindirimi durdurmak için bir mililitre FBS ekleyin. Ardından oluşan hücre süspansiyonunu santrifüjleyin ve peleti yeniden süspanse edin. Son olarak hücreleri, bir mililitre ılık DMEM içerisinde, antibiyotiklerle desteklenmiş 10 mililitre DMEM içeren 10 santimetrelik bir kültür kabına aktarın ve istenen hücre sayısına ulaşana kadar hücreleri kültüre edin.Hayvanın sakrifiye edileceği tümör progresyon aşaması, spesifik çalışmaya ve I-A-C-U-C kılavuzlarına bağlıdır. Örneğin, fare meme tümörü virüsü polyoma orta T antijenine sahip olan bu 100 günlük FVB fare, az önce gösterildiği gibi bir meme tümörü izole edildikten üç ay sonra sakrifiye edilmiştir. Primer tümör hücreleri elde edilmiştir.Birçok gen meme kanserinin akciğere metastazını yönettiği için, metastatik süreci incelemek amacıyla az önce gösterildiği gibi akciğerler de çıkarılmıştır. Tümör nodüllerini görüntülemek için akciğerler Z fix ile şişirilmiş ve Hindistan mürekkebi ile boyanmıştır. Burada, FVB suşu fare embriyolarından izole edilmiş fare embriyonik fibroblastları gösterilmektedir.Bu videoyu izledikten sonra, primer fare tümör hücrelerini ve fare embriyonik fibroblastlarını nasıl izole edeceğiniz ve fare akciğerini nasıl çıkaracağınız konusunda iyi bir bilgiye sahip olmalısınız. İzofluran ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın; bu nedenle, bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman kimyasal bir çeker ocak altında çalışmak gibi önlemler alınmalıdır.

primary-tumor-and-mef-cell-isolation-to-study-lung-metastasis

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu makale, insan kanser hücre hatları metastatik potansiyelini belirlemek için kullanılan deneysel bir metastaz testinin prosedürleri açıklamaktadır.

Deneysel metastaz Testi

Bu yazıda, tümör infiltre lökositlerin oldukça saflaştırılmış nüfusu izole edilmesi için bir protokol tanımlamaktadır. Bu protokol, karmaşık tümör doku hücreleri izole edilmesi için, verim ve saflıkta geliştirmek için Miltenyi Biotech protokolü uyarlanmıştır.

Primer Tümörler gelen Bağışıklık Hücre İzolasyonu

Nötrofiller sadece istilacı mikroorganizmalara karşı konak savunmasında değil, aynı zamanda tümör hücrelerinin immün sürveyansında da önemli bir rol oynarlar. Burada, anti-tümör özelliklere sahip nötrofillerin izolasyonu ile ilgili teknikleri ve in vitro ve in vivo olarak anti-tümör nötrofil fonksiyonunu izleme yöntemlerini açıklıyoruz.

Anti-tümör özelliklere sahip izole edilmesi ve nötrofil Karakterizasyonu

Bu el yazması tümör hücresi birikimi Akciğerlerde tümör metastazı, bir hayvan modeli ölçmek için bir yöntem açıklanır.

Akciğer tümör hücre işe alım tahlil

Farelerde floresan haberci kullanılarak, akciğer metastazı olan tümör hücre stromanın etkileşimleri ex vivo canlı görüntüleme için nispeten basit bir yöntem tarif eder. iplik disk konfokal mikroskopi kullanılarak, bu teknik, en az 4 saat boyunca canlı hücre görüntülenmesini sağlayarak ve diğer enflamatuar akciğer koşulları incelemek için adapte edilebilir.

Ex Akciğer Metastaz ve Bunların mikroçevresinin Canlı Görüntüleme vivo

Burada, kanser metastazında pulmoner alveoler makrofajların fonksiyonlarını incelemek için model ve yaklaşımı açıklıyoruz. Bu hücrelerin metastazdaki rolünü göstermek için, alveolar makrofajın klodronat lipozomlarla tükenmesi ile birlikte meme kanserinin sinjenik (4T1) modeli kullanıldı.

Meme Kanseri Metastaz alveoler makrofajlar Rolü incelenmesi

Bu makalede, pulmoner metastaz tahlil (PuMA) Protokolü'nün ayrıntılı bir açıklama sağlamak için hedeftir. Bu model araştırmacılar metastatik osteosarkom (OS) hücre büyümesini widefield floresan veya confocal mikroskop lazer tarama kullanarak akciğer dokusunda çalışmaya izin verir.

Metastatik akciğer kolonizasyon pulmoner metastaz tahlil kullanarak osteosarkom içinde eğitim pratik düşünceler

Bir hayvan modeli tümör hücreleri (CTCs) kanseri metastaz sırasında akciğer kolonizasyon teşvik dolaşan rolü deşifre için gereklidir. Burada kurduk ve başarıyla gerçekleştirilen bir vivo içinde tahlil özel olarak test etmek için gereksinimin akciğer kolonizasyon için CTCs polimer fibronektin (polyFN) Meclisi.

Tümör hücre görselleştirme akciğer dokusu içinde dolaşan bir akciğer kolonizasyon tahlil kurulması

Burada, tümör hücreleri ve metastatik lezyonlar dolaşan bir protokol tümör progresyon adımları taklit eder ve birincil tümörün izole etmek için yardımcı olan bir ex vivo akciğer kanseri modeli için mevcut.

Tümör metastazı çalışmaya acellular ve hücresel akciğer modeli

Bu makale, üçlü negatif meme kanserinin singeneik bir murine modelinden primer kanser ilişkili fibroblastların izolasyonu ve kültürü ve tümör mikroçevrimini hedeflemek için tasarlanmış yeni nanopartiküllerin preklinik çalışması için uygulanması için bir protokol sağlamayı amaçlamaktadır.

Hedeflenen Nanopartiküllerin Çalışması için Meme Kanserinin Singeneik Murine Modelinden Primer Kanserle İlişkili Fibroblastların İzolasyonu

Akciğer metastazlarından tümör hücresi yayılımını incelemek için, akciğer metastazlarının seçici fotokonversiyonu için cerrahi bir protokol ve ardından üçüncül organlarda redissemine tümör hücrelerinin tanımlanması için bir yöntem sunuyoruz.

Fotokonversiyon Kullanarak Akciğer Metastazlarından Tümör Hücresi Yayılımının İzlenmesi

Keşfedin meme tümörlerinden primer hücre izolasyonu, akciğer metastazı görüntüleme ve fare embriyonik fibroblast hazırlama yöntemlerini. Bu teknikler kanser biyolojisi araştırmalarında uygulanabilir.

Primer Tümör ve Akciğer Metastazı Eğitim için MEF Hücre İzolasyonu

Daha fazla video keşfet