Fareler Soğuk Hassasiyeti ve Uyum belirlenmesi için Basit ve ucuz Yöntem

Bu prosedürün genel amacı, farelerin soğuğa tepkisini ölçmektir. Bu, önce camın istenen sıcaklığa soğutulması veya ısıtılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, fareleri dinlenene kadar alıştırmaktır.

Üçüncü adım, kuru buz tozunu bir şırıngadaki bir pelet haline sıkıştırmaktır. Son adım, çekme gecikmesini ölçmek için kuru buz peleti ve bir kronometre kullanarak fareleri test etmektir. Sonuç olarak, soğuk ekici testi, serbest davranan farelerde soğuğa duyarlılığı ve adaptasyonu ölçmek için kullanılır.

Testimizin aseton testi ve soğuk plaka testi gibi şu anda mevcut olan tahlillere göre ana avantajı, çeşitli çevresel koşullar altında başlangıçta hem aşırı duyarlılığı hem de analjeziyi test edebilmemizdir. Yine de bu yöntem, farelerin soğuğa duyarlılığı hakkında fikir verebilir. Maymun, sıçan ve insanlar gibi diğer sistemlerde de kullanılabilir Prosedürü gösteren, laboratuvarımda yüksek lisans öğrencisi olan Daniel Brenner olacak.

Cam yüzeyi temizledikten sonra, T tipi filament termokupl probunu laboratuvar bandı ile cam plakanın ortasındaki yüzeye sabitleyin. Hayvan muhafazalarını cam plakanın üzerine ortada tek bir çizgi halinde yerleştirin. Ardından termokupl probunu merkezi hayvan muhafazasından geçirin ve veri kaydediciye takın.

Veri kaydediciyi açın ve otomatik kapanma özelliğini devre dışı bırakın. Veri kaydediciyi verilen kabloyla bilgisayara bağlayın. Fareler arasındaki görsel etkileşimleri önlemek için hayvan muhafazalarını siyah eklerle ayırın ve muhafazaların alt tarafının görüntülenmesine izin vermek için aynaları camın altına yerleştirin.

Teste başlamak için, alüminyum kutuları hayvanın her iki yanındaki cam plakaya, muhafazaları sabit bir mesafede yerleştirin. 30 santigrat derecede test yapıyorsanız, ısıtılmış su sirkülatörlerini hayvan muhafazasından 0,25 inç uzağa yerleştirilmiş alüminyum kutulara bağlayın. Tahliye delikleri tıkalıyken kutuları yarıya kadar su ile doldurun.

Sirkülatörleri, alüminyum kutulardan gelen sıcak su her iki taraftaki sirkülatörün rezervuarına doğrudan geri akacak şekilde konumlandırın. Her sirkülatöre su eklemeniz gerekecektir. Metal kutular doldurulduktan sonra, sirkülatörleri 45 ila 60 santigrat dereceye ayarlayın ve alüminyum kutuları sabit bir sıcak su akışıyla doldurun.

Gözlükler istenen sıcaklık aralığına ulaştığında, fareleri plakanın üzerindeki muhafazalara yerleştirin. Farelerin aparata ve sıcaklığa alışmasına izin verin. Bu fareler 2,5 saat boyunca alışacaktır.

Alışma süresinin sonuna yaklaşırken, yarısı kadar kuru buzla dolu bir buz kovasını doldurun ve kuru buzu toz haline getirmek için bir çekiç veya tokmak kullanın. Fareleri rahatsız etmekten kaçınmak için bunu davranış odasının dışında yapın. Ardından, üç mililitrelik bir şırınganın üstünü kesmek için bir tıraş bıçağı veya makas kullanın.

Ardından, kuru buzu davranış odasına geri sıkıştırırken süblimasyonun oluşturduğu basıncı azaltmak için şırınganın zıt taraflarına iki set üç delik açmak için 21 gauge bir iğne kullanın, şırınga haznesini yarıya kadar kuru buz tozu ile doldurun. Şırınganın kesik ucunu düz bir nesneye karşı tutun ve pistonu kullanarak tozu sıkıca sıkıştırın. Sıkıştırılmış kuru buz paletinin ucunu şırınganın kenarını geçecek şekilde uzatın.

Şimdi, camda dört pençesi olan ve hareket etmeyen, ancak tamamen uykuda olmayan fareleri test edin. Nazikçe ama sıkı bir şekilde hedeflemek için aynaları kullanarak, düz peleti farenin arka pençesinin altındaki cam yüzeye aynı hizada bastırın. Aynı anda, bir zamanlayıcıda başlat düğmesine basın.

