Kemirgen Retina ve Uzaktan Ekstremite İskemik Önkoşullamanın Koruyucu Etkileri Fonksiyonu Değerlendirmek Üzere elektroretinogram kullanma

Bu prosedürün genel amacı, ERG kullanarak normal ışık hasarlı, uzak iskemik ön koşullandırmalı ve ışık hasarlı sıçanlarda görsel fonksiyonu test etmek ve böylece uzak ekstremite iskemisinin retina üzerindeki koruyucu etkilerini göstermektir. Bu işlem, öncelikle sıçanların 12 saat boyunca karanlığa adapte edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, LED ışık stimülasyonları ve dijital bir amplifikatör kullanılarak bazal karanlığa adapte ERG kaydının alınmasıdır.

Ardından, sıçanları parlak ve sürekli bir ışığa maruz bırakarak retinal strese tabi tutun. Son adım, ışık hasarlı sıçanların ERG kayıtlarını, uzak ekstremite iskemisi ile ön koşullandırılmış olanlarınkilerle karşılaştırmak ve A dalgasında görülen fotoreseptör yanıtları ile B dalgasında görülen iç retinal yanıtları ölçmektir. Nihayetinde, skotopik görme fonksiyonunu değerlendirmek için karanlığa adapte ERG kullanılır.

Böylece bu yöntem, uzak iskemik tabanlı nöroproteksiyon hakkında bilgiler sağlayabilir. Ayrıca, retinal hasarın ve hastalığın diğer formlarının farmakolojik testlerinde ve görme kusurları olan hayvanların taranmasında da uygulanabilir. Bu prosedüre başlamak için, sıçanı 12 saat boyunca karanlığa adapte edin, ardından ketamin ksilazin kokteyli enjekte ederek anestezi uygulayın.

Hayvan bilincini kaybettiğinde, refleks yanıtının yok olduğundan emin olmak için ayağını hafifçe sıkarak anestezinin derinliğini kontrol edin. Ardından, korneasına bir damla atropin ve bir damla proksmetan uygulayın. 10 santimetre uzunluğunda siyah iplik kesin.

Ardından iplikle bir ilmek oluşturun ve ilmeği gözün ekvatoruna geçirin; göz küresini hafifçe öne çekmek ve korneayı göz kapağından uzak tutmak için ilmeği hafifçe sıkın. Sonrasında, kornealara carmer göz damlası uygulayın. Sıçanı, başı ganzfeld açıklığına gelecek şekilde, ısıtılmış platformun üzerindeki emici yatağa yerleştirin.

Ardından, vücut sıcaklığının 37 °C'de tutulduğundan emin olmak için iç sıcaklık probunu rektuma yerleştirin ve sıcaklık probunun kablosunu sıçanın kuyruğuna bantlayarak probu sabitleyin. Sonra, referans elektrodu arka ekstremiteye subkutan olarak yerleştirin. Elektrodun ağızdan kayıp çıkmasını önlemek için negatif elektrodu ağza güvenli bir şekilde yerleştirin.

Bağlantı kablosunu sabit bir yüzeye tutturun. Ardından pozitif elektrodu korneanın merkezine konumlandırın ve bir mikro manipülatör kullanarak elektrodun korneaya nazikçe temas ettiğinden emin olun. Elektrotlar yerleştirildikten sonra, karanlık adaptasyonu korumak için ganzfeld ve hayvanı da içeren düzenek setini opak bir malzeme ile örtün.

Kazanım yazılımında, örnekleme hızını 2 kHz, toplama öncesi örnekleme süresini 5 ms ve toplama süresini 100 ile 1000 ms arası olarak ayarlayın. Ardından band geçiren filtreleri 1 ile 1000 Hz arasına ayarlayın ve örneklemenin bir flaşı takiben 100 ms'lik bir süre boyunca tetiklendiğinden emin olun.

Şimdi, kayıt baz hattını kontrol edin. Dış gürültüden arındırılmış olması, ancak amplifikatör gürültüsünü ve solunum osilasyonunu göstermesi gerekir. Ardından bir test flaşı uygulayın.

Bu, test flaşına yanıt olarak alınan tipik bir ERG dalga formudur. İşlem tamamlandığında, hayvanın 10 dakika boyunca karanlığa yeniden adapte olmasına izin verin. Ardından, kararlı sinyal için baz hattını tekrar kontrol edin.

Ardından, kayda başlayın. Kayıt oturumunun sonunda, hayvanın vücut sıcaklığının stabilitesini kontrol edin. Elektrotları çıkarın ve ardından kornealara carmer polimerini yeniden uygulayın. Sonrasında, hayvanı hayvan barınağına geri döndürmeden önce, tamamen hareketli ve aktif hale gelene kadar bir ısıtıcı ped üzerinde iyileşmeye bırakın.

Bu şekil, karanlığa adapte edilmiş bir ERG'den elde edilen a dalgasının ve B dalgasının ölçümünü göstermektedir. Buradaki iz, karanlığa adapte edilmiş bir gözün korneasından, T sıfır olarak gösterilen zamanda verilen parlak bir ışık flaşına yanıt olarak kaydedilmiştir. Bir a dalgasının genliği, baz çizgiden ilk çukura kadar ölçülür.

B dalgasının genliği, A dalgasının çukurundan takip eden pozitif tepeye kadar ölçülür. Latans, stimulus artefaktından iz üzerindeki ilgilenilen noktaya (örneğin A dalgasının çukuruna) kadar ölçülür. Ham ERG sinyali, artan ışık stimulu ile birlikte artış gösterir.

Yaklaşık 0,4 log skotopik kandela saniye/m² değerinde bir dalga belirginleşir ve karma ERG sinyalini koni ve çubuk yanıtlarına ayırmak için ikiz flaş paradigması kullanılmıştır. Uzmanlaşıldığında, bu teknik 30 dakika içerisinde tamamlanabilir.