Fare Koku Ayrımcılık ve alışkanlık için test

Bu prosedürün genel amacı, farelerin hem yeni hem de sosyal kokuları tespit etme, bunlara alışma ve alışkanlıklarını yitirme yeteneklerini inceleyecek bir yöntem sunmaktır. Bu işlem, öncelikle meyve ve kuruyemiş bazlı özütler gibi bir dizi yeni sosyal olmayan koku ile kafes altlığı gibi sosyal kokuların hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, farelere önce üç yeni koku, ardından da iki farklı sosyal koku sunulmasıdır.

Her denemede, farelerin koklama davranışı değerlendirilir ve kaydedilir. Nihayetinde, koku alma için kullanılan koku, ayırt etme ve alışma testi; hayvanın yeni bir kokuya yanıt verebildiğini, kokuya alışabildiğini ve ardından başka bir yeni koku veya sosyal kokuyla karşılaştığında kokuya karşı alışkanlığın bozulma yeteneğini sergileyebildiğini göstermek için kullanılır. Bu yöntem, hayvanın yeni bir hayvana veya yeni bir uyarana, kokuyu algılayamadığı için mi yanıt vermediği gibi nörobilim alanındaki temel soruları yanıtlamak için kullanılabilir.

Eldivenleri giyerek ve üç adet 15 mililitrelik konik tüpü 10 mililitre su ile doldurarak sosyal olmayan kokuları hazırlamaya başlayın. İlk tüpe 100 mikrolitre badem özütü, ikinci tüpe 100 mikrolitre muz özütü pipetleyin ve kontrol olarak kullanmak üzere üçüncü tüpü sadece suyla bırakın. Ardından, en az üç gündür temizlenmemiş olan ve test denekleriyle aynı cinsiyette ve eşit sayıda fare içeren iki farklı fare kafesi temin edin.

Kirli kafesin altını zikzaklar çizerek silmek için bir pamuklu çubuk kullanın. Çubuğa yapışmış olan altlık malzemesini silkeleyin ve çubuğu, sentetik tarafı aşağı gelecek şekilde, sıkı kapanan kapaklı büyük bir cam kavanoza yerleştirin. Test edilecek her bir fare için her iki kafesten üçer çubuk elde edilene kadar bu işlemi tekrarlayın.

Kavanozları oda sıcaklığında saklayın ve sürüntü çubuklarını dört ila altı saat içinde kullanın. Güçlü ve tutarlı bir koku sağlamak için, deney günü koku örnekleme kafeslerini test alanının dışındaki bir odaya taşıyın. Kokulu parfümler veya losyonlar kullanmayın ve güçlü kokusu olan herhangi bir şey yememekten kaçının.

Hazırlanan sosyal ve sosyal olmayan kokuları; laboratuvar bandı, taze pamuklu çubuklar, kapaklı bir atık şişesi ve iki zamanlayıcı ile birlikte test prosedüründen hemen önce test odasına yerleştirin. Temiz eldivenleri giyin ve ilk fareyi tartın. Ardından fareyi, tel kapaklı ve su şişesi olmayan temiz bir kafese aktarın.

Kafesi, sıra dışı koku veya gürültünün olmadığı bir alana yerleştirin ve farenin yeni kafese uyum sağlaması için 45 dakika bekleyin. Alıştırma süresinin sonunda, fareyi kafesiyle birlikte test alanına taşıyın ve başka bir fareyi alıştırmaya başlayın. Alıştırma süreci tamamlanmış fareyi, oturduğunuzda görüş açısı rahat olacak bir yükseklikteki tezgah üzerine, kafesiyle birlikte yerleştirin.

Ardından, metin protokolünde açıklanan sırayla, taze bir pamuklu çubuğun ucuna 100 µL koku gelecek şekilde sosyal olmayan kokulardan birini hazırlayın. Bunu kullanımdan hemen önce yapın. Sosyal kokular için, önceden hazırlanmış pamuklu çubuklardan birini ilgili kavanozundan çıkarıp kullanın.

Kafesin telli üst kısmını kaldırın ve pamuklu çubuğun kokusuz ucunu, telli kapağın alt tarafından su şişesinin ağzına yerleştirin. Koku kontaminasyonunu önlemek için, pamuklu uca parmaklar dahil hiçbir şeye dokunmaktan kaçının. Koku çubuğunun yaklaşık bir inçlik kısmı kafeste kaldığında, çubuğun ahşap ucunu laboratuvar bandı kullanarak kafesin altına sabitleyin.

Ardından kapağı nazikçe tekrar kafesin üzerine kapatın. Test faresini rahatsız etmemek için hemen iki dakikalık süreyi başlatın. Birinci zamanlayıcıyı ve ikinci kronometreyi kullanarak, test faresinin kokuyu koklayarak geçirdiği toplam süreyi kaydedin.

Aktif koklama, farenin pamuklu çubuğa iki santimetreden daha yakınken burnunu çubuğa doğru yöneltmesi olarak tanımlanır. Deneme sona erdiğinde, tel kapağı kaldırın ve pamuklu çubuğu kapağın alt kısmından aşağı doğru çekerek dikkatlice çıkarın. Çubuğun koku içeren ucunun kapağa temas etmesini önlemek için, fare bir dakika boyunca dinlenirken kullanılmış çubuğu atık şişesine kapatın ve bir sonraki donör çubuğu hazırlayın.

Her bir kokuyu iki dakika boyunca art arda üç kez sunun. Tüm denemeler tamamlandığında, kullanılan pamuklu çubukları içeren atık şişesini test odasının dışındaki bir çöp kutusuna boşaltın ve fareyi kendi kafesine geri koyun. Kokulardan her biri, önce C 57 black six J arka planına sahip farelere, her bir kokunun ardışık sunumlarıyla uygulanmıştır.

Fareler, konaklama belirtisi gösteren kokuyu incelemek için daha az zaman harcadılar. Konaklama ve ayırt etme konusundaki aynı örüntü, sosyal kokularda da sosyal olmayan kokularda olduğu gibi görülebilir. Ancak fareler, sosyal kokuları incelemek için daha fazla zaman harcadılar.

Aynı sosyal olmayan kokular, karma arka planlı bir erkek FVB suşuna sunulduğunda, benzer bir alışma örüntüsü gözlemlenmiştir. Tanıtılan her yeni koku, aktif koklamada bir artışla karşılanmış ve aynı kokunun her sunumunda bu artış azalmıştır. Bununla birlikte, FVB fareler sosyal kokularla ilgili farklı bir örüntü sergilemişlerdir; çünkü tekrarlanan maruziyetle birlikte koklama süresinde anlamlı bir azalma görülmemiştir.

Veriler, farelerin iki sosyal kokuya tekrarlanan sunumlara alışmadığını göstermektedir. Bu videoyu izledikten sonra, bir farenin yeni veya sosyal bir kokuyu tespit etme, bu kokuya alışma ve ardından yeni bir koku sunulduğunda bu kokuya karşı alışkanlığı bozma yeteneğinin nasıl test edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.