Fare soğutulmuş camdan dikey veya yatay olarak uzaklaştığında, zamanlayıcıyı durdurun ve kuru buz topağını çıkarın. Bununla birlikte, fare pençeyi çok kısa bir süre hareket ettirir ve ardından soğutma yüzeyine geri döndürürse, fare kalıcı bir hareket yapana kadar zamanlamaya ve uyarmaya devam edin. Fare soğutulmuş camdan uzaklaşmazsa, uyaranı 20 saniye sonra durdurun.

Fareleri 17 santigrat derecede test etmek için hayvanın her pençesinde en az üç değer toplanana kadar bu test prosedürünü tekrarlayın. Deneyi az önce gösterildiği gibi tekrarlayın, ancak alüminyum kutuları ısıtılmış suyla doldurmak yerine ıslak buz kullanın ve fareleri test etmek için kutuları muhafazalardan yaklaşık 0,25 inç uzağa yerleştirin. 12 santigrat derecede kuru buz kullanılır, ancak kutular muhafazalardan 1,25 inç uzağa yerleştirilir.

Bu alternatif protokol, fareleri, stabilize edildikten sonra değil, plakanın sıcaklığı düşerken test eder. Bu, cihazı kurduktan sonra farelerin adaptasyonunu olduğu gibi test etmemizi sağlar. Daha önce olduğu gibi, oda sıcaklığında ölçüm yapmak için deneyi daha önce belirtildiği gibi gerçekleştirin.

Temel gecikmeler oda sıcaklığında ölçüldükten sonra. Daha önce gösterilen prosedürü kullanarak, boş alüminyum kutuları kuru buzla doldurun ve her iki taraftaki muhafazalardan 1.25 inç uzağa yerleştirin. Son olarak, cam plaka soğurken gecikme ölçümleri yapmak için deneyi tekrarlayın.

Mümkün olduğunca sık ölçüm yapmak. Bu grafik, 12 santigrat derece, 17 santigrat derece, 23 santigrat derece veya 30 santigrat dereceden başlayan fareler için ortalama çekme gecikmesini gösterir. Çekilme gecikmeleri tüm sıcaklıklarda tutarlıdır.

Analjezik etkiler, burada gösterildiği gibi soğuk ekici testi kullanılarak ölçülebilir. Kilogram başına 1.5 miligram morfinin deri altı enjeksiyonu, enjeksiyondan 60 dakika sonra Bonferroni post-hoc testi ile iki yönlü bir innova ile ölçüldüğü gibi, enjeksiyondan 30 dakika sonra farelerin geri çekilme gecikmesini arttırır. Morfin enjekte edilen ve serum fizyolojik enjekte edilen arasında anlamlı bir fark yoktur.

Farelerin aşırı duyarlılığı da burada ölçülebilir. 10 mikrolitre tam fros adjuvanının ekici içi enjeksiyonu, bonferroni post-hoc testi ile iki yönlü bir innova ile ölçüldüğü gibi, enjeksiyondan iki ve üç saat sonra farelerin geri çekilme gecikmesini önemli ölçüde azaltır. Aynı farelere dört saat sonra deri altı morfin enjeksiyonları verildi ve 4.5 saatteki tüm geri çekilme gecikmeleri, post hoc testi ile yapılan tek yönlü bir innova ile ölçülen üç saate kıyasla önemli ölçüde daha yüksekti.

Morfin enjeksiyondan 5.5 saat sonra metabolize edildikten sonra, CFA enjekte edilen fareler, Bonferroni post-hoc testi ile iki yönlü bir inova ile ölçüldüğü gibi, salin enjekte edilen farelere göre daha düşük geri çekilme gecikmelerine sahipti. Soğutma ortamındaki değişikliklere adaptasyon, bu test ile gerçek zamanlı olarak ölçülebilir. Yabani tip fareler, cam plaka soğudukça aynı geri çekilme gecikmesine sahiptir, bu da soğutma sıcaklıklarına, herhangi bir grup arasında önemli bir fark olmayan CPA ile ölçülebilenden daha hızlı adapte olduklarını düşündürür.

Bununla birlikte, farelere PIP iki hidrolizini bloke etmek için U 7 3 1 2 2 enjekte edildiğinde, sıcaklık plakası azaldıkça gecikmeleri azalır ve bu da adaptasyonun bozulduğunu düşündürür Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik alışma süresi de dahil olmak üzere beş saat içinde yapılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, uyanık ve serbestçe davranan farelerde soğuk algınlığı ve adaptasyonun nasıl ölçüleceğini iyi anlamış olmalısınız. Kuru buzla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu yöntem sırasında uygun havalandırmayı ve hava temizliğini sağlamanız gerektiğini unutmayın.