Kemirgen Retina ve Uzaktan Ekstremite İskemik Önkoşullamanın Koruyucu Etkileri Fonksiyonu Değerlendirmek Üzere elektroretinogram kullanma

Bu prosedürün genel amacı, ERG kullanarak normal ışık yaralanmalı ve uzak iskemik ön koşullandırılmış ve hafif yaralı sıçanlarda görme fonksiyonunu test etmek ve böylece uzak ekstremite iskemisinin retina üzerindeki koruyucu etkilerini göstermektir. Bu, fareleri 12 saat boyunca adapte ederek ilk karanlıkta gerçekleştirilir. İkinci adım, LED ışık uyaranları ve bir dijital amplifikatör kullanarak temel karanlığa uyarlanmış ERG'yi kaydetmektir.

Daha sonra, fareleri parlak ve sürekli bir ışığa maruz bırakarak retinal bir strese maruz bırakın. Son adım, ışık hasarı olan sıçanların ve uzak ekstremite iskemisi ile ön koşullandırılan sıçanların ERG kayıtlarını karşılaştırmak ve A dalgasında görülen fotoreseptör yanıtlarını ve B dalgasında görüldüğü gibi iç retinal yanıtları ölçmektir. Sonuç olarak, karanlığa uyarlanmış ERG, skotopik görsel işlevi değerlendirmek için kullanılır.

Dolayısıyla bu yöntem, uzaktan iskemik bazlı nöroproteksiyon hakkında bilgi sağlayabilir. Ayrıca diğer retina yaralanması ve hastalık farmakolojik testlerine ve görme kusurlu hayvanların taranmasına da uygulanabilir. Bu işleme başlamak için, fareyi karanlıkta 12 saat boyunca uyarlayın, ardından ketamin ksilazin kokteyli enjeksiyonu ile uyuşturun.

Hayvan bilincini kaybettikten sonra, refleks tepkisinin olmadığından emin olmak için ayağını hafifçe sıkıştırarak anestezi derinliğini kontrol edin. Ardından, korneasına bir damla atropin ve bir damla prox metan uygulayın. 10 santimetre uzunluğunda siyah ipliğe kesin.

Daha sonra iplikle bir ilmek yapın ve ilmeği gözün ekvatoru üzerinden geçirin, göz küresini hafifçe öne doğru çekmek ve korneayı göz kapağından uzak tutmak için hafifçe sıkı bir şekilde örün. Daha sonra, kornealara carmer göz damlası uygulayın. Fareyi, başı ganzfeld'in açıklığına yerleştirilmiş şekilde ısıtılmış platformun üstündeki emici yatağın üzerine yerleştirin.

Ardından, vücut sıcaklığının 37 santigrat derecede tutulduğundan emin olmak için iç sıcaklık probunu rektuma yerleştirin ve kordonunu farenin kuyruğuna bantlayarak sıcaklık probunu yerine sabitleyin. Ardından, referans elektrodu deri altından arka bacak içine yerleştirin. Elektrotun ağızdan kaymasını önlemek için negatif elektrodu ağzınıza güvenli bir şekilde yerleştirin.

Bağlantı kablosunu sabit bir yüzeye sabitleyin. Ardından pozitif elektrodu korneanın merkezinin üzerine yerleştirin ve elektrotun bir mikrom manipülatör kullanarak korneaya hafifçe temas ettiğinden emin olun. Elektrotlar yerleştirildikten sonra, karanlığa adaptasyonu korumak için ganzfeld ve hayvan da dahil olmak üzere kurulan deliği opak bir malzeme ile örtün.

Satın alma yazılımında. Toplama öncesi örnekleme için beş milisaniye ve 100 ila 1000 milisaniye arasında bir toplama süresi ile örnekleme hızı olarak iki kilohertz ayarlayın. Ardından bant geçiren filtreleri bir ila 1000 hertz'e ayarlayın ve örneklemenin bir flaşın ardından 100 milisaniyelik bir süre boyunca tetiklendiğinden emin olun.

Şimdi, kayıt taban çizgisini kontrol edin. Yabancı gürültüden arındırılmış olmalı, ancak amplifikatör gürültüsünü ve solunum salınımını göstermelidir. Ardından bir test flaşı çalıştırın.

Bu, test flaşına yanıt olarak tipik bir ERG dalga biçimidir. Tamamlandığında, hayvanın 10 dakika boyunca karanlığa yeniden adapte olmasına izin verin. Ardından, kararlı sinyal için taban çizgisini yeniden kontrol edin.

Daha sonra, kayda başlayın Kayıt seansının sonunda, hayvanın vücut sıcaklığının stabilitesini kontrol edin. Elektrotları çıkarın, ardından carmer polimerini kornealara tekrar uygulayın. Daha sonra, hayvan barınağına dönmeden önce hayvanın tamamen hareketli ve aktif olana kadar bir ısı yastığı üzerinde iyileşmesine izin verin.

Bu şekil, karanlığa uyarlanmış bir ERG'den bir dalga ve B dalgasının ölçümünü göstermektedir. Burada gösterilen iz, karanlığa adapte olmuş bir gözün korneasından, T sıfır olarak gösterilen zamanda verilen parlak bir ışık parlamasına kaydedilir. Bir dalganın genliği, taban çizgisinden ilk çukura kadar ölçülür.

B dalgasının genliği, A dalgasının çukurundan bir sonraki pozitif tepe noktasına kadar ölçülür. Gecikme, uyaran artefaktından, A dalgasının çukuru gibi iz üzerindeki ilgi noktasına kadar ölçülür. Ham baskın ERG sinyali, artan ışık uyaranı ile artar.

Bir dalga, metre kare başına yaklaşık 0.4 log skotopik kandela saniyesinde görünür hale gelir ve karışık ERG sinyalini koni ve çubuk tepkilerine ayırmak için ikiz flaş paradigması kullanılmıştır. Bir kez ustalaştı. Bu teknik 30 dakika içinde yapılabilir.